一种用于检测牛布鲁菌病的ELISPOT检测试剂盒的制作方法与工艺

文档序号:11734940阅读:来源:国知局
一种用于检测牛布鲁菌病的ELISPOT检测试剂盒的制作方法与工艺

技术特征:
1.一种用于检测牛布鲁菌病ELISPOT检测试剂盒,所述ELISPOT检测试剂盒包括:支持介质、捕获抗体、检测抗体、阴性对照和阳性对照、特异性刺激剂,其中,所述捕获抗体为第一牛γ干扰素单克隆抗体,所述检测抗体为经过标记的第二牛γ干扰素单克隆抗体,特异性刺激剂为布鲁菌素Br-PPD;其中,所述支持介质与试剂接触面上有微孔滤膜;所述捕获抗体包被在支持介质上或所述捕获抗体与支持介质分别放置;以及所述捕获抗体与所述检测抗体能与牛γ干扰素共同发生抗原抗体结合作用。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其中,所述第一牛γ干扰素单克隆抗体为牛γ干扰素单克隆抗体2G5,所述牛γ干扰素单克隆抗体2G5由保藏号为CCTCCNO:C2012107的杂交瘤细胞株2G5或其传代细胞株分泌产生;以及所述第二牛γ干扰素单克隆抗体为牛γ干扰素单克隆抗体5E11,所述牛γ干扰素单克隆抗体5E11由保藏号为CCTCCNO:C2012108的杂交瘤细胞株5E11或其传代细胞株分泌产生。3.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其中,所述标记包括生物素标记或碱性磷酸酶标记。4.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其中,所述支持介质包括微孔滤膜板。5.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其中,所述支持介质包括披覆PVDF薄膜微孔培养板。6.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其中,所述试剂盒中还包括下列试剂中的一种或多种:1)亲和素-碱性磷酸酶结合物;2)底物液;3)浓缩PBS缓冲液、封闭液、细胞培养液、洗涤液。7.根据权利要求6所述的检测试剂盒,其中,所述底物液可为液氮蓝四唑/5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸NBT/BCIP底物液,所述封闭液包括脱脂乳液、FBS、BSA或酪蛋白,以及所述洗涤液包括磷酸盐缓冲液或磷酸盐吐温缓冲液。8.根据权利要求1~7任一项所述的检测试剂盒在用于非诊断目的的牛布鲁菌感染检测中的应用,其中,所述非诊断目的包括流行病学分析和研究、离体组织进行检测、表位鉴定研究以及定性和定量检验布鲁菌抗原特异的牛IFN-γ。9.根据权利要求8所述的应用,其中,所述应用为用于非诊断目的的牛布鲁菌感染或布鲁菌抗原特异的牛IFN-γ的早期检测中的应用。
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