许多与肿瘤有关的性质（Cody 等人，2008)。因而，发现KAAG1的表达在模仿进行性肿瘤的模型中显著增加，尤其是在卵巢 癌发展过程中。
[0069] 证实了卵巢癌细胞中的KAAG1表达受到调节，在基于细胞的试验中检查了该基因 在卵巢癌细胞行为中的功能。为此，使用RNA干扰（RNAU来敲低（knockdown)内源KAAG1 基因在卵巢癌细胞系中的表达，且发现，KAAG1表达的减少导致细胞迁移的显著减少，该通 过标准的细胞能动性试验测得，且被创伤愈合（或抓伤）试验证实。该类试验测量细胞填 充汇合单层中的裸露区的速率。KAAG1表达的减少导致卵巢癌细胞系存活的减少，该通过产 克隆试验（诸如集落存活试验）测得。本领域技术人员可W使用其它方法来评价癌细胞行 为（尤其是卵巢癌细胞）对KAAG1的需求。
[0070] 基于KAAG1在大部分卵巢肿瘤中的表达、它在正常组织中的有限表达、表达水平 和恶性增加之间的一致性W及推定的KAAG1在卵巢癌细胞系行为中的生物学作用，选择 KAAG1作为治疗祀标，用于开发检测、预防和治疗卵巢癌的抗体。KAAG1在除了卵巢癌W外 的癌症中的表达，也引导申请人评价用于其它癌症适应症的治疗或诊断抗体。
[0071] 因此，提供了多种抗-KAAG1抗体及其抗原结合片段，诸如单克隆抗体、多克隆抗 体、嵌合和人源化抗体（包括人源化的单克隆抗体）、抗体片段、单链抗体、结构域抗体和具 有抗原结合区的多肤，它们可用于祀向KAAG1。
[007引【作为抗原的KAAG1和源自KAAG1的表位】
[007引 申请人已经意外地发现，KAAG1在几个肿瘤类型中表达，且还在患者的血液和腹水 液中发现。该抗原因而可W用于在体内祀向表达该抗原的肿瘤细胞，且在检测试验的开发 中，用于在体外或在体内测量肿瘤相关抗原。在血液中循环的KAAG1抗原缺少信号肤。 [0074] 本发明因此提供了KAAG1抗原，其可用于产生对KAAG1的循环形式特异性的和/ 或对肿瘤表达的KAAG1特异性的抗体。所述KAAG1抗原（即，表位）可W包含KAAG1的至 少10个氨基酸（且至多84个氨基酸）的片段，且可W特别地结合KAAG1的胞外区域。
[00巧]一种示例性抗原是完整的KAAG1蛋白，或与SEQIDNO. : 2或其片段具有至少80% 序列同一性的变体形式。
[0076] 源自KAAG1的另一种示例性抗原是KAAG1的分泌形式或循环形式，其缺少KAAG1 的信号肤或胞外区域。该抗原可W更具体地缺少KAAG1的氨基酸1-25、1-26、1-27、1-28、 1-29、1-30、1-31、1-32、1-33、1-34、1-35 或 1-36。
[0077]本文所述的抗原或表位可W与载体相融合，所述载体诸如钥孔血蓝蛋白（KHL)、牛 血清白蛋白炬SA)、卵白蛋白（OVA)或其它，W便产生抗体和抗原结合片段。
[0078] 本发明也提供了表位，其包含在SEQIDNO. :2的氨基酸1-35内、SEQIDNO. :2的 氨基酸36-60内或SEQIDNO. : 2的氨基酸61-84内，W产生本文所述的抗体和抗原结合片 段。本发明另外提供了一种组合物，其用于产生针对KAAG1的分泌形式或循环形式或KAAG1 的胞外区域的抗体，所述组合物可W包含在SEQIDNO. : 2的氨基酸30-84中含有的KAAG1 的表位和载体。所述表位可W具体地包含KAAG1的至少10个氨基酸。
[0079] 组合物的示例性实施方案是该样的药物组合物，其用于产生针对KAAG1的分泌形 式或循环形式或KAAG1的胞外区域的抗体。所述药物组合物可W包含在SEQ ID NO. :2的 氨基酸30-84中含有的KAAG1的表位和药学上可接受的载体。
[0080] 在再一个方面，本发明提供了用于产生针对KAAG1的分泌形式或循环形式的抗体 的方法。所述方法可W包括，施用多肤，所述多肤包含在SEQ ID NO. :2的氨基酸30-84中 含有的KAAG1的表位，其中所述表位缺少KAAG1信号肤。
[0081] 或者，所述方法可W包括，施用包含信号肤的表位，并选择仅结合所述蛋白的分泌 形式或胞外区域的抗体。
[008引在另一个方面，本发明提供了在SEQ ID NO. : 2的氨基酸30-84中含有的KAAG1的 表位用于产生抗体的应用，所述抗体针对KAAG1的分泌形式或循环形式。
[0083]【结合KAAG1的抗体和抗原结合片段】
