肽及其用途的制作方法

专利名称：肽及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及肽及其在治疗微生物感染，特别是细菌感染中的用途。还提供了医学治疗的方法。
背景技术：
抗微生物肽是固有免疫系统的关键效应分子和所有真核生物防御微生物感染的第一道防线的整体成分。许多原核生物也利用抗微生物肽作为对抗来自其它微生物的挑战的手段。许多抗微生物肽的特征是具有有利于与微生物膜的带负电荷的磷脂相互作用的阳离子特性，然后随着膜的透化作用而导致微生物的裂解和死亡。例如，已表明抗微生物肽分子能够在脂双层中聚集并形成电压依赖性通道，导致微生物的内膜和外膜的透化作用(Lehrer, R. I. , J. Clin. Investigation, 84:553 (1989))。这些分子的两亲性质还可以有利于通过静电吸引使疏水性残基插入到脂双层中，而使极性残基伸入膜中和突出在膜上。·
随着感染率持续上升，而有效的控制方法变得越来越有限，耐药性微生物，特别是细菌变得越来越成问题。在过去的大约50年来，对抗生素的大量使用，加上抗生素的随意开具和患者对治疗方案的非依从性，已经选择出了已发展出或已获得克服抗生素效果的方式的微生物。耐药生物的传播和控制正成为医疗保健中最显著的问题之一。所有革兰氏阳性菌属，包括葡萄球菌属(Staphylococcus spp·),肠球菌属(Enterococcus spp.),李斯特菌属(Listeria spp.),梭菌属(Clostridiumspp.)，棒杆菌M (Corynebacterium spp.),诺卡氏菌属(Nocardia spp.),芽抱杆菌属(Bacillus spp.)和链球菌属(Streptococcus spp.),包括那些已发展出或已获得对抗生素例如甲氧西林(甲氧苯青霉素)不同水平的耐药性的菌属，特别感兴趣的是革兰氏阴性菌属埃希氏杆菌属(Escherichia spp.),假单胞菌属(Pseudomonas spp.),克雷伯氏菌属(Klebsiella spp.)和不动杆菌属(Acetinobacter spp.)。其它感兴趣的革兰氏阴性病原体包括肠杆菌科(特别是产生超广谱β_内酰胺酶(ESBL)或碳青霉烯酶的那些)。凝固酶阴性葡萄球菌(Staphylococci),例如表皮葡萄球菌(S. epidermidis)也作为重要的耐药性医院病原体出现。目前对于甲氧西林或多药耐药性细菌导致或引起的感染的治疗方案是有限的并且迫切需要发现新的抑制或杀死这种生物体的疗法。其它特别感兴趣的细菌性病原体包括分支杆菌属(Mycobacterium spp.),例如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis);肠杆菌属(Enterobacter spp.);弯曲杆菌属(Campylobacter spp.);沙门氏菌属(Salmonellaspp.);螺杆菌属(Helicobacter spp.)例如幽门螺杆菌(Helicobacter pylori);奈瑟氏菌属(Neisseria spp.);例如淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhea),脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis);伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi);志贺氏杆菌属(Shigella spp.),例如弗氏志贺菌(Shigella fIexnerii);嗜血杆菌属(Haemophilusspp.),例如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae);衣原体属(Chlamydia spp.),例如沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis),肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae),婴鸟踏热衣原体(Chlamydia psittaci) ;土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis);耶尔森菌属(Yersinia spp.),例如鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis);密螺旋体属(Treponemaspp.);伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia spp.);例如鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderiamallei)和类鼻疽伯克霍尔德氏菌(B. pseudomallei)。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种条件致病菌,其导致呼吸道感染、尿路感染、皮炎、软组织感染、菌血症和各种全身性感染，尤其是在严重烧伤和癌症患者及免疫抑制的AIDS患者中。由铜绿假单胞菌引起的呼吸道感染几乎专有地在下呼吸道受损或全身性防御机制受损的个体中(例如在患有囊胞性纤维症或慢性阻塞性肺病的患者中)发生。原发性肺炎发生于患有慢性肺病和充血性心力衰竭的患者中。菌血症性肺炎一般发生于接受化疗的中性粒细胞减少的癌症患者中。常见囊胞性纤维症患者的下呼吸道被铜绿假单胞菌的粘液菌株定殖，且很难治疗。需要开发治疗铜绿假单胞菌感染的有效方法。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是通常在许多健康人的皮肤上和鼻子中遇到的完全无害地存活于其中的条件致病菌。然而，当金黄色葡萄球菌能够意外地或通过手术进入身体时可以引起问题，导致脓肿，疮，面疱，脓疱病和伤口感染。如果感染进入血流并行进至身体的不同部位，可以引起血液中毒(败血症)，骨感染(骨髓炎)，心脏瓣膜感染(心内膜炎)和肺部感染(肺炎)。MRSA是一种对通常开具的许多抗生素包括甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(在英国 40%的金黄色葡萄球菌感染对甲氧西林和其它抗生素是耐药的)， 在大众媒体中通常称为“超级病菌”。MRSA是涉及医疗保健相关感染的最普遍的微生物之一。感染通常限于医院，特别是对于易受伤害的和/或虚弱的患者，包括在特护病房、烧伤病房和骨科病房的患者。由于许多抗生素是无效的，并且那些有效的常常需要以更高的剂量在持续很久的时间内(数周)静脉注射给药，因此MRSA更加难以治疗，从而突出了开发可供选择的抗微生物疗法的需要。尽管有来自数百万年共存的进化压力，但是由于微生物病原体并不易于获得对阳离子肽的耐药性，因此阳离子肽仍然是具有吸引力的治疗靶点。在我们的共同在审申请WO2006/018652和WO 2008/093058中，我们描述了可以用于治疗微生物感染包括细菌感染的肽的确定。微生物的生物膜是嵌入多聚物的胞外基质并附着于生物或非生物表面的微生物细胞的共同体。在这些生物膜中可以找到一系列微生物(细菌、真菌和/或原生生物，和相关的噬菌体和其它病毒)。生物膜在自然界中是普遍存在的并且通常发现于广泛的环境中。生物膜与许多感染有关，特别是它们对于反抗感染治疗的贡献越来越多地被科学界和医学界所认识。生物膜形成不仅限于微生物附着于表面的能力。在生物膜中生长的微生物彼此间的相互作用能够比与实际的物质基底之间的相互作用更多，其中最初在所述物质基底上形成生物膜。例如，这种现象有助于接合基因转移，所述接合基因转移在生物膜中的细胞间发生的速率比在浮游生物细胞间更高。这表示在细菌之间的水平基因转移的机会增加，并且由于这可以促进抗生素耐药性或毒性决定基因从耐药菌向敏感菌转移，因此具有重要性。细菌可以通过称为群体感应的系统互相交流，通过所述群体感应释放信号分子进入外界，并且可以通过周围的微生物检测它们的浓度。群体感应能够使细菌协调它们的行为，从而增强它们生存的能力。对群体感应的响应包括对营养物有效性的适应，防御其它可能竞争相同营养物的微生物并避免对细菌具有潜在危险性的毒性化合物。对于病原菌在感染宿主(例如人类、其它动物或植物)的过程中非常重要的是协调它们的毒性以逃避宿主的免疫应答从而能够建立成功的感染。生物膜形成在许多感染性疾病，例如囊胞性纤维症和牙周炎，在血流和尿路感染以及由于留置医疗设备存在的结果中起到了关键的作用。提出的生物膜相关的微生物在它们的宿主中引起疾病的机理包括下列(i)延迟抗菌剂通过生物膜基质的渗透，( )细胞从留置医疗设备生物膜分离或细胞聚集，(iii)产生内毒素，(iv)抵抗宿主免疫系统，(v)通过抗菌剂耐药性和/或毒性决定基因的水平基因转移为耐药生物体的产生提供生态位，和(vi)生长率改变(即代谢休眠)(Donlan和Costerton, Clin MicrobiolRev15:167-193, 2002;Parsek 和 Singh, Annu Rev Microbiol 57:677-701, 2003;CostertonJff, Resistance of biofilms to stress. In’ The biofilm primer’ . (Springer BerlinHeidelberg). pp. 56-64. 2007)。最近的实验证据表明在生物膜内特定的非代谢存留细胞(persistercell)(休眠细胞)的小亚群体的存在。认为这些细胞可能是生物膜对抗菌剂高耐药性/耐受性的原因。多重药物耐受性存留细胞存在于浮游生物种群和生物膜种群两者中，并且酵母菌和细菌似 乎进化出了类似的分配生存功能到该亚群体的策略。由聚合物基质提供的保护允许存留细胞逃脱消除并充当再增殖的来源。有证据表明存留可能是微生物生物膜的多重药物耐受性的主要原因(LaFleur 等人,Antimicrob Agents Chemother. 50:3839-46，2006; Lewis, Nature Reviews Microbiology 5,48-56 2007)。