专利名称：：Nogo-a对人抗体有特效和它的药学应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及免疫球蛋白，特别是与NOGO结合并中和其活性的抗体，编码此类抗体的多核苷酸，含有所述抗体的药物制剂以及此类抗体治疗和/或预防神经疾病中的用途。
背景技术：
：中风在西方世界是主要的死亡和致残原因。除了组织型纤维蛋白溶酶原(t-PA)用于治疗中风外，尚无其他获得批准的疗法，组织型纤维蛋白溶酶原可以在发作3小时内根据计算机断层扫描(CT)来施用以消除出血。迄今为止，大多数针对急性中风治疗(即神经保护)的治疗剂主要涉及以谷氨酸受体及其已知参与急性细胞死亡中的下游信号通路作为粑点。但是，迄今为止，在临床试验中这些策略被证明是不成功的，经常与剂量局限性副反应有关(Hill&Hachinski,TheLancet,352:(supplIII)10-14(1998))。因此，需要针对血流中断后改善细胞死亡的新方法。神经保护是响应损伤或疾病过程而预防或緩解神经元细胞损失的治疗能力。可以通过预防神经胶质细胞(包括少突胶质细胞)损失而直接或间接以神经元为靼点，/人而达到这一目的。在中风发作后，在许多患者中观察到某种程度的自发性功能恢复，提示大脑在损伤后具有修复和/或重构的能力(尽管有限)。因此，能潜在增强这种恢复的药物使人们可在脑缺血发作很久后(潜伏数天)来进行干预。能够提供急性神经保护并加强功能恢复的药物比当前可能的神经保护策略具有显著优势。功能恢复潜在的机制当前是未知的。损伤或未损伤轴突的萌生被认为是一种可能的机制。然而，尽管体内研究表明用神经营养因子治疗脊髓损伤或中风，结果能增强功能恢复和某种程度的轴突萌生,但这些没有证明某种程度的轴突生长与功能恢复程度之前存在直接联系(Jakeman,等，1998,Exp.Neurol.154:170-184,Kawamata等，1997，ProcNatlAcad.Sci.USA.,94:8179-8184,Ribotta等，2000，JNeurosci.20:5144-5152)。而且，轴突萌生需要活的神经元。因此，在例如中风等与大量细胞死亡有关的疾病中，中风后给予药物而提供的功能恢复增强可能通过不同于轴突萌生的机制，例如内源干细胞分化、冗余途径的活化、受体分布的变化或神经元或神经胶质兴奋性的变化来进行(Fawcett&Asher,1999,BmmRes.Bulletin,49:377-391,Homer&Gage,2000,Nature407963-970)。中枢神经系统(CNS)修复以下损伤的有限能力部分是因为CNS环境内存在着对轴突萌生(神经突增生)具有抑制效果的分子，例如髓鞘蛋白NOGO(SatoS等(1989)Biochem.Biophys.Res.Comm,163,1473-1480;McKermcherL等(1994),Neuron13，805-811;MukhopadhyayG等(1994),Neuron13,757-767;TorigoeK和LundborgG(1997)Exp.Neurology150,254-262;Schafer等(1996)Neuron16,1107-1113;W09522344;WO9701352;PrinjhaR等(2000)Nature403,383—384;ChenMS等(2000)Nature403,434-439;GrandPreT等(2000)Nature403,439-444;US005250414A;WO200005364A1;WO0031235)。已经鉴定出人NOGO的三种形式NOGO-A,具有1192个氨基酸残基(GenBank检索号AJ251383);NOGO-B，在推定胞外区域中缺失残基186-1004的剪接变异体(GenBank检索号AJ251384);NOGO-C,—种4支短的剪接变异体，它也缺失残基186-1004并且也具有更小的可变氨基端区域(GenBank检索号AJ251385)(Prinjha等(2000)，同上)。抑制CNS抑制蛋白，例如NOGO可提供治疗方法，以改善神经元损伤并促进神经元修复和生长，因而潜在地有助于从神经元损伤，例如在中风中持续的的神经元损伤中恢复过来。此类NOGO抑制剂的实例可包括小分子、肽和抗体。抗体通常包括通过二硫键连接在一起的两条重链以及两条轻链。每条轻链通过二硫键连接各自的重链。每条重链在一端具有可变区，接着是若干恒定区。每条轻链在一端具有可变区，而在另一端具有恒定区。轻链可变区与重链可变区相对排列。轻链恒定区与重链第一恒定区相对排列。轻链恒定区和重链恒定区不直接参与抗体与抗原的结合。每对轻链和重链的可变区构成抗原结合位点。轻链可变区和重链可变区具有相同的通用结构，并且每个区域都包含4个构架区，其序列相对保守，通过3个互补决定区(CDR)连接，互补决定区通常称为超变区。4个构架区大部分是P-折叠构象，CDR构成环状连接，在某些情况下构成部分P-折叠结构。CDR紧靠构架区，与来自其它区域的CDR形成抗原结合位点。抗体的CDR和构架区可通过以下参考文献来确定Kabat等C，SequencesofProteinsofimmunologicalinterest"USDept.ofHealthandHumanServices,USGovernmentPrintingOffice,1987)。据报道针对NI-220/250(—种髓鞘蛋白，是神经突生长的有效抑制剂(示于以下的NOGO-A片段))产生的鼠单克隆抗体IN-1能促进轴突再生(Carom,P和Schwab,ME(1988)Neuron185-96;Schnell，L和Schwab，ME(19卯)Nature343269—272;Bregman，BS等(1995)Nature378498-501和Thallmair,M等(1998)NatureNeuroscience1124-131)。也据报道NOGO-A是IN-1的輩巴点(Chen等(2000)Nature403434-439)。将IN-lFab片段或人源化IN-1施用于经历脊髓横切的大鼠能增强恢复(Fiedler,M等(2002)ProtemEng15931—941;Brosamle,C等(2000)J.Neuroscience208061—8068)。在WO04/052932和WO2005028508中描述了与NOGO结合的单克隆抗体。WO04/052932/>开了与人NOGO某些形式以高亲合力结合的鼠抗体11C7。分离和开发进一步能与人NOGO结合并抑制其活性的治疗用单克隆抗体，一直是非常希望达到的目标。神经变性过程是包括但不限于以下许多神经科疾病/障碍的基础，所述疾病/障碍例如中风(缺血性或出血性)、创伤性脑损伤和脊髓损伤等急性病；以及阿尔茨海默病、额颞痴呆(fronto-temporaldementias)((tau蛋白病(tauopathies))、周围^申经病、帕金森病、克罗伊茨费尔特-雅各布病(CJD)、精神分裂症、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、多发性硬化、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化和包涵体肌炎等慢性病。因此，抗NOGO单克隆抗体可用于治疗这些疾病/障碍。本发明提供用于治疗上述疾病/障碍的所述抗体，详细描述如下。WO2005/061544公开了高亲合力的单克隆抗体，包括鼠单克隆抗体2A10,其人源化变体HlLll。发明概述本发明提供若干与人NOGO结合的单克隆抗体。本申请提及了在表12中总结的很多SEQID,以及在该表后直到本文结尾的真实结构。鼠抗体2A10与人NOGO以高亲合力结合，并且与人细胞抹表达的NOGO形式以高亲合力结合。在过去2A10已^皮成功地人源化(包括重链可变区H1(SEQIDN0.77)和轻链可变区L11(SEQIDNO,78)的HlLll)。本发明提供了另外的人源化单克隆抗体，其保持了高比例的供体抗体与人NOGO的亲合力，或具有与之相当的亲合力。特别地，本发明的抗体无论是以在细菌细胞(例如，大肠杆菌)中表达的重组形式还是以由人成神经瘤细胞抹(例如，人成神经瘤细胞抹IMR32)表达的形式均可与人NOGO高度结合。为了提供人源化的2A10变体，本发明人鉴定了2A10可变区的框架序列中的许多关键的氨基酸残基，该序列被认为对保留与人NOGO的最佳结合亲合力重要。在SEQIDNO.7中提供了2A10重链可变区(VH);在SEQIDN0.8中提供了2A10轻链可变区(VL)。在SEQIDNO9和10中分别提供了包括鼠可变区和人恒定区的嵌合体重链和轻链(两个嵌合体链的组合叫做HcLc)。有经验的读者将会理解SEQIDNO9和10代表在任何去除信号序列的过程(例如，宿主细胞介导的过程)之前的重链或轻链。通常，对于SEQIDNO.9,抗体链的加工形式将从第20位开始(在去除信号序列后)；对于SEQIDNO.10,将从第21位开始。在本发明的上下文中，所提供的所有全长重链和轻链序列包括信号序列(所有其他非SEQIDNO9和10的全长序列与SEQIDN0.75相符)。对于有经验的人员而言，显然由用编码任何这些全长重链和轻链的基因转染的细胞林所产生的抗体应该不包含这样的信号序列。表1,2A10重链CDR是:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2，2A10轻链CDR是:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>CDR根据Kabat(Kabat等，(1991),"Sequencesofproteinsofimmunologicalinterest";第5版；USDepartmentofHealthandHumanServices;NIHpublicationNo91-3242)所述进行筌定。CDR优选根据Kabat的定义，但是也遵循Chothia和Lesk所定义的蛋白质结构和折叠原理[(Chothia等,(1989)"Conformationsofimmunoglobulinhypervariableregions";Nature342,第877-883页)，可以理解，额外残基也可考虑作为抗原结合区的组成部分，并且因此也包括在本发明之内。以前在WO2005/061544中对VH和VL区域HI和Lll进4亍了描述，它们是将表1和表2的CDR移植入人可变区的结果，与2A10供体抗体高度同源，各移植构建体进一步包括在kabat第93位和第94位(对于HIVH)或第4、45和46位(对于LllVL)的回复突变。2A10抗体能够与人NOGO结合，也能够与狨猴和大鼠NOGO结合，据信本发明新的人源化抗体保留了这种性质。例如，包括H20和L16可变区(参见以下详述)的单克隆抗体与狨猴NOGO以及大鼠、猕猴和松鼠猴NOGO结合。在SEQIDNO.113中给出了狨猴NOGO-A片段。本发明提供了包括表1和表2中CDR的抗体。包括这些CDR类似物的抗体也包括在本发明中。重链可变区(VH)在本发明的一个方面，抗体包括具有SEQIDNO.77(H1可变区域)的氨基酸序列的重链可变区，该序列进一步包括在第12、20、38、40、48、67、68、70、72、74、76、79和91位中一个或多个的若干取代；其中各取代的氨基酸残基是用在SEQIDN07(供体抗体2A10的重链可变区)等同位置的氨基酸残基代替，取代的数目为1至13。在目为1、或2、或3、或4、或5、或6、或7、或8、或9、或10、或11、或12、或13。