组织工程皮肤的细胞活 力，使得组织工程皮肤的保存时间大大延长。
[0032] 其中，对所述基础培养基的具体组分不做限定，所述基础培养基可W为DMEM，也可 W为F12。
[0033] 本发明的一实施例中，所述基础培养基包括质量浓度为14. 4-15.Og/L的DMEM和 质量浓度为4. 0-5. 6g/L的F12。其中，所述DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基， F12含有较丰富的成分，运两种培养基能够为成纤维细胞和表皮细胞生长提供多种营养成 分。
[0034] 其中，对所述基础培养基的获取方式不做限定，所述基础培养基可W通过商业途 径获取，也可W通过自制获得。 阳03引其中，对所获取的基础培养基形态不做限定，所述DMEM与Fl2可W为粉末，也可W为溶液，当所述DMEM与F12为液态时，可W根据所述DMEM与F12的浓度计算所述DMEM与 F12的添加量，当所述DMEM与F12为粉末时，可W根据所述DMEM与F12的浓度进行配制。
[0036] 优选的，所述液体培养基还包括：质量浓度为0. 5-1.Og/L的k谷氨酷胺、体积 浓度为5% -15%的胎牛血清和摩尔浓度为30-50mM的4-径乙基赃嗦乙横酸。其中，所述 k谷氨酷胺的降解产物为组织工程皮肤提供营养物质，4-径乙基赃嗦乙横酸为一种生物 缓冲剂，具有比较强的缓冲能力，能够使所述基础培养液的抑值长时间保持在恒定的范围 内。
[0037] 进一步优选的，所述液体培养基还包括：质量浓度为5. 0-7.Og/L碳酸氨钢、质量 浓度为0. 6-6.化g/L的碱性成纤维生长因子bFGF和质量浓度为4-16yg/L的膜岛素。其 中，所述碳酸氨钢具有缓冲作用，能够维持组织工程皮肤在保存过程中的抑值恒定，所述 碱性成纤维生长因子具有促进组织工程皮肤中的真皮层细胞生长的作用，所述膜岛素能够 加快组织工程皮肤的葡萄糖利用率。
[0038] 更进一步地，所述液体培养基还包括：质量浓度为10-30mg/L的维生素C、质量浓 度为0. 1-0. 3mg/L的氨化的可松、质量浓度为6-20mg/L的转铁蛋白、质量浓度为20-40mg/ L的腺嚷岭和质量浓度为0. 1-1.化g/L的表皮生长因子EGF。其中，所述维生素C具有抗氧 化作用与消除自由基的作用，在用于组织工程皮肤的保存时能够保护组织工程皮肤免受低 溫损伤的作用，消除组织工程皮肤在保存过程中产生的自由基的作用；所述氨化的可松具 有保持组织工程皮肤的渗透压在正常范围内，从而避免组织工程皮肤由于细胞内的高渗透 压而导致溶质性损伤，所述转铁蛋白具有修复细胞的作用，降低细胞的坏死比例；所述腺嚷 岭为一种DNA合成物，具有为组织工程皮肤提供能量的作用，所述表皮生长因子具有促进 表皮细胞生长的作用。
[0039] 另一方面，参见图1，为本发明实施例提供的一种如上述所述的凝胶的制备方法的 流程图，包括：
[0040] 步骤1)分别配制液体培养基W及凝固剂；其中，所述凝固剂为质量浓度为 1.0-1. 5 %的琼脂溶液；
[0041] 步骤2)将所述液体培养基与所述凝固剂混合、静置，使所述液体培养基与所述凝 固剂的混合液凝固，获得凝胶。
[0042] 其中，凝胶是指具有弹性的处于半固体状态且失去流动性的稠厚物质。
[0043] 本发明实施例提供一种如上述所述的凝胶的制备方法。该方法通过琼脂作为凝固 剂与所述液体培养基混合，所获得的混合液通过静置凝固而获得凝胶，所获得的凝胶中具 有丰富的营养物质，能够为组织工程皮肤提供营养，并保护组织工程皮肤免受低溫缺氧损 伤，能够进一步保持所述组织工程皮肤的细胞活力，使得组织工程皮肤的保存时间大大延 长。