因此，需要进一步的可以用于治疗微生物感染的药剂。特别地，仍然迫切需要进一步的可以用于治疗细菌感染例如由葡萄球菌、链球菌、不动杆菌属、克雷伯氏菌属、大肠杆菌和假单胞菌属引起的那些感染的抗微生物活性物。同样迫切需要更好的防止生物膜形成和治疗与微生物生物膜相关的病症的治疗方法。本发明人令人惊讶地确定了比天然的抗微生物肽，例如防御素、抗菌肽(cathelicidins)等具有改进的抗微生物活性的肽。所要求的化合物具有较强的抗微生物特性，同时显示对动物和人类较低的体外和体内毒性。发明陈述根据本发明的第一方面，提供了一种肽，其中肽的至少75%的氨基酸为精氨酸和苯丙氨酸，至少50%的氨基酸为精氨酸，至少15%的氨基酸为苯丙氨酸。本发明的肽是有用的，尤其是在治疗或预防微生物感染中，特别是细菌感染例如但不限于，由葡萄球菌属和假单胞菌属引起的那些感染。本发明的肽在预防和治疗由这些和其它细菌引起的生物膜感染中也是有用的。通常在肽中至少80%的氨基酸为精氨酸和苯丙氨酸，适宜地，在肽中至少90%，更适宜地，至少95%,代表性地,大约99%的氨基酸为精氨酸和苯丙氨酸。根据一个实施方案，肽中全部的氨基酸为精氨酸和苯丙氨酸。通常在肽中至少55%的氨基酸为精氨酸，适宜地，在肽中至少60% (例如61%)，更适宜地，至少65%，代表性地，大约70%的氨基酸为精氨酸。通常在肽中至少20%的氨基酸为苯丙氨酸，适宜地，在肽中至少25%，更适宜地，至少30%，代表性地，大约30-40% (例如38%)的氨基酸为苯丙氨酸。本发明的肽的氨基酸可以是D或L-氨基酸。氨基酸可以是如本文定义的例如D或L-氨基酸的阳离子氨基酸的光学异构体。氨基酸可以是天然存在的或合成的。本发明也包括已知的异构体(结构的、立体的、构象的和构型的)和上述氨基酸的结构类似物，和天然(例如翻译后修饰)或化学修饰的那些，所述天然或化学修饰包括但不仅限于磷酸化、糖
基化、磺酰化和/或羟基化。根据本发明的一个实施方案，肽由精氨酸和苯丙氨酸，可选地与多达5个非精氨酸和非苯丙氨酸替代物组成。通常地，肽由精氨酸和苯丙氨酸氨基酸与0、1、2或3个非精氨酸和非苯丙氨酸替代物，代表性地，O、I或2个替代物；优选地，O或I个替代物组成。根据一个实施方案，肽由精氨酸和苯丙氨酸组成。代表性地，本发明的肽可以包含I至5个替代物，适宜地，I至3个替代物，通常地，I个替代物。所述替代物可以是末端的或非末端的。替代物可以由氨基酸或非氨基酸组成。替代物可以是带电的或不带电的。通常地， 一个或多个替代物是不带电的氨基酸。供选择地或另外地，一个或多个替代物可以是带电的氨基酸，特别是阳离子氨基酸。一个或多个氨基酸替代物可以是疏水性的。当一个或多个替代物是氨基酸替代物时，它们可以是带电的或不带电的氨基酸。氨基酸替代物可以是天然存在的或非天然存在的、合成的氨基酸替代物。通常地，替代物由一个或多个疏水性氨基酸，和/或一个或多个阳离子氨基酸组成。如本文中所使用的，术语“疏水性”是指具有侧链的氨基酸，所述侧链在生理pH值下是不带电的，非极性的，并且通常被水溶液排斥。通常疏水性氨基酸残基的疏水性大于或等于-I. 10并且电荷小于或等于O。如本文中所使用的，术语“阳离子的”是指具有大于或等于O的净电荷的氨基酸。通常地，术语“阳离子的”是指具有大于O的净电荷的氨基酸。典型的疏水性氨基酸替代物包括甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸和苏氨酸。典型的阳离子氨基酸替代物包括鸟氨酸、组氨酸和赖氨酸。根据一个实施方案，肽包括一个或多个半胱氨酸，特别是一个或两个末端半胱氨
酸残基。根据一个实施方案，肽包括一个或多个选自赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸和组氨酸的替代物。优选地，肽由精氨酸、苯基丙苯丙氨酸以及以下氨基酸其中之一组成赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸和组氨酸；优选地，为脯氨酸和甘氨酸其中之一。通常肽不包括天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或丝氨酸，但是即使存在这些氨基酸，本发明的某些肽也可能具有活性。此外，可以修饰肽的氨基酸序列从而产生肽变体，所述肽变体包括在肽中至少一个氨基酸残基被另一个氨基酸残基替代的替代物，包括使用D构型而不是L构型的替代物。肽的一个或多个残基可以替换为另一个而改变、增强或保持肽的生物活性。这样的变体可以具有例如至少约10%的相应的非变体肽的生物活性。通常使用保守氨基酸，即如上所述的具有类似化学和物理性质的氨基酸替代物。因此，例如保守氨基酸替代物可能涉及用一个阳离子氨基酸替换另一个，例如用赖氨酸替换精氨酸、用组氨酸替换鸟氨酸。供选择地或另外地，可以用甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸或苏氨酸替换苯丙氨酸。在引入替代物之后，筛选变体的生物活性。本发明的肽可以包含2至200个氨基酸，例如3、4、5、6或7个至100个氨基酸，包括3、4、5、6或7个至10、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸。根据一个实施方案，抗微
生物肽包含3或4至50个氨基酸。肽可以包含100至200个氨基酸，20至100、20和45个氨基酸，例如20、25、30、35、40、42或45个氨基酸。肽可以包含3至15个氨基酸，例如5至15个氨基酸，例如13至15
个氨基酸。代表性地，肽包含5至20个氨基酸；适宜地，5至15个，更适宜地，7至15个，通常地，10至15个氨基酸，包括11至13个氨基酸。根据一个实施方案，肽由10至15个氨基酸组成，特别是由11至13个氨基酸组成。肽可以代表性地包括5至50个精氨酸，适宜地5至30个，更适宜地，5至20个，通常地，7至10个精氨酸。肽可以包含I至20个苯丙氨酸,代表性地，I至15个,适宜地,2至10个,更适宜地，2至5个苯丙氨酸。通常地，肽包含精氨酸骨架和在其中的苯丙氨酸替代物。通常地，肽包含至少一个3至20个连续的精氨酸的部分，代表性地，至少一个3至10个连续的精氨酸的部分，适宜地，至少一个3至5个连续的精氨酸的部分。供选择地或另外地，肽可以包含至少一个5至10个连续的精氨酸的部分。通常地,肽包含至少一个I至5个连续的苯丙氨酸的部分,代表性地,至少一个3至5个连续的苯丙氨酸的部分，适宜地，肽包含至少一个3个连续的苯丙氨酸的部分。根据一个实施方案，肽包含多于一个苯丙氨酸部分；其中各苯丙氨酸部分包含一个或多个苯丙氨酸。通常地，肽包含两个或三个苯丙氨酸部分。根据一个实施方案，肽不包含末端苯丙氨酸。根据一个实施方案，肽仅包含一个末端苯丙氨酸，例如N-端苯丙氨酸。优选地,在肽的两端肽不包含末端苯丙氨酸。代表性地，肽在一端或两端包含精氨酸部分，适宜地，具有I至5个精氨酸的精氨酸部分。供选择地，肽可以包含一个或两个末端非精氨酸和非苯丙氨酸替代物。适宜地，末端替代物包括如上所述的替代物，特别是组氨酸、半胱胺和赖氨酸。肽可以在C-端或N-端包含苯丙氨酸，并分别在N-端或C-端包含精氨酸。根据一个实施方案，肽包含C-端精氨酸和N-端苯丙氨酸。根据一个实施方案，肽在N-端不包含一连串(例如2个或多个)苯丙氨酸。本发明的肽可以是对称的或非对称的。优选地，肽是无环的。肽可以是直链的即线性的或支化的。一般来说，本文中所使用的术语“肽”是指通过肽键连接在一起的多个氨基酸残基。肽与多肽和蛋白质可以互换使用并具有相同的含义。根据本发明的一个实施方案，肽包含选自RRRFRFFFRFRRR、HHHFRFFFRFRRR、KKFPffRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR、RRRFRFRFRFRRR、RRRFRFPFRFRRR、RRFRRFFFRRFRR、RRRRFFFRRRR、RRRRFRFRRRR、RRRRFPFRRRR、RRFRRRFRRFR、RRFRRRFRRFG、RRFGRRFRRFG、RRFRRFRRRFG, RRFRRFRRRFR, FRRRRFFFRFRRR, RRRRRFFFRRRRF, FFFFRRRRRFRRR,RRRRFFFFFRRRR、FRRRRFFFRRRRF、RRRYRYYYRYRRR、RRRARAAARARRR、RRRFRRRRRFFFF、RRRFFFFFFFRRR和RRRFRFFFRFRRR-半胱胺其中之一的氨基酸序列。肽基本上可以由这些氨基酸序列组成。根据本发明的一个实施方案，肽包含选自RRRFRFFFRFRRR (NP432)、FRRRRFFFRFRRR (NP490)、RRRRFFFFFRRRR (NP493)和 RRRFRRRRRFFFF (NP497)中的一个氨基酸序列。根据本发明的第二个方面，肽包含疏水性氨基酸和阳离子氨基酸的混合物。特别地，疏水性氨基酸选自甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸和苏氨酸。该实施方案的肽通常包含精氨酸但不一定包含苯丙氨酸。
