一种具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物及其制备方法和应用，该化合物的结构式为其中R1、R2为卤素基团，或者R1、R2共同形成该化合物对VEGFR?2激酶有很好的抑制活性，能够通过抑制VEGFR?2激酶的活性，阻断其诱导的信号通路，抑制肿瘤细胞的增生和迁移，从而可应用于抗肿瘤药物的制备。且该化合物的制备方法具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
【专利说明】
一种具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物及其制备方法和 应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗肿瘤的化合物，特别涉及一种具有抗 肿瘤活性的环丙二酰胺化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，极大地危害人类的健康，并将成为 新世纪人类的第一杀手。恶性肿瘤已不再只是发达工业国家的严重疾病，发展中国家面临 着更大的疾病负担。化学药物治疗作为治疗肿瘤的重要手段之一，在近三十年已经有了巨 大的发展和进步，得到了一大批具有不同作用机制的临床抗肿瘤药物。但是抗肿瘤药也存 在许多不良反应，比如脱发，呕吐，产生骨髓抑制，快速产生耐药性等等，这些都导致化学药 物无法达到预期的治疗效果。因此新的抗肿瘤药物的研究与开发是目前药学领域的热点和 难点问题之一。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物及其制备方法 和应用，该化合物在体外体现出很好的抗肿瘤活性，能够应用于抗肿瘤药物的制备。
[0004] 为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0005] -种具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物，其化学结构式如下：
[0006]
基环丙烷羧酸通过缩合反应制备具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物。
[0014] 所述步骤1)的具体操作为：将2-氟-6-碘苯甲腈溶于无水乙醇中，加入水合肼及 NaH⑶3,回流反应，反应结束后冷却至室温，向反应液中加入水至固体析出，然后搅拌、抽 滤，滤饼即为4-碘-1H-吲唑-3-胺。
[0015] 所述步骤2)的具体操作为:将4-碘-1H-B引唑-3-胺、对氨基苯硼酸盐酸盐或间氨基 苯硼酸、无水碳酸钠、催化剂Pd(PPh 3)4溶于1，4_二氧六环和水的混合溶液中，氮气保护下反 应，反应结束后冷却至室温，对反应液进行抽滤，将滤液旋干得到粗品，用层析柱分离粗品， 得到4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺。
[0016] 所述步骤3)的具体操作为:在氮气保护下，将无水三乙胺滴加到1，1_环丙二羧酸 的二氯甲烷溶液中，冰浴条件下搅拌均匀，再向其中滴加 S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完毕 后搅拌反应，然后向其中继续滴加含有双取代基的苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续 搅拌反应，反应结束后，调节反应液的pH值，用乙酸乙酯萃取，再减压旋蒸除去有机溶剂，即 得到苯胺基羰基环丙烷羧酸。
[0017] 所述步骤4)的具体操作为:将4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)_ 1H-吲唑-3-胺，以及苯胺基羰基环丙烷羧酸加入到冰浴中的无水二氯甲烷溶液中，然后加 入缩合剂HATU，搅拌均匀，再向其中滴加无水三乙胺的二氯甲烷溶液，撤去冰浴，室温下反 应，反应结束后，反应液经洗涤、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，用层析柱分离粗品，得到具 有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物。
[0018] 所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物在制备抑制VEGFR-2激酶活性的药物 中的应用。
[0019] 所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物在制备以VEGFR-2激酶为靶点的抗肿 瘤药物中的应用。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0021]本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物，是一种新型的具有抗肿瘤活 性的化合物，其对VEGFR-2激酶有很好的抑制活性，可用于抗肿瘤药物的制备。具体的，本发 明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物，能够抑制VEGFR-2激酶的活性。而血管生成 与肿瘤的发生、发展和迀移都有密切关系，抑制新生血管的形成可以有效的抑制肿瘤的生 长和迀移，许多生长因子调控新生血管生成，其中VEGFR-2是已知的最强的正调控因子。因 此本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物通过抑制VEGFR-2激酶的活性，阻断 其诱导的信号通路，抑制肿瘤细胞的增生和迀移，从而可应用于抗肿瘤药物的制备，尤其是 以VEGFR-2激酶为靶点的抗肿瘤药物以及抑制VEGFR-2激酶活性的药物。
