一种全人源her2抗体、其编码基因及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种全人源HER2抗体、其编码基因及应用。
【背景技术】
[0002] HER2/neu (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,人表皮生长因子受体 2)，又称erbB-2,是生长因子受体家族成员之一。该受体蛋白通常只在胎儿时期表达，成年 以后只在极少数正常组织内低水平表达，然而在多种人类肿瘤组织中（如乳腺癌、胃癌、卵 巢癌、肺癌、原发性肾细胞癌、子宫内膜癌等）却过度表达，并提示预后不良。ffiR2/neu的过 度表达可导致肿瘤细胞过度增殖和新生血管的形成，造成肿瘤高复发率、高转移率和高死 亡率。研宄表明，HER2/neu的过度表达会出现在约30%的乳腺癌和16%的胃癌患者中，是 乳腺癌患者预后差的指征，同时在胃癌的发生、发展和侵袭性/转移性上也发挥着重要作 用。
[0003] 针对HER2/neu靶点的单克隆抗体药物治疗是继手术和放、化疗后较为有效的治 疗手段。赫赛汀（Herceptin)是美国Genentech公司（现属Roche公司）研制，于1998年 上市的以HER2/neu为靶点的拮抗性人源化单克隆抗体药物，被批准用于HER2/neu高表达 的乳腺癌和胃癌的治疗。该抗体抑制了 HER2/neu的信息传递活性，从而阻断了下游信号传 导，导致癌细胞增殖停滞和新生血管形成的抑制。赫赛汀作为一线用药在乳腺癌术后与化 疗合用已在临床中被证实可使病人生存期延长，并使复发率下降50%。
[0004] 赫赛汀的分子药理机制通常被认为是通过抑制HER2磷酸化、阻断细胞增殖周期、 加速受体内化及抗体Fc段诱导的效应器作用（如抗体介导的细胞杀伤作用，ADCC)的共同 结果。
[0005] 尽管相当多的HER2阳性乳腺癌病人在赫赛汀治疗的起始阶段对抗体药物有良好 的反应，但最终疾病还会进展和恶化，有约70 %病例对赫赛汀治疗无效和产生耐药状况。因 此，寻求更为有效的抗ffiR2/neu抗体是目前临床迫切需要解决的问题。
[0006] 赫赛汀的耐药机制目前尚不完全清楚，有HER2受体以下信号传递通路异常，如持 续激活的PI3K途径、磷酸化PTEN失去作用等。针对HER2分子上不同的表位产生的可抑制 HER2和HER3形成异源性二聚体的单克隆抗体帕妥珠单抗（Pertuzumab)与赫赛汀联合应 用，在最近的临床实验中被证实与单用赫赛汀相比其对病人生存期的延长有更加明显的作 用，说明抗体通过赫赛汀表位以外的结合位点可以产生不同于赫赛汀的拮抗机制，从而与 赫赛汀产生相加或协同效应。T-DM1是免疫抗体结合物（antibody-drug conjugate，ADC)， 是将高效价细胞毒素DM1与单克隆抗体曲妥珠单抗（Trastuzumab，即赫赛汀）通过共价键 结合，利用抗体结合J1ER2后的受体内吞作用，将毒素带入HER2阳性的肿瘤细胞，从而起到 对肿瘤细胞的杀伤作用。在之前接受过赫赛汀和化疗的J1ER2阳性晚期或转移性乳腺癌病 人中，与标准治疗联合使用，T-DM1可显著延长无进展生存期。该临床实验数据表明，利用 HER2抗体对HER2阳性肿瘤细胞的特异免疫反应性，携载细胞毒素进入癌细胞，可能是克服 赫赛汀药效不足的有效途径。临床前实验还显示，利用细胞工程方法制备的去岩藻糖的曲 妥珠单抗，通过加强与效应器细胞上Fc受体的结合，获得了更强的抗体介导的细胞杀伤作 用，在相关动物模型中展示了比赫赛汀更强的抑制肿瘤的效果。该项研宄结果提示，加强抗 体介导的的细胞杀伤作用，也可能是优化抗J1ER2抗体的可能途径之一。
[0007] 赫赛汀是人源化的抗体药产品，受到技术发展的制约。患者接受抗体治疗后产生 的抗药抗体，可能是抗体耐药的机制之一。人源化抗体临床常见的副作用是输液反应。高 容量全人源抗体单链可变区片段（scFv)噬菌体展示文库，是近十几年来被国际各大生物 制药公司利用来筛选全人源抗体的平台之一。过去十几年来，有利用该文库筛选得到高亲 和力全人源抗体的先例（如Abbott公司的阿达木单抗（Humira))及丰富经验。全人源抗 体可降低输液反应和免疫原性，提高药物安全性，具有更好的药代动力学特征。
【发明内容】
[0008] 本发明提供了一种全人源的HER2抗体，其中重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO: 1，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2。
[0009]本发明的全人源HER2抗体，其是Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv的形式。所述 Fab、Fab'、F(ab'） 2、Fv或scFv具有本领域所惯常理解的含义。