[0044] 本发明的一实施例中，在将所述液体培养基与所述凝固剂混合时，所述液体培养 基的溫度为4-8°C，所述凝固剂的溫度为60-68°C。由于液体培养液中具有多种活性成分， 因此，在将所述液体培养液与琼脂溶液混合时，若琼脂溶液的溫度过高会使得液体培养液 中的活性成分发生失活，若琼脂溶液的溫度过低，在将所述琼脂溶液与液体培养液混合时， 会由于溫度低于30°C而发生凝固，不利于均匀混合，在本发明实施例中，将所述基础培养液 与所述琼脂溶液进行混合时，能够保持基础培养液中活性成分的活性，并使得所述基础培 养液与所述琼脂溶液混合均匀。
[0045] 再一方面，本发明实施例提供的一种上述所述的凝胶在保存组织工程皮肤中的应 用。
[0046] 本发明实施例提供的一种上述所述的凝胶在保存组织工程皮肤中的应用。将所述 凝胶用于保存组织工程皮肤，与液体培养基相比能够防止液体培养基对所述组织工程皮肤 造成冲刷，使得组织工程皮肤的细胞、组织容易发生损坏，从而能够提高所述组织工程皮肤 中的细胞活力，且由于所述凝胶中含有丰富的营养物质，能够为所述组织工程皮肤的保存 提供营养，并保护组织工程皮肤免受低溫缺氧损伤，能够进一步保持组织工程皮肤的细胞 活力，使得组织工程皮肤的保存时间大大延长。
[0047] 其中，对所述凝胶在保存组织工程皮肤中的应用的具体方法不做限定。可W将制 备好的组织工程皮肤嵌在所述凝胶中进行保存。
[0048] 本发明的一实施例中，所述组织工程皮肤包括真皮层与表皮层，参见图2,所述应 用包括：
[0049] SI)将组织工程皮肤的表皮层朝上置于培养皿中；
[0050] S2)将所述液体培养基W及凝固剂的混合液注入所述培养皿中，静置，使所述液 体培养基与所述凝固剂的混合液凝固成凝胶，所述组织工程皮肤的真皮层包裹在所述凝胶 中，表皮层裸露在外。
[0051] 在本发明实施例中，通过将具有表皮层和真皮层的组织工程皮肤的表皮层朝上放 置在培养皿中，并将琼脂溶液与基础培养液的混合液注入所述培养皿中，静置，使所述液体 培养基与所述凝固剂的混合液凝固成凝胶，将组织工程皮肤的表皮层裸露在外，真皮层包 裹在所述凝胶中，在对该组织工程皮肤进行保存时，由于所述组织工程皮肤被半包埋在凝 胶中，所述组织工程皮肤的表皮层能够与空气直接接触，从而能够避免表皮层坏死，促进表 皮层生长，而真皮层保存在所述凝胶中，能够吸取凝胶中的营养物质，因此，采用该方法对 所述组织工程皮肤进行保存时，能够保持组织工程皮肤中表皮层与真皮层的细胞活力，从 而能够进一步延长组织工程皮肤的保存时间。
[0052] 本发明的一实施例中，在S2)之前还包括将所述液体培养基与所述凝固剂混合， 其中，所述液体培养基的溫度为4-8°C，所述凝固剂的溫度为60-68°C。由于液体培养液中 具有多种活性成分，因此，在将所述液体培养液与琼脂溶液混合时，若琼脂溶液的溫度过高 会使得液体培养液中的活性成分发生失活，若琼脂溶液的溫度过低，在将所述琼脂溶液与 液体培养液混合时，会由于溫度低于30°C而很快发生凝固，不利于后续操作，在本发明实施 例中，将所述液体培养液与所述琼脂溶液进行混合时，能够保持液体培养液中活性成分的 活性，并保持混合之后的混合液处于流动状态，便于后续操作。
[0053] 其中，对所述琼脂溶液的获取不做限定，琼脂为在水中需加热至95°C才开始融化， 融化后的溶液溫度需降至30°C才开始凝固的一种物质，利用琼脂的运一特性，可W将琼脂 在水中加热至95°C来获取琼脂溶液。
[0054] 其中，对所述琼脂溶液的浓