代表性地，疏水性氨基酸选自苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸和甘氨酸。特别地，阳离子氨基酸选自鸟氨酸、组氨酸、精氨酸和赖氨酸。代表性地，阳离子氨基酸选自精氨酸和赖氨酸。根据一个实施方案，肽包含赖氨酸、苯丙氨酸和精氨酸。根据进一步的实施方案，肽包含赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和甘氨酸。尽管本发明的肽通常不包含谷氨酰胺，但一些这样的肽可能显示活性。该肽可以包含一个或两个谷氨酰胺。根据一个实施方案，上述的肽可以由指定的氨基酸与0、1或2个替代物组成。通常地，本发明的肽由指定的氨基酸组成。供选择地，本发明的该实施方案的肽可以包含上文详述的替代物。第二个实施方案的肽可以包含选自KKPRRKPRRPKRKK(NP449)和KKFPWRLRLRYGRR(NP445)的氨基酸序列。本发明的肽通常为合成的肽。肽可以是分离的、纯化的肽或其变体，所述肽可以例如通过固相肽合成法、通过酶催化肽合成或借助重组DNA技术在体外合成。为了确定对哺乳动物细胞具有很少的或不具有不希望的毒性的活性肽，可以制备单个肽或肽库，可以筛选单个肽或来自肽库的肽的抗微生物活性和毒性，包括但不限于，抗真菌、抗细菌、抗病毒、抗原生动物、抗寄生虫活性和毒性。本发明的肽能够以不同的形式存在，例如游离酸、游离碱、酯和其它前药、盐和互变异构体，本发明包括化合物的所有变体形式。因此，本发明包含肽的盐或前药或本发明的肽变体。组合物根据本发明的另一方面，提供了一种组合物，所述组合物包含如上所述的一种或多种肽，和一种或多种辅助剂或赋形剂。根据一个实施方案，组合物可以包含本发明的两种或多种肽。优选地，组合物包含本发明的一种、两种或三种肽。本发明的药剂可以以药学上可接受的盐的形式给予。可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常地，可以通过将这些化合物的游离酸或游离碱形式与化学计量的合适的在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中的碱或酸反应来制备这样的盐；通常地，优选非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适的盐的列表见于Remington' s Pharmaceutical Sciences, 17thed. , Mack Publishing Company, Easton, Pa. , US, 1985, p. 1418,通过引用的方式将其公开的内容并入本文中；同样可见于Stahl等人，Eds, “Handbook ofPharmaceutical SaltsProperties Selection and Use”, Verlag HelveticaChimica Acta and Wiley-VC H, 2002。本文使用短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适合用于与人类或有些情况可能是动物的组织相接触的那些化合物、材料、组合物和/或剂型，它们没有过度的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。因此，本发明包括所公开的化合物的药学上可接受的盐，其中通过制备其酸式盐或碱式盐对母体化合物进行修饰，所述酸式盐或碱式盐为例如由如无机或有机酸或碱形成的常规无毒盐或季铵盐。这种酸加成盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环 戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和i^一烷酸盐。碱式盐包括铵盐，碱金属盐如钠和钾盐，碱土金属盐如钙和镁盐，与有机碱成的盐如二环己基胺盐，N-甲基-D-葡糖胺以及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等成的盐。另外，含氮的碱性基团可以被试剂季铵化，所述试剂诸如低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和鹏化物；_■经基硫酸盐如_■甲基、_■乙基、_■丁基和_■戍基硫酸盐；长链齒化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基齒化物如苄基和苯乙基溴化物以及其它。本发明的肽或肽变体的羧基盐可以通过使肽与一当量或更多当量的所需的碱相接触的常见方法制备，所述碱例如金属氢氧化物碱如氢氧化钠；金属碳酸盐或碳酸氢盐如碳酸钠或碳酸氢钠；或者胺碱如三乙胺、三乙醇胺等。本发明的肽或肽变体的氨基的N-酰基衍生物可以通过使用N-酰基保护的氨基酸作最后的缩合来制备，或者通过酰化保护的或未保护的氨基酸来制备。O-酰基衍生物可以通过例如肽或肽树脂游离羟基的酰化来制备。两种酰化都可以使用标准酰化试剂例如酰基卤化物、酸酐、酰基咪唑等来进行。本发明包括所述肽的活性药物品种的前药，例如其中一个或多个官能团被保护或衍生化，但是可以在体内转化成所述官能团，如羧酸酯在体内可转化成游离酸的情况，或保护的胺可转化为游离氨基的情况。本文中使用的术语“前药”代表特定的结构，所述特定的结构在体内例如通过在血液中水解而快速转化成母体结构。在T. Higuchi和V.Stella,Pro-drugs asNovel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. SymposiumSeries, Edward B. Roche, ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design, AmericanPharmaceuticalAssociation and Pergamon Press, 1987;H Bundgaardj ed, Design ofProdrugsj Elsevier, 1985;以及 Judkins 等人.Synthetic Communications, 26 (23)，4351-4367 (1996)中提供了深入的讨论，均通过引用的方式并入本文中。因此前药包括具有已转化成其可逆衍生物的官能团的药物。代表性地，所述前药通过水解作用转化为活性药物。前药也包括通过氧化或还原反应可转化为活性药物的化合物。可提及下列作为实例氧化活化、-N-和O-脱烷基化、氧化脱氨基、N-氧化、环氧化、还原活化、偶氮还原、亚砜还原、二硫化物还原、生物还原烷基化和硝基还原。也提及作为前药的代谢活化的是核苷酸活化、磷酸化活化和脱羧活化。保护基的使用在"ProtectiveGroups in Organic Chemistry", edited by JffF McOmie, Plenum Press (1973),和"Protective Groups in OrganicSynthesis^,2ndedition, T W Greene&P G M ffutz, Wiley-Interscience (1991)中充分描述。因此，本领域技术人员将会理解，尽管所述肽的保护的衍生物本身可能不具有药理活性，但是可以通过例如非肠道或口服给药，然后在体内代谢形成药理活性的化合物。因此这些衍生物是“前药”的实例。所述化合物的任意单位(AU)的前药包括在本发明的范围内。本发明的组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂、辅助剂或稀释 齐U。本文使用短语“药学上可接受的”是指那些在合理的医学判断范围内，适合用于与人类或有些情况可能是动物的组织相接触的化合物、材料、组合物和/或剂型，它们没有过度的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。当本发明的治疗肽制备成用于口服给药时，它们通常与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相结合形成药物制剂或单位剂型。对于口服给药，肽可以以粉末、颗粒形态、溶液、悬浮液、乳状液形式存在或存在于天然或合成聚合物或树脂中以从口香糖中摄取活性成分。活性肽也可以以大丸剂、药糖剂或糊剂存在。本发明的口服给予的治疗肽也可以被制备用于缓释，例如可以将肽包衣、微囊化或者置于持续递送装置中。在这些制剂中的总活性成分包括以制剂重量计的0. Γ99. 9%。因此，包含本发明的治疗肽的一种或多种合适的单位剂型可以通过各种途径给予，所述途径包括口服、肠胃外(包括皮下、静脉内、肌内和腹膜内)、直肠、皮肤、经皮、胸内、肺内、粘膜、眼内和鼻内(呼吸)途径。该治疗肽还可以被制成脂质制剂或者用于缓释(例如，使用微胶囊技术，参见WO 94/07529和第4，962，091号美国专利，通过弓I用的方式并入本文中)。适当地，该制剂可以方便地以分散的单位剂型提供，并可以通过制药领域熟知的任何方法制备。这些方法可以包括将治疗剂与液体载体、固体基质、半固体载体、微细的固体载体或其组合混合的步骤，然后若有必要，将产品引入或成形为所需的递送系统。含有本发明的治疗肽的药物制剂可以通过本领域已知的步骤使用熟知的和容易获得的成分制备。例如，肽可以与常见赋形剂、稀释剂或载体一起配制并制成片剂、胶囊剂、溶液剂、混悬剂、粉剂、气雾剂等。适合用于这样的制剂的赋形剂、稀释剂和载体的实例包括缓冲剂以及填充剂和填料如淀粉、纤维素、糖类、甘露醇和含硅的衍生物。也可以包括粘合剂如羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和其它纤维素衍生物，海藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮。可以包括润湿剂如甘油，崩解剂如碳酸钙和碳酸氢钠。还可以包括用于减速溶解的试剂例如石蜡。还可以包括吸收促进剂如季铵类化合物。可以包括表面活性剂如十六醇和单硬脂酸甘油酯。可以加入吸附载体如高岭土和膨润土。还可以包括润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和硬脂酸镁、和固体聚乙二醇。还可以加入防腐剂。本发明的组合物还可以含有增稠剂如纤维素和/或纤维素衍生物。它们还可以包含树胶如黄原胶、瓜尔豆胶或碳胶(carbo gum)或阿拉伯胶,或供选择地,聚乙二醇、膨润土和蒙脱土等等。