[0022]本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的制备方法，通过2-氟-6-碘 苯甲腈与水合肼反应得到4-碘-1H-吲唑-3-胺，再与对氨基苯硼酸盐酸盐或间氨基苯硼酸 Suzuki偶联反应得到4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺，并 通过1，1-环丙烷二羧酸与含有双取代基的苯胺缩合反应得到苯胺基羰基环丙烷羧酸，将苯 胺中的取代基引入到苯胺基羰基环丙烷羧酸的苯环上，然后4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺再与7-(4-氨基苯基)喹唑啉-2-胺缩合反应，即得到具 有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物，该方法具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简 单，所用试剂便宜的优点。
【附图说明】
[0023] 图1为本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的合成路线图；
[0024] 其中，化合物丨为2-氟-6-碘苯甲腈，化合物2为4-碘-1H-吲唑-3-胺，化合物3为对 氨基苯硼酸盐酸盐，化合物4为4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺，化合物为5为间氨基苯硼 酸，化合物6为4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺，化合物7为1，1_环丙烷二羧酸，化合物8为含 有双取代基的苯胺，化合物9为苯胺基羰基环丙烷羧酸，化合物1'1343639、51-510为具有 抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物。
[0025]图中标注的具体为：
[0026] a: EtOH, NaHCOs, NH2NH2, H20 ； b: Pd (PPh3 )4, Na2C03, H20, dioxane ； c: SOCI2, Et3N, DCM ； d:HATU,Et3N,DCM,0°Cto rt.
【具体实施方式】
[0027] 下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的 解释而不是限定。
[0028] 本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物，该环丙二酰胺化合物在 体外具有抗肿瘤活性，可应用于抗肿瘤药物的制备。
[0029] 本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的化学结构式具体如下：
[0030]
[0031]其中，Ri为三氟甲基、三氟甲氧基或卤素，R2为三氟甲基、三氟甲氧基、卤素或烷氧 基，通过0原子连接于酰胺基团的间位和对位。
[0032] 下面结合图1中所示的合成路线和具体的合成实施例来详细说明本发明提供的具 有抗肿瘤活性的候选药物环丙二酰胺化合物的制备和活性筛选方法。
[0033] 实施例1
[0034]该具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式中，Ri为三氟甲基，R2为溴，通过 以下步骤制备(参见图1):
[0035] 1)由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)
[0036] 将10g 2-氟-6-碘苯甲腈溶于70mL无水乙醇中，加入12.5mL水合肼和5.2g NaHC03，90 °C回流反应5h，反应结束后，待反应液冷却至室温，加入120mL水，有大量固体析 出，室温下搅拌2h，抽滤，所得的滤饼即为4-碘-1H-吲唑-3-胺，约8g，产率77% ;
[0037] 2)由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和对氨基苯硼酸盐酸盐(化合物3)通过Suzuki 偶联反应制备4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物4)