[0084] 关于对目标抗原的特异性，最初从Fab文库分离抗体。表现出最大特征的抗体的 轻链可变域或重链可变域的氨基酸序列的对比，允许我们取得在CDR内和在可变区内的共 有序列。在SEQIDNO:74-90中提供了CDR的共有序列。
[0085] 本文所述的可变区可W与希望物种的恒定区融合，由此允许希望物种的效应细胞 识别抗体。所述恒定区可W源自，例如，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亚型。与可变区在框架内 克隆或合成恒定区，是在本领域技术人员知识范围内，且可W通过例如重组DNA技术来实 现。
[0086] 在本发明的某些实施方案中，结合KAAG1的抗体可W属于IgGl、IgG2、IgG3或IgG4 亚型。本发明的更具体的实施方案涉及IgGl亚型的抗体。所述抗体可W是IgGl亚型的人 源化抗体，其在介导抗体依赖性的细胞毒性（ADCC)、补体介导的细胞毒性（CMC)中是有生 物活性的，或与免疫复合物有关。典型的ADCC包含天然杀伤（NK)细胞的活化，且依赖于NK 细胞表面上的化受体对抗体包被的细胞的识别。化受体识别抗体的化结构域（诸如存 在于IgGl上），其结合祀细胞、尤其是表达抗原（诸如KAAG1)的癌细胞的表面。结合IgG 的化受体后，NK细胞释放细胞因子和细胞毒性颗粒，它们进入祀细胞，并通过触发细胞调 亡来促进细胞死亡。
[0087] 在某些情况下，具有与抗体3D3基本上相同的轻链和重链可变区的抗-KAAG1抗体 会与KAAG1的氨基酸36 - 60(包括端值）区间的表位相互作用。在其它情况下，具有与抗 体3G10基本上相同的轻链和重链可变区的抗-KAAG1抗体会与KAAG1的氨基酸61 - 84(包 括端值）区间的表位相互作用。在另一个情况下，具有与抗体3C4基本上相同的轻链和重 链可变区的抗-KAAG1抗体会与KAAG1的氨基酸1-35(包括端值）区间的表位相互作用。 [008引本发明描述了结合KAAG1的抗体集合。在某些实施方案中，所述抗体可W选自；多 克隆抗体、单克隆抗体（诸如嵌合或人源化抗体）、抗体片段（诸如抗原结合片段、单链抗 体、结构域抗体）和具有抗原结合区的多肤。
[0089] 在本发明的一个方面，本发明的分离的抗体或抗原结合片段能诱导表达KAAGl的 肿瘤细胞或表达KAAG1变体的肿瘤细胞的杀死（消除、破坏、裂解）（例如，WADCC-依赖性 的方式）。
[0090] 在本发明的另一个方面，本发明的分离的抗体或抗原结合片段的具体特征在于， 它的减少表达KAAG1的肿瘤细胞的扩散的能力。
[0091] 在本发明的另一个方面，本发明的分离的抗体或抗原结合片段的特征在于，它的 减少或损害表达KAAG1的肿瘤的形成的能力。
[0092] 根据本发明的一个实施方案，当KAAG1在表达KAAG1的肿瘤细胞的表面处表达时， 所述抗体或抗原结合片段可W是更特别有效的。
[0093] 也根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可W具体用于祀向特征在于不依赖于销 着生长的表达KAAG1的肿瘤细胞。
[0094] 在另一个方面，本发明涉及用于治疗癌症的分离的抗体或抗原结合片段，所述癌 症包含表达KAAG1的肿瘤细胞。
[0095] 在再一个方面，本发明涉及用于检测癌症的分离的抗体或抗原结合片段，所述癌 症包含表达KAAG1的肿瘤细胞。
[0096] 在本发明的一个示例性实施方案中，所述分离的抗体或抗原结合片段可W包含恒 定区的氨基酸，所述恒定区可W源自例如人抗体。
[0097] 在本发明的另一个示例性实施方案中，所述分离的抗体或抗原结合片段可W包含 人抗体的框架氨基酸。
[009引不限于本文呈现的示例性实施方案，申请人制备了可用于本文所述目的的具体抗 体和抗原结合片段。
[0099] 本发明因此在一个示例性实施方案中提供了分离的抗体或抗原结合片段，其包含 轻链可变域，所述轻链可变域具有：
[0100] (3)〔0化1序列，其选自56910側.：74和56910側.：75;
[0101] (b)CD化2序列，其选自SEQ ID NO. :76、SEQ ID NO. :77和SEQ ID NO. :78,或；
[010引（c)CD化3序列，其选自SEQ ID NO. :79、SEQ ID NO. :80和SEQ ID NO. :81。
