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【主权项】
1. 一种用于获得允许禽病毒体外复制的非转化的禽细胞系的方法，其至少包括以下步 骤： a) 存在基质时，培养禽胚胎干细胞至少三天； b) 在低血清浓度的介质中培养至少两天； c) 在含1至10mM的六亚甲基二乙酰胺（HMBA)的低血清浓度的介质中培养至少2天； d) 在低血清浓度的介质中培养至少10天； e) 培养或冷冻允许禽病毒的复制的禽细胞系。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的禽病毒是马立克氏病毒或双RNA病 毒。3. 根据权利要求1或2中的任一项所述的方法，其特征在于，所述的禽胚胎干细胞来自 鸡。4. 根据权利要求1至3中的任一项所述的方法，其特征在于，所述的禽胚胎干细胞分离 自在X期至XIV期的胚盘。5. 根据权利要求1至4中的任一项所述的方法，其特征在于，在步骤b)、c)和d)后， 所述的方法进一步包括用于在合适的生长介质中培养细胞的步骤。6. 根据权利要求1至5中的任一项所述的方法，其特征在于，所获得的禽细胞系在合适 的培养介质中至少60次传代中具有稳定的表型。7. 根据权利要求1至6中的任一项所述的方法，其特征在于，所获得的禽细胞系经基因 修饰以表达感兴趣的蛋白。8. -种细胞系，其可通过权利要求1至7中的任一项所述的方法获得。9. 根据权利要求8所述的细胞系，其表达以下标志物：CD44+、整合素β1、胶原蛋白1 和 0LFM3〇10. 根据权利要求8或9中的任一项所述的细胞系，所述的系不表达以下标志物： cP0UV/0CT4、nanog、SSEA1、EMA1、IXF1、KRT8 和KRT19。11. 权利要求8至10中的任一项所述的细胞系作为基底用于体外生产禽病毒的用途。12. 权利要求8至10中的任一项所述的细胞系用于禽病毒的滴定的用途。13. -种用于体外制备疫苗制剂的方法，其包括培养权利要求8至10中的任一项所述 的细胞系，以及用至少一种禽病毒感染所述的细胞系。14. 一种疫苗制剂，其包含权利要求8至10中的任一项所述的细胞系，所述的细胞系感 染有至少一种禽病毒。
【专利摘要】本发明涉及一种用于获得未转化的禽细胞系的方法，所述的禽细胞系能够在体外使禽病毒复制。所述的方法包括以下步骤：a)存在基质时，将禽胚胎干细胞培养至少三天；b)在含低血清浓度的介质中培养至少两天；c)在含1至10mM的六亚甲基二乙酰胺(HMBA)的低血清浓度的介质中培养至少2天；d)在低血清浓度的介质中培养至少10天；以及e)培养或冷冻能够使禽病毒复制的禽细胞系。本发明还涉及所得到的细胞系以及其在疫苗制剂中的用途。
【IPC分类】C12N7/00, C12N5/077
【公开号】CN105408471
【申请号】CN201480041662
【发明人】J-F·沃特罗, B·潘, C·德内斯维尔, L·弗拉涅-特拉普
【申请人】国家农艺研究院
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2014年7月24日
【公告号】CA2918845A1, EP3024927A1, US20160152956, WO2015011238A1