参与岩芹酸生物合成的新基因和用于生产岩芹酸的方法

专利名称：：参与岩芹酸生物合成的新基因和用于生产岩芹酸的方法
技术领域：
：本发明涉及参与岩芹酸生物合成的新基因。本发明尤其涉及源自胡萝卜的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因和源自植物的岩芽酰-ACP硫酯酶基因。本发明还涉及使用这些新基因产生岩芽酸的方法。
背景技术：
：近年，在树脂材料领域，从建立再循环社会而不依赖石油资源观点出发，正在进行源自生物量的生产树脂的技术开发。尼龙是一种人工合成的塑料，其自氨基羧酸作为原材料合成，或通过联氨与二羧酸的聚合合成。大多数原材料单体是通过化学工业技术自化石资源生产的。使用癸二酸(l，10-癸二酸)作为尼龙的源自生物量的原材料。该癸二酸是通过对提取自蓖麻油植物的蓖麻油使用苛性碱裂解制备的，用作尼龙6,10的原材料。但是尼龙6，10的应用是有限的，因此尼龙6，10不能广泛地用作树脂材料。已知二羧酸可通过氧化分解不饱和脂肪酸而制备。至今为止，研究了制备作为尼龙6，6的原材料单体己二酸的原材料岩芽酸(顺-6-十八碳烯酸)的技术(非专利文献1-8)。包括芫荽、胡萝卜等在内的伞形科植物(Umbellifers)含有占种子的脂肪和油含量80%或以上的岩,酸。但是，由于它们的种子产量低，因此不适用于产生岩芽酸。在质体(叶绿体)中新合成了植物脂肪酸。如下合成岩芽酸。将前体_棕榈酰ACP通过A4-棕榈酰-ACP去饱和酶(下文中称为4DES)转化为顺-4-十六烯酰ACP,然后通过原核型脂肪酸合成酶复合体延长链以产生岩芽酰-ACP。然后，通过岩芽酰-ACP硫酯酶(下文中称为PTE)合成游离的岩芽酸，并转运至细胞质。认为在合成岩芽酸的植物中存在对岩芽酸的合成特异的一系列生物合成酶和它们的基因。在这些基因中，已克隆了源自芫荽的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因，并导入至本来不产生岩芽酸的拟南芥菜(Arabidopsisthaliana)中，以产生经转化的植物。虽然已证实了岩芽酸的累积，但累积量仅占种子中脂肪和油含量的约1%。关于PTE,已显示了酶活性的存在(非专利文献8)，但尚未克隆其基因。不仅在质体中的脂肪酸生物合成体系，而且在细胞质内的脂肪酸衍生物的输送、在内质网膜中甘油三酯合成体系均参与了植物中脂肪和油的生产以及组成性脂肪酸的组成。对于使用基因重组技术生产岩齐酸，还需解决许多问题。专利文献1美国专利号5,430,134专利文献2国际7>开号94/01565非专利文献lProc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,89，11184-11188，1992非专利文献2PlantJ.，17(6)，679-688，1999非专利文献3Prog.LipidRes.,33(1/2)，155-163,1994非专利文献4PlantPhysiol.，124，681-692，2000非专利文献5PlantMol.Biol.,47，507-518,2001非专利文献6Metab.Eng.，4，12-21，2002非专利文献7Biochim.Biophys.Acta.,1212，134-136，1994非专利文献8PlantPhysiol.,104,839-844，1994非专利文献9Planta215:584-5952002。发明公开根据以上所述，本发明的目的是提供能够促进岩芽酸累积的新基因并提供使用此类基因制备岩芽酸的方法。为了实现上述目的，本发明人进行了深入研究，并新发现了源自伞形科的胡萝卜(Daucuscarota)的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶在岩芹酸合成能力方面优于源自芫荽的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶。而且，本发明人首次成功地分离到岩芽酰-ACP硫酯酶基因，并发明了涉及使用该基因和A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因使得实现约2倍岩芽酸合成能力的技术。本发明包含以下方面(1)编码以下蛋白质(a)、(b)或(c)的基因(a)包含SEQIDNO:2所示絲,列的蛋白质；(b)包含在SEQIDNO:2所示M酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的M酸序列并具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质；或者(c)由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO:1所示核苷酸序列的核蛋白质。在上述(b)和(c)中，"具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质"可描述为通过在培养的植物细胞或植物中表达，能够增加顺-4-十六碳烯酸、岩芽酸(顺-6-十八碳烯酸)、或顺-8-二十碳烯酸(cis-8-icosenoicacid)的累积量的蛋白质。(2)编码以下蛋白质(a)、(b)或(c)的基因(a)包含SEQIDNO:4或6所示^J^餅列的蛋白质；(b)包含在SEQIDNO:4或6所示^J^酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列并具有岩芽酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质；或者(c)由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO:3或5所示核苷酸序列的核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码并具有岩芽酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质。在上述(b)和(c)中，"具有岩芽酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质"可描述为通过在培养的植物细胞或植物中与具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质共表达该蛋白质，能够增加顺-4-十六碳烯酸、岩芽酸(顺-6-十八碳烯酸)、或顺-8-二十碳烯酸的累积量的蛋白质，其中通过共表达获得的累积量大于通过仅表达具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质而获得的累积量。