Il-17f基因实时荧光pcr检测引物及试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种IL-17F基因实时荧光PCR检测引物，所用的正反引物如下：正向引物（SEQIDNO.1）:5-CTGGGACGTACCGGGTCGGT-3；反向引物（SEQINNO.2）:5-GTCTGTCGCCTGAACAACGTCT-3；利用还有利用本引物的实时荧光PCR检测试剂盒和方法，本发明所采用的PCR试剂盒，适用于一般的荧光PCR仪器，操作简单，可重复性高；检测的成本低，特异性和敏感性高，适合大范围的普及使用。
【专利说明】IL-17F基因实时荧光PCR检测引物及试剂盒
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于基因表达领域，尤其是涉及IL-17F基因PCR检测引物。
【背景技术】
[0003]白介素17(IL-17)是一种炎症前因子，其家族成员在自身免疫性疾病、移植排斥反应及炎症中起着重要作用，IL-17普遍存在与Thl7细胞、⑶8记忆T细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞中，主要来源于Thl7细胞家族。IL-17家族成员主要包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17C、IL-17D 和 IL-17E、IL-17F。目前，研究发现 IL-17F 在哮喘中扮演重要角色，作为哮喘的促炎因子。IL-17F经常在哮喘病人的气管中出现，并且其严重程度与IL-17F浓度相关；IL-17F可以诱导多种细胞因子，包括趋化因子、粘结因子等；在小鼠IL-17F过量表达时与出现气管的中性粒细胞增多、和诱导多种相关促炎因子表达增加；IL-17F成为哮喘治疗和诊断的主要分子标记。
[0004]目前IL-17F的检测中，目前没有有效的引物进行检测，并利用传统的抗体检测方法，但是此方法费用较高，花费时间长，并且并利用大范围的使用。RT-PCR是研究检测特定基因表达的一个简便、准确的方法。通过RT-PCR在mRNA
水平上检测某个基因的表达情况，可以提高检测的准确率。
【发明内容】
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[0005]为了解决上述现有技术的不足，本发明目的在于提供用于检测IL-17F基因表达的引物。
[0006]本发明所采用的技术方案如下:
IL-17F基因实时荧光PCR检测引物，所用的正反引物如下:
正向引物(SEQ ID N0.1):5-CTGGGACGTACCGGGTCGGT-3 反向引物(SEQ IN N0.2):5-GTCTGTCGCCTGAACAACGTCT-3?
[0007]IL-17F基因实时荧光PCR检测试剂盒，其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括:SYBR Premix Ex Taq II (2X)、、正向引物 10 μ M、反向引物 10μΜο
[0008]所述的正向引物和反向引物为上述的引物。
[0009]IL-17F基因实时荧光PCR检测方法，具体步骤为:
1)提取RNA，并反转录为cDNA；
2)反应体系:取2μI步骤I)制得的模板cDNA溶液，加入上述试剂盒中的溶液12 μ 1，再加入灭菌超纯水至总体积20 μ I ;将以上各组分加入至0.2mL实时荧光PCR反应管中，
短暂离心；
3)实时荧光PCR检测，具体反应提交如下:
950C /!Os, I 次循环；95°C /50s,66°C /60s,40 次循环。[0010]本发明采用SYBR Green I实时荧光PCR检测方法，对IL-17A基因进行鉴定，具有检测实时性和高效性，并可以对早期IL-17A基因表达进行检测，用于早期判断自身免疫性疾病，另外可以对病人进行个性诊断和治疗过程中，IL-17A的基因表达情况的检测，并判断病人复发和加重病情的可能性。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]附图1为检测样品1-6实时荧光PCR检测曲线；
附图2为检测样品1-6和阴性对照对比图表。
【具体实施方式】[0012]结合实施例对发明申请做进一步的说明。
[0013]设计IL-17F基因实时荧光PCR检测引物，所用的正反引物如下:
正向引物(SEQ ID N0.1):5-CTGGGACGTACCGGGTCGGT-3
反向引物(SEQ IN N0.2):5-GTCTGTCGCCTGAACAACGTCT-3?
[0014]IL-17F基因实时荧光PCR检测试剂盒，其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括:SYBR Premix Ex Taq II (2X)、、正向引物 10 μ M、反向引物 10μΜο
[0015]实施例1
I)提取6位哮喘病人血清样品，标记为1-6，2位正常人血清作为阴性对照；分别提取各样品的RNA，并反转录为cDNA，低温保存备用。
[0016]2)取步骤I)中所述的取2μ I步骤I)制得的模板cDNA溶液，加入上述试剂盒中的溶液12 μ 1，再加入灭菌超纯水至总体积20 μ I ;将以上各组分加入至0.2mL实时荧光PCR反应管中，短暂离心；
3)实时荧光PCR检测，具体反应提交如下:
950C /10s，I 次循环；95°C /50s,66°C /60s,40 次循环。
[0017]结果分析:
对得到实时荧光PCR检测的曲线进行分析；并对检测样品和阴性对照的荧光进行分析。
[0018]其中，如图1和图2所示，图1中所得的荧光PCR扩增曲线的特异性较好，并通过附图2中的与阴性对照比较，所得哮喘病人IL-17F基因表达较正常高。所得结果有利于针对对IL-17F因子的个性化治疗病人。
【权利要求】
1.1L-17F基因实时荧光PCR检测引物，其特征是:所述的正反引物如下:
正向引物(SEQ ID N0.1):5-CTGGGACGTACCGGGTCGGT-3,
反向引物(SEQ IN N0.2):5-GTCTGTCGCCTGAACAACGTCT-3。
2.1L-17F基因实时荧光PCR检测试剂盒，其特征是:其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括:SYBR Premix Ex Taq II (2X )、、正向引物10 μ Μ、反向引物10 μ M ; 所述的正向引物和反向引物为权利要求1所述的引物。
3.1L-17F基因实时荧光PCR检测方法，其特征是，具体步骤为: 1)提取RNA，并反转录为cDNA； 2)反应体系:取2μ I步骤I)制得的模板cDNA溶液，加入权利要2所述的试剂盒中的溶液11.2 μ 1，再加入灭菌超纯水至总体积20 μ I ;将以上各组分加入至0.2mL实时荧光PCR反应管中，短暂离心； 3)实时荧光PCR检测，具体反应提交如下:
950C /!Os, I 次循环；95°C /50s, 66°C /60s, 35 次循环。
【文档编号】C12N15/11GK103498007SQ201310504426
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年10月24日 优先权日:2013年10月24日
【发明者】周世亮 申请人:周世亮