例如，含有本发明的肽的片剂或囊片可以包括缓冲剂如碳酸钙、氧化镁和碳酸镁。合适的缓冲剂还可以包括醋酸及盐、柠檬酸及盐、硼酸及盐和磷酸及盐。囊片和片剂还可以包括非活性成分如纤维素、预胶化淀粉、二氧化硅、羟丙甲基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、淀粉、滑石粉、二氧化钛、苯甲酸、柠檬酸、玉米淀粉、矿物油、聚丙二醇、磷酸钠、硬脂酸锌等。含有至少一种本发明的肽的硬胶囊或软胶囊可以含有非活性成分例如明胶、微晶纤维素、十二烷基硫酸钠、淀粉、滑石粉和二氧化钛等，以及液体载体例如聚乙二醇(PEG)和植物油。此外，含有本发明的一种或多种肽的肠衣囊片或片剂被设计成在胃中抗崩解并在更加中性至碱性的十二指肠的碱性环境中溶解。本发明的治疗肽还可以被配制成便于口服给予的酏剂或溶液剂，或配制成适合用于肠胃外给予的溶液剂，所述肠胃外给予例如通过肌内、皮下、腹膜内或静脉内途径进行。本发明的治疗肽的药物制剂也可以采用水溶液或无水溶液或分散体的形式，或供选择地，采用乳状液或悬浮液或软膏的形式。因此，治疗肽可以被制成用于肠胃外给药(如通过注射，例如团注或连续输注)，并可以以单位剂型存在于安瓿、预充注射器、小容量输注容器或多剂量容器中。如以上所记·录，可以加入防腐剂以帮助维持剂型的保质期。活性肽和其它成分可以在油性或水性介质中形成悬浮液、溶液或乳状液，并可以含有配方剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。供选择地，活性肽和其它成分可以为粉末的形式，通过无菌固体的无菌分离获得或通过从溶液中冻干获得以在使用前与合适的介质如无菌、无热原的水组合。如果必要，可以加入辅助剂，所述辅助剂选自抗氧化剂、表面活性剂、其它防腐剂、成膜剂、角质软化剂或粉刺消除剂(comedolytic agent)、香料、调味剂和着色剂。可以加入抗氧化剂如叔丁基氢醌、丁基羟基茴香醚、丁羟甲苯和[α ]_生育酚及其衍生物。这些制剂可以含有本领域熟知的药学上可接受的载体、赋形剂和辅助剂。例如，可能使用一种或多种从生理学角度可接受的有机溶剂来制备溶液剂，所述有机溶剂选自，除水之外的溶剂，例如丙酮、醋酸、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜、乙二醇醚如商品名为“Dowanol”的产品、聚二醇和聚乙二醇、短链酸的C1-C4烷基酯、乳酸乙酯或乳酸异丙酯、脂肪酸甘油三酯如商品名为“Miglyol”的产品、豆蘧酸异丙酯(isopropyl mytrisate),动物、矿物和植物油以及聚硅氧烷。优选地，组合物为本发明的治疗肽的药物制剂的形式，也可以采用包含肽的溶剂或稀释剂的形式。溶剂或稀释剂可以包括酸溶液，二甲基砜、N-(2-巯丙酰基)甘氨酸、2-n-壬基-1，3- 二氧戊环和乙醇。优选溶剂/稀释剂为酸性溶剂，例如，乙酸、柠檬酸、硼酸、乳酸、丙酸、磷酸、苯甲酸、丁酸、苹果酸、丙二酸、草酸、琥珀酸或酒石酸。本发明的药物制剂可以包括药学上可接受的载体、稀释剂、增溶剂或乳化剂和本领域中可供使用的该类型的盐作为可选择成分。这些物质的实例包括生理盐溶液如生理缓冲盐溶液和水。在本发明的药物制剂中有用的载体和/或稀释剂的特定非限定性实例包括水和生理上可接受的缓冲盐溶液如磷酸盐缓冲盐溶液pH7. 0-8. O。更优选地，溶剂为醋酸溶液。溶剂，例如醋酸溶液，可以以少于1%、0. 5%、0. 25%、
0.1%、0. 05%或0. 01%的酸浓度，例如醋酸的浓度存在于组合物中。本发明的组合物可以包含一种或多种另外的抗微生物剂。特别地，本发明的组合物可以包含一种或多种另外的抗细菌剂。
也可以考虑包括一种或多种本发明的肽和一种或多种其它抗微生物剂，特别是一种或多种其它抗细菌剂的组合产品。本发明的组合物可以包含一种或多种半胱胺(NM001)、多聚精氨酸和多聚赖氨酸，如10至20kDa的聚-L-赖氨酸氢溴酸盐(NP108)、15至30kDa的聚-L-赖氨酸盐酸盐(NPlOl)和5至15kDa的聚-L-精氨酸盐酸盐(NP121)此外，所述肽非常适合配制成缓释剂型等。可以这样构造制剂以使其可能在一定的时期内例如在肠道或呼吸道的特定部位释放活性肽。可以例如由聚合物，如聚交酯-乙醇酸酯、脂质体、微乳液、微粒、纳米粒或蜡制备包衣、包膜和保护基质。这些包衣、包膜和保护基质对于包被留置装置，如支架、导管、腹膜透析管、引流装置等是有用的。对于局部给予，活性剂可以按照本领域已知的用于直接施用于目标部位的方式进行配制。主要适用于局部施用的形式采用例如乳膏剂、乳剂(milk)、凝胶剂、粉剂、分散体或微乳剂、在较大或较小程度上增稠的洗剂、浸溃垫(impregnated pad)、软膏剂或药棒(sticks)、气雾剂制剂(如喷雾剂或泡沫剂)、皂、清洁剂、洗剂或皂块的形式。用于此目的的其它常规形式包括伤口敷料、涂层绷带或其它聚合物遮盖物、软膏剂、乳膏剂、洗剂、糊剂、 凝胶剂、喷雾剂和气雾剂。因此，本发明的治疗肽可以通过贴剂或绷带递送用于皮肤给予。供选择地，肽可以被配制成粘合性聚合物例如聚丙烯酸酯或丙烯酸酯/醋酸乙烯酯共聚物的一部分。对于长期应用，可能需要使用多微孔的和/或透气的衬垫层压物，从而最小化皮肤的水合作用或浸溃作用。衬垫层可以是任何将提供所需保护和支持功能的适当的厚度。合适的厚度通常为约10至约200微米。用于局部给予的药物制剂可以包含例如生理上可接受的缓冲盐溶液，所述生理上可接受的缓冲盐溶液含有约O. 001mg/ml至约100mg/ml,例如O. lmg/ml至10mg/ml的特定用于所治疗的适应症或疾病的一种或多种本发明的肽。可以例如使用水性或油性基质并加入合适的增稠剂和/或胶凝剂来配制软膏剂和乳膏剂。用水性或油性基质配制洗剂，所述洗剂通常还包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。也可以通过电离子透入疗法如在第4，140，122、4，383，529或4，051，842号美国专利中所公开的来递送活性肽，所述专利通过引用的方式并入本文中。存在于局部制剂中的本发明的治疗剂的重量百分比将取决于多种因素，但通常为以制剂总重量计O. 01%至95%，代表性地，以重量计O. 1-85%。可以使用一种或多种治疗肽在水性或非水性基质中配制滴剂，如滴眼剂或滴鼻齐 ，所述滴眼剂或滴鼻剂还包括一种或多种分散剂、增溶剂或悬浮剂。液体喷雾可以被泵送或方便地由加压的包装递送。可以通过简单的加盖滴眼管的瓶、通过适合逐滴递送液体内容物的塑料瓶或通过特定形状的闭合来递送滴剂。治疗肽可以进一步被配制用于口腔或咽喉局部给予。例如，活性成分可以被配制成锭剂，所述锭剂进一步包含调味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；糖果锭剂，所述糖果锭剂包含在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的组合物；漱口剂，所述漱口剂包含在合适的液体载体中的本发明的组合物。本发明的肽也可以给予至呼吸道。因此，本发明还提供了用于本发明的方法的气雾剂药物制剂和剂型。通常，这样的剂型包含一定量的可有效治疗或预防特定感染、适应症或疾病的临床症状的本发明的至少一种药剂。依照本发明的方法治疗的感染、适应症或疾病的一种或多种症状的任何统计上显著的减轻，都被认作在本发明的范围内对这种感染、适应症或疾病的治疗。
供选择地，对于吸入或吹入给予，组合物可以采用干粉的形式，例如治疗剂与合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。粉末组合物可以存在于单位剂型中，例如在胶囊或药筒中，或如明胶或罩板包装，其中可以借助吸入器、吹入器或计量吸入器通过所述单位剂型给予干粉(参见，例如公开于 Newinan, S. P. in Aerosols and the Lung, Clarke, S.ff.和 Davia, D. eds. , pp. 197-224，Butterworths, London, England, 1984 中的加压计量吸入器(MDI)和干粉吸入器)。当以气雾剂或吸入形式给药时，本发明的治疗性肽也可以以水溶液给药。因此，也可以包含其它气雾剂药物制剂，例如，含有约O. 00lmg/ml至约100mg/ml的一种或多种特定用于所要治疗的适应症或疾病的本发明的肽的生理上可接受的缓冲盐溶液。以非溶解或悬浮于液体中的极细分散的固体肽或核酸颗粒形式的干气雾剂在本发明的实施中也是有用的。本发明的肽可以被配制成扑粉并包含平均粒径为约I至约5 μ m,供选择地，2至3 μ m的极细分散的颗粒。可以使用本领域熟知的技术通过粉化和筛滤来制备极细分散的颗粒。颗粒可以通过吸入预定量的极细分散的物质来给予，所述极细分散的物质可以为粉末形式。 应当理解在各个剂型的单个气雾剂剂量中含有的活性成分或成分的单位含量本身不需要构成治疗特定的感染、适应症或疾病的有效量，因为所需的有效量可以通过给予多个剂量单位来达到。此外，可以使用少于在剂型中的剂量单独地或以一系列的给药来实现有效量。对于通过吸入给药于上呼吸道(鼻)或下呼吸道，可以方便地由喷雾器或加压包或其它递送气雾喷雾剂的便利装置递送本发明的治疗肽。加压包可以包括合适的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压喷雾器的情况下，可以通过提供阀门来确定剂量单位以递送计量的量。喷雾器包括，但不限于，在第4，624，251,3, 703，173,3, 561，444和4，635，627号美国专利中描述的那些，其均通过引用的方式并入本文中。本文公开的气雾剂递送系统的类型可以从很多商业来源获得，包括 Fisons Corporation(Bedford, Mass.), Schering Corp. (Kenilworth, NJ)和 AmericanPharmoseal Co. (Valencia, CA)。对于鼻内给予,还可以通过滴鼻剂、液体喷雾剂,例如通过塑料瓶喷雾器或计量吸入器给予治疗剂。典型的喷雾器是Mistometer (Wintrop)和Medihaler(Riker)。此外，在所述情况或一些其它情况下，活性成分还可以与其它治疗剂，例如镇痛药、抗炎药、抗组胺药、支气管扩张药等一起联合使用。抗微牛物用涂根据本发明的另一方面，提供了上述肽用于治疗或预防。根据本发明的又一方面，提供了上述肽用于治疗或预防微生物感染或病症。通常对本发明的肽进行包装并提供用于治疗或预防微生物感染或病症。根据本发明的另一方面，提供了治疗或预防微生物感染或病症的方法，所述方法包括将本发明的肽给予需要的患者的步骤。本发明的肽可特别用作抗微生物肽，例如抗细菌、真菌、酵母菌、寄生虫、原生动物和病毒。本文可以使用术语“抗微生物肽”定义任何具有杀微生物和/或抑制微生物活性的肽，并且非唯一地包括所述的任何具有抗细菌、抗真菌、抗霉菌、抗寄生虫、抗原生动物、抗病毒、抗传染、抗感染和/或杀菌、杀操、杀变形虫、杀微生物、杀细菌、杀真菌、杀寄生虫、杀原生动物、杀原虫性质的肽。
