CyHV-2单克隆抗体、杂交瘤细胞和应用
【技术领域】
[0001] 本申请涉及单克隆抗体领域，特别是涉及用于CyHV-2的单克隆抗体，分泌该单克 隆抗体的杂交瘤细胞，以及该单克隆抗体的应用。
【背景技术】
[0002] 鲤科疱疼病毒-2 (cyprinid herpesvirus 2,简写CyHV-2)是疱疼病毒性造血器 官坏死病的病原，能引起养殖的金鱼、鲫鱼大量死亡。2011?2012年，在我国中部地区的养 殖鲫鱼暴发了该病，造成了极高的死亡率（Wang等，2012)。2011年，我国出口马来西亚的金 鱼被通报检出CyHV-2,同年江苏省暴发鲫鱼大量死亡，深圳局动植中心水生室派人采样后， 通过分子生物学方法检测到CyHV-2,并且通过电镜检测成功在脾脏和肾脏中观察到了该病 毒颗粒。可见，疱瘆病毒性造血器官坏死病已经传入我国，并已对我国金鱼养殖业及金鱼出 口贸易造成了严重的影响。目前，新加坡、马来西亚等国家明确要求对进口到国内的金鱼要 求出具金鱼造血器官坏死病的健康证书。因此加强对该病的研宄，对于我国鲤科鱼类养殖 业和进出口贸易的健康发展具有重要意义。
[0003] 目前对CyHV-2的检测鉴定主要包括细胞培养分离技术、分子检测和电镜观察。细 胞培养分离技术是最准确的诊断方法，但是，研宄发现CyHV-2很难在鱼类病毒分离常用的 细胞系中进行增殖。分子检测方面，特别是PCR法是目前较为精确检测CyHV-2感染的方法， 因为它可以检测到组织中极微量的病毒DNA;但分子检测需要变温PCR扩增仪器，为现场的 快速诊断带来了不便。电镜观察是最直接的方法，但是，同样的需要特殊的检测设备，并且 也不便于现场快速诊断检测。
[0004] 现有的对金鱼疱瘆病毒性造血器官坏死病的检测方法主要是PCR、组织病理学等 方法，检测方法相对单一；而免疫学研宄相对缺乏或滞后，尚无用于该病的免疫学检测方 法。因此，进一步加强免疫学的研宄，建立新的、更可靠的免疫学检测方法，成为当前对该病 研宄的重要任务。
【发明内容】
[0005] 本申请的目的是提供新的CyHV-2的单克隆抗体，分泌该单克隆抗体的杂交瘤细 胞，以及该单克隆抗体的应用。
[0006] 为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
[0007] 本申请一方面公开了一种CyHV-2单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏号CCTCC No. C2013114的杂交瘤细胞GFHNV-6G7或保藏号CCTCC No. C2013115的杂交瘤细胞 GFHNV-3B5分泌产生。其中杂交瘤细胞GFHNV-6G7于2013年9月13号保藏于中国典型培 养物保藏中心，保藏号为CCTCC No. C2013114 ;杂交瘤细胞GFHNV-3B5于2013年9月13号 保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No. C2013115。
[0008] 需要说明的是，本申请在对CyHV-2进行研宄时，获得了两个杂交瘤细胞，都能 够分泌产生高效价的CyHV-2单克隆抗体，因此，分别对其进行了保藏；可以理解，保藏号 CCTCC No. C2013114的杂交瘤细胞GFHNV-6G7或保藏号CCTCC No. C2013115的杂交瘤细胞 GFHNV-3B5分泌产生的CyHV-2单克隆抗体都可以用于本申请。
[0009] 本申请率先研制出了 CyHV-2的单克隆抗体，为CyHV-2的免疫学检测以及后续研 宄奠定了基础；可以理解，本申请的CyHV-2单克隆抗体具备良好的特异性和效价，因此可 以用于CyHV-2检测。
[0010] 本申请的另一面公开了，本申请的单克隆抗体在制备CyHV-2检测试剂或设备中 的应用。