在其他实施方案中，取代的数目为2至13、或3至13、或4至13、或5至13、或6至13、或7至13、或8至13、或9至13、或10至13或11至13、或12至13。在其他实施方案中，取代的数目为1或2,或在1至3个取代、或l至4、或1至5、或1至6、或1至7、或1至8、或1至9、或l至10、或l至ll、或1至12个取代的范围内。在上下文中，所述取代在概念上与"回复突变"等同，其中H1序列中特定位置的人框架氨基酸残基对于2A10供体抗体序列等同位置的氨基酸残基为回复突变。除非特别另外说明，当提及特定序列中发现的氨基酸残基的数位(numericalposition),例如"第12位，，时，是指有经验的读者会将该序列第一个氨基酸定为第"r位，并从第i位开始计数和鉴定期望位置的氨基酸，在这个实例中，是该序列中的第12个氨基酸残基。有经验的读者将会注意到这种编号体系与经常用于抗体序列中氨基酸位置的Kabat编号体系不同。下表(表3)说明了本发明的取代/回复突变并给出了它们的数位和该数位的Kabat号。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>根据表3，在一个实施方案中，本发明的单克隆抗体在第79位包括取代/回复突变，形成"A类"抗体。对于最佳的结合亲合力，发现在第48和68位的氨基酸残基对应该分别为I和A(当它们在2A10中存在时)或分别为M和V(当它们在HI中存在时)。因此，再根据表3，在另一个实施方案中，"B类，，单克隆抗体包括在第79、48和68位的取^。在另一个实施方案中("C类")，"A类"或"B类"单克隆抗体进一步包括在第40和/或67位的取代。在另一个实施方案中，本发明的"C类"单克隆抗体进一步包括在第38、72或70位的取代，形成"D类，，抗体。在另一个实施方案中，"D类"单克隆抗体进一步包括在第12、20、74、76或91位的取代("E类")。下表包括了可形成本发明部分抗体的20种不同重链可变区(VH)的详情。每个所公开的VH基于进一步包括表中(表4)所提及取代的HIVH(SEQIDNO.77),其中相关位置的HI残基用该位置的2A10残基取代(在表中，"-"表示在该位置无取代，因此该残基在H1序列中保留):表4<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>因此，提供了包括具有SEQIDNO:11-18或85-91中任一给定序列的重链可变区；或其包括CDR类似物的变体的单克隆抗体。在另一个实施方案中，提供了包括具有SEQIDNO:26-33或92-98中任一个给定序列的重链可变区；或其包括CDR类似物的变体的单克隆抗体。在一个特定实施方案中，抗体包括在SEQIDNO11、12、16、18、85、86、87或91中提供的VH区，或其包括CDR类似物的变体；或抗体包括在SEQIDNO26、27、31、33、92、93、94或98中提供的重链,或其包括CDR类似物的变体。轻链可变区在本发明的一个方面，抗体包括具有SEQIDNO.20(L13可变区域)氨基酸序列的轻链可变区，该序列任选进一步包括在第4、7、11、19、42、64和70位中的一个或多个的若干取代；其中各取代的氨基酸残基是用SEQIDNO8(供体抗体2A10的轻链可变区)中等同位置的氨基酸残基代替，取代的数目为0至7。在其他实施方案中，取代的数目为1、或2、或3、或4、或5、或6、或7。在其他实施方案中，取代的数目为2至7、或3至7、或4至7、或5至7、或6至7。在其他实施方案中，取代的数目为1或2,或在1至3个取代、或1至4、或1至5、或1至6的范围内。下表(表5)说明了本发明的取代/回复突变并给出了它们的数位和该数位的Kabat号表5人L13框架残基(SEQIDNO20)MS<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>根据表5，在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体"X类"包括具有在第11和19位的取代/回复突变的VL区。在另一个实施方案中，"X类"的"Y类"单克隆抗体进一步包括在第42位的取代。在进一步的实施方案中，"X类"单克隆抗体或"Y类"单克隆抗体包括在第7、64或70位的回复突变，形成"Z类"。再根据表5，在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体包括在第4位具有取代的VL区域(与Lll一致(SEQIDN0.78))。下表(表6)包括了可形成本发明部分抗体的7种不同轻链可变区(VL)或其包括CDR类似物的变体的详情。每个所公开的VL为或基于任选进一步包括表中所提及取代的L13VL(SEQIDNO.20)，其中相关位置的L13残基用该位置的2A10残基取代(在表中，"-"表示在该位置无取代，因此该残基在L13序列中保留)表6新VL(SEQ残基数位471119426470IDNO.X)Kabath号4711193759652A10IDNVSSL13MSAQPGLll(78)IL13(20)L14(21)-一—-一-L15(22)一--—S-L16(23)-一NV--Lll(24)-D一--sSL18(25)一DNVsS因此，提供了包括具有SEQIDNO:20-25中任一给定序列的轻链可变区；或其包括CDR类似物的变体的单克隆抗体。在另一个实施方案中，提供了包括具有SEQIDNO:35-40中任一给定序列的轻链可变区；或其包括CDR类似物的变体的单克隆抗体。选择性地，提供一种包括具有SEQIDNO.19中给定序列的轻链可15变区，或具有SEQIDN0.34中给定序列的轻链可变区的单克隆抗体。在一个特定的实施方案中，抗体包括在SEQIDNO20、23和25中提供的VL区或其包括CDR类似物的变体，或包括在SEQIDNO35、38和40中提供的轻链或其包括CDR类似物的变体。重链可变区和轻链可变区地具体组合本发明提供了包括上文公开的重链可变区和轻链可变区所有可能组合的抗体等。所涉及的特定序列或其包括天然存在的CDR类似物的变体也预期在那些组合或以下所列组合中。本发明的抗体包括重链可变区和轻链可变区。在一个实施方案中，抗体包括(a)具有SEQIDNO.77(H1可变区)氨基酸序列的重链可变区，该序列进一步包括在第12、20、38、40、48、67、68、70、72、74、76、79和91位中一个或多个的若干取代；其中各取代的氨基酸残基是用在SEQIDNO7(供体抗体2A10的重链可变区)等同位置的氨基酸残基代替，取代的数目位1至13。在其他实施方案中，取代的数目为1、或2、或3、或4、或5、或6、或7、或8、或9、或10、或11、或12、或13;(b)选自SEQIDNO20-25或78的轻链可变区。特定实施方案的抗体包括以下重链和轻链可变区的组合HIL13(SEQID77+SEQID20)、H5L13(SEQID11+SEQID20)、H6L13(SEQID12+SEQID20)、H14L13(SEQID14+SEQID20)、H15L13(SEQID15+SEQID20)、H16L13(SEQID16+S]巳QID20)、H17L13(SEQID17+SEQID20)、H18L13(SEQID18+SEQID20)、H19L13(SEQID85+SEQID20)、H20L13(SEQID86+SEQID20)、H21L13(SEQID87+SEQID20)、H22L13(SEQID88+SEQID20)、H23L13(SEQID89+SEQID20)、H24L13(SEQID90+SEQID20)、H25L13(SEQID91+SEQID20)、H700L13(SEGID13+5;EQID20)、HIL16(SEQID77+SEQID23)、H5L16(SEQID11+SEQID23)、H6L16(SEQID12+SEQID23)、H14L16(SEQID14+S]巳QID23)、H15L16(SEQID15+SEQID23)、H16L16(SEQID16+S]巳QID23)、H17L16(SEQID17+SEQID23)、H18L16(SEQID18+S]EQID23)、H19L16(SEQID85+SEQID23)、H20L16(SEQID86+SEQID23)、H21U6(SEQIDaibas)Aii6iH、0乙aiOss+sicn^)3S)aiisih、OsaiDas+z:iaiDas)"i"h、0乙aiaiOas)"i9iH、(t/乙aiaid3s)aiisih、0乙aiDas+t/iaiOas)ait^ih、OzaiaiDas)zji9H、0乙cnDas+iiaiDas)厶iish、0乙aiaim、(乙乙aid3s+eiaibss)"iooah、(z乙aiDss+i6aiD3S)siiwh、(乙乙aiD3S+06aiDas)"ii乙h、(乙zaiaibas)sns乙H、(乙乙aiOas+88aiOas)m乙乙H、(aaiai63s)i乙h、(2乙aiaid3s)siio乙h、(乙zaiaiDas)ni6iH、(乙2aib3S+siaiDss)siisih、(ssaiaiDas)ni厶iH、(z乙aiDas+9iaiOas)sii9iH、(haiai^)3s)"i"h、(s乙aiOas+maiOas)"iwh、(乙乙aiaibas)sn9H、(乙乙aib3S+uaiDas)"ish、(aaiaiDas)siiih、(isaid3s+siaibas)wioo厶h、(i乙aiaiDas)wisoh、(i乙aiDsts+o6aiDas)廿iii7乙h、(i乙aiaiDas)t7ii^H、(isaiai03S)wiaH、(isaiGID3S)tnil乙H、(ISaiD3S+98CIID3S)frllOSH、(I乙dlaiDas)t7ii6iH、(i乙aiD3S+siaiD3S)tiisiH、(i乙aiaiDas)t7ii厶iH、(i乙aiaiDss)tm9iH、(i乙aibas+siaiDas)tiisiH、(i乙aibas+i7igib3S)t/iit/iH、(i乙aibss+乙iaiizii9H、(i乙aiaiDas)t7iisH、(isaiD3s+厶aaibas)W11H:令瑕^11￥丘努鞋4努晷丄V3辨^,^^審《W奪浙货t)3S+l6加S+68ai03S+￡Iai81100厶HaiD3S)、(WCO。3S+06ai加S)8I，HGI加S+68ai加s)似aiaiD3S)8HHGIai811l乙h、("aiD3S+98aiD3S)siio乙haiaiD3S)81161H似aiD3S+81aiD3S)8raiHcn加s+"aiD3S)、(s乙giai53S)8H91H、(WaiaiD3S)、(S2ai加s+taaiDas)8ntiH、(Waiai8119H、(waibas+iiaiDas)snsH、(haiai8111H、(e乙aibas+eiaiDas)9raom、(￡乙cn53S+16ai加s)、(￡乙aiD3S+06ai^)3S)9Hl7乙H、(￡乙cn加S+68D3S)9ll￡^H、(￡乙aiCII。3S)911乙乙Hai17+SEQ85+SEQID24)、H20L17(SEQID86+SEQID24)、H21L17(SEQID87+SEQID24)、H22L17(SEQID88+SEQID24)、H23L17(SEQID89+SEQID24)、H24L17(SEQID90+SEQID24)、H25L17(SEQID91+SEQID24)、H700L17(SEQID13+SEQID24)。