一种凝胶及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及组织工程皮肤保存领域，尤其设及一种凝胶及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着组织工程皮肤的研究和开发，组织工程皮肤的保存方法层出不穷，目 前组织工程皮肤的保存主要包括冷藏保存与冷冻保存两种，由于冷冻保存过程中容易产生 冰晶，对组织工程皮肤的细胞和组织容易造成损伤，因此，组织工程皮肤最优选的保存方法 为冷藏保存。目前用于保存组织工程皮肤的培养基也具有多种形式，例如，用于保存组织 工程皮肤的培养基可W为液态培养基，也可W为固态培养基，其中，在采用液态培养基对所 述组织工程皮肤进行冷藏保存时，所述组织工程皮肤受到所述液态培养基的冲刷容易使细 胞、组织发生损伤，当所述组织工程皮肤具有表皮层与真皮层时，容易使所述组织工程皮肤 的表皮层和真皮层发生脱落分离，从而影响组织工程皮肤的细胞活力。因此，固态培养基更 合适于组织工程皮肤的冷藏保存。
[0003] 在现有技术中，已有的固态培养基在用于组织工程皮肤保存时，尚没有任何突破 性进展，组织工程皮肤的保存时间仍然为组织工程皮肤应用的主要限制因素。
【发明内容】
[0004] 本发明的主要目的在于，提供一种凝胶及其制备方法和应用。在采用该凝胶对组 织工程皮肤进行保存时，能够保持组织工程皮肤的细胞活力，延长组织工程皮肤的保存时 间。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 一方面，本发明实施例提供一种凝胶，包括：液体培养基W及凝固剂；其中，所述 液体培养基包括质量浓度为5-lOg/L的基础培养基、质量浓度为0. 2-1. Omg/L的谷脫甘肤、 质量浓度为0. 4-1. Og/L的色氨酸和质量浓度为0. 1-0. 3g/L的a -酬戊二酸；
[0007] 所述凝固剂为质量浓度为1. 0-1. 5%的琼脂溶液。
[0008] 可选的，所述液体培养基还包括：质量浓度为0. 5-1.Og/L的k谷氨酷胺、体积浓 度为5% -15%的胎牛血清和摩尔浓度为30-50mM的4-径乙基赃嗦乙横酸。
[0009] 优选的，所述液体培养基还包括：质量浓度为5. 0-7.Og/L碳酸氨钢、质量浓度为 0. 6-6.Ong/L的碱性成纤维生长因子bFGF和质量浓度为4-16yg/L的膜岛素。
[0010] 可选的，所述液体培养基还包括：质量浓度为10-30mg/L的维生素C、质量浓度为 0. 1-0. 3mg/L的氨化的可松、质量浓度为6-20mg/L的转铁蛋白、质量浓度为20-40mg/L的腺 嚷岭和质量浓度为0. 1-1.化g/L的表皮生长因子EGF。
[0011] 优选的，所述基础培养基包括质量浓度为14. 4-15.Og/L的DMEM和质量浓度为 4. 0-5. 6g/L的F12。
[0012] 另一方面，本发明实施例提供一种如上述所述的凝胶的制备方法，包括：
[0013] 步骤1)分别配制液体培养基W及凝固剂；其中，所述凝固剂为质量浓度为 I. 0-1. 5%的琼脂溶液；
[0014] 步骤2)将所述液体培养基与所述凝固剂混合、静置，使所述液体培养基与所述凝 固剂的混合液凝固，获得凝胶。
[0015] 优选的，在将所述液体培养基与所述凝固剂混合时，所述液体培养基的溫度为 4-8 °C，所述凝固剂的溫度为60-68 °C。
[0016] 再一方面，本发明实施例提供一种上述所述的凝胶在保存组织工程皮肤中的应 用。
[0017] 优选的，所述组织工程皮肤包括真皮层与表皮层，所述应用包括：
[0018] SI)将组织工程皮肤的表皮层朝上置于培养皿中；
[0019] S2)将所述液体培养基W及凝固剂的混合液注入所述培养皿中，静置，使所述液 体培养基与所述凝固剂的混合液凝固成凝胶，所述组织工程皮肤的真皮层包裹在所述凝胶 中，表皮层裸露在外。
[0020] 优选的，在S2)之前还包括将所述液体培养基与所述凝固剂混合，其中，所述液体 培养基的溫度为4-8°C，所述凝固剂的溫度为60-68°C。
[0021] 可选的，SI)具体为：将组织工程皮肤放置于底部具有通孔的容器中，并将所述容 器放置于所述培养皿中，其中，所述容器的边缘与所述培养皿的侧壁之间具有空隙。
[0022] 本发明实施例提供一种凝胶及其制备方法和应用。在通过所述凝胶对组织工程皮 肤进行保存时，能够防止液体培养基冲刷所述组织工程皮肤，使组织工程皮肤的细胞与组 织造成损伤，从而能够保持所述组织工程皮肤的细胞活力，且所述凝胶的各个组分能够为 组织工程皮肤提供营养，并保护组织工程皮肤免受低溫缺氧损伤，进一步保持所述组织工 程皮肤的细胞活力，使得组织工程皮肤的保存时间大大延长。
【附图说明】
[0023] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述 中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些 实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可W根据运些附 图获得其它的附图。
[0024] 图1为本发明实施例提供的一种凝胶的制备方法流程图；
[0025] 图2为本发明实施例提供的一种凝胶的应用的方法流程图。
【具体实施方式】
[00%] 现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每 一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可W对 本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部 分而说明或描述的特征可W用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。因此，基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0027] 本发明实施例所设及的材料均可W通过商业途径或通过申请人获取。
[0028] 一方面，本发明实施例提供一种凝胶，包括：液体培养基W及凝固剂；其中，所述 液体培养基包括质量浓度为18. 4-20. 6g/L的基础培养基、质量浓度为0. 2-1. Omg/L的谷脫 甘肤、质量浓度为0. 4-1. Og/L的色氨酸和质量浓度为0. 1-0. 3g/L的a -酬戊二酸；
[0029] 所述凝固剂为质量浓度为1. 0-1. 5%的琼脂溶液。
[0030] 其中，凝胶是指具有弹性的处于半固体状态且失去流动性的稠厚物质，该凝胶中 的凝固剂为琼脂溶液，琼脂溶液在用于制备固体培养基时，能够提高固体培养基的凝固型 与稳定性，该凝胶中的谷脫甘肤具有保护组织工程皮肤免受低溫损伤的作用，所述色氨酸 能够为组织工程皮肤提供营养物质且避免组织工程皮肤低溫缺氧而造成损伤，所述a-酬 戊二酸能够保护组织工程皮肤免受低溫损伤。
[0031] 本发明实施例提供一种凝胶。在通过所述凝胶对组织工程皮肤进行保存时，能够 防止液体培养基冲刷所述组织工程皮肤，使组织工程皮肤的细胞与组织造成损伤，从而能 够保持所述组织工程皮肤的细胞活力，且所述凝胶的各个组分能够为组织工程皮肤提供营 养，并保护组织工程皮肤免受低溫缺氧损伤，能够进一步保持所述