“微生物感染”是指由细菌、寄生虫、原生动物、病毒或真菌病原体引起的感染。“病原体”通常被定义为任何引发疾病的生物体。特别地，本发明的肽是用作抗细菌的肽。因此，本发明进一步提供了用作药物的根据本发明所述的肽。本发明的肽在体内、体外和离体条件下均可作为抗微生物剂应用。细菌性病原体可以来自选自以下的细菌物种葡萄球菌属(Staphylococcusspp.)，如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis);肠球菌属(Enterococcus spp.)，如类肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)；酿胺链球菌(Streptococcus pyogenes)；李斯特菌属(Listeria spp.);假单胞菌属(Pseudomonas spp.)，如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa);分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)，如结核分枝杆 菌(Mycobacteriumtuberculosis);肠杆菌属(Enterobacter spp.);克雷伯氏菌属(Klebsiellaspp.)，如肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia);弯曲杆菌属(Campylobacter spp.);沙门氏菌属(Salmonella spp.);链球菌属(Streptococcusspp.)，如 A 或 B 群链球菌(Streptococcus Group A or B)、肺炎链球菌(Streptoccocuspneumoniae);寡养单胞菌属(Stenotrophomonasspp.)、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia);螺杆菌属(Helicobacter spp.)，如幽门螺杆菌(Helicobacter pylori);奈瑟氏菌属(Neisseria spp.)，如淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhea)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis);伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi);志贺氏菌属(Shigella spp.)，如弗氏志贺菌(Shigella fIexneri)；大肠杆菌(Escherichia coli);嗜血杆菌属(Haemophilus spp.)，如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae);衣原体属(Chlamydia spp.)，如沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、婴I鶴衣原体(Chlamydia psittaci)；土拉弗朗西斯菌(Francisella fularensis);芽孢杆菌属(Bacillus spp.)，如炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis);梭状芽胞杆菌属(Clostridia spp.)，如肉毒棱状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、艰难梭菌(Clostridium difficile);耶尔森氏菌属(Yersinia spp.)，如鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)；密螺旋体属(Treponema spp.);伯克霍尔德菌属(Burkholderia spp.)，如鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei)、洋葱伯克霍尔德菌(B. cepacia)、洋葱伯克霍尔德菌复合体(B. cepacia complex)和类鼻疽伯克霍尔德菌(B. pseudomallei)；不动杆菌属(Acinetobacter spp.)，如鲍曼不动杆菌(A. baumanii)和醋酸妈不动杆菌(A. calcoaceticus);无色杆菌属(Achromobacter spp.)，氧化木糖无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)。细菌性病原体可以是革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。革兰氏阴性细菌可以选自假单胞菌属(特别是铜绿假单胞_;伯克霍尔德菌属(特别是洋葱伯克霍尔德不动杆菌属，如鲍曼不动杆菌和醋酸钙不动杆菌；链球菌属，如A或B群链球菌、肺炎链球菌；寡养单胞菌属，嗜麦芽寡养单胞菌和无色杆菌属，如氧化木糖无色杆菌。革兰氏阳性细菌可以选自葡萄球菌属(特别是金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌)；大肠杆菌；梭状芽胞杆菌属，如肉毒棱状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌；和肠球菌属，如粪肠球菌、屎肠球菌。
细菌性病原体可以选自葡萄球菌属(特别是金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌)；假单胞菌属(特别是铜绿假单胞菌)；伯克霍尔德菌属(特别是洋葱伯克霍尔德菌)；大肠杆菌；不动杆菌属，如鲍曼不动杆菌和醋酸钙不动杆菌；梭状芽胞杆菌属，如肉毒棱状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌；肠球菌属，如粪肠球菌、屎肠球菌；链球菌属，如A或B群链球菌、肺炎链球菌；寡养单胞菌属，嗜麦芽寡养单胞菌和无色杆菌属，如氧化木糖无色杆菌。细菌性病原体可以选自葡萄球菌属(特别是金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌)和假单胞菌属(特别是铜绿假单胞菌)。抗微生物的疾病或病症/感染可以选自疮、疖、蜂窝组织炎、脓疱病、医院感染、菌血症、肺炎、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎、脓肿、囊胞性纤维症(特别是囊胞性纤维症患者的肺部感染)、胃肠道感染、泌尿生殖器感染、败血症、咽炎、坏死性筋膜炎、急性肾小球肾炎、中耳炎、创伤、炭疽、脑炎、白喉、气性坏疽、肉毒中毒和破伤风。供选择地，本发明的肽可以用于治疗或缓解疾病或病症，所述疾病或病症选自淋病、脑膜炎、肺炎、中耳炎、骨髓炎、囊胞性纤维症(特别是囊胞性纤维症患者的肺部感染)、 泌尿生殖器感染、腹膜炎、结膜炎、败血症、性病、菌血症、医院感染、痢疾、胃肠道感染、伤寒症、肺鼠疫、创伤、霍乱、肾脏感染、类鼻疽、结膜炎、百日咳、兔热病、布鲁氏菌病、军团病、消化性溃疡、斑疹伤寒症、咽炎。所要治疗的疾病或病症可以是由机会性细菌感染促成或导致的，包括选自尿路感染、呼吸道感染、皮炎、软组织感染、菌血症、骨和关节感染、胃肠道感染和在严重烧伤、癌症、囊胞性纤维症或AIDS患者中的全身性细菌感染的疾病或病症。本发明的肽对于革兰氏阳性微生物病原体，特别是细菌性病原体的最小抑菌浓度(MIC)可为32 μ g/ml或更低。通常肽对于革兰氏阳性微生物病原体的MIC为20 μ g/ml或更低，代表性地，16 μ g/ml或更低，适宜地，10 μ g/ml或更低。优选地，本发明的肽对于革兰氏阳性微生物病原体，特别是革兰氏阳性细菌性病原体的MIC为约8 μ g/ml。本发明的肽对于革兰氏阴性微生物病原体，特别是细菌性病原体的最小抑菌浓度(MIC)可为70 μ g/ml或更低。通常肽对于革兰氏阴性微生物病原体的MIC为50 μ g/ml或更低，代表性地，40 μ g/ml或更低，适宜地，30 μ g/ml或更低。优选地，本发明的肽对于革兰氏阴性微生物病原体，特别是革兰氏阴性细菌性病原体的MIC低于30 μ g/ml。通常在pH约为7下测量MIC。本发明的肽对于革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌性病原体的最小杀菌浓度(MBC)可为250 μ g/ml或更低。通常肽对于革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌性病原体的MIC为125 μ g/ml或更低,代表性地，100 μ g/ml或更低,适宜地,60 μ g/ml或更低。优选地，本发明的肽对于革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌性病原体的MIC为低于40 μ g/ml。病毒性病原体可以来源于选自以下的病毒人类免疫缺陷病毒(HIV I型和2型)、人类T细胞白血病病毒(HTLV1型和2型)、埃博拉病毒、人乳头瘤病毒(例如HPV-2、HPV-5、HPV-8、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-52、HPV-54 和 HPV-56)、乳头多瘤空泡病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、疱疫病毒、腺病毒、EB病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒、天花病毒，轮状病毒或SARS冠状病毒。寄生虫病原体可以来源于选自以下的寄生虫病原体椎体虫属(Trypanosomaspp.)