进一步实施方案的抗体包括以下重链和轻链可变区的组合HIL6(SEQID77+SEQID19)、H5L6(SEQID11+SEQID19)、H6L6(SEQIDID19)、H14L6(SEQID14+SEQID19)、19)、H16L6(SEQID16+SEQID19)、H18L6(SEQID18+SEQID19)、H20L6(SEQID86+SEQID19)、H22L6(SEQID88+SEQID19)、H24L6(SEQID90+SEQID19)、H700L6(SEQID13+SEQID19)、H6L11(SEQID12+SEQID78)、H15L11(SEQID15+SEQID78)、H17L11(SEQID17+SEQID78)、H19L11(SEQID85+SEQID78)、H21L11(SEQID87+SEQID78)、88+SEQID78)、H23L11(SEQID89+SEQID78)、87+SEQ91+SEQ11+SEQIDIDIDIDIDIDIDIDIDIDIDID19)、19)、19)、19)、19)、78)、78)、78)、78)、78)、78)、、H15L6(SEQID、H17L6(SEQID、H19L6卿IDH21L6(SEQID、H23L6(SEQID、H25L6(SEQID、H5L11(SEQIDH14L11(SEQIDH16L11(SEQIDH18L11(SEQIDH20L11(SEQIDH22L11(SEQIDH24L11(SEQIDH700L11(SEQID90+SEQID78)、H25L11(SEQID91+SEQID7813+SEQID78)。在一个实施方案中，抗体包括以下重链可变区H6L13、H16L16、H20L13或H20L16或其包括天然存在的CDR类似物的变体。在一个实施方案中，抗体包括H20L16或其包括天然存在的CDR类似物的变体。完全抗体进一步地，本发明还提供了人源化抗体，其与NOGO,优选人NOGO,更优选人NOGO-A结合并中和其活性。更具体地，提供包括如本文所述重《连可变区和如本文所述轻链可变区的人源4t<抗体。本发明的人源化抗体与人NOGO结合，其亲合力与鼠供体抗体2A10或其嵌合体形式(HcLc)相当。在一个实施方案中，本发明抗体与NOGO结合的亲合力常数倍范围内，在另一个实施方案中，亲合力常数在2A10的3倍或2倍范围内，在另一个方案中，亲合力常数与2A10(或2A10HcLc)没有差异。在另一个实施方案中，亲合力常数在2A10的3倍或2倍范围内，解离速率(off-rate)在2A10的10倍、或3倍、或2倍的范围内，在另一个实施方案中，解离速率与2A10(或2A10HcLc)没有差异。虽然测量抗体亲合力常数和解离速率的方法对有经验的读者应该是清楚的，但是在本文实施例5给出的动力学分析BiaCore方法对于这点进行了举例说明。例如，通过BiaCore动力学分析测量的2A10亲合力常数和解离速率通常分别在lnM和1.84xl0，kd1/s)的范围；在同样的测定中，本发明一个实施方案的抗体将会具有小于8-10nM和1.84xl(T2的亲合力常数。使用类似的方式，分析嵌合2A10抗体HcLc，其所具有的亲合力常数分别为大约1至2nM和2x10-3至4xl(T3(kdl/s)。在典型的实施方案中，本发明的抗体属于IgG类，更通常属于人IgGl或lgG4，具有K型人轻链。本发明进一步的方面提供了包括本发明抗-NOGO抗体或其功能片段与药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。在进一步的方面，本发明提供了治疗或预防人中风(特别是缺血性发作)和其他神经疾病，特别是阿耳茨海默氏病或多发性硬化症的方法，包括给所述需要的人施用有效量的本发明抗-NOGO抗体或其功能片段。在另一个方面，本发明提供了本发明抗-NOGO抗体或其功能片段在制备用于治疗或预防人中风(特别是缺血性发作)和其他神经疾病，特别是阿耳茨海默氏病或多发性硬化症的药物中的用途。在进一步的方面，本发明提供了抑制患有或有发生中风(特别是缺血性发作)或其他神经疾病，特别是阿耳茨海默氏病或多发性硬化症危险的患者神经变性和/或促进功能恢复的方法，包括给所述需要的人施用有效量的本发明抗-NOGO抗体或其功能片段。仍然在进一步的方面，本发明提供了本发明抗-NOGO抗体或其功能片段在制备抑制患有或有发生中风(特别是缺血性发作)和其他神经疾病，特别是阿耳茨海默氏病或多发性硬化症危险的患者神经变性和/或促进功能恢复的药物中的用途。在本发明的其他方面，提供了本发明抗-NOGO抗体在治疗方法或制备治疗创伤性神经损伤，例如脊髓损伤或神经系统其他创伤性损伤的药物的方法中的用途。在详述和其优选实施方案中对本发明的其他方面和优点做了进一步描述。在一个实施方案中，全长抗体是那些包括轻链SEQIDNO34-40和重链SEQIDN092-98的抗体，特别是包括轻链SEQIDNO35、38或40和重链SEQIDNO92、93、94或98的抗体。对于本领域技术人员而言，显然表7和表12中全长抗体链的所有给定序列(和附加序列(appendedsequences))表示任何去除信号序列过程(例如宿主细l包介导的过程)之前的重链或轻链。典型地，抗体链的加工形式在第20位(去除信号序列后(残基1-19)，其与SEQIDNO.75相符)开始。本发明提供了具有所列多肽序列(在除去信号序列起始的19个氨基酸后)的抗体，还提供了由表达编码重链和轻链的多核苷酸的宿主细胞产生和纯化的抗体。表7，具体的全长抗体包括:<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>在一个实施方案中，抗体是H6L13FL、H16L16FL、H20L13FL或H20L16FL。在一个实施方案中，抗体是H20L16FL,或其包括CDR类4以物的变体。选择性地，上文提及的取代是在供体2A10鼠序列的等同位置发现的精确(exact)氨基酸残基的回复突变，所述取代可以是氨基酸的任何取代，所述任何取代是在供体2A10鼠序列的等同位置发现的精确残基的保守取代。术语"保守取代"对于有经验的读者是清楚的，包括例如用具有相似物理、化学或结构性质，例如pH、电荷、疏水性、芳香度等的另一种氨基酸残基取代某种氨基酸。在本发明的一个实施方案中，抗体不具有溶胞作用。因为恒定区不能与补体结合和/或介导ADCC(抗体依赖细胞毒性)。因此，全长抗体的恒定区或基于天然地不具有溶胞作用的恒定区，例如人lgG4，或包括在人IgGl恒定区内的第235和237位的失活取代(mactiva-tingsubstitution)(详见EP0307434)。附图描述图1A和B,单克隆抗体上清液与重组人NOGO结合的ELISA数据。图2A和B,纯化单克隆抗体与重组人NOGO结合的ELISA数据。图3A和B,单克隆抗体上清液与重组人NOGO结合的ELISA数据。图4A和B,单克隆抗体上清液与重组人NOGO结合的ELISA数据。图5A和B,单克隆抗体上清液与重组人NOGO结合的ELISA数据。图6,A至F,纯化抗体与人成神经细胞瘤细胞表达的人NOGO结合的FACS数据。图7,竟争ELISA结果。图8,单克隆抗体与重组人NOGO结合的ELISA数据。图9,单克隆抗体与重组人NOGO结合的ELISA数据。图10,单克隆抗体与重组人NOGO结合的ELISA数据。图11,单克隆抗体与重组人NOGO结合的ELISA数据。图12A和B，单克隆抗体与重组人NOGO结合的ELISA数据。图13,纯化抗体与人成神经细胞瘤细胞表达的人NOGO结合的FACS数据。图14,A至C,纯化抗体与人成神经细胞瘤细胞表达的人NOGO结合的FACS数据。发明详述本发明的抗体通常具有天然抗体或其功能片段的结构。因此，抗体可包括全长抗体、(Fab)2片断、Fab片断、轻链二聚体或重链二聚体。抗体可以是IgGl、lgG2、lgG3或lgG4;IgM;IgA、IgE或IgD或其修22饰的变体。据此可对抗体重链的恒定区进行选择。轻链恒定区可以是K或X恒定区。此外，抗体可以包括全部类别的修饰物，例如IgG二聚体、不再结合Fc受体或介导CIq结合的Fc突变体。抗体还可以是WO86/01533所述类型的嵌合抗体，其包括抗原结合区域和非免疫球蛋白区域。抗原结合区域是抗体轻链可变区或重链可变区。通常抗原结合区域包括轻链和重链可变区。非免疫球蛋白区域在其C末端与抗原结合区域融合。非免疫球蛋白区域通常是非免疫球蛋白并且可以是具有已知结合特异性的酶、毒素或蛋白质。这种类型嵌合抗体的两个区域可以通过可裂解的连接序列连接，具有上文所述CDR的免疫粘附素也包括在本发明中。根据功能需要对恒定区进行选择。通常IgGl通过与补体结合而表现出溶解能力和/或介导ADCC(抗体依赖性细胞毒性)。如果需要非细胞毒性阻断抗体，lgG4是优选的。但是lgG4抗体的产生不稳定，因此，更优选对通常更稳定的IgGl进行修饰。在EP0307434中对所建议的修饰进行了描述，优选的修饰包括在第235和237位进行修饰。因此，本发明提供了溶解或非溶解形式的本发明抗体。在一个实施方案中，本发明的抗体为全长(即包括两条重链和两条轻链)的非溶解IgGl抗体，具有前文所述VH或VL序列。在另一个实施方案中，我们提供了全长非溶解IgGl抗体，其具有SEQIDNO11、12、16、18或85、86、87或91的VH;和SEQIDNOs20、23或25的VL。在进一步的方面，本发明提供编码所公开的重链或轻链或可变区的多核苷酸。例如，本发明提供了编码具有SEQIDNO45-52、99-105所含序列的VH和具有SEQIDNO53-59所含序列的VL区域的多核苷酸。"NOGO"是指任何NOGO多肽，包括变体形式。NOGO包括^f旦不限于NOGO-A,具有1192个氨基酸残基(GenBank检索号AJ251383);NOGO-B，在推定胞外区域中缺失了残基186至1004的剪接变体(GenBank检索号AJ251384);NOGO-C,—种较短的剪接变体，也缺失了残基186至1004.并且还具有更小的可变氨基端区域(GenBank检索号AJ251385)(Prmjha等(2000)，出处同上)。除非指明具体形式，在本文中所有有关的"NOGO"都理解为包括NOGO的任何和全部变体形式，例如NOGO-A和所述剪接变异体。"中和"及其语法变型是指全部或部分抑制NOGO功能，包括与神经元的结合和对神经突生长的抑制。术语Fv、Fc、Fd、Fab或F(ab)2按照其标准含义来使用(参见例如Harlow等，AntibodiesALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,(1988))。"嵌合抗体"是指一类工程抗体，其含有来自供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)以及来自受体抗体的轻链恒定区和重链恒定区。"人源化抗体"是指一类工程抗体，具有来自非人供体免疫球蛋白的CDR,其余部分来自一种(或多种)人免疫球蛋白分子的免疫球蛋白来源部分。另外，构架支持残基可以改变以保留结合亲和力(参见例如Queen等，Proc.NatlAcadSciUSA,86:10029—10032(1989),Hodgson等，Bio/Technology,9:421(1991))。可以根据与供体抗体核苷酸序列和氨基酸序列的同源性，从诸如KABAT⑧数据库、LosAlamos数据库和瑞士蛋白质数据库等常规数据库中选择合适的人受体抗体。以与供体抗体构架区的同源性(在氨基酸基础上)为特征的人抗体适合提供重链恒定区和/或重链可变区构架区，用于插入供体CDR。