本说明书包括在本申请的优先权文件日本专利申请号2005-191775的说明书和/或附图中公开的部分或全部内容。附图简述图1显示了多种类型的岩芽酰-ACP硫酯酶和油酰基-ACP硫酯酶的氨基絲列同源性(％)。图l中，DcPTE是指源自胡萝卜(Daucuscarota)的岩芽酰-ACP硫酯酶，CsPTE是指源自芫荽(Coriandrumsativum)的岩芽酰-ACP石危酯酶，AgPTE是指源自碎萝(Anethumgraveolens)的岩芽酰-ACP硫酯酶，CsOTE是指源自芫荽(Coriandrumsativum)的油酰基-ACP硫酯酶，且DcOTE是指源自胡萝卜(Daucuscarota)的油酰基-ACP硫酯酶。图2-1显示了多种类型的岩,酰-ACP疏酯酶和油酰基-ACP硫酯酶的氨基酸序列的比对。图2-2显示了多种类型的岩芽酰-ACP硫酯酶和油酰基-ACP硫酯酶的氨基酸序列比对。图3显示了源自胡萝卜(Daucuscarota)的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶(称为Dc4DES)的氨基酸序列和源自芫荽(Coriandrumsativum)的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶(称为Cs4DES)的^J^酸序列的比对。图4为利用大肠杆菌(Escherichiacoli)的纯化的源自胡萝卜(Dcarota)的岩萍酰-ACP硫酯酶(称为DcPTE)、源自芫荽(Coriandrumsativum)的油酰基-ACP硫酯酶(称为CsOTE)、和源自胡萝卜(Daucuscarota)的油酰基-ACP硫酯酶(称为DcOTE)的组氨酸标记蛋白质洗脱液中，对每一级分进行SDS-PAGE的结果的照片。图5显示了在纯化的DcPTE和DcOTE的组氨酸标记蛋白质洗脱液中使用酰基ACP作为底物反应后，进行SDS-PAGE的结果的照片。图6为显示对图5所示照片中包含的条带使用图像分析软件进行定量的结果的特征图。图7为显示在实施例中制备的用于持续全身表达的栽体的组成图。图8为显示在实施例中制备的用于种子特异性表达的载体的组成图。图9显示了对经转化植物的种子进行脂肪酸组成分析的结果图。本发明的优选实施方案下文中参照附图详细地描述了本发明的新基因和制备岩芽酸的方法。1.分离源自胡萝卜(Daucuscarota)的A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因(Dc4DES基因)Dc4DES基因编码包含SEQIDNO:2所示氨基酸序列的蛋白质(Dc4DES)。Dc4DES为具有对作为C16饱和脂肪酸的棕榈酰-ACP(棕榈酰-酰基载体蛋白)的厶4位置去饱和活性的蛋白质。作为Dc4DES基因的一个例子，为SEQIDNO:1所示的编码包含SEQIDNO:2所示^J^酸序列的蛋白质的基因。而且，在本发明中，Dc4DES基因可为编码包含在SEQIDNO:2所示M酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列并具有厶4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质的基因。此处，术语"多个氨基酸"是指2至150个，优选地2至80个，且更优选地2至40个氨基酸。欲进行删除、替换或添加的区域的例子包括但不限于SEQIDNO:2所示氨基酸序列中第1至99位氨基酸之间的区域或第270至386位M酸之间的区域，优选地SEQIDNO:2所示氨基酸序列中第1至99位^J^酸之间的区域或第301至386位氨基酸之间的区域，更优选地SEQIDNO:2所示氨基酸序列中第1至53位氨基酸之间的区域或第381至386位氨基酸之间的区域。而且，在本发明中，Dc4DES基因可为编码包含与SEQIDNO:2所示^J^酸序列具有50%或更高、优选地70%或更高、更优选地90%或更高同源性的氨基酸序列并具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质的基因。上述多个代表同源性的数值可使用序列分析软件DNASIS(HitachiSoftwareEngineeringCo.，Ltd.),例如通过执4亍最大匹配法的指令而求得。其中使用的参数为缺省参数(起始设定的参数)。而且，本发明的Dc4DES基因可为编码这样的蛋白质的基因，所述蛋白质为由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO:1所示核苷酸序列的核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码并具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质。此处，术语"在严格条件下杂交"是指例如即使于溶液(6xSSC，0.5%SDS,和50%甲酰胺)中42。C加热后，于溶液(0.1xSSC和0.5%SDS)中68。C洗的条件下，仍然观察到阳性杂交信号。术语"A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性"是指对棕榈酰-ACPA4位置的去饱和活性。此活性的有无可如下测试。将编码欲测试的蛋白质的DNA片段导入不累积顺-4-十六碳烯酸、岩芽酸和顺-8-二十碳烯酸的宿主植物细胞(如烟草或拟南芥菜)，从而基因能发挥作用。测定在导入了DNA片段的植物体的脂质中顺-4-十六碳烯酸、岩芽酸和顺-8-二十碳烯酸的有无。例如，使用通过在持续性表达启动子或特异表达启动子下游定位有Dc4DES基因，即所述基因定位于受相关启动子调节的位置而制备的表达载体转化不累积顺-4-十六碳烯酸、岩芽酸和顺-8-二十碳烯酸的植物细胞(如烟草或拟脂类。将提取的脂类用甲醇盐酸等处理得^脂肪酸甲酯。、通过气相色谱等测定其中含有的岩芽酸甲酯的量、顺-4-十六碳烯酸脂肪酸甲酯的量、顺-8-二十碳烯酸脂肪酸甲酯的量。如果可以检测到这些脂肪酸曱酯，则可以说受试蛋白质具有A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性。如果未能检测到这些脂肪酸曱酯，则可以说受试蛋白质缺乏A4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性。通过将Dc4DES基因以能发挥功能的形式导入宿主植物细胞，则Dc4DES基因具有在所述细胞中发挥促进岩芽酸合成的功能。例如，使用通过在持续性表达启动子或特异表达启动子下游定位有Dc4DES基因，即所述基因定位于受相关启动子调节的位置构建的表达载体转化植物细胞。