MEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 10%体积百分比、谷氨酰胺1%体积百分比、青霉素-链霉素1%体积百分比、抗坏血酸150 y M、0 -磷酸甘油10禮、地塞米松10 nM、白藜芦醇10 y M和葛根素0.1 y M。
[0032]制备方法:向DMEM/F12培养基中，按上述浓度加入FBS、谷氨酰胺、青霉素-链霉素、抗坏血酸母液、e -磷酸甘油母液、地塞米松母液、白藜芦醇母液和葛根素母液，搅拌均匀，过膜除菌即得。
[0033]抗坏血酸母液的配制:取10g抗坏血酸，用DMEM/F12培养基溶解，配成15mM的母液，-20度保存。0-磷酸甘油母液的配制:取10gf3-磷酸甘油，用DMEM/F12基础培养基溶解，配成1M的母液，-20度保存。地塞米松母液的配制:取lg地塞米松，用95%乙醇溶解，配成10 yM的母液，-20度保存。白藜芦醇母液的配制:取lOOmg白藜芦醇，用DMS0溶解，配成10mM的母液，-20度保存。葛根素母液的配制:取100mg葛根素，用甲醇溶解，配成0.1mM的母液，-20度保存。
[0034]实施例三间充质干细胞成骨诱导分化培养基间充质干细胞成骨诱导分化培养基，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 15%体积百分比、谷氨酰胺1.5%体积百分比、青霉素-链霉素1%体积百分比、抗坏血酸200 y M、0 -磷酸甘油20 mM、地塞米松10 nM、白藜芦醇15 y M和葛根素0.05 y M。
[0035]制备方法:与实施例二中的制备方法类似。
[0036]实施例四间充质干细胞成骨诱导分化培养基间充质干细胞成骨诱导分化培养基，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 10%体积百分比、谷氨酰胺1%体积百分比、青霉素-链霉素1%体积百分比、抗坏血酸150 y M、0 -磷酸甘油10 mM、地塞米松15 nM、白藜芦醇5 y M和葛根素0.2 y M。
[0037]制备方法:与实施例二中的制备方法类似。
[0038]实施例五骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化取P3代骨髓间充质干细胞，以5000个/cm2的密度接种于六孔板中，并用含10% (v/v)FBS的DMEM/F12培养基进行培养，待细胞汇合度达80%时，弃去培养基，分别加入诱导培养基1和诱导培养基2，每3天换液一次。诱导培养4周后，用茜素红进行成骨鉴定，结果如图2所示；同时，用qPCR鉴定成骨细胞相关基因0PN的表达水平，结果如图3所示。
[0039]从图2和图3可知:本发明提供的培养基所诱导分化的细胞，成骨钙结节更丰富，成骨相关基因0PN的表达水平更高(与诱导培养基2相比，P〈0.01 )，说明其成骨诱导分化效果更好。
[0040]实施例五脐带间充质干细胞的成骨诱导分化取P3代脐带间充质干细胞，以5000个/cm2的密度接种于六孔板中，并用含10% (v/v)FBS的DMEM/F12培养基进行培养，待细胞汇合度达80%时，弃去培养基，分别加入诱导培养基1和诱导培养基2，每3天换液一次。诱导培养4周后，用茜素红进行成骨鉴定，结果如图4所示；同时，用qPCR鉴定成骨细胞相关基因0PN的表达水平，结果如图5所示。
[0041]从图4和图5可知:本发明的培养基所诱导分化的细胞，成骨钙结节更丰富，成骨相关基因0PN的表达水平更高(与诱导培养基2相比，P〈0.01 )，说明其成骨诱导分化效果更好。
[0042]实施例六羊膜间充质干细胞的成骨诱导分化取P3代羊膜间充质干细胞，以5000个/cm2的密度接种于六孔板中，并用含10% (v/v)FBS的DMEM/F12培养基进行培养，待细胞汇合度达80%时，弃去培养基，分别加入诱导培养基1和诱导培养基2，每3天换液一次。诱导培养4周后，用茜素红进行成骨鉴定，结果如图6所示；同时，用qPCR鉴定成骨细胞相关基因0PN的表达水平，结果如图7所示。
[0043]从图6和图7可知:本发明的培养基所诱导分化的细胞，成骨钙结节更丰富，成骨相关基因0PN的表达水平更高(与诱导培养基2相比，P〈 0.01)，说明其成骨诱导分化效果更好。
[0044]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种间充质干细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于:包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 5~50%体积百分比、谷氨酰胺0.5~5%体积百分比、抗生素0.5~5%体积百分比、抗坏血酸100~1000 μΜ、磷酸甘油5~50 mM、地塞米松5~50 nM、白藜芦Il 5-50 4皿和葛根素0.05~0.5 4]?。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于:包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 5-20%体积百分比、谷氨酰胺0.5-2%体积百分比、抗生素0.5-2%体积百分比、抗坏血酸100~200 μ Μ、磷酸甘油5~20 mM、地塞米松5~20nM、白藜芦醇5~20 4皿和葛根素0.05~0.2 4]?。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于:包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度:FBS 10%体积百分比、谷氨酰胺1%体积百分比、抗生素1%体积百分比、抗坏血酸150 μ M、磷酸甘油10 mM、地塞米松10 nM、白藜芦醇10 μΜ和葛根素0.1 μΜ。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于:所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或羊膜间充质干细胞。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基，其特征在于:所述抗生素包括青霉素和链霉素，所述磷酸甘油为磷酸甘油。
6.根据权利要求1所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基的制备方法，其特征在于:包括如下步骤:向DMEM/F12培养基中，按所述浓度加入FBS、谷氨酰胺、抗生素、抗坏血酸母液、磷酸甘油母液、地塞米松母液、白藜芦醇母液和葛根素母液，搅拌均匀，过膜除菌即得。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基在间充质干细胞成骨诱导分化中的用途。
8.一种间充质干细胞成骨诱导分化方法，其特征在于:包括如下步骤:a)培养间充质干细胞山)待细胞汇合度符合要求时，弃去所述步骤a)中的培养基，加入权利要求1至5中任一项所述的间充质干细胞成骨诱导分化培养基培养3~5周。
9.根据权利要求8所述的间充质干细胞成骨诱导分化方法，其特征在于:所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞或羊膜间充质干细胞。
【专利摘要】本发明提供一种间充质干细胞成骨诱导分化培养基，属于干细胞技术领域，包括DMEM/F12培养基，还包括如下组分及其浓度：FBS 5~50%体积百分比、谷氨酰胺0.5~5%体积百分比、抗生素0.5~5%体积百分比、抗坏血酸100~1000μM、磷酸甘油5~50mM、地塞米松5~50nM、白藜芦醇5~50μM和葛根素0.05~0.5μM。本发明提供的间充质干细胞成骨诱导分化培养基具有诱导效率高等优点。
【IPC分类】C12N5-077
【公开号】CN104830758
【申请号】CN201510176994
【发明人】陈海佳, 王一飞, 葛啸虎, 戴国胜, 马岩岩
【申请人】广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月15日