[0010] 本发明的全人源J1ER2抗体，还可以包括人IgG的重链恒定区和轻链恒定区。在一 个具体的实施方案中，所述人IgG为IgGl。在一个具体的实施方案中，所述人IgG重链恒定 区的氨基酸序列为SEQ ID N0:5,所述人IgG轻链恒定区的氨基酸序列为SEQ ID N0:6。
[0011] 本发明提供了编码本发明全人源ffiR2抗体的核苷酸序列。
[0012] 在一个具体的实施方案中，编码所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID N0:3,编 码所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID N0:4。在一个具体的实施方案中，当本发明的全 人源HER2抗体为全长抗体时，在本发明的核苷酸序列中，编码所述重链恒定区的核苷酸序 列为SEQ ID N0:7,编码所述轻链恒定区的核苷酸序列为SEQ ID N0:8。
[0013] 本发明提供了一种表达载体，其中本发明的核苷酸序列与表达载体的表达控制序 列可操作地连接。在具体的实施方案中，所述表达载体是PGEM-T载体或293载体。
[0014] 本发明提供了一种细胞，其包含本发明的表达载体。所述细胞可以是原核或真核 的。在具体的实施方案中，所述细胞可以哺乳动物细胞，例如Freestyle 293F细胞。
[0015] 本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的全人源HER2抗体和可药用载体。
[0016] 此外发明人还发现，本发明的全人源HER2抗体与赫赛汀的作用机制不同，因此本 发明的全人源HER2抗体可用于对赫赛汀耐药或对赫赛汀无反应的患者。
[0017] 本发明提供了一种联合药物，其包含本发明的全人源HER2抗体和赫赛汀。
[0018] 本发明提供了一种试剂盒，其包含本发明的全人源HER2抗体。所述试剂盒可用于 检测样品中的J1ER2蛋白。所述试剂盒还可包含本领域检测HER2试剂盒中的其他常用组分。
[0019] 本发明还提供了本发明的全人源HER2抗体用于制备用于治疗受试者中的HER2阳 性肿瘤的药物的用途。
[0020] 所述"HER2阳性肿瘤"是指如果IHC〔免疫组化法〕检查结果为3个加号（+++)， 即，大于30%的肿瘤细胞的胞膜呈现完整的强着色，就表明为HER2阳性；如果是2个加号 (++)，即，至少10%的肿瘤细胞呈现弱至中度完整的胞膜染色，那么进一步做FISH〔荧光原 位杂交法〕或CISH〔显色原位杂交法〕检查，倘若结果为阳性〔发生基因扩增〕，就可以确诊 为HER2阳性。优选地，HER2阳性肿瘤检测结果是使用我国食品药品监督管理总局认证的 检测试剂盒（IHC，FISH和CISH检测试剂盒）获取的结果。执业医师熟知如何判定肿瘤是 否为HER2阳性肿瘤。
[0021] 所述HER2阳性的肿瘤选自HER2阳性的乳腺癌、胃癌、肺癌、非小细胞肺癌、骨 癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、结 肠癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、 内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织癌、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀 胱癌、肾或尿道癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆囊癌、慢性或急性白血病、淋巴 细胞淋巴瘤、中枢神经系统（CNS)癌、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤 (glioblastoma multiforme)，星形细胞瘤，神经鞘瘤，室管膜瘤，成神经管细胞瘤，脑膜 瘤、鳞状细胞瘤、垂体腺瘤。
[0022] 优选地，所述受试者是人。
[0023] 优选地，所述受试者是对赫赛汀耐药或对赫赛汀无反应的人。
【附图说明】
[0024] 图1A显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-094重链表达载体（293-VH-CH)的结 构示意图；图1B显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-094轻链表达载体（293-VL-CL)的 结构示意图。以PCR方法，利用相应模板和引