(克氏维虫(Trypanosoma cruzi)、布氏维虫(Trypansosoma brucei))、利什曼原虫属(Leishmania spp.)、贾第虫属(Giardia spp.)、毛滴虫属(Trichomonas spp.)、内阿米巴属(Entamoebaspp.)、纳氏虫属(Naegleria spp.)、棘阿米巴属(Acanthamoebaspp.)、血吸虫属(Schistosoma spp.)、症原虫属(Plasmodium spp.)、隐孢子虫属(Crytosporidium spp.)、等抱子球虫属(Isospora spp.)、肠袋虫属(Balantidium spp.)、罗阿丝虫(Loa Loa)、蛔虫(Ascaris Iumbricoides)、犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)、弓形虫属(Toxoplasma ssp.)如鼠弓形虫(Toxoplasma gondii)。真菌病原体可以来源于下列属的真菌病原体念珠菌属(Candida spp.)(如白色念珠菌(C. albicans))、表皮癣菌属(Epidermophyton spp.)、外瓶霉属(Exophiala spp.)、小孢子菌属(Microsporum spp.)、毛癣菌属(Trichophyton spp.)(如红色毛癣菌(T. rubrum)和指间毛癣菌(T. interdigitale))、癣属(Tinea spp.)、曲霉菌属(Aspergillus spp.)、芽生菌属(Blastomyces spp.)、芽生裂殖菌属(Blastoschizomyces spp.)、球抱子菌属(Coccidioides spp.)、隐球菌属(Cryptococcus spp.)、组织胞衆菌属(Histoplasmaspp.)、副球抱子菌属(Paracoccidiomyces spp.)、抱子丝菌属(Sporothrix spp.)、犁头霉属(Absidia spp. )、Cladophialophora 属(Cladophialophora spp.)、产色芽生菌属(Fonsecaea spp.)、瓶霉菌属(Phialophora spp. )、Lacazia 属(Lacaziaspp.)、节图霉属(Arthrographis spp.)、支顶孢属(Acremonium spp.)、马杜拉放线菌属·(Actinomadura spp.)、鱗质霉属(Apophysomyces spp.)、伊蒙菌属(Emmonsia spp.)、娃类霉菌属(Basidiobolus spp.)、白僵菌属(Beauveria spp.)、金抱子菌属(Chrysosporiumspp.)、耳霉属(Conidiobolusspp.)、小克银汉霉属(Cunninghamella spp.)、镰刀菌属(Fusarium spp.)、地丝菌属(Geotrichum spp.)、粘束抱霉(Graphium spp.)、小球腔菌属(Leptosphaeria spp.)、马拉色氏霉菌属(Malassezia spp.)、毛霉菌属(Mucorspp.)、新龟甲属(Neotestudina spp.)、诺卡氏菌属(Nocardia spp.)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsisspp.)、拟青霉属(Paecilomyces spp.)、莖点霉属(Phoma spp.)、毛结节菌属(Piedraiaspp.)、肺囊虫属(Pneumocystis spp.)、假霉样真菌属(Pseudallescheria spp.)、棘壳抱属(Pyrenochaeta spp.)、根毛霉菌属(Rhizomucor spp.)、根霉菌属(Rhizopusspp.)、红酵母属(Rhodotorula spp.)、酵母菌属(Saccharomyces spp.)、丝抱菌属(Scedosporium spp.)、帝霉属(Scopulariopsis spp.)、掷抱酵母属(Sporobolomycesspp.)、共头霉属(Syncephalastrum spp.)、木霉属(Trichoderma spp.)、毛抱子菌属(Trichosporon spp.)、细基格孢属(Ulocladium spp.)、黑粉菌属(Ustilago spp.)、轮枝抱属(Verticillium spp.)、万吉拉菌属(Wangiella spp.)。微生物感染可以是全身的、局部的、皮下的、皮肤的或粘膜的真菌感染。真菌感染可以分类为全身性的，指该感染是深层的并影响内部器官或血液，或局部的(皮肤寄生的)，指该感染是表面的并发生在皮肤上。此外，酵母菌感染可以影响身体的黏膜。酵母菌感染也可以是全身性的(例如念珠菌血症(candidaemia)和其它经常致命的病症)。皮肤上的真菌感染通常用乳膏剂或软膏剂(局部抗真菌药)治疗。然而，在用乳膏剂或软膏剂治疗后没有清除的全身性感染、酵母菌感染或局部感染可能需要用全身性抗真菌药(口服或静脉注射)来治疗。例如使用这些药物来治疗普通真菌感染，如发生在皮肤上的癣(金钱癣)或可以发生在咽喉中、阴道中或身体的其他部位中的念珠菌病(酵母菌感染，又称鹅口疮)。全身抗真菌药也用于治疗其它可以影响肺和其它器官的深部真菌感染如组织胞浆菌病、芽生菌病和曲霉菌病。它们有时用于预防或治疗免疫系统变弱的人，如骨髓或器官移植患者和患有HIV-AIDS的人的真菌感染。 虽然局部或皮霉癣菌真菌感染不是死亡或重大疾病的代表性成因，但是因为它们可能治疗昂贵，因此具有普遍性和经济重要性。局部或表面真菌感染可以包括皮肤、组织薄膜(lamina)、角质层、指(趾)甲和头发的感染。皮肤感染是皮肤、指甲和脚趾甲的感染。在本发明优选的方面，真菌感染是甲真菌病。甲真菌病可以由来自，但不限于毛癣菌属的真菌引起，例如所述真菌可以是指(趾)间毛癣菌或 红色毛癣菌。术语“甲真菌病”包括但不限于，远端侧位甲下型、浅表白色型、近端白色甲下型、继发营养不良型、原发营养不良型、甲内型、念珠菌型(例如甲脱离与慢性粘膜皮肤疾病)甲真菌病。已显示甲真菌病作为更严重的临床并发症，如手臂/腿的急性细菌性蜂窝组织炎和其它继发细菌性感染的重大风险因素，因此，本发明包括这些感染的治疗。术语“治疗”涉及本文所述的肽在使患有(传染性)疾病的患者受益方面的效果，包括患者病症的改善或疾病发展的延缓。给予本发明的肽，包括它们的盐，以实现与感染、适应症或疾病相关的至少一种症状的减轻，或与适应症或疾病相关的抗体的量的减少。本发明的肽在治疗或预防，尤其是创伤、溃疡和损伤，例如皮肤创伤如切口或烧伤，以及与其相关的疾病中也可以是有用的。术语“治疗”涉及本文所述的肽在使患有(传染性)疾病的患者受益方面的效果，包括患者病症的改善或疾病发展的延缓。本发明使用的“创伤的治疗”可以包括创伤愈合和相关的情形，以及促进、增加或加速组织愈合的治疗，包括手术后瘢痕形成、烧伤、银屑病，加速组织重建，例如在整容手术和器官移植后。因此，在本发明又一方面提供了本发明的肽涂覆或附着的基质。优选地，基质适合施用于创伤或者向创伤部位递送。优选地，基质允许本发明的肽从基质至创面转移，以实现其抗菌的效果。基质可以是敷料，例如创伤敷料。敷料可以包括纤维材料，或者可以是胶原样材料。本发明的肽也可以用作消毒剂或用在消毒剂中，在这种情况下，本发明的肽或药物组合物可以单独或与其它消毒剂组合涂覆于待处理的表面。本文使用的“待处理表面”可以是本文定义的基质或者医疗装置。另一方面，本发明提供了治疗或预防在受试者中的微生物感染的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的根据本发明的肽。本文所述的肽、组合物或方法可以治疗哺乳动物、鸟类和其它动物。这些哺乳动物和鸟类包括人，狗，猫和家畜，如马、牛、绵羊、山羊、鸡和火鸡等。此外，本发明的肽、组合物或方法也可以治疗植物。当受试者为动物时，本发明的肽可以局部给予或全身给予。特别地，可以将肽施用于动物的肉体或具有指(趾)甲样特征的部位，包括但不限于蹄、爪和脚。本发明的肽通常是无毒的，并且哺乳动物、鸟类、动物和植物通常对其耐受性良好。代表性地，本发明的肽在剂量为2至10mg/kg或以上时，适宜地，在剂量为2至6mg/kg时耐受性良好。例如，发现肽NP432在剂量为约5mg/kg时对小鼠是非致死的。为了获得理想的效果，肽、其变体或其组合可以以单剂量或分剂量给予，例如至少约 O. Olmg/kg 至约 500_750mg/kg,至少约 O. 01mg/kg 至约 300_500mg/kg,至少约 O. lmg/kg至约100_300mg/kg或者至少约lmg/kg至约50_100mg/kg体重，或者至少约lmg/kg至约20mg/kg体重，尽管其它剂量可以提供有益的结果。给药剂量将随着各种因素而变化，包括但不限于所选择的肽及其临床效果、疾病、体重、身体状况、健康状况、哺乳动物的年龄、要实现的是预防还是治疗，以及肽是否经过化学修饰。这些因素可以通过临床医生检查来自临床实验的经验数据和检查临床前动物模型结果或其它本领域可利用的测试系统来容易地确定。根据本发明的治疗剂的给予可以是单剂量、多剂量、连续的或间歇的方式，这取决于例如接受者的生理状况，给药的目的是治疗还是预防，以及专业技术人员已知的其它因素。本发明的肽的给予可以是在预选的时期基本上连续的，或者可以是一系列间隔的剂量。局部和全身给药都考虑在内。为了制备组合物，可以合成肽或以其它方式获得肽，根据需要或期望进行纯化，然 后通常经冻干和稳定化。然后可以调节肽至合适的浓度，并且任选地与其它试剂组合。单位剂量中包含的给定肽的绝对重量可以有很大的变化。例如，可以给予约O. 01至约2g或约O. 01至约500mg的至少一种本发明的肽，或特异性针对特定细胞类型的多种肽。供选择地，单位剂量可以从约O. Olg至约50g,从约O. Olg至约35g,从约O. Ig至约25g,从约O. 5g至约12g,从约O. 5g至约8g,从约O. 5g至约4g或者从约O. 5g至约2g变化。本发明的肽的日剂量也可以变化。这样的日剂量可以，例如，从约O. OOlg/天至约100或50g/天,从约O. Ig/天至约25g/天,从约O. Ig/天至约12g/天,从约O. Ig/天至约5g/天,从约O. Ig/天至约2. 