醇（48. 5mg，59. 3yL， 551ymol)加入到6-氯-4- (3, 3-二氟吡咯烷-1-基）-1- (2-(三氟甲基）苄基）-1H-吡 唑并[3,4-d]嘧啶（46mg，110ymol;实施例37c)在THF(lmL)中的溶液。将反应混合物在 80°C搅拌4h，倒入25mLEtOAc中并用水（2x20mL)洗涤。将合并的水层用EtOAc(lx25mL) 反萃取。将合并的有机层用MgS04干燥并在真空中浓缩。将粗物质通过急骤色谱法（硅胶， 20g，0%至50%EtOAc，在庚烷中）纯化，从而提供标题化合物（35mg，68% )，为白色固体； MS(ESI)470. 7[MH+]。
[0445] 实施例39
[0446] 药理学试验
[0447] 进行以下试验以确定式（I)化合物的活性：
[0448] 放射件配体结合测宙
[0449] 本发明化合物对大麻素CB1受体的亲和性使用建议量的表达人CNR1或 CNR2受体的人胚胎肾（HEK)细胞的膜制品（PerkinElmer)各自分别结合1. 5或 2. 6nM[3H]-CP_55,940(PerkinElmer)作为放射性配体确定。结合在总体积为0. 2ml的 结合缓冲液（对于CB1 受体 50mMTris，5mMMgCl2,2.5mMEDTA，和 0.5% (wt/vol)无脂 肪酸BSA，pH7. 4,和对于CB2 受体 50mMTris，5mMMgCl2, 2. 5mMEGTA，和 0? 1% (wt/vol) 无脂肪酸BSA，pH7.4)中进行，在30°C振荡lh。通过经涂布有0.5%聚乙烯亚胺的微过 滤板（UniFilterGF/B过滤板；Packard)快速过滤将反应终止。对于Ki使用非线性回归 分析（ActivityBase，IDBusinessSolution，Limited)来分析结合的放射性，对于[3H] CP55, 940的Kd值从饱和试验确定。式（I)化合物显示对于CB2受体的优异的亲和性，亲和 性低于10yM，更特别是InM至3yM并且最特别是InM至100nM。
[0450]cAMP测宙
[0451] 将表达人CB1或CB2受体的CH0细胞在实验之前17-24小时以50. 000细胞/孔 接种在具有透明平底的黑色96孔平板（CorningCostar#3904)中、在DMEM(Invitrogen No.31331)中，补充lxHT，具有10%胎牛血清，并在湿润的培养箱中在5%C0jP37°C 下温育。将培养基用具有ImMIBMX的KrebsRingerBicarbonate缓冲液交换，并且 在30 °C温育30分钟。加入化合物至最终测定体积为100y1，并且在30 °C温育30分 钟。使用cAMP-Nano-TRF检测试剂盒（RocheDiagnostics)，通过加入50y1裂解试剂 (Tris,NaCl, 1. 5 %TritonX100, 2. 5 %NP40, 10 %NaN3)和 50y1 检测溶液（20yMmAb Alexa700-cAMP1:1,和 48yMRuthenium-2-AHA-cAMP)终止测定，并且室温振荡 2h。通过 装备有ND:YAG激光器作为激发源的TRF读出器（EvotecTechnologiesGmbH)测量时间 分辨能量转移。将平板测量两次，在355nm激发和分别在730 (带宽30nm)或645nm(带宽 75nm)以100ns的延迟和100ns的门（gate)发射，总暴露时间是10s。FRET信号的计算如 下：FRET=I730-Alexa730-P(T645-B645)，P=Ru730-B730/Ru645-B645,其中 1730 是在 730nM测量的测试孔，T645是在645nm测量的测试孔，B730和B645是分别在730nm和645nm 的缓冲液对照。cAMP含量从跨度为从10yM至0. 13nMcAMP的标准曲线的函数来测定。
[0452]使用ActivityBase分析（IDBusinessSolution,Limited)测定EC5。值。从该 测定产生的宽范围的大麻素激动剂的EC5。值与科学文献中公开的值吻合。
[0453] 本发明的化合物是CB2受体激动剂，其EC5。低于1yM，并且在相应测定中相对于 CB1的选择性为至少10倍。本发明的特别的化合物是CB2受体激动剂，其EC5。低于0. 01yM， 并且在相应测定中相对于CB1的选择性为至少2000倍。
[0454] 例如，以下化合物在上述功能cAMP测定中显示以下人EC5。值：
[0455]
[0456]
[0457] 实施例A
[0458] 可以以常规方式制备含有下列成分的薄膜包衣片剂：
[0459]
[0460]
[0461] 筛分活性^分，并与微晶纤维素混和，一将混合"用聚乙稀^比略烧酮的水溶液制 粒。然后将颗粒与淀粉羟乙酸钠和硬脂酸镁混和并且压制，分别获得120或350mg的核。将 所述核用上述薄膜包衣的水溶液/悬浮液包衣。
[0462] 实施例B
[0463] 可以以常规方式制备含有下列成分的胶囊：
[0464]
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[0465] 筛分组分并混合和填充到2号胶囊中。 '
[0466] 实施例C
[0467] 注射液可以具有下列组成：
[0468]
[0469] 将活性成分溶解在聚乙二醇400和注射用水（一部分）的混合物中。通过加入乙 酸将pH调到5. 0。加入余量的水将体积调到1. 0ml。将溶液过滤，使用适当覆盖装入小瓶 中并灭菌。
【主权项】