可以按类似方式选择能够提供轻链恒定区或可变区构架区的合适的受体抗体。应当注意的是，受体抗体重链和轻链不一定要来自相同的受体抗体。现有技术介绍了产生这样的人源化抗体的若干方法，参见例如EP-A-0239400和EP-A-054951。术语"供体抗体"是指这样的抗体(单克隆抗体和/或重组抗体、)所述抗体将其可变区、CDR或其它功能片段或其类似物的氨基酸序列提供给第一免疫球蛋白配偶体，从而得到改变的免疫球蛋白编码区，结果表达具有供体抗体的抗原特异性和中和活性特征的改变抗体。术语"受体抗体"是指与供体抗体异源的抗体(单克隆抗体和/或重组抗体)，所述供体抗体将编码其重链构架区和/或轻链构架区和/或其重链恒定区和/或轻链恒定区的所有(或任何部分，但优选所有)氨基酸序列提供给第一免疫球蛋白配偶体。优选人抗体是受体抗体。"CDR"定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，其是免疫球蛋白重链和轻链的超变区。参见例如Kabat等，S叫uencesOfProtemsofImmunologicalInterest,第4版,U.S.DepartmentOfHealthandHumanServices,NationalInstitutesofHealth(1987)。免疫球蛋白可变部分中有3个重链CDR和3个轻链CDR(或CDR区)。因此，本文所用的""CDR"是指所有3个重链CDR或所有3个轻链CDR(或者所有重链CDR和所有轻链CDR,如果合适的话)。抗体的结构和蛋白质折叠意味着其它残基可考虑为抗原结合区的组成部分，技术人员可以理解这一点。参见例如Chothia等,(1989)Conformationsofimmunoglobulinhypervariableregions;Nature342,第877-883页。CDR提供抗体与抗原或表位结合的接触残基的大部分。本发明的目标CDR来自供体抗体可变重链和轻链序列，并且包括天然存在的CDR的类似物，所述类似物也共享或保留与其来源供体抗体相同的抗原结合特异性和/或中和能力。"功能片段"是部分重链可变序列或轻链可变序列(例如在免疫球蛋白可变区的氨基端或羧基端具有小缺失)，其保留与该片段的来源抗体相同的抗原结合特异性以及相同或相似的中和能力。"类似物"是由至少一个氨基酸修饰的氨基酸序列，其中所述修饰可以是化学修饰或者是取代或少数氨基酸(即不超过IO个氨基酸)重排，所述修饰允许氨基酸序列保留未修饰序列的生物学特性，例如抗原特异性和高亲和力。本发明也包括源自本发明抗NOGO的mAb的Fab片段或F(ab》片段的用途。Fab片段含有完整轻链和重链氨基端部分；F(ab，h片段是两个Fab片段通过二硫键结合而形成的片段。可以通过常规方法，得到Fab片段和F(ab》片段，所述方法例如用合适的蛋白酶，木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶裂解mAb,或者通过重组方法。Fab和F(ab，)2片段本身可用作治疗药或预防药，并且可作为包括可变区和CDR序列在内的序列供体，用于形成如本文所述的重组抗体或人源化抗体。在本发明进一步的方面，我们提供了具有前文所述一种或多种CDR的二价抗体(diabody)(双价或双特异性)、三价抗体(tnabody)、四价抗体(tetrabody)和其他多价scFV蛋白物质，其与NOGO结合并中和其功能。仍然在进一步的实施方案中，本发明的抗体可与额外试剂连接。例如，重组DNA才支术方法可用于产生本发明的工程抗体，其中Fc片段或全长抗体分子的CH2-CH3区域已经被酶或其它可检测分子(即多肽效应物或报道分子)替代。可通过将这些抗体编码序列与能够在宿主细胞中控制复制和表达和/或从宿主细胞中分泌的常规调节控制序列有效连接，产生常规表达载体或重组质粒来产生本发明的抗体。调节序列包括启动子序列例如CMV启动子，和信号序列，所述序列可来自其它已知抗体。相似地，可以产生第二表达载体，所述载体具有编码互补抗体轻链或重链的DNA序列。优选该笫二表达载体与第一表达载体相同，除了要考虑编码序列和选择标记之外，由此尽可能保证每条多肽链能功能性表达。选择性地，改变的抗体的重链和轻链编码序列可在一个载体上存在。通过常规技术，同时用第一载体和第二载体共转染所选宿主细胞(或者就用一个载体进行转染)，得到本发明的转染宿主细胞，所述细胞包含重组或合成轻链和重链。然后通过常规技术培养转染细胞，产生本发明的工程抗体。通过例如ELISA或RJA等合适的测定方法，从培养物中筛选出同时包含重组的重链和/或轻链的抗体。类似常规技术可用于构建其它改变的抗体和分子。和亚克隆步骤的合适载体。例如，可以使用克隆载体的常规puC系列。载体pUC19是市售的，由例如Amersham(Buckinghamshire，英国)或Pllarmacia(Uppsala，瑞典)供应。此外，容易复制的、具有丰富克隆位点和选择性基因(例如抗生素抗性)并且容易操作的任何载体，都可用于克隆。类似地，本领域技术人员可以从任何常规载体中选择用于表达抗体的载体。该载体也含有所选调节序列(例如CM1V或RSV启动子)，所述序列指导异源DNA序列在所选宿主细胞中复制和表达。这些载体含有编码抗体或改变的免疫球蛋白编码区的上述DNA序列。另外，载体可掺入到通过插入便于操作的所需限制位点而修饰的所选免疫球蛋白序列。表达载体又一特征是适于扩增表达异源DNA序列的基因，例如哺乳动物二氢叶酸还原酶基因(DHFR)。其它优选的载体序列包括聚A信号序列，例如来自牛生长激素(BGH)和p珠蛋白启动子序列(belaglopro)的聚A信号序列。本文所用的表达载体可以通过本领域技术人员众所周知的技术来合成。所述载体的组成，例如复制子、选择基因、增强子、启动子、信号序列等，是市售的或是天然来源的或是通过已知方法合成的，用于指导所选宿主中重组DNA产物的表达和/或分泌。按照该目的，也可选择其它合适的表达载体，本领域已知多种类型不同的载体，可用于哺乳动物、细菌、昆虫、酵母和真菌表达。本发明也包括用重组质粒转染的细胞抹，所述重组质粒含有抗体或其改变的免疫球蛋白分子的编码序列。用于克隆的宿主细胞以及这些克隆载体的其它操作也是常规的。然而，最好的是，来自大肠杆菌(E.coli)不同菌抹的细胞在本发明改变的抗体的构建中用于克隆载体的复制和其它步骤。用于表达本发明抗体的合适宿主细胞或细胞系优选为哺乳动物细胞，例如NSO、Sp2/0、CHO(例如DG44)、C0S、成纤维细胞(例如3T3)和骨髓瘤细胞，更优选CHO或骨髓瘤细胞。可以使用人体细胞，因此该分子可以用人糖基化模式来修饰。或者，可以使用其它真核细胞林。本领域已知用于转化、培养、扩增、筛选和产物制备及纯化的合适哺乳动物宿主细胞和方法的选4奪。参见例如Sambrook等，出处同上。已经证明，细菌细l包可用作适于表达本发明重组Fab的宿主细月包(参见例如Pltiackthun,A.,Immun01.Rev.,130:151—188(1992》。然而，因为细菌细胞表达的蛋白质倾向于呈现不折叠或不适当折叠的形式或者非糖基化形式，所以为保留抗原结合力，必须筛选细菌细胞产生的任何重组Fab。如果细菌细胞表达的分子以适当折叠形式产生，则该细菌细胞是所需宿主。例如，用于表达的大肠杆菌不同菌抹在生物工程领域作为宿主细胞，这是众所周知的。在该方法中，也可使用枯草芽孢杆菌、链霉菌属、其它芽孢杆菌等不同菌抹。如有必要，本领域技术人员已知的酵母细胞、以及昆虫细胞，例果蝇属(Drosophila)和鳞翅目属(Lepidoptera)、和病毒表达系统也可以作为宿主纟田月包。参见例^口Miller等，GeneticEngmeermg,8:277—298,PlenumPress(1986)及其所引用的参考文献。构建载体的通用方法、产生本发明宿主细胞所需的转染方法以及从所述宿主细胞产生本发明抗体所需的培养方法都是常规技术。通常，本发明的培养方法是无血清培养方法，通常通过悬浮培养无血清细胞。同样，一旦产生本发明抗体后，可以按照本领域的标准方法从细月包培养物中纯化本发明的抗体，所述方法包括硫酸铵沉淀法、亲和柱法、柱色谱法、凝胶电泳法等。这些技术都是本领域内的技术，并不限制本发明。例如，改变的抗体的制备方法描述于W099/58679和WO96/16990。表达抗体的再一种方法可采用在转基因动物中进行表达，例如描述于美国专利号4,873,316。该技术涉及利用动物酪蛋白启动子的表达系统，所述系统当经过转基因技术掺入到哺乳动物时，允许雌性动物在其乳汁中产生所需重组蛋白。在本发明进一步的方面，提供产生本发明抗体的方法，所述方法包括步骤在培养用载体转化或转染的宿主细胞的步骤，所述载体编码本发明抗体的轻链和/或重链，以及回收由此产生的抗体。按照本发明，提供产生抗NOGO抗体的方法，所述抗体与人NOGO-A特异性结合并中和其活性，所述方法包括下述步骤(a)提供编码抗体重链的第一载体；(b)提供编码抗体轻链的第二载体；(c)用所述第一和第二载体转化哺乳动物宿主细胞(例如CHO);(d)在允许所述宿主细胞将抗体分泌到所述培养基中的条件下，培养步骤(c)的宿主细胞；(e)回收步骤(d)分泌的抗体。一旦通过所需方法表达，就可采用合适的测定方法来检测抗体的体外活性。目前常规ELISA测定方法可用于评价抗体与NOGO的定性和定量结合。此外，其它体外测定方法也可用于证实中和功效，随后再进行人体临床研究以评价抗体在体内的持久性，虽然通常采用清除率机制。本发明的治疗剂可以作为预防施用，或者在中风事件之后/临床症状发作之后施用，或者视需要施用。治疗剂量和持续时间与本发明分子在人体循环中的相对持续时间有关，可以由本领域技术人员根据所治疗病症和患者的一般健康状况来调整。预计可能需要在延长的时间周期内(例如4-6个月)重复给药(例如每周一次或每两周一次)，以达到最大的治疗功效。本发明治疗剂的施用方式可以是将其施用于宿主的任何合适途径。本发明的拮抗剂和抗体以及药物组合物尤其可用于胃肠外使用，即皮下、鞘内、腹膜内、肌内、静脉内或鼻内，其中特别优选静脉内使用。可以将本发明的治疗剂制备成药物组合物，所述组合物含有在药学上可接受的载体中的有效量的作为活性成分的本发明拮抗剂或抗体。在本发明的预防剂中，优选含有工程抗体的、易于注射的形式的水性混悬剂或溶液剂优选在生理pH下緩沖。供胃肠外施用的组合物通常包括溶于药学上可接受的载体，优选水性载体的本发明拮抗剂或抗体的溶液剂或其混合物。可以使用各种水性载体，例如0.9%盐水、0.3%甘氨酸等。这些溶液是无菌的，通常不含颗粒物质。这些溶液剂可以通过常规的众所周知的灭菌技术(例如过滤)除菌。组合物可含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅料，例如pH调节剂和緩冲剂等。本发明拮抗剂或抗体在所述药物制剂中的浓度可以在宽范围内变动，即从小于约0.5%、通常在或至少约1%至最高15%或20%重量，并且可以按照具体选择的施用方式，主要根据液体体积、粘度等进行选择。因此，供肌内注射用的本发明药物组合物可以制备成含有1ml无菌li冲水和介于约lng至约100mg、例如约50ng至约30mg、或更优选约5mg至约25mg本发明拮抗剂或抗体。类似地，供静脉内输注用的本发明药物组合物可以制备成含有约250ml无菌林才各液和约1mg至约30mg、优选5mg至约25mg本发明工程抗体。制备供胃肠外施用组合物的实际方法是众所周知的，或者对本领域技术人员来说是显而易见的，i,纟田4葛述于1"列i口Remington'sPharmaceuticalScience,第15片反，MackPublishingCompany,Eastern,Pennsylvania。