5g/天,从约O. Ig/天至约2g/天,从约O. 5g/天至约8g/天，从约O. 5g/天至约4g/天,从约O. 5g/天至约2g/天,从约O. 5g/天至约Ig/天。协同效应优选地，组合物包含一种或多种与本发明的肽协同作用的抗微生物剂。代表性地，协同效应导致增加的抗微生物效果。通常地，与组合试剂相关的抗微生物性质比两种或多种试剂的累加的抗微生物性质至少大10% ;代表性地，至少大20% ;适宜地，至少大30% ;优选地，比两种或多种试剂的累加的抗微生物性质至少大50%。通常抗微生物剂是抗细菌剂，并且组合物表现协同性的较高的抗微生物效果。协同性的较高的抗细菌效果可以是针对以下菌属中任意一个显著的葡萄球菌属(Staphylococcus spp.),如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis);肠球菌属(Enterococcus spp.),如幾肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)；酿胺链球菌(Streptococcus pyogenes);李斯特菌属(Listeria spp.);假单胞菌属(Pseudomonasspp.),如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa);分枝杆菌属(Mycobacteriumspp.),如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis);肠杆菌属(Enterobacterspp.);克雷伯氏菌属(Klebsiella spp.),如肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumonia)；弯曲杆菌属(Campylobacter spp.);沙门氏菌属(Salmonella spp.);链球菌属(Streptococcus spp.),如 A 或 B 群链球菌(Streptococcus Group A or B)、肺炎链球菌(Streptoccocus pneumoniae);寡养单胞菌属(Stenotrophomonasspp.)、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia);螺杆菌属(Helicobacter spp.),如幽门螺杆菌(Helicobacter pylori );奈瑟氏菌属(Neisseria spp·),如淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhea)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis);伯氏疏螺方定体(Borrelia burgdorferi);志贺氏菌属(Shigella spp.),如弗氏志贺菌(ShigellafIexneri);大肠杆菌(Escherichia coli);嗜血杆菌属(Haemophilus spp.),如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae);衣原体属(Chlamydia spp.),如沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)> 肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、婴鸟踏热衣原体(Chlamydia psittaci); 土拉弗朗西斯菌(Francisella fularensis);芽抱杆菌属(Bacillus spp.)，如炭疽芽抱杆菌(Bacillus anthracis);梭状芽胞杆菌属(Clostridiaspp.),如肉毒棱状芽抱杆菌(Clostridiumbotulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、艰难梭菌(Clostridiumdifficile);耶尔森氏菌属(Yersinia spp.),如鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis);密螺旋体属(Treponema spp.);伯克霍尔德菌属(Burkholderiaspp.),如鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei)、洋葱伯克霍尔德菌(B. cepacia)、洋葱伯克霍尔德菌复合体(B. cepacia complex)和类鼻疽伯克霍尔德菌(B. pseudomallei );不动杆菌属(Acinetobacter spp.),如鲍曼不动杆菌(A. baumanii )和醋酸I丐不动杆菌(A. calcoaceticus);无色杆菌属(Achromobacter spp.)，氧化木糖无色杆 菌(Achromobacter xylosoxidans)。协同效应可以是针对铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌细菌，包括针对包含这些细菌性病原体的细菌生物膜特别显著的。供选择地，协同效应可以是由于与组合试剂有关的出人意料的低毒性而显著的。通常地，与组合试剂有关的毒性比两种或多种试剂的累加的相关毒性至少小10%;代表性地,至少小20% ;适宜地，至少小30% ;优选地，比两种或多种试剂的总和的相关毒性至少小50%。可以通过一种或多种本发明的肽和一种或多种其它抗细菌肽的组合来显示协同效应。根据一个实施方案，抗细菌肽可以为根据下式((X) I (Y) m) η其中I和m是从I至10的整数，例如O至5 ;n是从I至10的整数；X和Y可以是相同的或不同的，是选自疏水性氨基酸和/或阳离子氨基酸的氨基酸。在本发明优选的一个方面，抗细菌肽包含3至200个氨基酸，例如3、4、5、6或7个至100个氨基酸，包括3、4、
5、6或7个至20、25、30、35、40或42个氨基酸。抗细菌肽可以包含100至200个氨基酸，27至100个氨基酸，28至86个氨基酸，7至27个氨基酸或3至14个氨基酸。代表性地，抗细菌肽包含3至15个氨基酸(例如13至15个)，例如3至7个氨基酸。X和Y可以选自苯丙氨酸和精氨酸。X可以是苯丙氨酸，Y可以是精氨酸。根据一个实施方案，提供了包括包含氨基酸序列的肽以及半胱胺(NM001)、多聚精氨酸和多聚赖氨酸中的一种或多种的协同组合物，所述多聚赖氨酸如10至20kDa的聚-L-赖氨酸氢溴酸盐(NP108)，所述氨基酸序列选自RRRFRFFFRFRRR、HHHFRFFFRFRRR、KKFPWRLRLRYGRR、RRRRRFFFRFRRR、RRRFRFRFRFRRR、RRRFRFPFRFRRR、RRFRRFFFRRFRR、RRRRFFFRRRR、RRRRFRFRRRR、RRRRFPFRRRR、RRFRRRFRRFR、RRFRRRFRRFG、RRFGRRFRRFG、RRFRRFRRRFG、RRFRRFRRRFR、FRRRRFFFRFRRR、RRRRRFFFRRRRF、FFFFRRRRRFRRR, RRRRFFFFFRRRR, FRRRRFFFRRRRF, RRRYRYYYRYRRR、RRRARAAARARRR、RRRFRRRRRFFFF、RRRFFFFFFFRRR 和RRRFRFFFRFRRR-半胱胺。根据一个实施方案，组合物包含RRRFRFFFRFRRR (NP432)、RRRRRFFFRFRRR (NP465)、RRRFRFRFRFRRR (NP 466)和 RRRFRFPFRFRRR (NP 467)中的一种，和半胱胺和多聚赖氨酸中的一种，所述多聚赖氨酸如10至20kDa的聚-L-赖氨酸氢溴酸盐(NP108)。根据一个实施方案，组合物包含RRRFRFFFRFRRR (NP432)、FRRRRFFFRFRRR(NP490)、RRRRFFFFFRRRR(NP493)和 RRRFRRRRRFFFF(NP497)中的一种，和半胱胺和多聚赖氨酸中的一种，所述多聚赖氨酸如10至20kDa的聚-L-赖氨酸氢溴酸盐(NP108)。贯穿本申请的说明书和权利要求书，词语“包括(comprise)”和“包含(contain)”以及这些词语的变体，例如“包括(comprising)”和“包括(comprises)”意味着“包括但不限于”，并且不打算排除(和不排除)其它部分、添加剂、组分、整数或步骤。 贯穿本申请的说明书和权利要求书，单数包含了复数，除非上下文另有要求。特别地，当使用不定冠词时，说明书应被理解为考虑了复数以及单数，除非上下文另有要求。与本发明特定的方面、实施方案或实施例共同描述的特征、整数、特性、化合物、化学组成部分或基团将被理解为可适用于本文描述的任何其它方面、实施方案或实施例，除非与之不相容。现将通过实施例仅参照附图来描述本发明，其中图I提供了列举根据本发明的肽对各种革兰氏阳性细菌种(图I)和革兰氏阴性细菌种(图la、lb和Ic)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的表格；图2提供了列举根据本发明的肽对革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物物种的平均最小抑菌浓度(MIC)的表格；图3详细说明了 NP432、NP432和NM001以及NP432和NP108在不同浓度下对铜绿假单胞菌生物膜的MIC ；图4详细说明了 NP445、NP445和NM001以及NP445和NP108在不同浓度下对铜绿假单胞菌生物膜的MIC ；图5详细说明了 NP432和NM001以及NP432和NP108在不同浓度下对金黄色葡萄球菌生物膜的MIC ；图6详细说明了 NP445、NP445和NM001以及NP445和NP108在不同浓度下对金黄色葡萄球菌生物膜的MIC ；图7和图7a提供了详细说明根据本发明的肽对各种抗微生物物种的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的表格；图8详细说明了粘菌素、NP108和NP432在浓度为O至2500 μ g/ml下对铜绿假单胞菌细菌生物膜的MBEC ；图9 详细说明了 NP108-NM001、NP432-NM001 和 NP432-NP108 的组合物在浓度为 O至600 μ g/ml下对铜绿假单胞菌生物膜的MBEC ；