1. 式⑴的化合物，其中 A1是碳或氮； A2是碳或氮； A3是-(CH2)n-或-CH2C(O)-; R1是烷基，环烷基，烷氧基或卤素； R2是烷氧基，取代的吡咯烷基或取代的二氢吡咯基，其中取代的吡咯烷基和取代的二 氢吡咯基是被一个或两个独立地选自卤素，羟基，羟基烷基，烷氧基烷基和烷基呋咱基烷氧 基的取代基取代的吡咯烷基和二氢吡咯基； R3是苯基，取代的苯基，取代的咲咱基，P比陡基，取代的P比陡基，^氧代硫杂环丁基，四 氢呋喃基，取代的四唑基或取代的三唑基，其中取代的苯基，取代的呋咱基，取代的吡啶基 和取代的二唑基是被个或两个独立地选自烷基，烷氧基，卤素，卤代烷基，烷基横醜基和 环烷基的取代基取代的苯基，吡啶基和三唑基，并且其中取代的四唑基和取代的呋咱基是 被个选自烷基，烷氧基，卤素，卤代烷基，烷基横醜基和环烷基的取代基取代的四唑基和 呋咱基； n是0，1或2 ; 前提条件是A1和A2不同时是碳； 或其药用盐或酯。2. 根据权利要求1的化合物，其中A1是氮。3. 根据权利要求1或2的化合物，其中A2是氮。4. 根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中A3是-(CH2)n-。5. 根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中R1是烷基。6. 根据权利要求1至5中任一项的化合物，其中R1是叔丁基。7. 根据权利要求1至6中任一项的化合物，其中R2是取代的吡咯烷基，其中取代的吡 咯烷基是被一个或两个独立地选自卤素和羟基的取代基取代的吡咯烷基。8. 根据权利要求1至7中任一项的化合物，其中R2是二氟吡咯烷基或羟基吡咯烷基。9. 根据权利要求1至8中任一项的化合物，其中R3是取代的苯基，取代的呋咱基，取代 的吡啶基，取代的四唑基或取代的三唑基，其中取代的苯基，取代的吡啶基和取代的三唑基 是被一个或两个独立地选自烷基，卤素和卤代烷基的取代基取代的苯基，吡啶基和三唑基， 其中取代的四唑基是被一个选自烷基和环烷基的取代基取代的四唑基，并且其中取代的呋 咱基是被烷基取代的呋咱基。10. 根据权利要求1至9中任一项的化合物，其中R3是三氟甲基苯基，甲基呋咱基，氯 吡啶基，甲基四唑基，环丙基四唑基，二甲基三唑基或甲基三唑基。11. 根据权利要求1至10中任一项的化合物，其中n是1。12. 根据权利要求1至11中任一项的化合物，其选自： 6_叔丁基_4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-[(4-甲氧基苯基）甲基]-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 1-苄基-6-叔丁基-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； (S)-l-[6-叔丁基-l-[(2-氯苯基）甲基]-IH-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]-吡咯 烧_3_醇； 6_叔丁基-1-[ (2-氯苯基）甲基]-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡唑并[3, 4-d] 嘧啶； 6_叔丁基-1_[ (2-氯苯基）甲基]-4-乙氧基-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-1-[ (2-氯-4-氟苯基）甲基]-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-[ (2-三氟甲基苯基）甲基]-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-苯乙基-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(4-甲基-呋咱-3-基甲基）-IH-吡唑 并[3, 4-d]嘧啶； 6-叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(2-甲磺酰基-苄基）-lH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(2-吡啶-3-基-乙基）-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-1- (2-氯-吡啶-3-基甲基）-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(1, 1-二氧代-IA6-硫杂环 丁 -3-基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(四氢-呋喃-3-基）-IH-吡唑并[3, 4-d] 嘧啶； 6_叔丁基-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-I- (1-甲基-IH-四唑-5-基甲基）-IH-吡 唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-1-(1-环丙基-IH-四唑-5-基甲基）-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡 唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_ 叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(4, 5-二甲基-4H-[1，2, 4]三唑-3-基 甲基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_ 叔丁基-1- (4, 5-二甲基-4H- [ 1，2, 4]三唑-3-基甲基）-4- (3-氟-2, 5-二氢-吡 咯-1-基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(3-甲基-3H-[1，2, 3]三唑-4-基甲 基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_ 叔丁基-4- (3-氟-2, 5-二氢-吡咯-1-基）-1- (3-甲基-3H-[1，2, 3]三唑-4-基 甲基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 