将由此获得的经转化植物生长为植物体，可促进植物体中岩芽酸的合成。种子特异的表达启动子优选地用作此种特异的表达启动子。使用种子特异的表达启动子，可在种子中累积岩芽酸。可如下检测岩齐酸。例如，将经转化的植物生长为植物体，然后粉碎种子等组织。然后将产物与盐酸-甲醇溶液混合，以将组织中含有的岩芽酸甲酯化，然后用己烷提取。可用气相色镨-质镨(GC-MS)设备检测己烷提取物。自GC-MS设备的检测结果可分析促进岩芽酸合成的能力。2.岩芹酰-ACP硫酯酶的酶基因(PTE基因)尽管已指出在芫荽(Coriandrumsativium)中存在PTE基因，但该基因既未被分离也未被克隆。本发明首次分离和克隆了此PTE基因。PTE基因为编码对在A6位置处具有双键的酰基ACP(酰基载体蛋白)如岩芽酰-ACP有高特异性的硫酯酶(PTE)的基因。PTE参与游离岩芽酸的合成。PTE基因的一个例子为编码包含SEQIDNO:4或6所示^tj^酸序列的源自胡萝卜的PTE的基因。具体地，编码包含SEQIDNO:4所示氨基酸序列的蛋白质的基因示于SEQIDNO:3。编码包含SEQIDNO:6所示氨基,列的蛋白质的基因示于SEQIDNO:5。此外，源自胡萝卜的PTE基因和PTE分别称为DcPTE基因和DcPTE。本发明的DcPTE基因可为编码包含在SEQIDNO:4或6所示^J^酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列并具有活性的蛋白质的基因。此处，术语"多个氨基酸，，是指2至188个，优选地2至64个，且更优选地2至44个氨基酸。欲进行删除、替换或添加的区域的例子包括但不限于SEQIDNO:4所示氨基酸序列中第1至70位氮基酸之间的区域或第311至375位氨基酸之间的区域，优选地SEQIDNO:4所示氨基酸序列中第1至57位氨基酸之间的区域或第368至375位M酸之间的区域，更优选地SEQIDNO:4所示氨基酸序列中第1至32位^J^酸之间的区域。而且，编码包含在SEQIDNO:4或6所示氨基酸序列中导入了替换、删除或插入的氨基酸序列的蛋白质的PTE基因可使用公知的技术如Kunkel法或Gappedduplex法或者才艮据它们的方法向SEQIDNO:3或5所示核苷酸序列中导入目的突变而获得。突变的导入可使用例如利用了定点诱变的诱变试剂盒(如Mutan-K(TAKARA)或Mutan-G(TAKARA))，或者使用LAPCR体外诱变系列试剂盒(TAKARA)实施。而且，在本发明中，DcPTE基因可为编码包含与SEQIDNO:4或6所示M酸序列具有50%或更高、优选地70%或更高、更优选地90%或更高同源性的M,列并具有岩芽酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质的基因。上述多个代表同源性的数值可使用序列分析软件DNASIS(HitachiSoftwareEngineeringCo.，Ltd.),例如通过执行最大匹配法的指令而求得。其中使用的参数为缺省参数(起始设定的参数)。而且，本发明的DcPTE基因可为编码这样的蛋白质的基因，所述蛋白质为由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO:3或5所示核苷酸序列的核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码并具有岩芽酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质。此处，术语"在严格条件下杂交"是指例如即使于溶液(6xSSC，0.5%SDS,和50。/。曱酰胺)中42。C加热后，于溶液(0.1xSSC和0.5。/。SDS)中68°C洗的条件下，仍然观察到阳性杂交信号。术语"岩芽酰-ACP硫酯酶活性"是指将岩芽酰-ACP降解为岩芽酸和ACP的活性。此活性可如下测试。混合25mMTris-HCl(pH8.0)、1mMDTT、岩芽酰-ACP和水，然后25。C预孵育5分钟。将15吗受试蛋白质添加至100pl反应液中，然后25°C反应30分钟。反应后，通过SDS-PAGE分离未反应的岩芽酰-ACP和作为反应产物的游离ACP。电泳后，将凝胶进行CBB染色，然后使用光密度计定量作为反应产物的游离ACP(通过SDS-PAGE分离)的量。由此测定了所添加的受试蛋白质的硫酯酶活性。备选地，混合25mMTris-HCl(pH8.0)、1mMDTT、岩芽酰基用氖标记的岩芽酰-ACP和水，然后25。C预孵育5分钟。将受试蛋白质添加至100ji1反应液，然后25°C反应30分钟。反应后，添加50|J异丙醇终止反应。其后通过酶反应产生的岩芽酸通过薄层层析分离。由此产生的岩芽酸的量使用闪烁计数仪定量，从而测定所添加蛋白质的硫酯酶活性。此外，本发明中的PTE基因的例子不限于编码源自胡萝卜的PTE的基因。PTE基因的实例包括源自生物合成岩芽酸的植物的PTE基因。生物合成岩芽酸的植物的实例除了包括胡萝卜外，还包括伞形科中的如芫荽(Coriandrumsativium)、芽茱(Petroseliumcrispum)、誇萝(Anethumgraveolens)和五力口科(Araliaceae)植物:i口常青膝(Hederahelix)和惚木(Araliaelata)。当PTE基因获得自胡萝卜以外的植物时，例如可使用SEQIDNO:3或5所示的DcPTE基因核苷酸序列中第187至1128之间的核苷酸区域的全部或部分作为揮:针。当使用长的核酸序列^100bp)作为探针时，也可在中等或高度严格条件下进行筛选，以获得具有80%或更高同源性的来自目的样本的信号。此外，也可使用非常短的探针。例如，可使用的寡核苷酸长度为至少约10个，优选地至少约15个，且更优选地20个核苷酸。当使用短区域作为探针时，需要较长探针情况下高的序列同一性。特别地，使用上述探针和自胡萝卜以外的植物提取的基因组DNA，通过Southern杂交，可分离和鉴定来自该植物基因组的PTE基因。此外，该植物的PTE基因还可不使用基因组DNA，而使用自该植物提取的mRNA作为模板合成的cDNA来分离和鉴定。基于SEQIDNO:3或5所示的DcPTE基因的核苷絲列，自芫荽(Coriandrumsativium)和誇萝(Anethumgraveolens)分离的DcPTE同源基因的核苷酸序列分别示于SEQIDNO:7和9。此夕卜，由源自芫荽的SEQIDNO:7所示的PTE基因推定的氨基麟列(CsPTE)示于SEQIDNO:8。由源自蒔萝的SEQIDNO:9所示的PTE基因推定的氨基酸序列(AgPTE)示于SEQIDNO:10。