[0038]将7.5g (28.9mmo 1) 4-碘-1H-吲唑-3-胺、5g (28.9mmo 1)对氨基苯硼酸盐酸盐、9.2g (86 · 7mmol)无水碳酸钠和3 · 3g(2 · 89mmol)催化剂Pd(PPh3)4溶于150mL 1，4-二氧六环和 50mL水的混合溶液中，氮气保护下，于100°C反应过夜，反应结束后冷却至室温，抽滤，用1， 4_二氧六环洗涤滤饼，收集滤液，旋干得残留物，残留物经过层析柱分离(洗脱溶剂为石油 醚:乙酸乙酯=3:1，体积比），得到4-(4-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺3.2g，产率约45% ;
[0039] 3)1，1_环丙烷二羧酸(化合物7)和5-溴-3-三氟甲基苯胺(化合物8)通过缩合反应 制备1_({ [5-溴-2-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)环丙烷羧酸(化合物9)
[0040] 在氮气保护条件下，将2.2mL无水三乙胺滴加到2g(15.4mmol)l，l-环丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴条件下搅拌30min，再缓慢滴加1.2mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后搅拌2h，向反应液中继续滴加3.6g(15.4mmol )5_溴-3-三氟甲基苯胺的二氯甲烷溶液， 滴加完毕后继续搅拌2h。反应结束后，将反应液用2mol/L NaOH溶液调节pH至10,减压蒸干， 加入适量水进行超声，然后用乙酸乙酯萃取一次，保留水层，再用2mol/L HC1将水层调节pH 至2,再用乙酸乙酯萃取三次，减压旋除有机溶剂，即得到l-({[5-溴-2-(三氟甲基)苯基]氨 基}羰基)环丙烷羧酸，约〇. 8g，产率37 % ;
[0041 ] 4)由4-(4-氨基苯基)-1Η-Β引挫-3-胺(化合物4)和1-( {[5-溴-2-(三氟甲基)苯基] 氨基}羰基)环丙烷羧酸(化合物9)通过缩合反应得到具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物
[0042] 将0 · 38g(0 · 7mmol )4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺和0 · 24g(0 · 7_〇1) 1-( {[5-溴-2_(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)环丙烷羧酸加入到冰浴中的无水二氯甲烷溶液中，再加入 0.48g(l.26mmol)缩合剂HATU，继续搅拌30min，再慢慢滴加0. lmL无水三乙胺的二氯甲烷溶 液，撤去冰浴，室温下反应8h。反应结束后，将反应液依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐 水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到残留物，用层析柱分离残留物，得到具有抗肿瘤活 性的环丙二酰胺化合物0.12g，产率20%。
[0043] 实施例1制得的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式如下：
[0044]
1234567 理化性质:mp: 186 ~188°C 2 氢谱核磁共振数据为：? 匪R(400MHz，CDCl3W8.32(d，J = 8.3Hz，2H)，7.55(m， lH),7.33-7.14(m,4H),7.11(d ,J = 8.5Hz,lH),6.85(m,2H),4.54(d ,J = 4.9Hz,2H),1.73-1.58(m,4H). 3 实施例2 4 该具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式中，心、1?2分别通过0原子连接于 酰胺基团的间位和对位的烷氧基。 5 步骤1)~2)与实施例1的步骤1)~2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备 6 4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，再由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和对氨基苯硼酸盐酸盐 7 (化合物3)制备4-( 4-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺(化合物4)。
[0050] 3)1，1-环丙烷二羧酸(化合物7)和胡椒胺(化合物8)通过缩合反应制备Nl_l，3苯 并二氧杂环戊-5-环丙基-1，1-二甲酰胺(化合物9)
[0051 ]在氮气保护条件下，将2.2mL无水三乙胺滴加到2g(15.4mmol) 1，1-环丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴条件下搅拌30min，再缓慢滴加1.2mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后搅拌2h，然后向反应液中继续滴加1.9g (15.4mmo 1)胡椒胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕 后继续搅拌2h。然后将反应液用2mol/L的NaOH溶液调节pH至10,减压蒸干，加入适量水进行 超声，用乙酸乙酯萃取一次，保留水层，再用2mol/L的HC1将水层调节pH至2,再用乙酸乙酯 萃取三次，减压旋除有机溶剂即得到Nl-1，3苯并二氧杂环戊-5-环丙基-1，1-二甲酰胺，约 lg，产率 40%;
