鄉氨酸lOmg/L、哲基脯氨酸5mg/L、高半脱氨酸2mg/ L和牛横酸5mg/L。
[0030] 该培养Marc-145细胞用的培养基由如下方法制备；根据配方的体积比分别量取 DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清，混合，得到培养基；
[0031] 所述氨基酸DMEM溶液由如下方法制成：取配方量的丙氨酸、精氨酸、天口冬酷胺、 天冬氨酸、脱氨酸、谷氨酸、谷氨酷胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨 酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、鄉氨酸、哲基脯氨酸、高半脱氨酸、 牛横酸，然后溶解在配方量的DMEM溶液中，得到氨基酸DMEM溶液；
[0032] 所述酶解明胶溶液由如下步骤制备：
[0033] a ;将5g明胶溶解在90ml的PBS溶液中，得到明胶PBS溶液；
[0034] b ;将a步骤得到的明胶PBS溶液进行湿热高压灭菌处理，所述湿热高压灭菌处理 的温度为121°C、压力为103. 4KPa、时间为20min ;
[0035] C ;将经过b步骤处理的明胶PBS溶液冷却至常温，加入10ml质量百分浓度为 0. 25%的膜酶溶液，在37°C温度下酶解2化，重复该操作2次；
[0036] d ;将经过C步骤处理明胶PBS溶液冷却至2°C (无凝固现象出现），得到酶解明胶 溶液。
[0037] 本实施例中，分别对DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比 为：酶解明胶溶液；氨基酸DMEM溶液；胎牛血清；DMEM = 1:2:X: 100中的X取0. 5、1、2、3、 4、5,分别编为第二组至第走组，然后取不加胎牛血清，其余成分均匀本申请相同的，编为第 一组；取不添加本实施例中的酶解明胶溶液和氨基酸DMEM溶液的培养基，其中加入的胎牛 血清与DMEM溶液的比例分别为10:100、8:100、5:100、7:100,分别编为对照组一至对照组 四；Marc-145细胞按照1 ;3的比例进行传代，分别在培养过程中的化、W、2d、3d进行观察 细胞生长状况，具体情况详见表1;
[003引 表1 ;Marc-145细胞生长状况表 [0039]
【主权项】
1. 一种培养Marc-145细胞用的培养基，其特征在于由如下成分组成：DM EM、酶解明胶 溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清； 所述DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比为：酶解明胶溶液：氨 基酸 DMEM 溶液：胎牛血清：DMEM = 1-2:1-5:2-5:100 ; 所述酶解明胶溶液中的蛋白质浓度为20-80mg/ml，所述酶解明胶溶液中的溶剂为PBS 溶液； 所述氨基酸DMHM溶液中的溶剂为DMEM，溶质由按照质量体积比计的如下组分组成： 丙氨酸5-35mg/L、精氨酸10-60mg/L、天门冬酰胺5-25mg/L、天冬氨酸15-80mg/L、胱氨酸 5_30mg/L、谷氨酸 50-100mg/L、谷氨酰胺 40_80mg/L、甘氨酸 5_20mg/L、组氨酸 5-10mg/L、 异亮氨酸5-15mg/L、亮氨酸10-20mg/L、赖氨酸10-25mg/L、甲硫氨酸10-30mg/L、苯丙氨酸 5_20mg/L、脯氨酸 10_40mg/L、丝氨酸 10_30mg/L、苏氨酸 10_40mg/L、色氨酸 5_80mg/L、酪 氨酸10-50mg/L、缴氨酸10-20mg/L、羟基脯氨酸5-10mg/L、高半胱氨酸2-10mg/L、牛磺酸 5_15mg/L〇
2. 根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的培养基，其特征在于：所述酶解明胶 溶液为胰酶酶解明胶溶液，所述PBS溶液用超纯水配制而成。
3. 根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的培养基，其特征在于：所述DMEM、酶 解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比为：酶解明胶溶液：氨基酸DMEM溶液： 胎牛血清：DMEM = 1-2:1-5:2-3:100。