图10详细说明了粘菌素、NP 108和NP432在浓度为O至2500 μ g/ml下对金黄色葡萄球菌细菌生物膜的MBEC ；图11 详细说明了 NP108-NM001、NP432-NM001 和 NP432-NP108 的组合物在浓度为O至600 μ g/ml下对金黄色葡萄球菌生物膜的MBEC。
实施例实施例I37摄氏度下,在单独的96孔微量滴定板中的M-H琼脂(MueI Ier-Hintonagar)中培养铜绿假单胞菌细菌生物膜和金黄色葡萄球菌细菌生物膜21小时。然后将浮游生物细胞和培养基移出，并用PH约为7的磷酸盐缓冲溶液清洗细菌生物膜三次。然后将稀释两倍的在M-H肉汤(Mueller Hintonbroth)中的三种不同的抗微生物剂加入细菌生物膜。在37摄氏度下孵化微量滴定板24小时。然后将培养基转移至新的微量滴定板并在625nm下用微滴定板读数器(BioTek Powerwave, XS, Winooski, USA)测量细菌生物膜的光密度。所测试的抗微生物剂为粘菌素、NP108和NP432。首先，测试抗微生物剂在浓度为 O至2500 μ g/ml的活性，然后测试抗微生物剂在浓度为O至600 μ g/ml的活性。结果总结在图8至11中。这些图证明了本发明的肽(NP432)对铜绿假单胞菌细菌生物膜和金黄色葡萄球菌细菌生物膜的抗微生物效果。所述抗微生物效果与已知的抗微生物剂相当。实施例237摄氏度下，在单独的96孔微量滴定板中的M-H琼脂中培养铜绿假单胞菌细菌生物膜和金黄色葡萄球菌细菌生物膜18小时。然后将浮游生物细胞和培养基移出，并用PH约为7的磷酸盐缓冲溶液清洗细菌生物膜三次。然后将稀释两倍的在M-H肉汤中的三种不同的抗微生物剂加入细菌生物膜。在37摄氏度下孵化微量滴定板24小时。然后将培养基转移至新的微量滴定板并在625nm下用微滴定板读数器(BioTekPowerwave, XS, Winooski, USA)测量细菌生物膜的光密度。所测试的抗微生物剂为单独的NP432、NP432和NMOOl以等浓度的组合、NP432和NP 108以等浓度的组合、单独的NP445、NP445和NMOOl以等浓度的组合、NP445和NP108以等浓度的组合。在浓度为O至lmg/ml下针对铜绿假单胞菌细菌生物膜和金黄色葡萄球菌细菌生物膜对抗微生物剂进行测试。结果总结在图3至6中。这些图证明了本发明的肽(NP432和NP445)单独或与NMOOl和NP108组合对铜绿假单胞菌细菌生物膜和金黄色葡萄球菌细菌生物膜的抗微生物效果。
权利要求
1.一种肽，其中肽的至少75%的氨基酸为精氨酸和苯丙氨酸，至少50%的氨基酸为精氨酸，至少15%的氨基酸为苯丙氨酸。
2.如权利要求I所述的肽，所述肽由精氨酸和苯丙氨酸和O至5个非精氨酸和非苯丙氨酸替代物组成。
3.如权利要求2所述的肽，所述肽包含一个或多个选自赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸和组氨酸的替代物。
4.如权利要求3所述的肽，所述肽由精氨酸、苯丙氨酸和以下氨基酸其中之一组成赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸和组氨酸。
5.如权利要求I所述的肽，所述肽由精氨酸和苯丙氨酸组成。
6.前述任一项权利要求所述的肽，所述肽包含3至200个氨基酸，优选5至50个氨基酸，更优选5至15个氨基酸。
7.如权利要求6所述的肽，所述肽由3至200个氨基酸、优选5至60个氨基酸、更优选5至15个氨基酸组成。
8.前述任一项权利要求所述的肽，所述肽包含选自以下的氨基酸序列RRRFRFFFRFRRR、HHHFRFFFRFRRR、KKFPffRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR 、RRRFRFRFRFRRR、RRRFRFPFRFRRR 、 RRFRRFFFRRFRR、 RRRRFFFRRRR、 RRRRFRFRRRR、 RRRRFPFRRRR、RRFRRRFRRFR、RRFRRRFRRFG、RRFGRRFRRFG、RRFRRFRRRFG、RRFRRFRRRFR 、FRRRRFFFRFRRR、RRRRRFFFRRRRF 、 FFFFRRRRRFRRR 、 RRRRFFFFFRRRR 、 FRRRRFFFRRRRF 、RRRYRYYYRYRRR 、RRRARAAARARRR 、RRRFRRRRRFFFF 、RRRFFFFFFFRRR。
9.一种肽，所述肽包含赖氨酸、苯丙氨酸和精氨酸。
10.一种肽，所述肽包含赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和甘氨酸。
11.权利要求9和10中任一项所述的肽，所述肽包含氨基酸序列KKPRRKPRRPKRKK或KKFPffRLRLRYGRR0
12.前述任一项权利要求所述的肽、或其肽变体，其用作药物。
13.权利要求I至11中任一项所述的肽、或其肽变体或药学上可接受的盐，用于治疗或缓解抗微生物感染或病症。
14.如权利要求13所述的肽，其中所述抗微生物感染或病症是由细菌、寄生虫、原生动物、病毒或真菌病原体引起或导致的。
15.如权利要求14所述的肽，其中所述抗微生物感染或病症是由细菌性病原体引起或导致的。
16.如权利要求15所述的肽，其中所述细菌性病原体是革兰氏阴性细菌。
17.如权利要求16所述的肽，其中所述革兰氏阴性细菌选自假单胞菌属(Pseudomonas spp.)(特别是铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa));伯克霍尔德菌属(Burkholderia spp)(特别是洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia))；不动杆菌属(Acinetobacter spp.),如鲍曼不动杆菌(A. baumanii )和醋酸I丐不动杆菌(A. calcoaceticus);链球菌属(Streptococcus spp.),如 A 或 B 群链球菌(Streptococcus Group A or B)、肺炎链球菌(Streptoccocus pneumoniae);寡养单胞菌属(Stenotrophomonasspp.),嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)和无色杆菌属(Achromobacter spp.),如氧化木糖无色杆菌(Achromobacterxylosoxidans)。
18.如权利要求15所述的肽，其中所述细菌性病原体是革兰氏阳性细菌。
19.如权利要求18所述的肽，其中所述细菌性病原体是选自以下的革兰氏阳性细菌葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)(特别是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis));大肠杆菌(Escherichia coli);梭状芽胞杆菌属(Clostridia spp.),如肉毒棱状芽抱杆菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)> 艰难梭菌(Clostridium difficile)；和肠球菌属(Enterococcusspp.),如幾肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium) ο
20.如权利要求15所述的肽,其中所述细菌性病原体是葡萄球菌属(Staphylococcusspp)或假单胞菌属(Pseudomonas spp)。
21.如权利要求14所述的肽，其中所述抗微生物感染或病症选自疮、疖、蜂窝组织炎、脓疱病、医院感染、菌血症、肺炎、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎、脓肿、囊胞性纤维症、胃肠道感染、泌尿生殖器感染、败血症、咽炎、坏死性筋膜炎、急性肾小球肾炎、中耳炎、创伤、炭疽、脑炎、白喉、气性坏疽、肉毒中毒和破伤风。
22.一种用于治疗、预防或延缓抗微生物感染发展的方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的如权利要求I至10中任一项所述的肽、或其药学上可接受的盐。
23.如权利要求22所述的方法，其中通过局部、口服、肠胃外(包括皮下、静脉内、肌内和腹膜内)、直肠、皮肤、经皮、胸内、肺内、粘膜和鼻内(呼吸)途径给予所述肽或其药学上可接受的盐。
24.一种组合物，所述组合物包含药学上有效量的至少一种如权利要求I至11中任一项所述的肽和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
25.如权利要求24所述的组合物，其中所述组合物包含至少两种如权利要求I至11中任一项所述的肽，其中所述肽是不同的。
26.如权利要求24和25中任一项所述的组合物，所述组合物包含半胱胺和/或多聚赖氨酸。
27.一种基质，在所述基质上附着或涂覆如权利要求I至10中任一项所述的肽或肽变体或如权利要求24至26中任一项所述的组合物。
全文摘要
本发明涉及肽及其在治疗微生物感染，特别是细菌感染中的用途。特别地，本发明涉及肽，其中所述肽的至少75%的氨基酸为精氨酸和苯丙氨酸，至少50%的氨基酸是精氨酸，至少15%的氨基酸为苯丙氨酸。
文档编号A61K38/10GK102906105SQ201180024768
公开日2013年1月30日 申请日期2011年3月30日 优先权日2010年3月31日
发明者D·奥尼尔, D·莫斯, C·查瑞尔 申请人:诺瓦生命科学有限公司