此外，多种植物的硫酯酶蛋白间的氨基酸同源性(％)示于图1中。如图1所示，PTE组中的成员(包括DcPTE、CsPTE和AgPTE)具有高同源性。另夕卜，DcOTE显示与CsOTE具有高同源性。相反，PTE组与OTE组显示相对低的同源性。因此，可以说与PTE组中的PTE蛋白质具有高于80%的氮基酸同源性的新蛋白质很可能包括在PTE组中。因此，本发明的PTE基因的例子也包括编码包含与SEQIDNO:4、6、8或10所示氨基酸序列的同源性高于80%的氨基酸序列的蛋白质的DNA。此外，图2显示了DcPTE、CsPTE、AgPTE、DcOTE和CsOTE的氨基酸序列比对。在OTE和PTE之间存在约30y。的氩基酸差异。具体地，OTE组中的一些氨基酸与PTE组中的极性不同。在以下说明中，术语"共有序列中的第X位(氨基酸)(X为自然数)，，是指在图2的比对中对于上排所赋予的数值。在PTE组中共有序列的第120、125和373位氛基酸为非极性的，而在OTE组中的这些氨基酸为极性的。而且，在PTE组中共有序列的第140和195位氛基酸为极性的，而在OTE组中的这些氨基酸为非极性的。此外，OTE组中的一些带电荷氨基酸与PTE组中的极性不同。在PTE组中共有序列的第149和246位氛基酸为不带电荷的，而在OTE组中的这些氨基酸为带正电荷的。此外，在PTE组中共有序列的第244位氛基酸为带负电荷的，而在OTE组中的该氨基酸为不带电荷的。此外，在PTE组中共有序列的第270位氛基酸为带正电荷的，而在OTE组中的该M酸为不带电荷的。认为在这些位置处氨基酸极性的有无和电荷的变化导致了底物选择性的变化。而且，已知在底物结合位点处氨基酸侧链结构的不同导致底物选择性的变化。在PTE组中共有序列的第89、147、161、177、192、196、214、217、223、238、270、287和338位氨基酸的侧链结构不同于OTE组的这些氨基酸的侧链结构。通过替换OTE组和PTE组之间不同的这些氨基酸可能改变对酰基ACP的底物特异性。当将PTE基因与A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因一起以PTE基因能发挥功能的形式导入宿主植物细胞，PTE基因具有显著促进宿主植物细胞中岩芽酸合成的功能。例如，通过将PTE基因定位于持续性表达启动子或特异表达启动子下游而构建表达载体，即所述PTE基因定位于受相关启动子调节的位置。用A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因转化的植物细胞(参见上述l)进一步用由此构建的表达载体转化。备选地，也可使用通过将PTE基因和A4-棕榈酰-ACP去饱和酶基因定位于持续性表达启动子或特异表达启动子下游而构建的表达载体转化植物细胞。在这两种情况下，均可将由此获得的经转化植物生长为植物体，并在该植物体中能促进岩芽酸合成。可如下检测岩芽酸。例如，将经转化的植物生长为植物体，然后粉碎种子等组织。然后将产物与盐酸-甲醇溶液混合，以将组织中含有的岩芽酸甲酯化，然后用己烷提取。可用气相色镨-质镨(GC-MS)设备检测己烷提取物。自GC-MS设备的检测结果可分析促进岩芽酸合成的能力。表达载体在本发明中，表达载体包含上述1和2描述的Dc4DES基因和/或PTE基因。对本发明所使用的表达栽体没有特别的限制，只要是质粒型载体或染色体导入型载体(其可掺入宿主生物基因组)即可。此类载体的实例包括质粒DNAs、喧菌体DNAs、反转录转座子DNAs和人工染色体DNAs(YAC:酵母人工染色体)。此类质粒DNAs的实例包括YCp大肠杆菌-酵母穿梭载体(如pRS413，pRS414，pRS415，pRS416，YCp50，pAUR112,和pAUR123)，YEp大肠杆菌-酵母穿梭载体(如pYES2和YEpl3)，YIp大肠杆菌-酵母穿梭载体(如pRS403，pRS404，pRS405，pRS406,pAUR101，和pAUR135)，源自大肠杆菌的质粒(如ColE质粒，例如pBR322,pBR325,pUC18，pUC19,pUC118,pUC119，pTV118N，pTV119N,pBluescript，pHSG298，pHSG396,和pTrc99A;pl5A质粒，例如pACYC177和pACYC184;以及pSC101质粒，例如pMW118，pMW119，pMW218,和pMW219),源自农杆菌(Agrobacterium)的质粒(如pBI101),以及源自枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的质粒(如pUB110和pTP5)。此类噬菌体DNAs的实例包括入噬菌体(如Charon4A,Charon21A,EMBL3，EMBL4,XgtlO，Xgtll，和AZAP),cpX174，M13mpl8，和M13mpl9。反转录转座子的实例包括Ty因子。YAC载体的实例包括pYACC2等。此外，也可使用动物病毒如逆转录病毒和痘苗病毒以及昆虫病毒如杆状病毒(baculovirus)的载体。需要将Dc4DES基因和/或PTE基因以使所述基因能表达的状态导入此类表达载体。所述"使所述基因能表达的状态"是指通过将Dc4DES基因和/或PTE基因连接至启动子而掺入载体中，从而Dc4DES基因和/或PTE基因可在预定的启动子控制下于所述基因导入的宿主生物中表达。因此，除了Dc4DES基因和/或PTE基因之外，可将启动子和终止子，并且根据需要，将顺式元件如增强子、剪接信号、添加polyA的信号、选择标记、核糖体结合序列(SD序列)等连接入载体。此外，此类选择标记的实例包括抗生素抗性基因如氨节青霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、潮霉素抗性基因和除草剂抗性基因如双丙氨膦抗性基因。待用于本发明的表达载体中包含的启动子的实例包括但不特别地限于持续性表达启动子、组织特异的表达启动子和刺激诱导性启动子。在这些实例中，优选使用种子特异的表达启动子，以在种子中累积合成的岩芽酸。作为种子特异的表达启动子，可使用源自油菜籽的油菜籽蛋白A启动子、源自拟南芥菜的FAE1启动子、油质蛋白启动子、源自大豆的谷蛋白Bl启动子、亚麻的硬脂酰-ACP去饱和酶(SAD)启动子等。转化体可使用上述表达载体制备转化体。特别地，可通过将上述表达载体导入宿主而制备转化体，从而使得在栽体中包含的Dc4DES基因和/或PTE基因可表达。宿主植物所属的科包括但不特别地限于伞形科、茄科(Solanaceae)、芸莒科(Brassicaceae)、禾本科(Gramineae)、豆科(Leguminosae)、蔷薇科(Rosaceae)、菊科(Asteraceae)、百合科(Liliaceae)、石竹科(Caryophyllaceae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、-炎花科(Convolvulaceae)、藜科(Chenopodiaceae)。