7于于制备供l争乐^内施用的本发明抗体制剂来说，参见LasmarU和ParkinsD"TheformulationofBiopharmaceuticalproducts",Pharma.Sci.Tech.today,第129-137页，第3巻(2000年4月3日)，Wang,W，，Instability,stabilizationandformulationofliquidprotei叩harmaceutical，，,Int.J.Pharm185(1999)129.188,StabilityofProteinPllarmaceuticals第A部分和第B部分，AhemT.J.,ManningM.C.主编，NewYork,NY:PlenumPress(1992),Akers,M.J."Excipient隱DruginteractionsinParenteralFormulations",JPharmSci91(2002)2283-2300,Imamura，K等"Effects29oftypesofsugaronstabilizationofproteininthedriedstate",JPharmSci92(2003)266-274,Izutsu,Kkojima,S."Excipientcrystalinityanditsprotein-structure-stabilizingeffectduringfreeze-drying",JPharm.Pha腿col,54(2002)1033-1039，Joh湖n，R,"Ma應tolsucrosemixtures-versatileformulationsforproteinlyophilization",J.Pharm.Sci,91(2002)914-922。Ha,EWangW，WangY.j."Peroxideformationinpolysorbate80andprotemstability"，J.PharmSci,91,2252-2264,(2002),所述文献的全部内容通过引用结合到本文中，读者可以具体查阅。当在药物制剂中时，优选本发明的治疗剂呈单位剂型。本领域技术人员可以容易地确定合适的治疗有效剂量。为了有效治疗人的中风和其它神经疾病，可以通过胃肠外、优选i.v.或i.m(月几内)，主会予一剂最高700mg/70kg体重的本发明拮抗剂或抗体。必要时，可以由医生选择合适的时间间隔重复给予所述剂量。正如实施例中公开的，在静脉内施用本发明抗体时，本发明人已经能够证明在大鼠模型中其对于功能恢复的阳性效果。可以将本文所述的抗体冻干后贮藏，临用前用合适的载体重建。该技术对于常规免疫球蛋白来说，已经显示出是有效的，可使用本领域已知冻干技术和重建技术。本发明的抗体也可与以下药物联合^吏用(即同时、顺序或独立使用)神经营养因子例如神经生长因子(NGF)、例如脑源性神经营养因子(BDNF,抗炎药例如皮质类固醇和/或tPA。可以在以下实施例所述MCAO才莫型中评价本发明NOGO抗体与例如tPA的联合用药。另一方面，本发明提供用于治疗或预防中风和其它神经疾病的药药学上可接受的载体。仍在进一步的方面，本发明提供用于抑制人患者的神经变性和/或促进功能恢复的药物组合物，所述药物组合物包含本发明的抗NOGO抗体或其功能片段以及药学上可接受的载体；所述人患者患有中风或其它神经疾病，或者处于发生所述疾病的危险之中。本发明进一步提供了治疗或预防人的中风(尤其是局部缺血性中风:和其它神经疾病/障碍、尤其是阿尔茨海默病的方法，所述方法包括给有需要的人施用有效量的抗NOGO抗体或其功能片段。本发明的抗体除了治疗人患者已知疾病(或作为其替代)之外，还可用于治疗方法，以緩解阿尔茨海默病的进程和/或发作或者使之停止。本发明进一步提供了抗NOGO抗体或其功能片段在制备用于治疗或预防中风和其它神经疾病/障碍、尤其是阿尔茨海默病的药物中的用途。本发明也提供了抑制人患者的神经变性和/或促进功能恢复的方法，所述方法包括给有需要的人患者施用有效量的抗NOGO抗体或其功能片段；所述人患者患有中风或其它神经科疾病/障碍、尤其是阿尔茨海默病，或者处于发生所述疾病的危险之中。此外，本发明提供了抗NOGO抗体或其功能片段在制备用于抑制人患者的神经变性和/或促进功能恢复的药物中的用途；所述人患者患有中风和其它神科疾病/障碍、尤其是阿尔茨海默病，或者处于发生所述疾病的危险之中。本发明进一步提供了治疗或预防人中风或其它神经疾病/障碍、尤其是阿尔茨海默病的方法，所述方法包括胃肠外施用治疗有效量的抗NOG0抗体的步骤。优选抗NOGO抗体经静脉内施用。以上所用的神经疾病或障碍包括但不限于创伤性脑损伤、脊髓损伤、额颞痴呆(tau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化，尤其是阿尔茨海默病。本发明也提供了促进轴突萌生的方法，所述方法包括使人体轴突与抗NOGO抗体接触的步骤。该方法可以在体外或体内进4亍，优选该方法在体内进4亍。因此，在进一步的方面，以静脉内施用形式提供了本发明抗NOGO抗体或其功能片段在制备用于治疗人患者以下疾病的药物中的用途中风(尤其是局部缺血性中风)、脑损伤、脊髓损伤、额颞痴呆(tau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化，尤其是阿尔茨海默病。因此，在进一步的方面，提供了治疗人患者以下疾病的方法中风(尤其是局部缺血性中风)、脑损伤、脊髓损伤、额颞痴呆(tau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化，尤其是阿尔茨海默病，所述方法包括静脉内施用治疗有效量的本发明抗NOGO抗体。在本发明的进一步方面，提供了在人类受试者(例如患者)中枢神经系统内促进神经元轴突萌生的方法，所述方法包括施用(例如静脉内给予)治疗有效量的抗NOGO抗体(例如包含本文所示CDR的抗NOGO抗体)。在本发明的进一步方面，提供了抗NOGO抗体(例如包含本文所示CDR的抗NOGO抗体)在制备用于治疗人患者以下疾病的静脉内施用药物中的用途中风(尤其是局部缺血性中风)、脑损伤、脊髓损伤、额颞痴呆(fau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化，尤其是阿尔茨海默病。在本发明的进一步方面，提供了在人患者中枢神经系统内再生轴突突起的方法，所述方法包括施用(例如静脉内施用)治疗有效量抗NOGO抗体的步骤；所述患者患有(或怀疑患有)中风(尤其是局部缺血性中风)、脑损伤、脊髓损伤、额颞痴呆(tau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化，尤其是阿尔茨海默病。在本发明的进一步方面，提供了本发明的抗NOGO抗体在制备用于在人患者中枢神经系统内再生轴突突起的静脉内施用药物中的用途；所述患者患有(或易患有)中风(特别是局部缺血性中风)、脑损伤、脊髓损伤、额颞痴呆(tau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、多发性硬化，尤其是阿尔茨海默病。本文所用的术语"功能恢复"是指患者在例如缺血事件或损伤或临床症状发作后的运动和/或感觉和/或行为改善。可以通过仪器评价人体功能恢复，所述仪器是设计用于测定基本神经学功能例如运动强度、感觉和协调，认知功能例如记忆、语言和服从指令的能力，和功能能力例如日常生活的基本活动或器械活动(instrumentalactivity)。可以用以下仪器测量基本神经功能的恢复例如NIH中风量表(NIHSS),可以用以下神经心理学实马全测定i^知功能的恢复例如BostonNaming实验、Trail-makmg实验和CaliforniaVerbalLearning实验，可以用以下仪器测定日常活动例如ADCS/ADL(阿尔茨海默病临床研究/日常生活活动)量表或Bristol日常生活活动量表；所有这些实验和量表都是本领域已知的。实施例1,人源化抗NOGO抗体的构建和表达通过构建重叠寡核苷酸，从头开始制备鼠和人源化VH和VL构建体，所述重叠寡核苷酸包含用于克隆到Rid和Rln哺乳动物表达载体的限制位点以及人信号序列。为了克隆到含有人体Yl突变恒定区的Rld中，将HmdIII和SpeI限制位点符合读框地引入到含有CAMPATH-1H信号序列的Vh区。为了克隆到含有人k恒定区的Rln中，将HindIII和BsiWI限制位点符合读框地引入到含有CAMPATH-1H信号序列的Vl区。CAMPATH-1H信号序列MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ.I.D.NO:82)平行地，产生11C7的嵌合形式(参见WO04/052932)。通过构建重叠寡核普酸，从头开始制备可变重区域序列(源自WO04/052932SeqID43)和可变轻区域序列(源自WO04/052932S叫ID44)。为了克隆到含有人体突变恒定区的Rid中，将HindIII和SpeI限制位点符合读框地引入到Vh区中。为了克隆到含有人k恒定区的Rln中，将HmdIII和BsiWI限制位点符合读框地引入到VL区中。实施例2，抗体在CHO细胞中的表达将编码重链和轻链的RId和RIn质粒分别瞬时共同转染至CHO细胞中并小规模或者大规模产生抗体。选择性地，通过电穿孔将同样的质粒共同转染至CHO细胞，使用不含核苷的培养基选择表达适合抗体的稳定多克隆细胞群。在某些情况下，对上清夜含有的抗体进行下测定，在其他情况下，回收重组抗体并在蛋白A琼脂糖凝胶上通过亲和色谱法进行纯化。实施例3，人源化抗NOGO抗体与NOGO结合将在PBS中的l|ng/mGST画人NOGO-A56(SEQID:76)涂覆在NuncImmunosorp板(每孑L100^1),在4。C过夜。各孔用TBS+0.05%Tween(TBST)冲洗一次，再与在TBST中的2%BSA—起在室温下孵育1小时以封闭非特异性结合位点。抗体用TBST+2%BSA稀释成10)iig/ml，由此制备l/2的稀释液。将抗体加入到各孔中，一式两份，室温下孵育1小时。各孔用TBST洗涤3次，再与抗人-k过氧化物结合物(1:2000)一起孵育1小时。用TBST洗涤3次，再与每孔lOOplOPD过氧化物底物(Sigma)—起孵育10分钟。加入25(il浓H2S04显色反应。用读板仪测定4卯nm处的光密度。減去从无抗体各孔中读取的背景值。图l-5说明在ELISA测定中，与嵌合体(2A10的嵌合体称为HcLc(包括2A10鼠VH(SEQIDNO.7)和VL(SEQIDN0.8)以及人IgG恒定区)和人NOGO-A56(详见实施例6)的结合比较，人源化抗体的结合为剂量依赖性。Y轴表示在490nm测定的光密度(OD),是对各孔中所捕获抗体的定量测定。X轴表示每个数据点所用的抗体浓度孑L(mcg/m1)/孔。在图1、3、4和5中使用的抗体材料由小规模瞬时转染(transienttransfections)产生。通过ELISA对上清夜中人IgG水平进行定量(实施例4)。对于图2,所使用的材料为通过多克隆表达系统或大规模瞬时转染产生的纯化抗体(参见实施例2)。在这些情况中通过ELISA和光密度对IgG水平进行定量。在另一个试验中，对于以下人源化抗体，抗体材料(CHO细胞的上清夜)由小规模转染(一式三份)产生H16L16、H17L16、H18L16、H16L18和嵌合抗体HcLc。该试验的结果与图l-5中的数据一致，除了H17L16比图1A和图2中的数据少。