[0052] 4)由4-(4-氨基苯基)-1Η-Β引挫-3-胺(化合物4)和Nl-1，3苯并二氧杂环戊-5-环丙 基-1，1-二甲酰胺(化合物9)通过缩合反应得到具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物
[0053] 将0.58(0.92111111〇1)4-(4-氨基苯基）-1!1-吲唑-3-胺和0.238(0.92111111〇1州1-1，3苯 并二氧杂环戊-5-环丙基-1，1-二甲酰胺加入到冰浴中的无水二氯甲烷溶液中，再加入 0.63g(l.66mmol)缩合剂HATU，继续搅拌30min，再慢慢滴加0.13mL无水三乙胺的二氯甲烷 溶液，撤去冰浴，室温反应8h。反应结束后，将反应液依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐 水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到残留物，用层析柱分离残留物，得到具有抗肿瘤活 性的环丙二酰胺化合物0. lg，产率20%。
[0054] 实施例2制得的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式如下：
[0055]
[0063]将7 · 6g( 36 · 5mmo 1 )4_鹏-1H-吲唑_3_胺、4g(36 · 5mmol)间氛基苯棚酸、9 · 3g (87 · 6mmol)无水碳酸钠和3 · 4g(3 · 65mmol)催化剂Pd(PPh3)4溶于150mL 1，4-二氧六环和 50mL水的混合溶液中，氮气保护下，于100°C反应过夜，反应结束后冷却至室温，抽滤，用1， 4_二氧六环洗涤滤饼，收集滤液，旋干得残留物，残留物经过层析柱分离(洗脱溶剂为石油 醚:乙酸乙酯=3:1，体积比），得到4-(3-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺2.9g，产率约40% ;
[0064] 3)1，1_环丙烷二羧酸(化合物7)和5-溴-2-三氟甲氧基苯胺(化合物8)通过缩合反 应制备1_({ [5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]氨基}羰基)环丙烷羧酸(化合物9)
[0065] 在氮气保护条件下，将2.2mL无水三乙胺滴加到2g(15.4mmol)l，l-环丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴条件下搅拌30min，再缓慢滴加1.2mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后搅拌2h，向反应液中继续滴加3.5g(13.9mmol)5-溴-2-三氟甲氧基苯胺的二氯甲烷溶 液，滴加完毕后继续搅拌2h。反应结束后，将反应液用2mo 1/L NaOH溶液调节pH至10，减压蒸 干，加入适量水进行超声，然后用乙酸乙酯萃取一次，保留水层，再用2mol/L HC1将水层调 节pH至2,再用乙酸乙酯萃取三次，减压旋除有机溶剂，即得到1-( {[5-溴-2-(三氟甲氧基） 苯基]氨基}羰基)环丙烷羧酸，约〇.8g，产率35% ;
[0066] 4)由4-(3-氨基苯基)-1Η-Β引挫-3-胺(化合物6)和1-({ [5-溴-2-(三氟甲氧基）苯 基]氨基}羰基)环丙烷羧酸(化合物9)通过缩合反应得到具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化 合物
[0067] 将0·5g(0·92mmol)4-(3-氨基苯基）-lH-吲唑-3-胺和0·34g(0·92mmol)l-({[5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]氨基}羰基)环丙烷羧酸加入到冰浴中的无水二氯甲烷溶液中，再 加入0.63g(l.66mmol)缩合剂HATU，继续搅拌30min，再慢慢滴加0.13mL无水三乙胺的二氯 甲烷溶液，撤去冰浴，室温反应8h。反应结束后，将反应液依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和 食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到残留物，用层析柱分离残留物，得到具有抗肿 瘤活性的环丙二酰胺化合物〇. 12g，产率25%。
[0068] 实施例3制得的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式如下：
[0069]