[0103] 所述分离的抗体或抗原结合片段还可W包含重链可变域，所述重链可变域具有：
[0104] (a)CDRHl序列，其包含SEQ ID NO. :82 ;
[010引 （b)CDR肥序列，其选自SEQ ID NO. :83、SEQ ID NO. :84、SEQ ID NO. :85、SEQ ID NO. : 86和SEQ ID NO. : 87,或；
[0106] (c)CDR册序列，其选自SEQ ID NO. : 88、SEQ ID NO. : 89和SEQ ID NO. : 90。
[0107] 在一个示例性实施方案中，所述抗体或抗原结合片段可W包含轻链可变区的任意 单个CDR或者CDR1、CDR2和/或CDR3的组合。可W更具体地选择CDR3。组合可W包括， 例如，CD化1和CD化3 ;CD化1和CD化2 ;CD化2和CD化3,和；CD化1、CD化2和CD化3。
[0108] 在另一个示例性实施方案，所述抗体或抗原结合片段可W包含重链可变区的任 意单个CDR或者CDRUCDR2和/或CDR3的组合。可W更具体地选择CDR3。组合可W包括， 例如，CDRH1和CDR册；CDRH1和CDR肥；CDR肥和CDR册，和；CDRH1、CDR肥和CDR册。
[0109] 根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可W包含CD化1、CD化2或CD化3中的至少 2 个CDR。
[0110] 也根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可W包含一个CD化1、一个CD化2和一个 CD化3。
[0111] 进一步根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可W包含：
[0112] (a)CD化1、CD化2或CD化3中的至少2个CDR，和；
[0113]化）CDRH1、一个CDR肥或一个CDR册中的至少2个CDR。
[0114] 所述抗体或抗原结合片段可W更优选地包含一个CD化1、一个CD化2和一个 CD化3。
[0115] 所述抗体或抗原结合片段还可W更优选地包含一个CDRH1、一个CDR肥和一个 CDRH3。
[0116] 本发明的其它示例性实施方案涉及分离的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变 域，所述重链可变域具有：
[0117] (a)CDRH1 序列，其包含SEQIDNO. : 82;
[0118] (b)CDRH2 序列，其选自SEQIDNO. : 83、SEQIDNO. : 84、SEQIDNO. : 85、SEQID NO. : 86 和SEQIDNO. : 87,或；
[0119] (c)CDR册序列，其选自SEQIDNO. : 88、SEQIDNO. : 89 和SEQIDNO. : 90。
[0120] 根据本发明，所述抗体或抗原结合片段可W包含一个CDRHl、一个CDR肥或一个 CDRH3。
[0121] 根据本发明，所述抗体或抗原结合片段还可W包含一个CDRH1、一个CDR肥和一个 CDRH3。
[0122] 当仅可W得到一个轻链可变域或重链可变域时，使用本领域已知的方 法（Portolano等人HieJournalofImmunology(1993) 150:880-887,Clarkson等 人，化化re(1991) 352:624-628)，通过筛选互补可变域的文库，可W重建抗体或抗原结合片 段。
[0123] 本发明也包括包含可变链的多肤或抗体，所述可变链具有在至少一个本文所述的 CDR中的至少一个保守氨基酸置换（相对于最初的CDR)。
[0124] 本发明也包括包含可变链的多肤或抗体，所述可变链在至少2个CDR中具有至少 一个保守氨基酸置换（相对于最初的CDR)。
[01巧]本发明也包括包含可变链的多肤或抗体，所述可变链在所述3个CDR中具有至少 一个保守氨基酸置换（相对于最初的CDR)。
[0126] 本发明也包括包含可变链的多肤或抗体，所述可变链在至少一个CDR中具有至少 2个保守氨基酸置换（相对于最初的CDR)。
[0127] 本发明也包括包含可变链的多肤或抗体，所述可变链在至少2个CDR中具有至少 2个保守氨基酸置换（相对于最初的CDR)。
[0128] 本发明也包括包含可变链的多肤或抗体，所述可变