NO: 2的氨基 酸序列； (xviii) 所述VL包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列且所述VH包含SEQ ID NO:4的氨基 酸序列； (xix) 所述VL包含SEQ ID N0:10的氨基酸序列且所述VH包含SEQ ID N0:5的氨基酸 序列；或 (XX)所述VL包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列且所述VH包含SEQ ID NO: 6的氨基酸 序列。
5. 权利要求1的抗体，其包含： (i) 轻链可变区（"VL"），包含氨基酸序列： divmtqspsxk1lsasvgdrvtitckasqnvrtnvawyqqkpgkapkxK2liysasyrysgvpdrfxK3gsgsgt dftltisslqxk4edfaxK5yxK6cqqynsyprtfgggtkveik，其中Xki为具有芳族或脂族羟基侧链的氨 基酸，Xk2为具有芳族或脂族羟基侧链的氨基酸，X K3为具有脂族羟基侧链的氨基酸，X K4为具 有脂族羟基侧链的氨基酸或为P，Xk5为具有带电荷或酸性侧链的氨基酸，和X K6为具有芳族 侧链的氨基酸；和 (ii) 重链可变区（"VH"），包含分别具有 SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17 和 SEQ ID NO: 18 的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
6. 权利要求1的抗体，其包含： (i) VL，包含分别具有SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21的氨基酸序列的 VL CDRUVL CDR2 和 VL CDR3;和 (ii) VH，包含氨基酸序列：QVQLVQSGAEXH1KKPGASVKXH2SCKASGYTFTDYnNWVX H3QAPGKGLEW IARIYPGSGNTYYNEKFKGRXH4TXH5TAX H6KSTSTAYMXH7LSSLRSEDXH8AVYFCARGVYYFDYWGQGTTVTVSS, 其中Xhi为具有脂族侧链的氨基酸，Xh2为具有脂族侧链的氨基酸，Xh3为具有极性或碱性侧 链的氨基酸，Xh4为具有脂族侧链的氨基酸，Xh5为具有脂族侧链的氨基酸，Xh6为具有酸性 (acidid)侧链的氨基酸，Xh7为具有酸性或酰胺衍生物侧链的氨基酸，和Xh8为具有脂族羟 基侧链的氨基酸。
7. 权利要求1的抗体，其包含： (iii) VL，包含与SEQ ID NO: 7有至少90%同一性、与SEQ ID NO: 8有至少88%同一性、 与SEQ ID N0:9有至少87%同一性或与SEQ ID NO: 10有至少84%同一性的氨基酸序列； 和 (iv) VH，包含与SEQ ID NO: 2有至少93%同一性、与SEQ ID NO: 3有至少92%同一性、 与SEQ ID NO: 4有至少90%同一性、与SEQ ID NO: 5有至少87%同一性或与SEQ ID NO: 6 有至少86 %同一性的氨基酸序列。
8. 分离的抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合于人KIT的D4区，包含： (i)轻链可变区（"VL"），包含氨基酸序列：DIVMTQSPSXk1LSASVGDRVTITCKASQNVRTNVA wyqqkpgkapkxK2liysasyrysgvpdrfxK3gsgsgtdftltisslqxk4edfaxK5yxK6cqqynsyprtfgggtkve IK，其中Xki为具有芳族或脂族羟基侧链的氨基酸，X k2为具有芳族或脂族羟基侧链的氨基 酸，Xk3为具有脂族羟基侧链的氨基酸，Xk4为具有脂族羟基侧链的氨基酸或为P，Xk5为具有 带电荷或酸性侧链的氨基酸，和Xk6为具有芳族侧链的氨基酸；和 (ii) VH，包含氨基酸序列：QVQLVQSGAEXH1KKPGASVKXH2SCKASGYTFTDYnNWVX H3QAPGKGLEW IARIYPGSGNTYYNEKFKGRXH4TXH5TAX H6KSTSTAYMXH7LSSLRSEDXH8AVYFCARGVYYFDYWGQGTTVTVSS, 其中Xhi为具有脂族侧链的氨基酸，Xh2为具有脂族侧链的氨基酸，Xh3为具有极性或碱性侧 链的氨基酸，Xh4为具有脂族侧链的氨基酸，Xh5为具有脂族侧链的氨基酸，Xh6为具有酸性侧 链的氨基酸，Xh7为具有酸性或酰胺衍生物侧链的氨基酸，和Xh8为具有脂族羟基侧链的氨基 酸。
9. 权利要求8的抗体，其中X ^为氨基酸F或S，X ^为氨基酸A或S，X K3S氨基酸T或 S，Xk4S氨基酸S或P，X K5S氨基酸D或T，和X ^为氨基酸F或Y。
10. 权利要求8的抗体，其中X 氨基酸L或V，X氨基酸L或V，X氨基酸K或 R，Xh4S氨基酸V或A，X 氨基酸L或I，X ^为氨基酸E或D，X 氨基酸Q或E，和X !^为 氨基酸S或T。
11. 权利要求1-10中任一项的抗体，其中所述抗体特异性结合于重组表达野生型KIT 的CHO细胞，其中如通过流式细胞术所测定的EC50为约150pM或约150pM以下。
12. 权利要求1-10中任一项的抗体，其中所述抗体抑制KIT的酪氨酸磷酸化，其中如通 过ELISA所测定的IC50为约600pM或约600pM以下。
13. 权利要求1-10中任一项的抗体，其能在CHO细胞中以至少LOy g/mL、或至少 I. I y g/mL、或至少I. 2 y g/mL的效价表达。
14. 权利要求1-10中任一项的抗体，其中所述抗体还包含人K轻链恒定区和人Y重 链恒定区。
15. 权利要求1-10中任一项的抗体，其中所述抗体是人IgGl或IgG4抗体。
16. 权利要求1-10中任一项的抗体，其是单克隆抗体。
17. 权利要求1-10中任一项的抗体，其是抗原结合片段或Fab片段。
18. 权利要求1-10中任一项的抗体，其是双特异性抗体。
19. 权利要求1-10中任一项的抗体，其与异源多肽融合。
20. 缀合物，包含与药剂连接的权利要求1-10中任一项的抗体或其抗原结合片段。
21. 权利要求20的缀合物，其中所述药剂是毒素。
22. 权利要求21的缀合物，其中所述毒素是相思豆毒素、篦麻毒素A、假单胞菌外毒素、 霍乱毒素或白喉毒素。
23. 权利要求20的缀合物，其中所述缀合物被细胞内化。
24. 药物组合物，包含权利要求20的缀合物和药学上可接受的载剂。
25. 药物组合物，包含权利要求1-10中任一项的抗体和药学上可接受的载剂。
26. 多核苷酸，包含编码权利要求1-10中任一项的抗体的VH链区、VL链区或VL链区 和VH链区两者的核苷酸序列。
27. 权利要求26的多核苷酸，其包含编码VH的SEQ ID NO:22、23、24、25或26。
28. 权利要求26的多核苷酸，其包含编码VL的SEQ ID NO:27、28、29或30。
29. 权利要求26的多核苷酸，其包含编码VH的SEQ ID NO: 22、23、24、25或26和编码 VL 的 SEQ ID N0:27、28、29 或 30。
30. 载体，包含权利要求26的多核苷酸。
31. 权利要求30的载体，其是哺乳动物表达载体。
32. 宿主细胞，包含权利要求30的载体或一种或多种权利要求26的多核苷酸。
33. 分离的细胞，产生根据权利要求1-10中任一项所述的抗体。
34. 分离的细胞，包含一种或多种权利要求26的多核苷酸，其中所述细胞能表达与人 KIT的D4特异性结合的抗体。
35. 细胞，包含权利要求30的载体。
36. 试剂盒，包含权利要求1-10中任一项的抗体。
37. 试剂盒，包含权利要求20的缀合物。
38. 用于治疗或处理KIT相关紊乱的方法，包括向有其需要的对象给予治疗有效量的 权利要求1-10中任一项的抗体。
39. 用于治疗或处理KIT相关紊乱的方法，包括向有其需要的对象给予治疗有效量的 权利要求20的缀合物。