1234 理化性质：mp:173 ~174Γ 2 氢谱核磁共振数据为：? NMR(400MHz, CDC13W8.62(s，1H) ,8.61 (d，J = 2.3Hz, 1H) ,8.41(d ,J = 8.1Hz,lH),7.60-7.55(m,lH),7.31-7.26(m,lH) ,7.22(d ,J = 6.9Hz , 1H), 7.04(m,lH),6.79(m,2H),6.74(d,J=1.7Hz,lH),4.38(s,2H),1.73(s,4H). 3 实施例4 4 该具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式中，Ri、R2为氯：
[0074]步骤1)~2)与实施例1的步骤1)~2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备 4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，再由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和对氨基苯硼酸盐酸盐 (化合物3)制备4-( 4-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺(化合物4)。
[0075] 3)1，1-环丙烷二羧酸(化合物7)和3,4_二氯苯胺(化合物8)通过缩合反应制备Ι α 3 ， 4-二氯苯胺氨基} 羰基) 环丙烷羧酸 (化合物 9)
[0076] 在氮气保护条件下，将12.9mL无水三乙胺滴加到4g(30.8mmol) 1，1-环丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴条件下搅拌30min，再缓慢滴加2.3mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后搅拌2h，向反应液中继续滴加4.5g(27.7mmo 1) 3，4-二氯苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后继续搅拌2h。然后将反应液用2mol/L NaOH溶液调节pH至10,减压蒸干，加入适量水进 行超声，用乙酸乙酯萃取一次，保留水层，再用2mol/L HC1将水层调节pH至2,再用乙酸乙酯 萃取三次，减压旋除有机溶剂，即得到1-({3,4_二氯苯胺氨基}羰基)环丙烷羧酸，约2g，产 率 40 %;
[0077] 4)由4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物4)和1-({3,4_二氯苯胺氨基}羰基） 环丙烷羧酸(化合物9)通过缩合反应得到具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物
[0078] 将0 · 5g(0 ·92mmol)4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺和0 · 25g(0 ·92mmol) 1-( {3,4-二氯苯胺氨基}羰基）环丙烷羧酸加入到冰浴中的无水二氯甲烷溶液中，再加入〇.63g (1.66mmol)缩合剂HATU，继续搅拌30min，再慢慢滴加0.13mL无水三乙胺的二氯甲烷溶液， 撤去冰浴，室温下反应8h。反应结束后，将反应液依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗 涤，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到残留物，用层析柱分离残留物，得到具有抗肿瘤活性的 环丙二酰胺化合物〇. 12g，产率22%。
[0079] 实施例4制得的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式如下：
[0080]
[0081 ]理化性质：mp: 103 ~104°C
[0082] 氢谱核磁共振数据为：4 NMR(400MHz，DMS0) δ9 · 95 (s，1H)，8 · 26(d，J = 8 · 1Hz， 1H) ,7.91(s，lH) ,7.59-7.54(m，lH) ,7.49(s，2H)，7· 12(d，J = 8.2Hz，3H)，6.73(d，J = 8·4Hz，2H)，5·12(s，2H)，1·53(m，2H)，1·46(m，2H)·
[0083] 实施例5
[0084] 该具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式中，Ri、R2为氯：
[0085] 步骤1)~2)与实施例3的步骤1)~2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备 4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，再由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和间氨基苯硼酸(化合 物5)制备4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物6)。