虽然无法解释这种观察现象，但是应该注意该结论与使用上清夜材料的另一个试验(参见图1A)和使用纯化H17L16材料的试验(图2)矛盾，两试验表明H17L16显示出与其他最优化的变形相当的结合能力。实施例4，抗体定量实^r方案将Bicarbonatebuffer(Sigma弁C3041)中的2|ig/ml捕获抗体H19(山羊抗人IgG链，Sigma#13382)涂覆在NuncImmunosorp板，在4。C过夜。各孔用含0.05Q/。Tween20的PBS(TBST)洗涤两次，再与200W含2%BSA的TBST(封闭緩冲液)一起在室温下封闭1小时。用TBST洗涤板两次。将全板含有抗体的组织培养物上清液以2倍稀释步骤滴定入封闭緩冲液并在室温孵育1小时。用TBST洗涤板三次。用TBST以1:2000稀释HRP结合抗体H23(山羊抗人K链，Sigma#A7164)，每孔加入100^il。将板在室温下孵育1小时。用TBST洗涤板三次并用lOOplFast-OPD底物(Sigma存P9187)显影。显色5-10分钟后，加入25)^13MH2S04停止ELISA。用读板仪测定490nm处的吸光度并通过标准曲线测定抗体浓度。34实施例5，抗体竟争ELISA实验方案将PBS中的l貼/mlGST隱人NOGO-A56(SEQID:76)涂覆在NuncImmunosorp板(每孔lOOpl),在4。C过夜，或37。C1小时。各孔用PBS洗涤三次，再与PBS中的1。/oBSA(封闭缓冲液)一起在室温下孵育2小时，以封闭非特异性结合位点。平行地，制备50:50的抗体混合物。将鼠抗体2A10抗体加入封闭緩冲液至终浓度为0.5或1.0mcg/ml。将嵌合抗体(克隆至人lgGlFc突变恒定区的鼠可变区)加入封闭緩冲液至终浓度为0-25mcg/ml。将封闭緩冲液从板上除去，加入lOOpl的50:50的抗体混合物，室温下1小时。用PBS洗涤各孔三次，然后与100^1兔多克隆抗鼠免疫球蛋白过氧化物酶结合物(用封闭缓冲液以1:2000进行稀释，DakoCytomation#P0260),室温1小时。用PBS洗涤各孔3次，与每孔lOOplOPD过氧化底物酶底物(Sigma弁P9187)或TMB底物(Sigma弁T8665)孵育10-30分钟。加入25^1浓H2S04终止显色反应。用读板仪测定490nm处(OPD)或450nm处(TMB)的光密度。在第一次实验中(图7A),用在PBS中的0.5貼/mlGST-人NOGO-A56涂覆板，在4。C过夜，使用TMB底物使板显色。在本实验中，将鼠抗体2A10与HcLc(2A10的嵌合形式)、11C7、同种型对照嵌合抗体和空白对照结合进行评《K图7B),用在PBS中的0.5pg/mlGST-人NOGO-A56涂覆板，在37。Cl小时，使用OPD底物使板显色。在本实验中，将鼠抗体2A10与HcLc、11C7、同种型对照抗体和纯化的H16L18抗体结合进行评价。实施例6，NOGO-A片段(NOGO-A56.SEO.I.D.NO:76)的产生将人NOGO-A编码氨基酸586-785的cDNA序列MIEYENKE-SEQ丄D.NO:76)克隆至pGEX-6Pl的BamHI-Xhol位点以产生GST标记的融合蛋白，命名为NOGO-A56。在37。C用IPTG诱发3小时至0.5mM后，在含100pg/ml氨千西林的2XTY培养基中在BL21细胞中表达质粒。通过声裂法使细胞团粒溶解，根据制造商的说明使用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶(AmershamPharmacm)纯化融合蛋白。使用减少的谷胱甘肽洗提纯化的蛋白，并针对PBS进行大量透析，使用BSA标准物和基于蛋白测定的BioRadcoomassie对蛋白进行定量，然后于-S(TC等分贮存。实施例7,人源化抗NOGO单克隆抗体BiaCore分析使用Biacore3000生物传感器，对纯化抗NOGO单克隆抗体(mAb)与重组表达的人NOGO-A(GST-人NOGO-A56)结合动力学进行分析。hNOGO-A芯片制备如下方法采用i殳计用于革巴向固定4匕水平(targetedimmobilizationlevel)的BiacoreWizard程序，使hNOGO(GST-人NOGO-A56)通过伯胺偶联固定到CM5芯片上。CM5传感器表面通过50mMN-羟基-琥珀酰亚胺(NHS)和200mMN-乙基-N，-二甲氨基丙基碳化物(EDC)溶液而活化。然后使在乙酸钠(pH5.0或pH4.5)中的hNOGO通过芯片并固化。固定化完成后，通过注入1M乙醇胺盐酸盐(pH8.5)将任何仍然具有活性的酯封闭起来。将抗-NOGOmAb用HBS-EP(10mMHEPES,pH7.4,150mMNaCl,3mMEDTA和0.005。/。P-20表面活性剂)稀释，然后在定义的抗体浓度范围内进行结合研究。所有运行均参照空白传感器表面(即已经如上所述地被活化并封闭，但不加入配体)。采用B1A评价动力学分析软件第4.1版进行结合分析。本发明其它抗体的Biacore分析基本上按照本文所述的相同方案进行。结果-表8四项独立实验的平均值(+/-标准偏差)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>结果-表9除了HcLc和H6Lc外，所示结果源于单次实验<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>实施例8.使用解离速率分级进行人源化抗NOGO单克隆抗体BiaCore分析按动力学分析制备hNOGO芯片。细胞上清液直接源于瞬时转染的CHO-K1细胞。这些直接通过传感器表面并测量相互作用。使用^^莫拟转染细胞上清液j故双重参照(doublereferencing)以除去由于组织培养基而存在的假象。所有运行均参照空白传感器表面(即如早先所述被活化并封闭，但不加入配体)。采用B1A评价动力学分析软件第4.1版，进行结合分析。结果-表11除了H6L13、H16L16、H16L18、HlLll、HcLc和H18L16所示值为两次或三次独立实验的平均值(+/-标准偏差)外，所示结果源于单次实验抗体ka(固s)H14L131.38e陽2H15L139.65e-3H16L139.07e醫3H17L139.31e陽3H18L139.07e-3H6L13(x3)1.73e陽2(4.8e-■3)H16L16(x3)6.64e-3(9.2e.■4)H16L18(x3)6.09e-3(7.4e-4)H1L11(x3)4.03e-2(1.8e.■2)HcLc(x2)3.76e-3(7.1e.4)H15L166.04e-3H14L168.9e-3H18L16(x2)6.87e-3(7.5e-4)H14L188.35e-3H15L185.94e-3H18L185.8e-3H6L171.58e-2H6L181.06e-2H6L144.57e-2H6L152.11e-2H6L161.14e-2实施例9,人源化抗NOGO单克隆抗体FACS分析以106细胞/ml的密度将IMR32人成神经细胞瘤细胞在FACS染色的緩沖液(PBS+4%热失活FCS)重新悬浮。将lOO(il悬浮液转移至96孔圆底微量培养板。向每孔中加入100(ir'Fix&Perm"MediumA(CaltagLaboratories,GAS001S-100),将该板在室温孵育15分钟。将团粒细胞用FACS染色的緩冲液洗涤两次。洗涤后，用50pl纯化抗NOGO抗体或同种型匹配的对照抗体的溶液以终浓度的2X的浓度将该细胞重新悬浮(在FACS染色的緩沖液中，0-200|ig/ml)。加入50^'Fix&Perm"MediumB(CaltagLaboratories,GAS002S-100),将该板在冰上孵育1个小时。在用100plPE结合的抗人y1特异性羊F(ab')2(SigmaP-8047)的溶液以1/50或1/100稀释重新悬浮以前，将细胞用FACS染色的緩冲液洗涤两次。将细胞在水上孵育1小时。将团粒细胞用FACS染色的緩冲液洗涤三次，在lOOpl同样的緩冲液将细胞重现悬浮。对于图6和13所示实马全，加入lOOpl"Fix&Perm"MediumB固定细胞。对于图14所示实验，加入lOOplBDCeIIFIX固定细胞。通过流式细胞术使用BectonDickinsonFACScan流式细胞器测定染色程度。使用同种型匹配只于照作为参照。结果示于图6A至F。所示全部数据说明HcLc抗体(2A10)在FACS测定中具有强信号，表明与人细胞表达的NOGO强结合。数据还显示人源化嵌合体保留了该性质。在本测定中当2A10嵌合抗体以及其他人源化形式在本测定始终优于11C7或与之相同时，H20L16抗体也始终优于11C7。实施例10，另外的人源化抗NOGO单克隆抗体按照实施例1和2所述技术，产生若干另外的抗体。通过BIAcore、ELISA和FACS对这些抗体的结合活性进行测定。10.1BIA匿e根据实施例7所述方法，另外的抗NOGO抗体数据示于下表13、14、15和17(纯化抗体材料)和表16(上清液材料)。结果-表13所示数据源于单次实验。在本实验中，所获得的H16L16数据不是在其他实验获得的通常值(通常显示大约1的KD(nM)(参见表8和10))。抗体ka(l/Ms)kd(l/s)KD(n]NHcLc2.6e64.4e-31.7H20L164.4e67.3e-21.7H22L164.9e66.9e-31.47H23L181.9e66.4e-33.8H24L161.9e66.9e-3)3.7H6L132.2e61.4e-36.4HILll1.4e63.1e-222.3H16L161.2e64.0e-23.4结果-表14所示数据源于单次实验。抗体ka(固s)kd(1/s)KD(nlH1L111.34e62.82e-221.0H6L132.02e61.57e-27.76HcLc2.46e63.5e-31.42H20L165.24e68.47e匿31.61H22L165.83e67.67e-31.32H23L162.95e65.87e-31.99H24L162.3e65.72e-22.49结果-表15所示数据源于单次实验。抗体ka(l/Ms)H1L111.19E6H6L131.91E6HcLc2.32E6H22L165.69E6H16L134.76E6H20L135.52E6结果-表16所示数据源于单次实验。数据材料的解离速率分级kd(1/s)KD(nM)2.19E-218.41.55E-28.13.69E-31.597.59E-31.331.21E-22.531.6E-23.06于源于小规模瞬时转染的上清液抗体off-rate:kd(1/sH23Ix3.42E-03H24Lc3.83E-03HcLc3.92E-03H22Lc4.67E-03H20Lc5.07E-03H16L185.66E-03H21Ix5.69E-03H16L165.77E-03H19Lc5.95E-03H23L166.06E-03H20L167.18E-03H22L167.78E-03H19L168.73E-03H23L139.56E-03H24L139.96E-03H20L131.20E-02H21L131.20E-02H19L131.30E-02H16L131.38E-02H1L111.96E-02H6L161.14E-2表17结果源于12次独立运行。所示数据为12次运行的平均值和标准偏差抗体kakdKD(nM)H20L165.24e6(1.77e5)1.02e-2(1.56e-3)1.86(0.16)HcLc3.02e6(4.74e5)7.54e-3(1.90e-3)1.90(0.18)4310.2ELISA根据实施例3所述方法，NOGO抗体另外的数据示于图8-11中。