4. 根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的培养基，其特征在于：所述DMEM、酶 解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比为：酶解明胶溶液：氨基酸DMEM溶液： 胎牛血清：DMEM = 1:2:2-5:100 ; 所述氨基酸DiffiM溶液中的溶质按照质量体积比计的如下组分：丙氨酸5mg/L、精氨酸 10mg/L、天门冬酰胺5mg/L、天冬氨酸15mg/L、胱氨酸5mg/L、谷氨酸50mg/L、谷氨酰胺40mg/ L、甘氨酸5mg/L、组氨酸5mg/L、异亮氨酸5mg/L、亮氨酸10mg/L、赖氨酸10mg/L、甲硫氨酸 10mg/L、苯丙氨酸5mg/L、脯氨酸10mg/L、丝氨酸10mg/L、苏氨酸10mg/L、色氨酸5mg/L、酪氨 酸10mg/L、缴氨酸10mg/L、羟基脯氨酸5mg/L、高半胱氨酸2mg/L和牛磺酸5mg/L。
5. 根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的培养基，其特征在于：所述DMEM、酶 解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比为：酶解明胶溶液：氨基酸DMEM溶液： 胎牛血清：DMEM = 1:2:2-5:100 ; 所述氨基酸DiffiM溶液中的溶质由按照质量体积比计的如下组分：丙氨酸8mg/L、精氨 酸12mg/L、天门冬酰胺9mg/L、天冬氨酸20mg/L、胱氨酸7mg/L、谷氨酸60mg/L、谷氨酰胺 50mg/L、甘氨酸10mg/L、组氨酸8mg/L、异亮氨酸8mg/L、亮氨酸12mg/L、赖氨酸12mg/L、甲硫 氨酸15mg/L、苯丙氨酸6mg/L、脯氨酸10mg/L、丝氨酸10mg/L、苏氨酸10mg/L、色氨酸5mg/ L、酪氨酸13mg/L、缴氨酸10mg/L、羟基脯氨酸6mg/L、高半胱氨酸5mg/L和牛磺酸6mg/L。
6. -种根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的培养基的制备方法，其特征在 于：根据配方的体积比分别量取DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清，混合， 得到培养基。
7. 根据权利要求6所述的培养Marc-145细胞用的培养基的制备方法，其特征在于所述 氨基酸DMEM溶液由如下方法制成：取配方量的丙氨酸、精氨酸、天门冬酰胺、天冬氨酸、胱 氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、 脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、羟基脯氨酸、高半胱氨酸、牛磺酸，然后溶 解在配方量的DMEM溶液中，得到氨基酸DMEM溶液。
8. 根据权利要求6或7所述的培养Marc-145细胞用的培养基的制备方法，其特征在于 所述酶解明胶溶液由如下步骤制备： a :将明胶溶解在PBS溶液中，得到明胶PBS溶液，所述明胶PBS溶液的质量体积浓度为 25_600mg/ml ; b :将a步骤得到的明胶PBS溶液进行湿热高压灭菌处理，所述湿热高压灭菌处理的温 度为121°C、压力为103. 4KPa、时间为20min ; c :将经过b步骤处理的明胶PBS溶液冷却至常温，加入质量百分浓度为0. 25 %的胰酶 溶液，在37°C温度下酶解8-24h，重复该操作1-3次； d :将经过c步骤处理明胶PBS溶液冷却至2-8°C，如出现凝固现象，则重复c步骤，直 至在2-8°C时无凝固现象出现，得到酶解明胶溶液。
9. 根据权利要求8所述的培养Marc-145细胞用的培养基的制备方法，其特征在于：所 述c步骤中每次加入的胰酶溶液与明胶PBS溶液的体积比为1:9-10。
10. 根据权利要求8所述的培养Marc-145细胞用的培养基的制备方法，其特征在于： 所述c步骤中酶解的时间为24h，所述c步骤中重复操作的次数为2-3次。
【专利摘要】本发明涉及一种培养Marc-145细胞用的培养基，其由如下成分组成：DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清；所述DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比为：酶解明胶溶液：氨基酸DMEM溶液：胎牛血清：DMEM＝1-2:1-5:2-5:100。本发明还提供该培养基的制备方法：根据配方的体积比分别量取DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清，混合，得到培养基。本发明的培养Marc-145细胞用的培养基，能够大幅降低Marc-145细胞培养过程中牛血清的使用量，降低了生产成本，同时制备方法简单、易操作。
【IPC分类】C12N5-071
【公开号】CN104630132
【申请号】CN201510050944
【发明人】徐家华, 陈瑞爱, 蒋春英, 张东霞, 王新秋
【申请人】肇庆大华农生物药品有限公司, 广东大华农动物保健品股份有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月30日