属于伞形科或芸莒科的植物是尤其希望的宿主植物。当宿主为植物时，经转化的植物可如下获得。本发明的待转化的对象植物是指任一完整的植物体、植物器官(如叶、花瓣、茎、根、和种子)、植物组织(如表皮、韧皮部、薄壁组织、木质部、维管束、栅状组织、海绵状组织)、培养的植物细胞。可使用常规的转化方法将表达载体导入植物，如真空浸润法(农杆菌法)、粒子枪法、PEG法、电穿孔法等。例如，可根据已知的技术进行真空浸润法(Shujunsha,ExperimentalProtocolsforModelPlants,2001,109-113页)。当使用农杆菌时，将表达载体导入合适的农杆菌(如根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404林)。例如根据叶盘法(HirofumiUchimiya编著，GeneticEngineeringManualsforPlants,1990,27-31页，KodanshaScientificLtd.,东京)，使用该菌林感染宿主(如烟草)的无菌培养叶片，也可获得经转化的此外，当使用粒子枪法时，可直接使用植物体、植物器官、植物组织本身。备选地，可从其制备切片或原生质体并使用。如此制备的样本可用基因导入设备(如PDS-1000(BIO-RAD公司))处理。处理条件根据植物或样本的不同而不同。处理通常于压力约450psi至2000psi之间，距离约3cm至12cm之间进4亍。作为转化的结果而获得的肿瘤组织、枝条、毛状根等可直接用于细胞培养、组织培养或器官培养。而且，此类肺瘤组织、枝条、毛状根等可使用常规的已知植物组织培养法，通过施与合适浓度的植物激素(如生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯和油菜素内酯)再生为植物体。可通过PCR法、Southern杂交法、Northern杂交法等证实基因被掺入了宿主。例如，自转化体制备DNA,设计DNA特异的引物，然后进行PCR。PCR可在用于制备质粒的相似条件下进行。接下来将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、或毛细管电泳，然后使用溴化乙锭、SYBRGreen液等染色。然后，通过扩增产物以单一条带的形式被检测到，从而证实成功的转化。此外，也可以使用事先用荧光染料等标记的引物进行PCR来检测扩增产物。此外，此处可采用的方法还包括将扩增产物结合至固相如微孔板，然后通过荧光反应、酶反应等证实扩增产物。另外，宿主的实例包括属于埃希氏菌属(Escherichia)(如大肠杆菌)、芽孢杆菌属(Bacillus)(如枯草芽孢杆菌)、假单胞菌属(Pseudomonas)(如恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida))或根瘤菌属(Rhizobium)(如苜蓿才艮瘤菌(Rhizobiummeliloti))的细菌；酵母如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和粟酒裂歹直酵母(Schizosaccharomycespombe);动净勿细胞^口COS细胞和CHO细胞；以及昆虫细胞如Sf9。当使用细菌如大肠杆菌作为宿主时，重组载体优选地为在细菌中可自主复制的，且同时载体优选地包含有核糖体结合序列、本发明的基因和转录终止序列。大肠杆菌的实例包括大肠杆菌DH5oc和大肠杆菌Y1090。枯草菌的实例包括但不限于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。对将重组载体导入细菌的方法没有特别的限制，只要是将DNA导入细菌中的方法即可。此类方法的实例包括使用钙离子的方法[Cohen，S.N.等人Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.,69:2110(1972)和电穿孔法。当使用酵母作为宿主时，可使用酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)等。对将重组载体导入酵母的方法没有特别的限制，只要是将DNA导入酵母中的方法即可。此类方法的实例包括使用电穿孔法[Becker，D.M.等人Methods.Enzymol.，194:182(19卯)、原生质球法[Hinnen，A.等人Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，75:1929(1978)、和醋酸锂法[Itoh，H.:J.Bacteriol.,153:163(1983)]。当4吏用动物细胞作为宿主时，可使用猴细胞(如COS-7和Vero)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)、小鼠L细胞、大鼠GH3、人FL细胞等。用于将重组载体导入动物细胞的方法的实例包括电穿孔法、磷酸钩法和脂转染法。当使用昆虫细胞作为宿主时，可使用Sf9细胞等。用于将重组载体导入昆虫细胞的方法的实例包括磷酸钩法、脂转染法和电穿孔法。用于产生岩芹酸的方法在上述经转化的植物中可促进岩芽酸合成，因为导入的Dc4DES基因和/或PTE基因的功能。可使用常规的公知技术提取经转化的植物中合成和累积的岩芽酸。自植物组织(如产油型植物的种子或果实)压和提取脂肪和油的方法主要分成两种方法压榨法和提取法。自具有高的脂肪和油含量的组织如油菜籽的种子获得脂肪和油的方法包括用滚动压榨机等粗碎和压组织，在75°C至85°C之间加热，使用压榨机如螺旋式压榨机压榨，然后提取脂肪和油(压榨法)。另外，对于具有低的脂肪和油含量的原材料如大豆，使用溶剂如己烷自组织提取脂肪和油(提取法)。通过这些步骤产生的脂肪和油是脂肪酸(包含岩芽酸)和酯如甘油的混合物。因此，其中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯、磷脂等。接下来，将这些脂肪和油水解，获得脂肪酸。分离和纯化由此获得的脂肪酸混合物，从而可获得非常纯的岩芽酸。此外，将醇如甲醇添加至脂肪和油，然后进行反应，可获得醇酯如岩芽酸甲酯。下面参照实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明的技术范围不解释为受下列实施例的限制。接下来，制备了导入实施例1中克隆的Dc4DES基因和实施例2中克隆的DcPTE基因的经转化植物。