在这些实验中使用不同浓度的涂层抗原(0.1-1.0mcg/ml)结果-图8.以1.0mcg/ml涂覆的NOGO抗原结果-图9.以0.1mcg/ml涂覆的NOG05+6抗原结果-图10.以0.5mcg/ml涂覆的NOGO抗原结果-图11.以1.0mcg/ml涂覆的NOGO抗原结果图12A和B.以1.0mcg/ml涂覆的GST-人NOGOA56抗原。对源于小规模瞬时转染的上清液材料进行ELISA结合。10.3细胞内FACS根据实施例9所述方法，另外的FACS数据示于图13。另外的数据示于图14A至C。图14A表示每个样品的单次数据点。图14A和14B表示重复样品的平均值。实施例11,人抗NGOG单克隆抗体反形式BiaCore分析使用BiacoreTlOO对纯化抗NOGO单克隆抗体(mAb)与重组表达的方法人源化NOGO抗体的BiacoreTM动力学分析使用候选抗体的蛋白质A捕获进行。简言之，使用标准的偶联方法使用机器软件中固有的固定化向导以大约3000-4000共振单位(resonanceunits)(RU's)的密度使蛋白质A通过伯胺偶联固定到CM5芯片上。然后使人源化抗体通过蛋白质A表面，捕获的水平为200-400RU's,在稳定期后，将人NOG05+6GST以定义的浓度通过捕获抗体的表面，获得结合传感图(sensorgrams)。酸性再生(100mMH3P04或10mM甘氨酸pH1.5)会从蛋白质A表面除去了全部捕获的抗体，并且没有显著减少表面的结合能力。所有曲线针对緩冲注射液而不是人NOG05+6参照两次，使用Bmcore评估软件T100vl.l的全局拟合参数(globalfitparameter)对数据按l:l的结合模型进行拟合。在T100仪器上进行全部实验。表18-所示结果为5次或6次独立运行的平均值和标准偏差抗体kakdKD(nM)H20L161.01e6(1.35e5)3.13e-2(2.79e-5)0.31(0.036)HcLc1.38e6(3.70e5)5.69e-4(1.54e-4)0.41(0.062)11C72.85e5(4.06e4)1.17e-4(1.22e匿5)0.42(0.065)NOGO抗体序列概述(表12)<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>序列表SEQID1:2A10CDR隱H1SYWMHSEQID2:2A10CDR-H2NINPSNGGTNYNEKFKSSEQID3:2A10CDR-H3GQGYSEQID4:2A10CDR-L1RSSKSLLYKDGKTYLNSEQID5:2A10CDR画L2LMSTRASSEQID6:2A10CDR-L3QQLVEYPLTSEQID7:2A10,VH(鼠)YYCELGQGYWGQGTTLTVSSSEQID8:2A10,VL(鼠)LVEYPLTFGAGTKLELKSEQID9:嵌合重链HeSEQID10:嵌合轻链LcRGECSEQID11:2A10VH人源化构建体H5LEWMGN證SNGGTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID12:2A10VH人源化构建体H6AVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID13:2A10VH人源化构建体H700VYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID14:2A10VH人源化构建体H14YYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID15:2A10VH人源化构建体H15YYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID16:2A10VH人源化构建体H16VYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID17:2A10VH人源化构建体H17VYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID18:2A10VH人源化构建体H18YYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID19:2A10VL人源化构建体L6LVEYPLTFGGGTKVEIKSEQID20:2A10VL人源化构建体L13QLVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID21:2A10VL人源化构建体L14LVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID22:2A10VL人源化构建体L15LVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID23:2A10VL人源化构建体L16QLVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID24:2A10VL人源化构建体L17QLVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID25:2A10VL人源化构建体L18QLVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID26:2A10重链人源化构建体H5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage52</formula>SEQID29:2A10重链人源化构建体H14SEQID30:2A10重链人源化构建体H15SKLTVDKSRWWGNWSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQID31:2A10重链人源化构建体H16SEQID32:2A10重链人源化构建体H17SEQID33:2A10重链人源化构建体H18SKLTVDKS證QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQID34:2A10轻链人源化构建体L6QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQID35:2A10轻4连人源化构建体L13ECSEQID36:2A10轻链人源化构建体L14QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQID37:2A10轻《连人源化构建体L15ECSEQID38:2A10轻链人源化构建体L16ECSEQID39:2A10轻链人源化构建体L17ECSEQID40:2A10轻链人源化构建体L18ECSEQID41:编码2A10的PN,VH(鼠)SEQID:7AAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCASEQID42:编码2A10的PN,VL(murine)SEQID:8ACCAAGCTGGAGCTGAAASEQID43:编码嵌合重链HeSEQID:9的PNTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCGACACCCTCATGATCTCCCGGACCSEQID45:编码2A10VH人源化构建体H5SEQID:11的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTTCASEQID46:编码2A10VH人源化构建体H6SEQID:12的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCTCASEQID47:编码2A10VH人源化构建体H700SEQID:13的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCASEQID48:编码2A10VH人源化构建体H14SEQID:14的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCCASEQID49:编码2A10VH人源化构建体H15SEQID:15的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCASEQID50:编码2A10的VH人源化构建体H16SEQID:16PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCASEQID51:编码2A10VH人源化构建体H17SEQID:17的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCASEQID52:编码2A10VH人源化构建体H18SEQID:18的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCASEQID53:编码2A10VL人源化构建体L6SEQID:19的PNACCAAGGTGGAGATCAAASEQID54:编码2A10VL人源化构建体L13SEQID:20的PNGGGTCCCAGACAGATTCAGCGSEQID55:编码2A10VL人源化构建体L14SEQID:21的PNGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGSEQID56:编码2A10VL人源化构建体L15SEQID:22的PNGGGTCAGCGACAGATTCAGCGGSEQID57:编码2A10VL人源化构建体L16SEQID:23的PNGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGSEQID58:编码2A10VL人源化构建体L17SEQID:24的GGACCAAGCTGGAGATCAAASEQID59:编码2A10VL人源化构建体L18SEQID:25的CTGGGGTCAGCGACAGATTCAGCGSEQID60:编码2A10重《连人源化构建体H5SEQID:26的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage64</formula>SEQID62:编码2A10重链人源化构建体H700SEQID:28的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage66</formula>SEQID63:编码2A10重链人源化构建体H14SEQID:29的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula>AATGASEQID65:编码2A10重链人源化构建体H16SEQID:31的PNAATGASEQID66:编码2A10重链人源化构建体H17SEQID:32的PN70<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>SEQID69:编码2A10轻链人源化构建体L13SEQID:35的