0. 5h，冷却至室温，接入6%质量份 的种子液，混合均匀，37°C，相对湿度70%条件下培养72h。
[0021] (3)发酵产物处理：发酵结束后，发酵产物用于分析发酵水平，分析后将固态基质 烘干可以回用于固体发酵。
[0022] 〈实施例5> (1)将生防芽孢杆菌TB1335接种在LB平板培养基上，培养温度为37°C，培养24h，之后 接种于液态LB培养基中。液态种子培养条件为：培养温度37°C，摇床转速160r/min，PH7. 2， 培养时间16h，得到种子液。
[0023] (2)将麦麸、可溶性淀粉、牛肉膏、玉米粉、ΚΗ2Ρ04和水按质量比1 :0. 5:0. 16:0. 13: 0. 03:1. 7加入250ml锥形瓶中，调PH6. 2,高压湿热灭菌0. 5h，冷却至室温，接入5%质量份 的种子液，混合均匀，25°C，相对湿度50%条件下培养48h。
[0024] (3)发酵产物处理：发酵结束后，发酵产物用于分析发酵水平，分析后将固态基质 烘干可以回用于固体发酵。
[0025] 〈实施例6> (1)将生防芽孢杆菌TB1335接种在LB平板培养基上，培养温度为37°C，培养24h，之后 接种于液态LB培养基中。液态种子培养条件为：培养温度37°C，摇床转速160r/min，PH7. 2， 培养时间16h，得到种子液。
[0026] (2)将麦麸、可溶性淀粉、牛肉膏、玉米粉、ΚΗ2Ρ04和水按质量比1 :0. 5:0. 16:0. 13: 0. 03:1. 7加入250ml锥形瓶中，调PH7. 5,高压湿热灭菌0. 5h，冷却至室温，接入6%质量份 的种子液，混合均匀，25°C，相对湿度50%条件下培养48h。
[0027] (3)发酵产物处理：发酵结束后，发酵产物用于分析发酵水平，分析后将固态基质 烘干可以回用于固体发酵。
[0028] 〈变型例〉 将实施例1~6中的麦麸以麦麸、豆渔及燕渔的任意组合代替，并以相同条件发酵。
[0029] 在上述实施例和变型例中，发酵结束后，取lg发酵产物，放入加有10ml灭菌水的 三角瓶中，于摇床中37°C，160r/min，震荡30min，梯度稀释上清菌液，涂布LB平板培养基， 进行菌落计数，分析固相发酵水平。
[0030] 表1是采用不同固相基质配制培养基，进行固相发酵生防芽孢杆菌TB1335的结 果。
[0031] 表1生防芽孢杆菌TB1335固相发酵(菌落数10ncfu/培养基g) 如表1所示，在本发明的各具体实施例中，在实施例4的条件下，采用麦麸作为固相 发酵基质，能够达到最高的生防芽孢杆菌的发酵水平，每克发酵产物含有生防芽孢杆菌 TB1335 为 2. 14X10ncfu。
[0032] 〈实施例7> (1)将生防芽孢杆菌TB1335接种在LB平板培养基上，培养温度为37°C，培养24h，之后 接种于液态LB培养基中。液态种子培养条件为：培养温度37°C，摇床转速160r/min，PH7. 2， 培养时间16h，得到种子液。
[0033] (2)将麦麸、蔗糖、蛋白胨、玉米粉、ΚΗ2Ρ04和水按质量比1 :0.5:0. 16:0. 13: 0. 03:1. 7加入250ml锥形瓶中，调PH7. 5,高压湿热灭菌0. 5h，冷却至室温，接入6%质量份 的种子液，混合均匀，37°C，相对湿度70%条件下培养72h。
[0034] (3)发酵产物处理：发酵结束后，发酵产物用于分析发酵水平，分析后将固态基质 烘干可以回用于固体发酵。按前述方法分析发酵水平为1.73X10 ncfU/g。
[0035] 〈实施例8> (1)将生防芽孢杆菌TB1335接种在LB平板培养基上，培养温度为37°C，培养24h，之后 接种于液态LB培养基中。液态种子培养条件为：培养温度37°C，摇床转速160r/min，PH7. 2， 培养时间16h，得到种子液。
[0036] (2)将麦麸、麦芽糖、牛肉膏、酵母膏、ΚΗ2Ρ04和水按质量比1 :0. 5:0. 16:0. 13: 0. 03:1. 7加入250ml锥形瓶中，调PH7. 5,高压湿热灭菌0. 5h，冷却至室温，接入6%质量份 的种子液，混合均匀，37°C，相对湿度70%条件下培养72h。
[0037] (3)发酵产物处理：发酵结束后，发酵产物用于分析发酵水平，分析后将固态基质 烘干可以回用于固体发酵。按前述方法分析发酵水平为1.61 X10ncfU/g。