[0086] 3)1，1_环丙烷二羧酸(化合物7)和2,4_二氯苯胺(化合物8)通过缩合反应制备Ια 2 ， 4-二氯苯胺氨基} 羰基) 环丙烷羧酸 (化合物 9)
[0087] 在氮气保护条件下，将12.9mL无水三乙胺滴加到4g(30.8mmol) 1，1-环丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴条件下搅拌30min，再缓慢滴加2.3mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后搅拌2h，向反应液中继续滴加4.5g(27.7mmo 1) 2，4-二氯苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完 毕后继续搅拌2h。然后将反应液用2mol/L NaOH溶液调节pH至10,减压蒸干，加入适量水进 行超声，用乙酸乙酯萃取一次，保留水层，再用2mol/L HC1将水层调节pH至2,再用乙酸乙酯 萃取三次，减压旋除有机溶剂，即得到1-({2,4_二氯苯胺氨基}羰基)环丙烷羧酸，约2g，产 率 40 %;
[0088] 4)由4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物6)和1-({2,4_二氯苯胺氨基}羰基） 环丙烷羧酸(化合物9)通过缩合反应得到具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物
[0089] 将0 · 5g(0 ·92mmol)4-(3-氨基苯基）-1Η-吲唑-3-胺和0 · 25g(0 ·92mmol) 1-( {2,4-二氯苯胺氨基}羰基）环丙烷羧酸加入到冰浴中的无水二氯甲烷溶液中，再加入〇.63g (1.66mmol)缩合剂HATU，继续搅拌30min，再慢慢滴加0.13mL无水三乙胺的二氯甲烷溶液， 撤去冰浴，室温下反应8h。反应结束后，将反应液依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗 涤，无水硫酸钠干燥，然后旋干得到残留物，用层析柱分离残留物，得到具有抗肿瘤活性的 环丙二酰胺化合物〇. 12g，产率20%。
[0090] 实施例5制得的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的结构式如下：
[0091]
[0092] 理化性质：mp: 109~lilt：
[0093] 氢谱核磁共振数据为：4 NMR( 400MHz，CDCl3W8.43(d，J = 8.3Hz，lH)，8.38(s， 1H)，8.22(d，J = 8.8Hz，lH)，7.59(t，J = 7.8Hz，lH) ,7.30-7.28(m，3H) ,7.25-7.20(m，2H), 6.82(d ,J = 7.6Hz,lH),6.77(d ,J = 9.7Hz,lH),4.37(s,2H),1.72(s,2H),1.69(s,2H).
[0094] 下面对本发明制得的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物进行VEGFR-2激酶的抑 制活性筛选。
[0095] 激酶VEGFR-2和底物Abltide购自 Signal-Chem公司，选用Promega公司的ADP-GlobTM Kinase Assays检测试剂盒检测本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合 物的抑酶活性，操作方法按照试剂盒说明进行。将ATP(1 OmM)用buf f er (2 X ) (Tr i s 80mM， MgCl2 20mM，BSA 0.2mg/mL，DTT 2mM)稀释40倍配制成ΑΤΡ(250μΜ)的buffer(2X)溶液；将 250μΜ的ATP溶液和Abltide溶液体积1:1混合配制成ATP(125yM)-Abltide(0.5ygAU)的混 合溶液备用；VEGFR-2激酶溶液用buffer(lX)(Tris 40mM，MgCl2 10mM，BSA 0.1mg/mL，DTT ImM)稀释66倍配制成VEGFR-2( 1.5ng/yl)的buffer(l X )溶液备用；将目标化合物和阳性对 照药（Sorafinib)用bufTer( 1 X )分别配制成6 X 10-5mol/L，6 X 10-6mol/L，6 X 10-7mol/L，6 X l(TV〇l/L，6X l(T9m〇l/L，6X l(T1Qm〇l/L浓度梯度的样品溶液，于384孔板上每孔依次加 入2yL ATP-Abltide的混合溶液，lyL样品溶液，2yL酶溶液；空白孔加3yL缓冲液和2yLATP-Abltide的混合溶液;对照孔加2yL ATP-Abltide的混合溶液，lyL缓冲液，2yL酶溶液，加毕， 30°〇下孵育6〇111；[11;加入40?-610试剂5以1^，在25°(^下孵育40111；[11;加入1(;[11&86(16丨601:;[011试剂 10yL，在25°C下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶标仪的化学发光模块测定每孔的发 光值，计算本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物对VEGFR-2的抑制率和IC50。