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>SEQID72:编码2A10轻链人源化构建体L16SEQID:38的PNSEQID73:编码2A10轻链人源化构建体L17SEQID:39的PNCAGAGGCCAGGCCAATCTCCACGATCAAACGTACGGTGGCTGCACSEQID74:编码2A10轻链人源化构建体L18SEQID:40的PNSEQID75:Campath先导序列MGWSCIILFLVATATGVHSSEQID76:人NOGOA(NOGO-A56)的氨基酸586-785MIEYENKESEQID77:2A10VH人源化构建体HITAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID78:2A10VL人源4匕构建体LllLVEYPLTFGQGTKLEIKSEQID79:2A10重链人源化构建体HISEQID80:2A10轻链人源化构建体LllQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQID81:编码2A10VH人源化构建体HISEQID:77的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCASEQID82:编码2A10VL人源化构建体LllSEQID:78的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>AATGASEQID84:编码2A10人源4匕轻链构建体LllSEQID:90的PNSEQID85:2A10VH人源化构建体H19AVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID86:2A10VH人源化构建体H20AVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID87:2A10VH人源化构建体H21AVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID88:2A10VH人源化构建体H22AVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID89:2A10VH人源化构建体H23AVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID90:2A10VH人源化构建体H24VYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID91:2A10VH人源化构建体H25TAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSSEQID92:2A10重链人源化构建体H19<formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula>SEQID97:2A10重《连人源化构建体H24人源化构建体H25SEQID99:编码2A10的VH人源化构建体H19SEQID:85PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCTCASEQID100:编码2A10VH人源化构建体H20SEQID:86的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>CAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCASEQID104:编码2A10VH人源化构建体H24SEQID:卯的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCASEQID105:编码2A10VH人源化构建体H25SEQID:91的PNCAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTTCASEQID106:编码2A10重链人源化构建体H19SEQID:92的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage86</formula>SEQID107:编码2A10重链人源化构建体H20SEQID:93的PNAATGASEQID108:编码2A10重链人源化构建体H21SEQID:94的PNAATGASEQID109:编码2A10重《连人源4匕构建体H22SEQID:95的PNAATGASEQID110:编码2A10重链人源化构建体H23SEQID:96的PNAATGASEQID111:编码2A10重链人源化构建体H24SEQID:97的PN<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula>权利要求1.与人NOGO结合的单克隆抗体，包括具有SEQIDNO.77的氨基酸序列的重链可变区，该序列进一步包括在第12、20、38、40、48、67、68、70、72、74、76、79和91位的n个取代；其中各取代的氨基酸残基是用在SEQIDNO7等同位置的氨基酸残基代替，n的数目为1至13。2.如权利要求1的单克隆抗体，其中该抗体包括在第79位的取代。3.如权利要求2的单克隆抗体，其中该抗体序列包括在第48和68位的取代。4.如权利要求2或3的单克隆抗体，进一步包括在第40和/或67位的取代。5.如权利要求4的单克隆抗体，进一步包括在第38和/或72和/或70位的取代。6.如权利要求5的单克隆抗体，其中该抗体进一步包括在第12、20、74、76或91位中一个或多个的取代。7.如权利要求1至6任一项的单克隆抗体，其中重链可变区具有在SEQIDNO:11-18、29-33和85-91中提供的序列.8.如权利要求7的单克隆抗体，其中抗体包括在在SEQIDNO11、12、16、18、85、86、87或91中提供的VH区。9.单克隆抗体，包括如权利要求1至8任一项的重链可变区和具有SEQIDNO.20氨基酸序列的轻链可变区，该序列任选进一步包括在第4、7、11、19、42、64和70位中的一个或多个的若干取代；其中各取代的氨基酸残基是用SEQIDNO8(供体抗体2A10的轻链可变区)中等同位置的氨基酸残基代替，取代的数目为0至7。10.如权利要求9的单克隆抗体，其中轻链可变区具有在第11和19位的取代11.如权利要求9的单克隆抗体，其中轻链可变区具有在第4位的取代。12.如权利要求10的单克隆抗体，其中轻链可变区具有在第42位的取代。13.如权利要求10或12的单克隆抗体，其中轻链可变区具有在第、7、64或70位的取代。14.如权利要求9的单克隆抗体，其中轻链可变区是SEQIDNO.20.15.如权利要求9的单克隆抗体，其中抗体可包括在SEQIDNO23和25中提供的VL区。16.包括选自下列VH和VL的单克隆抗体<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>.17.如权利要求16的单克隆抗体，由下列全长抗体链在哺乳动物细胞中表达获得抗体轻链重链H5L13FLSEQIDNO.35SEQIDNO.26H6L13FLSEQIDNO.35SEQIDNO.27H19L13FLSEQIDNO.35SEQIDNO.92H20L13FLSEQIDNO.35SEQIDNO.93H21L13SEQIDNO.35SEQIDNO.94H25L13FLSEQIDNO.35SEQIDNO.98H16L16FLSEQIDNO.38SEQIDNO.31H19L16FLSEQIDNO.38SEQIDNO.92H20L16FLSEQIDNO.38SEQIDNO.93H21L16SEQIDNO.38SEQIDNO.94H25L16FLSEQIDNO.38SEQIDNO.98H16L18FLSEGIDNO.40SEQIDNO.31H18L16FLSEQIDNO.38SEQIDNO.33H19L18FLSEQIDNO.40SEQIDNO.92H20L18FLSEQIDNO.40SEQIDNO.93H21L18FLSEQIDNO.40SEQIDNO.94H25L18FLSEQIDNO.40SEQIDNO.9818.药物组合物，包括根据前述任一项权利要求的抗-NOGO抗体或其功能片段与药学上可接受的稀释剂或载体19.治疗或预防人中风和其他神经疾病/障碍的方法，包括给所述需要的人施用有效量的根据权利要求l-17任一项的抗-NOGO抗体，包括其改变抗体或功能片段。20.根据权利要求l-17任一项的抗-NOGO抗体在制备用于治疗或预防中风和其它神经疾病/障碍的药物中的用途，该抗体包括其改变抗体或功能片段。21.抑制人患者的神经变性和/或促进功能恢复的方法，所述方法包括给有需要的人患者施用有效量的根据权利要求1-17任一项的抗-NOGO抗体，包括其改变抗体或功能片段,所述人患者患有中风或其它神经科疾病/障碍、或者处于发生所述疾病的危险之中。22.根据权利要求l-17任一项的抗-NOGO抗体在制备用于抑制人患者的神经变性和/或促进功能恢复的药物中的用途，所述人患者患有中风和其它神科疾病/障碍、或者处于发生所述疾病的危险之中，该抗体包括其改变抗体或功能片段。23.治疗或预防人中风或其它神经疾病/障碍方法，所述方法包括给所述人胃肠外施用治疗有效量的权利要求l-17任一项的抗NOG0抗体的步骤。24.权利要求23的方法，其中抗NOGO抗体经静脉内施用。25.权利要求19至23任一项的方法，其中其他神经疾病/障碍选自创伤性脑损伤、脊髓损伤、阿尔茨海默病、额颞痴呆(tau蛋白病)、周围神经病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病和多发性硬化.26.促进轴突萌生的方法，所述方法包括使人体轴突与权利要求1-17任一项的抗NOGO抗体接触的步骤。27.权利要求26的方法，其中该方法在体内进4亍。28.产生权利要求l-17任一项的抗NOGO抗体的方法，所述抗体与人NOGO-A特异性结合并中和其活性，所述方法包括下述步骤(a)提供编码抗体重链的第一载体；(b)提供编码抗体轻链的第二载体；(c)用所述第一和第二载体转化哺乳动物宿主细胞；(d)在允许所述宿主细胞将所述抗体分泌到所述培养基中的条件下，在培养基(优选不含血清)中培养步骤(c)的宿主细胞；(e)回收步骤(d)分泌的抗体。29.产生抗NOGO抗体的方法，所述抗体竟争性抑制权利要求1至17任一项的抗体的结合，所述方法包括下述步骤(a)提供编码抗体重链的第一载体；(b)提供编码抗体轻链的第二载体；(c)用所述第一和第二载体转化哺乳动物宿主细胞；(d)在允许所述宿主细胞将所述抗体分泌到所述培养基中的条件下，在培养基(优选不含血清)中培养步骤(c)的宿主细胞；(e)回收步骤(d)分泌的抗体。30.根据权利要求28和29的方法，其中宿主细胞选自NSOSp2/o、CHO、COS、成纤维细胞例如3T3，特别是CHO。全文摘要本发明涉及NOGO抗体，含有它们的药物制剂以及此类抗体在治疗和/或预防神经疾病/障碍中的用途。文档编号C12N15/63GK101258165SQ200680032351公开日2008年9月3日申请日期2006年7月3日优先权日2005年7月5日发明者A·P·路易斯,F·哈赛因,J·H·艾利斯,P·A·汉布林,P·威尔逊,R·普林哈,R·麦克亚当申请人:葛兰素集团有限公司