2_[6_叔丁基-4-(3,3-二氟-吡咯烷-1-基）-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-吡 啶-4-基-乙酮； 2_[6_叔丁基-4-(3,3-二氟-吡咯烷-1-基）-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基]-1-吡 啶-2-基-乙酮； (S)-1-[6-叔丁基-1-[ (4-甲氧基苯基）甲基]-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-基]-吡 咯烷-3-醇； 6-环丙基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-[ (4-甲氧基苯基）甲基]-IH-吡唑并 [3, 4-b]吡啶； (S)-I-[6-叔丁基-1-(4-甲基-呋咱-3-基甲基）-lH-吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-4-基]-吡咯烷-3-醇； 6_叔丁基-4-[⑶-3- (4-甲基-呋咱-3-基甲氧基）-吡咯烷-1-基]-1- (4-甲基-呋 咱-3-基甲基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6-环丙基-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1- (4-甲基-呋咱-3-基甲基）-IH-吡唑 并[4, 3-c]吡啶； 6-环丙基-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1- (4-甲基-呋咱-3-基甲基）-IH-吡唑 并[3, 4-b]吡啶； (S)-l-[6-叔丁基-l-[(2-三氟甲基苯基）甲基]-IH-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]-吡 咯烷-3-醇； (S)-1-[6-叔丁基-1-(2-甲磺酰基-苄基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-基]-吡咯 烷-3-醇； (S)-I-[6-叔丁基-1-(1-甲基-IH-四唑-5-基甲基）-lH-吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-4-基]-吡咯烷-3-醇； (S) -1-[6-叔丁基-1- (3-氯-吡啶-2-基甲基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-4-基]-吡 咯烷-3-醇； (S)-I-[6-叔丁基-1-(1-环丙基-IH-四唑-5-基甲基）-lH-吡唑并[3,4-d]嘧 啶-4-基]-吡咯烷-3-醇； {(R)-l-[6-叔丁基-l-[(2-三氟甲基苯基）甲基]-IH-吡唑并[3,4-d]嘧 啶-4-基]-吡咯烷-2-基}-甲醇； 6_叔丁基-4-((R)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基）-1-[(2_三氟甲基苯基）甲 基]-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-((R)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基）-1-(4-甲基-呋咱-3-基甲 基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_氯-4-(3, 3-二氟吡咯烷-1-基）-1-[[2-(三氟甲基）苯基]甲基]吡唑并[3, 4-d] 嘧啶；和 4- (3, 3-二氟吡咯烷-1-基）-6- (2, 2-二甲基丙氧基）-1- [ [2-(三氟甲基）苯基]甲 基]吡唑并[3, 4-d]嘧啶。13.根据权利要求1至12中任一项的化合物，其选自： 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-[ (2-三氟甲基苯基）甲基]-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6-叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-I-基）-I-(4-甲基-呋咱-3-基甲基）-IH-吡唑 并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-1- (2-氯-吡啶-3-基甲基）-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡唑并 [3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4- (3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-I- (1-甲基-IH-四唑-5-基甲基）-IH-吡 唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-1-(1-环丙基-IH-四唑-5-基甲基）-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-IH-吡 唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_ 叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(4, 5-二甲基-4H-[1，2, 4]三唑-3-基 甲基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； 6_叔丁基-4-(3, 3-二氟-吡咯烷-1-基）-1-(3-甲基-3H-[1，2, 3]三唑-4-基甲 基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶； (S)-I-[6-叔丁基-1-(4-甲基-呋咱-3-基甲基）-lH-吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-4-基]-吡咯烷-3-醇；和 (S)-l-[6-叔丁基-l-[(2-三氟甲基苯基）甲基]-IH-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]-吡 咯烷-3-醇。