检测了经转化的植物中的岩芽酸合成能力。特别地，制备了其中仅导入了Dc4DES基因的经转化植物、其中仅导入了DcPTE基因的经转化植物、和其中Dc4DES基因和DcPTE基因一同导入的经转化植物。制备用于持续全身表达的DNA构建体在用于转化的载体中，图7显示了用于持续全身表达的载体。在图7中，"Pnos"是指源自农杆菌的胭脂碱合成酶启动子，"Tnos"是指源自农杆菌的胭脂碱合成酶终止子，"P35S"是指CaMV35S启动子，且"NPTII"是指新霉素砩酸转移酶II基因。特别地，将植物表达载体pBI121(Cloetech)中含有的GUS基因替换为Dc4DES基因的cDNA序列。使用所设计的在5，末端侧添加了BamHI序列和在3，末端侧添加了SacI序列的引物通过PCR法扩增编码Dc4DES基因ORF区的DNA片段。将PCR产物与pSTBluel(克隆载体，Novagen)混合，然后向该混合物加入等量TaKaRaLigationKitver.2,于16。C30分钟进行连接反应。将反应液的总量添加至50nl感受态细胞(大肠杆菌DH5ot，TOYOBO),然后按照制造商说明的方法进行转化。自由此获得的转化体(生长于补充有50|Lig/ml卡那霉素的LB琼脂培养基)制备质粒。由此获得的质粒用限制性酶(BamHI和SaeI)处理。接下来，为了切下pBI121中连接在CaMV35S启动子下游的GUS基因，同样地用限制性酶(BamHI和SacI)处理。将这些限制性酶消化的产物进行0.8。/。琼脂糖凝胶电泳。使用QIAquick凝胶提取试剂盒(QIAGEN)和GenecleanII(BIO101)，分别分离和纯化含有Dc4DES基因的DNA片段和pBI121骨架(对应于其中GUS基因已移除的部分)。将pBI121骨架片段和欲插入的DNA片段(Dc4DES基因)以1:10的比率混合。-使用等量的TaKaRaLigationKitver.2于16。C进行连接反应30分钟。将反应液的总量添加至100nl感受态细胞(大肠杆菌菌林DH5a,TOYOBO)，然后按照制造商说明的方法进行转化。将所得产物涂布至含有50吗/ml卡那霉素的LB琼脂培养基，然后过夜培养.用于共表达Dc4DES基因和DcPTE基因的载体(图6(D))如下构建将DcPTE基因的表达单元(包含启动子和终止子的DNA片段)插入图6(A)所示的Dc4DES表达用表达栽体中的T-DNA的LB附近的唯一的EcoRI位点和DraIII位点之间。DcPTE基因的表达单元通过PCR法使用所设计的两端添加有EcoRI位点和DraIII位点的引物扩增。制备用于种子特异性表达的DNA构建体在用于转化的载体中，用于种子特异性表达的载体示于图8(A)至(D)。在图8(A)至(D)中，"Pnap"是指源自油菜籽(B.campestriscvKizakinonatane)的油菜籽蛋白A启动子。已知Monsanto公司使用该启动子调控油菜籽的脂肪和油含量。具体地，通过将图7所示的载体中的CaMV35S启动子替换为源自油菜籽的油菜籽蛋白A启动子而构建种子特异性表达的载体。此外，将GUS基因替换为Dc4DES基因、DcPTE基因、或Cs4DES的cDNA序列。同时，用于共表达Dc4DES基因和DcPTE基因的载体(图8(D))如下构建将DcPTE基因的表达单元(包含启动子和终止子的DNA片段)插入图8(A)所示的Dc4DES表达用表达载体中的T-DNA的LB附近的唯一的EcoRI位点和DraIII位点之间。DcPTE基因的表达单元通过PCR法使用所设计的两端添加有EcoRI位点和DraIII位点的引物扩增。通过电穿孔法将基因导入农杆菌使用所制备的质粒通过电穿孔法转化农杆菌。将40pl通过常规方法制备的根癌农杆菌(LBA4404林)的感受态细胞溶解，然后添加5pl(25|ug)DNA溶液。将溶液置于冰上1至2分钟。接下来，将溶液置于冰冷的小杯(0.2cm,BIO-RAD)中。使用基因导入设备(Shimadzu)施加脉沖电流(1.25kV和10fxF)。加入立即冷却的SOC培养基460|ul，然后28。C培养1小时。将该溶液涂布至含有50pg/ml卡那霉素和50吗/ml利福平的LB琼脂培养基，然后过夜培养。选择转化体。对于出现的转化体菌落进行单菌落分离。挑取多个菌落，通过PCR法证实目标质粒DNAs。通过真空浸润法制备拟南芥菜转化体通过真空浸润法转化拟南芥菜(Arabidopsisthalianaet.Columbia)。根据ExperimentalProtocolsforModelPlants,Shujunsha,2001,109-113页实施真空浸润法。接下来，培养经真空浸润的拟南芥菜。然后，收集种子并确定为第l世代转化种子(T1种子)。但是，为了方便，将它们作为世代转化种子使用。然而，该种子群体的所有种子不是均已被转化。接下来，将笫1世代转化种子播种于补充有卡那霉素的培养基(向Murashige&Skoog基本培养基中添加有0.5g/LMES、10g/L蔗糖、8g/L琼脂、100mg/L羧节青霉素、和50mg/L卡那霉素)。使种子在亮条件下发芽。生长植物约1至2周，然后选择转化的个体植物(由于它们的卡那霉素抗性而正常生长)。将其叶已正常展开的植物个体再次移植至相同的培养基，然后生长约1至2周用于再选择。将由此获得的植物体确定为第l世代转化才直物体(T1植物)。将卡那霉素抗性的植物品系移植至未灭菌的蛭石，从而4吏得它们经培育后变得适应未灭菌的环境。接下来，自第1世代转化植物体收集约100mg莲座丛叶，在液氮冻存下粉碎。使用DNA制备试剂盒(DNeasyplantminikit,QIAGEN)，按照在试剂盒中包括的标准方法制备DNA。使用以T-DNA中的药物抗性基因(NPTII)和所导入的脂肪酸合成体系的基因为靶的PCR引物以及使用ExTaqDNA聚合酶(TAKARABIOINC.)进行PCR扩增。将由此获得的片段(PCR扩增产物)使用0.8%琼脂糖凝胶和TAE緩冲液进行电泳。然后进行溴化乙锭染色，证实目标片段的扩增。基于扩增的有无确定所导入基因的有无。接下来，继续栽培上述确认了T-DNA导入的植物品系，收集的种子确定为第二世代转化种子(T2种子)。对每一构建体收获15个或更多品系的T2种子，并用于以下的脂肪酸组成分析。用于分析拟南芥菜种子的脂肪酸组成的方法为了进行种子中脂肪酸组成的分析，将种子中的脂肪酸用盐酸-甲醇进行甲酯化，然后对其正己烷提取物通过GC-MS分析。此夕卜，添加BHT(丁基化羟基甲苯)作为样本的抗氧化剂。另外，作为内部标准，将植物油中不含有的十五烷酸(C15:0)的甲酯(SIGMA)的甲醇溶液直接添加至称重后的种子，用于校正在制备分析用样本时出现的实验误差。