[0096]本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物对VEGFR激酶的抑制活性结果 具体如表1所示：
[0097] 表1环丙二酰胺化合物对VEGFR激酶的IC50
[0098]
[0099] 由表1可以看出，本发明制备的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物对VEGFR-2激 酶具有抑制活性，可用于制备抑制VEGFR-2激酶活性的药物以及制备以VEGFR-2激酶为靶点 的抗肿瘤药物。
[0100] 上述化合物的结构具体如表2所示：
[0101 ]表2本发明提供的具有抗肿瘤活性的环丙二酰胺化合物的具体结构式
【主权项】
1. 一种具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物，其特征在于，其化学结构式如下：其中，Ri、R2为面素基团，或者Ri、R2共同形2. 如权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物，其特征在于，所述的面素 基团为氣原子、氯原子、漠原子、=氣甲基或=氣甲氧基。3. 权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物的制备方法，其特征在 于，包括W下步骤： 1) 2-氣-6-舰苯甲腊与水合阱反应得到4-舰-IH-吗I挫-3-胺； 2) 4-舰-IH-吗I挫-3-胺与对氨基苯棚酸盐酸盐通过Suzuki反应制备4-(4-氨基苯基)- IH-吗I挫-3-胺;或者4-舰-IH-吗I挫-3-胺与间氨基苯棚酸通过Suz址i反应制备4-(3-氨基苯 基）-IH-吗階-3-胺； 3) 1，1-环丙烷二簇酸与含有双取代基的苯胺通过缩合反应制备苯胺基幾基环丙烷簇 酸； 4) 4-(4-氨基苯基)-lH-吗I挫-3-胺或4-(3-氨基苯基)-lH-吗I挫-3-胺与苯胺基幾基环 丙烷簇酸通过缩合反应制备具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物。4. 根据权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物的制备方法，其特征在 于:所述步骤1)的具体操作为:将2-氣-6-舰苯甲腊溶于无水乙醇中，加入水合阱及化肥化， 回流反应，反应结束后冷却至室溫，向反应液中加入水至固体析出，然后揽拌、抽滤，滤饼即 为4-舰-IH-吗I挫-3-胺。5. 根据权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物的制备方法，其特征在 于:所述步骤2)的具体操作为:将4-舰-IH-吗I挫-3-胺、对氨基苯棚酸盐酸盐或间氨基苯棚 酸、无水碳酸钢、催化剂Pd(PPh3)4溶于1,4-二氧六环和水的混合溶液中，氮气保护下反应， 反应结束后冷却至室溫，对反应液进行抽滤，将滤液旋干得到粗品，用层析柱分离粗品，得 至lj4-( 4-氨基苯基)-IH-吗I挫-3-胺或4-(3-氨基苯基)-IH-吗I挫-3-胺。6. 根据权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物的制备方法，其特征在 于:所述步骤3)的具体操作为:在氮气保护下，将无水=乙胺滴加到1,1-环丙二簇酸的二氯 甲烧溶液中，冰浴条件下揽拌均匀，再向其中滴加SOCh的二氯甲烧溶液，滴加完毕后揽拌 反应，然后向其中继续滴加含有双取代基的苯胺的二氯甲烧溶液，滴加完毕后继续揽拌反 应，反应结束后，调节反应液的pH值，用乙酸乙醋萃取，再减压旋蒸除去有机溶剂，即得到苯 胺基幾基环丙烷簇酸。7. 根据权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物的制备方法，其特征在 于:所述步骤4)的具体操作为:将4-(4-氨基苯基)-lH-吗I挫-3-胺或4-(3-氨基苯基)-lH-吗I 挫-3-胺，W及苯胺基幾基环丙烷簇酸加入到冰浴中的无水二氯甲烧溶液中，然后加入缩合 剂HATU，揽拌均匀，再向其中滴加无水S乙胺的二氯甲烧溶液，撤去冰浴，室溫下反应，反应 结束后，反应液经洗涂、干燥后减压蒸去溶剂，得粗品，用层析柱分离粗品，得到具有抗肿瘤 活性的环丙二酷胺化合物。8. 权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物在制备抑制VEGFR-2激酶 活性的药物中的应用。9. 权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的环丙二酷胺化合物在制备WVEGFR-2激酶为 祀点的抗肿瘤药物中的应用。
【文档编号】C07D405/12GK105906568SQ201610278878
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】贺浪冲, 张 杰, 潘晓艳, 王金凤, 苏萍, 卢闻, 王嗣岑, 张涛
【申请人】西安交通大学