一种解淀粉芽孢杆菌cd-17菌株及用图
【专利说明】-种解淀粉芽抱杆菌CD-17菌株及用途 发明领域
[0001] 本发明设及一种微生物及用途，更具体地说设及一种解淀粉芽抱杆菌炬acillus amyloliquefaciens)CD-17菌株、用途及其制剂的制备方法，属于生物农药技术领域。
【背景技术】
[0002] 由±传植物病原真菌侵杂引发的病害，如巧倒病、枯萎病、黄萎病等在农业和园艺 作物生产中造成重大损失。在生产中许多±传病害暴发能使作物绝收，常发情况下减少1-5 层的产量。为控制或减少该类病害的发生，当前最常用的方法有化学农药灌、化学熏蒸剂对 ±壤进行消毒、夏季高温闷棚和利用一些微生物菌剂在作物移栽后灌根等方法。然而该些 方法需投入大量的人力、物力和财力，而且处理不好会造成烧苗和大量的化学农药残留。
[0003] 随着化学农药的积年应用，植物病原菌对化学农药产生了严重的抗药性。当前几 乎所的植物病原菌对常用的化学农药都产生了不同程度的抗（耐）药性。为了有效防治植 物病害，农户往往采用的措施是加大农药的施用浓度、提高农药的使用频次来取得暂时的 有效性。但该些措施的经年使用，使得植物病原真菌的抗药性菌群在短期内程暴发流趋势。 由于化学农药的大量施用，使得食品安全风险越来越高。
[0004] 与化学农药相比，生物农药有着相应的优势，尤其在高附加值园艺作物生产上，生 物农药能够发挥很好的作用。在系统生物防治措施的作用下，生物农药能为植物提供有利 的生存环境，如生防菌在作物种子或根围形成有益微生物群落，在植物表面定殖形成生物 膜，同时产生多种类型抑菌化合物，抑制病原菌的繁殖等。此外，生防菌在与病原菌的生存 竞争中能有效的利用自生的高繁殖能力，迅速占用了大量的生存空间和生存区域物质的能 量，造就了对植物病原菌不利的生存环境，通过W上多种方式达到控制有害植物病原菌对 农作物的侵染。该种作用方式多样的结果使得植物病原菌不易产生抗药性，而生防菌对环 境无污染的特点，使得其在高效农业中得到在规模应用成为可能。目前美国等发达国家在 农药分级上，把活体微生物防治列为无危害级（OMRI)，即能应用于有机农业农作物生产中 的植物病害防治措施。
[0005] 对±传病害的防治关键是抓住防治适期。由于作物移栽过程中会不可避免的对其 根系造成损伤，根系损伤形成的微伤口是±传病害侵染的主要途径，植物病原菌在根部有 微伤口可迅速侵染，一旦侵染后则再多的防控措施也难W补救。因此，即时修复微伤口并在 伤口周围形成有益微生物菌群来抑制病原菌的初侵染，是一个有效的防治措施。本发明提 供一种微生物浸根剂，利用该剂可即时修复伤根的同时在伤根周围形成生物膜，有效抑制 病原菌的初侵染。试验结果表明，该生物修复剂能有效防治多种植物病害。本发明提供的 制备能有效修复植物伤根和防病的微生物制剂的技术及其应用方法，在现有技术中没有提 及和公开。
【发明内容】
[0006] 本发明解决现有技术存在的不足，提供一株新分离自草鱼肠道可培养微生物的芽 抱杆菌：解淀粉芽抱杆菌炬acillusamyloliquefaciens)CD-17菌株。本发明还提供用该 解淀粉芽抱杆菌CD-17菌株加工植物伤根修复和防病的微生物制剂的方法及其应用技术。
[0007] 本发明是通过W下技术方案实现的：
[0008] 本发明的解淀粉芽抱杆菌（拉了文学名为Bacillusamyloliquefaciens)CD-17 菌株，已于2013年7月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、保藏，保藏 号为；CGMCCNo. 7968。本发明的菌种具有如下特征；
[0009] (1)CD-17菌株的细胞形态及生理生化特征（见表1):
[0010] 表1.CD-17菌株细胞形态及理化特征
[0011]
[001引（2)CD-17 菌株 16SrDNA基因序列为（即SEQIDN0:1);
[0016] 用本发明的植物伤根修复和防病的CD-17菌株制备的微生物制剂，其制备方法包 括W下步骤：
[0017] (A)菌液的获得
[0018] 挑取事先在PDA固体培养基上培养好的CD-17菌株单菌落斑，接种于装有5mL PD 液体培养液（PDA培养基不加琼脂）的容积为20mL的S角瓶中，于30°C、200rpm条件下培养 16h，将培养液5mL全部接种于装有400mL PD培养液的容积为lOOOmL的S角瓶中，200巧m、 30°C条件下培养16h ;把所得的400mL培养液接种于装有20L培养液的容积为3化的发酵罐 (镇江东方GUS-30)，2化发酵培养液中固容物含量为；黄豆粉lOOg、水溶性淀粉200g、庶糖 25g、酵母粉25gXaC〇320g、MnS〇4l. Og，设置发酵条件为；溶氧100%，揽拌速度为35化pm，发 酵温度33 °C，发酵时间2化，抑7. 0-7. 2 ;
[0019] 炬）微生菌剂的加工
[0020] 微生物菌剂的加工步骤；（1)将上述发酵液在8000巧m条件下离屯、lOmin，弃 上清，沉淀物用1000血20%丙S醇溶液（V/V)重新悬浮（20%丙S醇溶液中溶有16克 N&Cl)，测定悬浮液的活芽抱含量，根据测定结果用20%丙S醇溶液（V/V)调节悬浮液的活 芽抱数至终芽抱含量为1. 0-2.8Xl〇i°c化/mL;(2)在上述调节好的悬浮液中按40g/L(W/V) 的用量加入膜化小麦粉，并揽拌均匀，得成品微生物制剂的活芽抱数约为1.OXl(Tc化/mL， 置5 °C低温保存。
[0021] 本发明的有益效果是：
[0022] 本发明提供的解淀粉芽抱杆菌CD-17菌株是一株能有效抑制多种植物病原真菌 的生防细菌。本发明中所提供的植物伤根修复和防病的微生物制剂均由该菌株的发酵产物 经过加工制备而成。本发明详细提供了利用CD-17菌株制备微生物菌剂的加工技术、施用 方法及制剂的助剂成份含量等关键技术。本发明提供的微生物制剂在施用后封闭并修复了 根部微伤口，从而能很好的阻断上壤病原菌从根部伤口的侵入途径，此外，微生物制剂中的 生防细菌通过利用制剂提供的速效养分在植物根围快速繁殖，建立了有益微生物群落，抑 制有害植物病原菌的侵染。
[002引本发明的生物材料，其分类命名为：解淀粉芽抱杆菌CD-17炬acillus amyloliquefaciensCD-17)，已于2013年7月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中屯、（简称CGMCC，地址；北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物 研究所）保藏，保藏号为；CGMCCNo.7968。
【具体实施方式】[0024] 实施例
[0025] 本发明的解淀粉芽抱杆菌（拉了文学名为Bacillusamyloliquefaciens)菌株 CD-17,已于2013年7月26日在