适于邻苯二甲酸酯分析用的正己烷(TokyoChemicalIndustryCo.,Ltd.)用于提取。这可消除邻苯二甲酸酯的影响，其中所述邻苯二甲酸酯在GC分析中显示出与脂肪酸类似的特性。表3显示了用于定性分析的方法，且表4显示了用于定量分析的方法。表3用于定性分析的方法(1)称重5mg样本(鲜重)(2)将样本添加至1.5-mLeppendorf管(PP),然后添加1粒Tangsten珠(Qiagen)(3)添加0.1%BHT和5mMC15:0國OMe/MeOH(各500pi)(4)在Freq:l/20s,1分钟条件下粉碎(混合研磨机MM300,Qiagen)所得物(5)添加500pi10%HCl/MeOH(TokyoChemicalIndustry,保存在4°C)(6)于80。C维持1小时(恒温金属浴仪(Heatblock)，Iwaki)(7)加入1ml正己烷(用于邻苯二甲酸酯分析，TokyoChemicalIndustry)(8)涡旋(混合)5秒(9)转移上层(己烷相，800pl)至1.5-mleppendolf管(10)在减压条件下干燥和固化(Concentrator5301，EppendolQ(11)添加100jul正己烷(用于邻苯二甲酸酯分才斤，TokyoChemicalIndustry)(12)转移所得物至GC用玻璃管瓶并密封瓶(13)GC/MS分析表4用于定量分析的方法(1)称重10粒样本种子(鲜重)(2)将种子加至1.5-mLeppendorf管(PP)，然后添加1粒Tangsten珠(Qiagen)(3)添加0.002%BHT和0.1mMC15:0-OMe/MeOH(各500jil)(4)在Freq:l/20s，1分钟条件下粉碎(混合研磨机MM300,Qiagen)(5)添加500pi10%HCl/MeOH(TokyoChemicalIndustry,保存在4。C)(6)于80。C维持1小时(恒温金属^1,Iwaki)(7)加入lml正己烷(用于邻苯二曱酸酯分析，TokyoChemicalIndustry)(8)涡4t(混合)5秒(9)转移上层(己烷相，800nl)至l,5-mleppendolf管(10)在减压条件下千燥和固化(Concentrator5301，Eppendolf)(11)添加100|al正己烷(用于邻苯二甲酸酯分析，TokyoChemicalIndustry)(12)转移所得物至GC用玻璃管瓶并密封瓶(13)GC/MS分析(HP)通过根据上述方法进行处理所得的谱在表5的条件下分析。所述条件为能够将由于双键位置不同的位置异构体油酸(C18:l，A9)和岩芽酸(C18:l，A6)通过GC分离并分析的条件。表5分析4义器HEWLETTPACKARDGC/MSHP6890系列GC系统，5973MassSelectiveDetector柱SUPELCOSP-2380(内径0.25mm，100m)分离程序80°C(开始时)，以3。C/分钟升温—180°C(维持该温度35分钟)，以30。C/分钟升温—240。<:(维持该温度10分钟)，总计:约80分钟分析模式分裂(分裂比率加1)载气:氦，流速lmL/分钟，压力29.9psi，平均速率20cm/秒在GC-MS系统质量检测仪的总离子色谱图(TotalIonChromatogram)中，用每一峰的积分值除以内部标准和相关分子量。由此计算的值的和确定为脂肪酸总量。在脂肪酸总量中的每一脂肪酸的百分率以摩尔百分率(mol-。/。)表示。此外，使用质量检测仪检测的碎片强度随物质的不同而不同，已知不能简单地反映分子量。但是，当在相同条件下分析时，再现性和定量可靠性非常高，因此进行相对比较是充分可能的。分析结果1为了测试根据本发明获得的Dc4DES基因对岩芽酸生产的效果，使用在CaMV35S启动子控制下的表达Dc4DES基因的pB-4DES构建体制备持续全身表达型的经转化的植物。自经转化的植物收集叶，提取脂肪和油成分，才艮据上述方法分析脂肪酸组成。此外，文中分析的脂肪酸组分为岩芽酸和岩萍酸前体顺-4-十六碳烯酸(16:1A4)。表6显示了这些单烯不饱和脂肪酸的分析结果。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>结果，在其中导入了pB-Dc4DES的转化体的叶中，相对于总脂肪酸量，累积了7.67wt。/。岩芽酸(在野生型拟南芥菜中未分析到)。特别地，显示了通过^f吏用源自胡萝卜的Dc4DES基因，可在植物细胞中有效地生产岩芽酸(表6)。如之前所报导的(专利文献1)，向培养的烟草细胞中导入源自芫荽的Cs4DES基因，岩芽酸含量为2.7wt%。因此，揭示了对于岩芽酸的合成和累积而言，源自胡萝卜Dc4DES基因的功能优于源自芫荽的Cs4DES基因的功能。分析结果2制备了使用种子特异性表达的油菜籽的油菜籽蛋白启动子以种子特异性方式表达Dc4DES基因、Cs4DES基因、或DcPTE基因的经转化植物。从这些种子提取脂肪和油成分，然后通过上述方法分析脂肪酸组分。表7显示了单烯不饱和脂肪酸的分析结果。此外表7中的"NT"是"未测试"的缩写。表7基因型脂肪酸(mol%)C16:1A4SEC18:1A6SEC20:1A8SE总计SE实验值WT0.000.000.000.00pNCs4DES/WTT2(n=3)0.38±0.040.81±0.110.35±0.051.54±0.20pNDc4DES/WTT2(n=3)0.40±0.030.89±0.090.41±0.031.70±0.15pNDc4DESPTE/WTT2(n=6)0.37±0.011.37±0.070.53±0.032.28±0.15pNDc4DESPTEAVTT3(n=3)0.42±0.021.83±0.090.68±0.052.93±0.15文献中的值WT0.00謹0.000.00pN-Cs4DESAVTT2(n,NTNTNT0.6±0.04pN-Cs4DES/fablT2(n=6)NTNTNT2.4±0,2结果，导入pN-Cs4DES的转化体的种子中累积了0.81niol%岩芽酸。相反，导入pN-Dc4DES的转化体的种子中累积了0.89mol%岩芽酸。关于在种子中合成和累积岩芹酸，源自胡萝卜的Dc4DES基因的功能也优于源自芫荽的Cs4DES基因的功能。在已导入了pN-Dc4DES-DcPTE的转化体中，累积了1.83mol。/o岩芽酸。特别地，与仅导入Cs4DES基因相比，累积的岩芽酸量增加至226。/。。通过导入对岩芽酰-ACP具有高底物特异性的DcPTE,促进了岩芽酸产生。更特别地，揭示了与仅表达Dc4DES基因相比，共表达Dc4DES基因和DcPTE基因可获得显著高的岩芽酸累积的效果。而且，通过此共表达获得2倍或2倍以上。通过与4DES基因共表达而使得岩芽酸累积量增加的岩芽酸生物合成系统基因是至今为止未知的。