[0038] 实施例的作用与效果 实施例1~8以及各变型例提供的生防芽孢杆菌TB1335的固相发酵方法不仅工艺简 单，成本低，对环境污染小，同时发酵水平最高达到2. 14X10ncfu/g，具有广阔的实际应用 前景，对生防微生物制剂的应用和推广具有良好的指导意义。
【主权项】
1. 一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于，包括如下步骤： 制备生防芽孢杆菌的种子液； 以体积质量比5~15ml/100g将所述种子液接入到固相发酵培养基中，在温度25~ 37°C，相对湿度50~90%，PH6. 2~8. 5条件下培养48~72小时，得到生防芽孢杆菌的固 相发酵产物， 其中所述固相发酵培养基由农产品加工过程中的副产物、碳源、氮源、盐和水按质量比 1 :(0· 1 ~0· 7) :(0· 17 ~1. 1) :(0· 01 ~0· 05) :(1· 2 ~6. 4)混合组成。2. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，将所述生防芽孢杆菌菌株接种在固态种子培养基上，培养温度为37°C，培养 24h，之后接种于液态种子培养基中，培养温度为37°C，摇床转速160r/min，培养16~18h， 即制备得到所述种子液。3. 根据权利要求2所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，所述固态种子培养基为LB平板培养基；所述液态种子培养基为LB液体培养基。 4. LB液体培养基配制：1升水中加蛋白胨10g、酵母粉5g和NaC15g，PH值为6. 8~7. 2。 5. LB固体培养基配制：1升LB液体培养基中加琼脂粉20g。6. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，生防芽孢杆菌菌株TB1335,保存于天津市植物保护研究所农业微生物发酵研究 室，对外可免费提供。7. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，所述农产品加工过程中的副产物为麦麸、豆渣及菇渣中的任意组合。8. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，所述碳源为可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖及麦芽糖的任意组合。9. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，所述氮源为酵母膏、牛肉膏、蛋白胨及玉米粉的任意组合。10. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，所述盐为磷酸盐。11. 根据权利要求1所述的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于： 其中，优选的条件为以6ml/100g将所述种子液接入到固相发酵培养基中，在温度 37°C，相对湿度70%，PH7. 5条件下培养72小时，所述固态发酵培养基由麦麸、可溶性淀粉、 牛肉膏、玉米粉、ΚΗ2Ρ04和水按质量比1 :0. 5:0. 16:0. 13: 0. 03:1. 7混合组成。
【专利摘要】一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：制备生防芽孢杆菌的种子液；以体积质量比5～15ml/100g将所述种子液接入到固相发酵培养基中，在温度25～37℃，相对湿度50～90%，pH6.2～8.5条件下培养48～72小时，得到生防芽孢杆菌的固相发酵产物，其中所述固相发酵培养基由农产品加工过程中的副产物、碳源、氮源、盐和水按质量比1∶（0.1～0.7）∶（0.17～1.1）∶（0.01～0.05）∶（1.2～6.4）混合组成。本发明中所涉及的一株生防芽孢杆菌的固相发酵方法不仅工艺简单，成本低，对环境污染小，同时发酵水平得到提高，具有广阔的实际应用前景，对微生物生防制剂的应用和推广具有良好的指导意义。
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/07
【公开号】CN105441347
【申请号】CN201410413812
【发明人】田涛, 孙冰冰, 杨秀荣, 李伟, 魏军
【申请人】天津市植物保护研究所
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2014年8月21日