[0011] 需要说明的是，本申请中检测试剂或用于相关检测的设备，包括现有的以免疫学 为基础的各种检测试剂或设备，如与胶体金免疫层析相结合的快速检测试纸条或试纸卡 等，在此不做具体限定；可以理解，本申请的CyHV-2单克隆抗体具备良好的特异性和效价， 只要将现有试纸中的抗体替换成本申请的CyHV-2单克隆抗体，即可得到CyHV-2快速检测 试纸，不仅可以提高CyHV-2的检测速度和检测效率，而且无需特殊设备，可以很方便进行 现场诊断检测。
[0012] 本申请的另一面公开了一种CyHV-2酶联免疫检测试剂盒，该试剂盒中含有本申 请的单克隆抗体。可以理解，本申请的试剂盒以是简单的以试剂形式存在的CyHV-2单克隆 抗体，以供实验室进行CyHV-2的免疫学研宄；也可以是含有的CyHV-2单克隆抗体的快速检 测试纸，以方便检验检疫实践使用；在此不做具体限定。
[0013] 本申请的再一面公开了分泌CyHV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏号为CCTCC No. C2013114 或 CCTCC No. C2013115。
[0014] 本申请的杂交瘤细胞能够有效的分泌出特异性强、效价高的CyHV-2单克隆抗体， 即本申请的CyHV-2单克隆抗体，为大批量生产本申请的CyHV-2单克隆抗体或含有该单克 隆抗体的试剂盒奠定了基础。需要说明的是，本申请在对CyHV-2进行研宄时，获得了两个 杂交瘤细胞，因此分别对其进行了保藏。
[0015] 由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
[0016] 本申请的CyHV-2单克隆抗体具备良好的特异性和效价，将其制成快速免疫检测 试纸，不仅能够提高检测速度和检测效率，而且能够实现鲤科疱瘆病毒-2的现场检测。本 申请的CyHV-2单克隆抗体填补了鲤科疱瘆病毒-2免疫检测的空缺，为鲤科疱瘆病毒-2的 免疫学研宄奠定了基础。
[0017] 本申请中有两株分泌CyHV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞GFHNV-6G7， 其微生物保藏号为：CCTCC No. C2013114 ;分类命名为：杂交瘤细胞hybridoma cell ;保藏 时间为：2013年9月13日；保藏单位是：中国典型培养物保藏中心；保藏地址是：湖北省 武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心。杂交瘤细胞GFHNV-3B5,其微生物保藏号为：CCTCC No. C2013115 ;分类命名为：杂交瘤细胞hybridoma cell ;保藏时间为：2013年9月13日； 保藏单位是：中国典型培养物保藏中心；保藏地址是：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学 保藏中心。
【具体实施方式】
[0018] CyHV-2对我国的金鱼养殖和进出口贸易影响重大，因此，对其进行流行病学、理化 特性、基因组学以及免疫学研宄，建立多种免疫学快速检测方法；对了解金鱼疱瘆病毒性造 血器官坏死病在我国的流行情况，保障我国水产养殖业和进出口贸易健康发展尤为重要。 本申请的CyHV-2单克隆抗体正是以上研宄成果中的一部分。
[0019] 下面通过具体实施例对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进 一步说明，不应理解为对本申请的限制。
[0020] 实施例
[0021] -、材料与方法
[0022] 1.病毒抗原和试剂
[0023] CyHV-2抗原：来自受CyHV-2感染的病鱼组织，取组织研磨样品，蔗糖梯度离心纯 化。大肠杆菌TG1由中国科学院水生生物研宄所戴和平研宄员提供。
[0024] 2YT培养基：称取17g胰蛋白胨，10g酵母抽提物，5g NaCl，溶于双蒸水中，定容至 1L，高压蒸气灭菌。配固体培养基，再加入15g琼脂粉，高压蒸气灭菌。
[0025] S0BAG培养基：称取20g胰蛋白胨，5g酵母抽提物，0.5g NaCl，溶于双蒸水中，定容 至1L。配固体培养基，再加入15g琼脂粉。高压蒸气灭菌。待冷却到40-5