关系见图2 ；
(2)将4mg双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶解于Iml氯化钠溶液中，氩气保护下滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下搅拌2小时，制备示意图见图1，双端马来酰亚胺化聚乙二醇浓度与纳米微球直径的关系见图3 ；
(3)室温搅拌下滴加浓度为IN的氢氧化钠溶液，调节混合溶液pH值为7，pH值与纳米微球直径的关系见图4 ；
(4)室温搅拌下滴加6倍体积的丙酮或乙醇，至溶液混浊；
(5)高速离心得到纳米微球，随后分别用蒸馏水、无水乙醇清洗，最后冷冻干燥得到牛血清白蛋白纳米微球。
[0025]图5为所得纳米微球在37°C磷酸盐缓冲溶液中孵育24小时后的直径变化(实线为孵育前，虚线为孵育后)，结果显示纳米微球在孵育前后，其直径变化很小，说明该纳米微球结构稳定，满足药物释放应用。
[0026]实施例2:
(1)配制浓度为1mM的氯化钠水溶液，将150mg牛血清白蛋白溶解于5ml氯化钠溶液；
(2)将5mg双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶解于Iml氯化钠溶液中，氩气保护下滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下搅拌2小时；
(3)室温搅拌下滴加浓度为IN的氢氧化钠溶液,调节混合溶液pH值为7；
(4)室温搅拌下滴加6倍体积的丙酮或乙醇，至溶液混浊；
(5)高速离心得到纳米微球，随后分别用蒸馏水、无水乙醇清洗，最后冷冻干燥得到牛血清白蛋白纳米微球。
[0027]实施例3:
(1)配制浓度为1mM的氯化钠水溶液，将150mg牛血清白蛋白溶解于5ml氯化钠溶液；
(2)将6mg双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶解于Iml氯化钠溶液中，氩气保护下滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下搅拌3小时；
(3)室温搅拌下滴加浓度为IN的氢氧化钠溶液,调节混合溶液pH值为8；
(4)室温搅拌下滴加7倍体积的丙酮或乙醇，至溶液混浊；
(5)高速离心得到纳米微球，随后分别用蒸馏水、无水乙醇清洗，最后冷冻干燥得到牛血清白蛋白纳米微球。
[0028]实施例4:
(1)配制浓度为1mM的氯化钠水溶液，将150mg牛血清白蛋白溶解于5ml氯化钠溶液；
(2)将7mg双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶解于Iml氯化钠溶液中，氩气保护下滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下搅拌3小时；
(3)室温搅拌下滴加浓度为IN的氢氧化钠溶液,调节混合溶液pH值为8； (4)室温搅拌下滴加7倍体积的丙酮或乙醇，至溶液混浊；
(5)高速离心得到纳米微球，随后分别用蒸馏水、无水乙醇清洗，最后冷冻干燥得到牛血清白蛋白纳米微球。
[0029]实施例5:
(1)配制浓度为1mM的氯化钠水溶液，将200mg牛血清白蛋白溶解于5ml氯化钠溶液；
(2)将9mg双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶解于Iml氯化钠溶液中，氩气保护下滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下搅拌4小时；
(3)室温搅拌下滴加浓度为IN的氢氧化钠溶液,调节混合溶液pH值为9；
(4)室温搅拌下滴加8倍体积的丙酮或乙醇，至溶液混浊；
(5)高速离心得到纳米微球，随后分别用蒸馏水、无水乙醇清洗，最后冷冻干燥得到牛血清白蛋白纳米微球。
[0030]实施例6:
(1)配制浓度为1mM的氯化钠水溶液，将250mg牛血清白蛋白溶解于5ml氯化钠溶液；
(2)将1mg双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶解于Iml氯化钠溶液中，氩气保护下滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温下搅拌4小时；
(3)室温搅拌下滴加浓度为IN的氢氧化钠溶液,调节混合溶液pH值为9；
(4)室温搅拌下滴加8倍体积的丙酮或乙醇，至溶液混浊；
(5)高速离心得到纳米微球，随后分别用蒸馏水、无水乙醇清洗，最后冷冻干燥得到牛血清白蛋白纳米微球。
[0031]以上实施例涵盖了最具代表性的实验数据。
【主权项】
1.一种牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，其特征在于，采用双端马来酰亚胺化聚乙二醇为交联分子，通过蛋白二聚作用及反相溶液法交联制备牛血清白蛋白，包括以下步骤: 步骤1、室温下将牛血清白蛋白溶于氯化钠溶液中； 步骤2、氩气保护下加入双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶液； 步骤3、室温搅拌下滴加氢氧化钠溶液，调节pH ； 步骤4、室温搅拌下滴加反相溶剂，至溶液混浊后停止搅拌； 步骤5、高速离心得到纳米微球，洗涤、冷冻、干燥后得到牛血清白蛋白纳米微球。
2.根据权利要求1所述的牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤I中所述牛血清白蛋白在氯化钠溶液中的质量浓度为2?5%。
3.根据权利要求1所述的牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤2中所述双端马来酰亚胺化聚乙二醇溶液的质量浓度为0.4?1%。
4.根据权利要求1所述的牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤3中加入双端马来酰亚胺化聚乙二醇后，混合溶液PH值调节至7?9。
5.根据权利要求1所述的牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤4中加入滴加的反相溶剂为丙酮或无水乙醇，滴加量为混合溶液体积的61倍。
6.根据权利要求1所述的牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤5中先后用蒸馏水、无水乙醇洗涤。
【专利摘要】本发明公开了一种牛血清白蛋白纳米微球的制备方法，提供了一种基于蛋白二聚作用交联蛋白纳米微球的手段。本发明以牛血清白蛋白为基体材料，通过蛋白二聚作用及反相溶液法，实现了牛血清白蛋白纳米微球的交联，得到了结构稳定的纳米微球类药物传递材料。本发明避免使用了有毒化学交联剂，保证了传递体系的使用安全性，同时有望保留被包埋药物的生物活性，从而可显著改善纳米微球体系的生物相容性。本发明工艺和设备简单、易行、操作安全，具有制备温度低、处理周期短等优点，在活性药物、蛋白或基因的包埋与传递方面有应用价值。
【IPC分类】C08L89-00, A61K47-42, C08J3-24, C08J3-12
【公开号】CN104710630
【申请号】CN201310687518
【发明人】谈华平, 肖超, 孙进晨, 高欣
【申请人】南京理工大学
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2013年12月17日