14.用于制备根据权利要求1至13中任一项的化合物的方法，所述方法包括以下步骤 中的一个： (a) 式（A)的化合物在R2H和碱存在下反应(b) 式（B)的化合物在R3-A3-X和碱存在下反应(c) 式（C)的化合物在MR1，钯催化剂和碱存在下反应(d)式（D)的化合物在MR1，钯催化剂和碱存在下反应其中A1至A3和R1至R3是如权利要求1至13中任一项所限定的，X是离去基团并且M是适当取代的金属种类。15. 根据权利要求14的方法制备的根据权利要求1至13中任一项的化合物。16. 根据权利要求1至13中任一项的化合物，其用作治疗活性物质。17. 药物组合物，其包含根据权利要求1至13中任一项的化合物和治疗惰性载体。18. 根据权利要求1至13中任一项的化合物用于治疗或预防疼痛、动脉粥样硬化、老年 性黄斑退化症、糖尿病性视网膜病、青光眼、视网膜静脉闭塞、早产儿视网膜病、眼缺血综合 征、地图样萎缩、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血-再灌注损伤、急性肝衰竭、肝纤维化、肺纤 维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病肾 病、肾小球肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血、心肌梗死、系统性硬化、热损伤、烧伤、肥大性 疤痕、瘢痕疙瘩、龈炎发热、肝硬化或肿瘤、骨质调节、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化、阿尔茨 海默病、帕金森病、卒中、一过性缺血发作或葡萄膜炎的用途。19. 根据权利要求1至13中任一项的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗 或预防疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑退化症、糖尿病性视网膜病、青光眼、视网膜静脉闭 塞、早产儿视网膜病、眼缺血综合征、地图样萎缩、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血-再灌注损 伤、急性肝衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢 性同种异体移植肾病、糖尿病肾病、肾小球肾病、心肌病、心、力衰竭、心、肌缺血、心肌梗死、系 统性硬化、热损伤、烧伤、肥大性疤痕、瘢痕疙瘩、龈炎发热、肝硬化或肿瘤、骨质调节、肌萎 缩侧索硬化、多发性硬化、阿尔茨海默病、帕金森病、卒中、一过性缺血发作或葡萄膜炎。20. 根据权利要求1至13中任一项的化合物，其用于治疗或预防疼痛、动脉粥样硬化、 老年性黄斑退化症、糖尿病性视网膜病、青光眼、视网膜静脉闭塞、早产儿视网膜病、眼缺血 综合征、地图样萎缩、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血-再灌注损伤、急性肝衰竭、肝纤维化、 肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿 病肾病、肾小球肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血、心肌梗死、系统性硬化、热损伤、烧伤、肥 大性疤痕、瘢痕疙瘩、龈炎发热、肝硬化或肿瘤、骨质调节、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化、阿 尔茨海默病、帕金森病、卒中、一过性缺血发作或葡萄膜炎。21. 用于治疗或预防疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑退化症、糖尿病性视网膜病、青 光眼、视网膜静脉闭塞、早产儿视网膜病、眼缺血综合征、地图样萎缩、糖尿病、炎症、炎性肠 病、缺血-再灌注损伤、急性肝衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同 种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病肾病、肾小球肾病、心肌病、心力衰竭、心 肌缺血、心肌梗死、系统性硬化、热损伤、烧伤、肥大性疤痕、瘢痕疙瘩、龈炎发热、肝硬化或 肿瘤、骨质调节、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化、阿尔茨海默病、帕金森病、卒中、一过性缺血 发作或葡萄膜炎的方法，所述方法包括向需要其的患者施用有效量的如权利要求1至13中 任一项定义的化合物。22. 如上所述的本发明。
【专利摘要】本发明涉及式(I)的化合物，其中A1至A3和R1至R3是如说明书和权利要求中所限定的。式(I)的化合物可以用作药物。
【IPC分类】C07D473/04, C07D487/04, C07D471/04
【公开号】CN105143220
【申请号】CN201480012444
【发明人】尤伟·格雷瑟, 金原笃, 马蒂亚斯·内特科文, 法比耶纳·里克兰, 斯蒂芬·勒韦尔, 马克·罗杰斯-埃文斯, 坦贾·舒尔兹-加施
【申请人】豪夫迈·罗氏有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2014年3月4日
【公告号】CA2897513A1, WO2014135507A1