该岩芽酸生物合成系统基因是世界上首次发现的。此外，如表6所示，发现通过仅表达Dc4DES基因或通过共表达Dc4DES基因和DcPTE基因，不仅产生岩芽酸，也可产生顺-8-二十碳烯酸。而且，能够证实与仅表达Dc4DES基因相比，通过共表达Dc4DES基因和DcPTE基因能更加增加顺-8-二十碳烯酸的生产量。此外，至今尚无在植物中成功生产顺-8-二十碳烯酸的情形。分析结果3此外，在^4^达Dc4DES基因或DcPTE基因的经转化的植物中，或在共表达Dc4DES基因和DcPTE基因的经转化的植物中，分析了每一脂肪酸组成(包括饱和脂肪酸)。结果，揭示了与野生型林、与导入了Cs4DES基因的经转化植物、以及与导入了Dc4DES基因的经转化植物相比较，在仅表达DcPTE基因的转化体或在共表达DcPTE基因和Dc4DES基因的转化体的种子中饱和脂肪酸含量显著增加(图9)。在已导入了DcPTE基因的植物的种子中硬脂酸(C18:0)含量、二十烷酸(C20:0)含量、或二十二烷酸(C22:0)含量达到没有导入DcPTE基因的植物的种子中相关含量的水平近2倍。基于推定的M酸序列进行分子系统树分析的结果，将DcPTE基因归入称为FatA的组(其成员对不饱和脂肪酸-ACP具有特异性)的硫酯酶基因。而且，根据实施例2所示，DcPTE基因显示对岩芽酰ACP的底物特异性的结果，可以预测增加不饱和脂肪酸含量的效果。但是，难于预测增加饱和脂肪酸生产的效果。因此，揭示了DcPTE基因具有本领域技术人员无法预测的特别显著的效果。在通过氧化分解源自植物的脂肪酸而制备尼龙原材料(二羧酸)时，DcPTE基因具有特别有利的特性。特别地，所述特性为除了促进岩芽酸累积之外，还增加C18(或更大碳数)的饱和脂肪酸的含量的效果。更特别地，DcPTE基因能增加饱和脂肪酸含量，从而降低除岩芽酸外的不饱和脂肪酸含量(为由于氧化分解而引起世代不纯的原因)。此外，此效果不仅可通过使用与另一基因(如Dc4DES基因)组合而获得，而且可通过仅使用DcPTE基因获得，因此，DcPTE基也可用于除岩芽酸累积外的用途(如饱和脂肪酸生产)，以制备树脂原材料。工业利用性根据本发明，可提供用于在岩芽酸生产中增加岩芽酸合成量的新基因。此外，提供了使用该基因生产岩芽酸的新方法。使用本发明的参与岩芽酸生产的基因，可以例如在植物种子中大量累积岩芽酸。本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请均在本说明书中全文引用作为参考。权利要求1.编码以下蛋白质(a)、(b)或(c)的基因(a)包含SEQIDNO2所示氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在SEQIDNO2所示氨基酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列并具有Δ4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质；或者(c)由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO1所示核苷酸序列的核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码并具有Δ4-棕榈酰-ACP去饱和酶活性的蛋白质。2.编码以下蛋白质(a)、(b)或(c)的基因(a)包含SEQIDNO:4或6所示^J^酸序列的蛋白质；(b)包含在SEQIDNO:4或6所示氨基酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列并具有岩芹酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质；或者(c)由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO:3或5所示核苷酸序列的核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码并具有岩芽酰-ACP疏酯酶活性的蛋白质。3.具有根据权利要求1的基因和/或根据权利要求2的基因的表达载体。4.导入了根据权利要求1的基因和/或根据权利要求2的基因的转化体。5.用于产生岩芽酸的方法，所述方法包括将根据权利要求l的基因和/或根据权利要求2的基因导入植物细胞，产生经转化的植物的步骤；以及从由经转化的植物收集来的组织提取岩芽酸的步骤。6.能够产生岩,酸的经转化的植物细胞或经转化的植物，其中导入了根据权利要求1的基因和根据权利要求2的基因。7.能够产生顺-4-十六碳烯酸的经转化的植物细胞或经转化的植物，其中导入了根据权利要求1的基因和根据权利要求2的基因。8.能够产生顺-8-二十碳烯酸的经转化的植物细胞或经转化的植物，其中导入了才艮据权利要求1的基因和根据权利要求2的基因。9.能够增加饱和脂肪酸生产的经转化的植物细胞或经转化的植物个体，其中导入了根据权利要求2的基因。10.根据权利要求5的用于产生岩芽酸的方法，其包括使用具有种子然后自种子提取岩萍酸。11.根据权利要求5的用于产生顺-4-十六碳烯酸的方法，其包括使用具有种子特异的启动子和位于该启动子下游的上述基因的表达载体转化植物细胞，然后自种子提取顺-4-十六碳烯酸。12.根据权利要求5的用于产生顺-8-二十碳烯酸的方法，其包括使用具有种子特异的启动子和位于该启动子下游的上述基因的表达载体转化植物细胞，然后自种子提取顺-8-二十碳烯酸。13.根据权利要求5的用于产生饱和脂肪酸的方法，其包括使用具有种子特异的启动子和位于该启动子下游的上述基因的表达载体转化植物细胞，然后自种子提取饱和脂肪酸。全文摘要提供了能够促进岩芹酸累积的新基因和使用所述基因生产岩芹酸的方法。此新基因编码以下蛋白质(a)、(b)或(c)(a)包含SEQIDNO4或6所示氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在SEQIDNO4或6所示氨基酸序列中删除、替换或添加一个或多个氨基酸的氨基酸序列并具有岩芹酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质；或者(c)由在严格条件下与包含互补于SEQIDNO3或5所示核苷酸序列的核苷酸序列的DNA杂交的DNA编码并具有岩芹酰-ACP硫酯酶活性的蛋白质。文档编号C12N15/09GK101213298SQ20068002414公开日2008年7月2日申请日期2006年6月29日优先权日2005年6月30日发明者冈村幸治,山中阳子,村本伸彦,西田生郎申请人:丰田自动车株式会社