40. 权利要求38的方法，其中所述KIT相关紊乱是癌症、炎症性病症或纤维化。
41. 权利要求40的方法，其中所述癌症是白血病、慢性髓细胞白血病、肺癌、小细胞肺 癌或胃肠道间质瘤。
42. 权利要求41的方法，其中所述癌症对于酪氨酸激酶抑制剂的治疗具有顽固性。
43. 权利要求42的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂是甲磺酸伊马替尼或SU11248。
44. 权利要求38的方法，其中所述方法还包括给予第二种治疗剂。
45. 权利要求44的方法，其中所述第二种治疗剂是化学治疗剂、酪氨酸激酶抑制剂、组 蛋白脱乙酰酶抑制剂、抗体或细胞因子。
46. 权利要求45的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂是甲磺酸伊马替尼或SU11248。
47. 用于诊断患有KIT相关紊乱的对象的方法，包括使获自所述对象的细胞或样品与 权利要求1-10中任一项的抗体接触，及检测所述细胞或所述样品中的KIT的表达水平。
48. 权利要求47的方法，其中所述抗体与可检测分子缀合。
49. 权利要求48的方法，其中所述可检测分子是酶、荧光分子、发光分子或放射性分 子。
50. 用于抑制表达KIT的细胞中的KIT活性的方法，包括使所述细胞与有效量的权利要 求1-10中任一项的抗体接触。
51. 用于诱导或增强表达KIT的细胞中的细胞凋亡的方法，包括使所述细胞与有效量 的权利要求1-10中任一项的抗体接触。
52. 用于诱导细胞分化的方法，包括使表达KIT的细胞与有效量的权利要求1-10中任 一项的抗体接触。
53. 权利要求52的方法，其中所述细胞是干细胞。
54. 制备免疫特异性结合于人的D4区的抗体的方法，包括培养权利要求32的细胞，和 /或使用权利要求32的细胞表达所述抗体。
55. 权利要求54的方法，还包括纯化获自所述细胞的抗体。
56. 分离的抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合于人KIT的D4区，其中所述抗体 或其抗原结合片段包含： (i) 轻链可变区（"VL"），包含选自表10-12中所阐述之组的VL⑶RUVL⑶R2和VL CDR3 ;和 (ii) 重链可变区（"VH")，包含选自表13-15中所阐述之组的VH⑶RUVH⑶R2和VH CDR3〇
57. 分离的抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合于人KIT的D4区，其中所述抗体 或其抗原结合片段包含： (i) 轻链可变区（"VL"），包含选自表2和表3中所阐述之组的VL⑶RUVL⑶R2和 VL CDR3 ;和 (ii) 重链可变区（"VH"），包含选自表2和表3中所阐述之组的VH⑶RUVH⑶R2和 VH CDR3〇
【专利摘要】本发明在一个方面提供的是免疫特异性结合于包含第四和/或第五细胞外Ig样域(即，D4和/或D5域)的人KIT抗原的抗体、包含编码这样的抗体的核苷酸序列的多核苷酸和用于产生这样的抗体的表达载体和宿主细胞。所述抗体能抑制KIT活性，例如配体诱导的受体磷酸化。本发明还提供的是包含特异性结合于KIT抗原的抗体的试剂盒和药物组合物，以及使用本发明描述的抗体治疗或处理KIT相关紊乱或疾病的方法及诊断KIT相关紊乱或疾病的方法。
【IPC分类】C07K16-28, A61P35-00, A61K39-395
【公开号】CN104812775
【申请号】CN201380048992
【发明人】亚龙·哈达利, 伊丽莎白·M·曼德尔-鲍什, 弗朗西斯·约瑟夫·凯尔, 蒂莫西·大卫·琼斯, 劳拉·克莱尔·亚历山德拉·佩里
【申请人】科尔坦制药公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2013年7月24日
【公告号】CA2880007A1, EP2877493A1, US20140065168, WO2014018625A1