一种低毒的刺五加注射液及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种低毒的刺五加注射液及其制备方法。其中刺五加注射液含有以下活性成分：含总黄酮1.8-5.5mg/ml、紫丁香苷0.13-0.70mg/ml和刺五加苷E0.06-0.34mg/ml，钾离子的数量≤800μg/ml。本发明提供的刺五加注射液钾离子含量低，该制剂的钾离子含量控制由国家标准中≤1000μg/ml，降至800μg/ml(或计为800μg/5mg总黄酮)以下；异常毒性小，安全性高。经过动物实验显示，受试对象耐受浓度由国家标准中的5mg/ml，提高达到18mg/ml。本发明提供的刺五加注射液，异常毒性检验结果优于现有市售产品。
【专利说明】一种低毒的刺五加注射液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及刺五加注射液，具体涉及一种低毒的刺五加注射液。
【背景技术】
[0002] 刺五加为五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim. ) Harms 的干燥根和根茎或茎。具有益气健脾，补肾安神的功效。性辛、微苦，温。刺五加注射液为 刺五加经提取加工制成的灭菌水溶液，功效为平补肝肾，益精壮骨。用于治疗肝肾不足所致 的短暂性脑缺血发作，脑动脉硬化，脑血栓形成，脑栓塞等。亦用于治疗冠心病，心绞痛合并 神经衰弱和更年期综合症等。
[0003] 包括刺五加注射液在内的中药注射剂，作为现代科学技术发展而产生的中药新剂 型，克服了传统中药生物利用度低、起效慢等缺点，逐渐受到广大患者的青睐。然而，临床使 用过程中，中药注射液不良反应的报道日益增多，其安全性也越加受到重视。
[0004] 临床研究表明：静脉滴注含钾离子的药物时，会增加血液中钾离子浓度，能够导致 心脏扩张和无力，甚至导致死亡。钾离子能够减慢心率并且阻止心脏从心房到心室的搏动， 其原因是细胞外的高浓度钾离子减少了心肌纤维的静息膜电位，导致动作电位降低，心脏 收缩无力。如果细胞外的钾离子浓度太高，静息膜电位就会被消除，心肌细胞就不能产生搏 动，从而心脏停止跳动。
[0005] 因此，静脉滴注含钾离子的药物时，钾离子一般浓度不超过0.3%，而就现有中药 注射剂而言，日最大使用剂量一般在IOOml以下，如：血塞通注射液4-16ml、舒血宁注射液 20ml、黄芪注射液20ml、双黄连注射液60ml ;而刺五加注射液20ml规格200ml (含总黄酮 IOOOmg)和刺五加注射液250ml规格500ml (含总黄酮IOOOmg)的日最大使用剂量特殊情 况，为保证人民用药的安全，有必要对刺五加注射液含钾离子的数量进行规定与精确测定。
[0006] 而现有中国专利，如CN201210049755. 1(下面简称2012年专利）公开了一种刺五 加组合物含其制剂及其检测方法，均未提到控制药物中钾离子含量的问题。
[0007] 针对现有刺五加注射液中存在的问题，发明人经过大量的研究，最终提出了本发 明。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供一种低毒的刺五加注射液。
[0009] 本发明的另一目的在于，提供该注射剂的制备方法。本发明提供的一种刺五加注 射液，含有以下活性成分：含总黄酮1. 8-5. 5mg/ml、紫丁香苷0. 13-0. 70mg/ml和刺五加苷 E0. 06-0. 34mg/ml，钾离子的数量彡800 g/ml。优选地，所述刺五加注射液含有以下活性成 分，按现有规格划分：
[0010] 每支 20ml，总黄酮 4. 5-5. 5mg/ml、紫 丁香苷 0? 32-0. 70mg/ml 和刺五加苷 E 0? 15-0. 34mg/ml，钾离子的数量< 800 y g/ml ;
[0011] 每支1001111，含总黄酮2.7-3.311^/1111、紫丁香苷0.19-0.4211^/1111和刺五加苷￡ 0? 09-0. 20mg/ml，钾离子的数量< 500 Ii g/ml ;
[0012]每支250ml，含总黄酮I. 8-2. 2mg/ml、紫丁香苷0? 13-0. 28mg/ml和刺五加苷 E0. 06-0. 14mg/ml，钾离子的数量< 300 u g/ml。
[0013] 进一步优选，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分：
[0014]每支20ml，含总黄酮4. 5-5. 5mg/ml、紫丁香苷0? 32-0. 70mg/ml和刺五加苷E 0? 15-0. 34mg/ml，钾离子的数量< 550 yg/ml ;
[0015] 每支100ml，含总黄酮2. 7-3. 3mg/ml、紫丁香苷0? 19-0. 42mg/ml和刺五加苷E 0? 09-0. 20mg/ml，钾离子的数量< 360 y g/ml ;
[0016]每支250ml，含总黄酮I. 8-2. 2mg/ml、紫丁香苷0? 13-0. 28mg/ml和刺五加苷 E0. 06-0. 14mg/ml，钾离子的数量< 240 u g/ml。
[0017] 更进一步优选，所述刺五加注射液含有以下活性成分，按现有规格划分：
[0018]每支 20ml，总黄酮 5. 14-5. 23mg/ml、紫 丁香苷 0? 36-0. 5mg/ml 和刺五加苷 E 0? 17-0. 25mg/ml，钾离子的数量< 550 y g/ml。
[0019] 本发明提供的一种刺五加注射液的制备方法，该方法包括以下步骤：用水提取刺 五加药材，得到的刺五加水煎膏经过醇沉后，经石硫法处理后，过大孔树脂进行吸附、洗脱， 洗脱液经浓缩后再次醇沉，然后再经过热压及超滤，得到刺五加提取物；经配剂、灌封、灭 菌，即得刺五加注射液。
[0020] 上述方法中：
[0021] 所述刺五加提取物由以下方法制备：
[0022] (1)提取：用6?12体积倍量的水提取刺五加药材2?3次，每次提取1?2小 时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；
[0023] (2)第一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入浓度为 93 %以上的乙醇使得含醇量为74-86 %，充分搅拌，静置6小时以上，过滤，滤液回收乙醇 至无醇味，并浓缩至80°C时相对密度为1. 10?1. 18,得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备 用；
[0024] (3)石硫法处理：将步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均 匀后，进行过滤，待滤液温度40°C?50°C时，用20 %的石灰乳调节pH值至10.0?12.0， 搅拌，再用20%的硫酸调节pH值至5. 0?6. 0,继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至 80°C时相对密度为1. 14?1. 19,得到浓缩膏；
[0025] (4)大孔树脂吸附：取步骤（3)得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含 量为7. 5?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 0?5. 5,搅拌均匀，冷藏12小时 以上；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调pH值2. 0±0. 5,滤液以1. 5?2BV/h流速 上大孔树脂柱，然后以同样的流速用〇. 3?0. 5倍柱体积纯化水冲洗，然后用3?6体积倍 量的50%乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 0?6. 5,将50 %洗脱液浓缩至80°C时相对密 度为1. 13?1. 20,得到浓缩膏，备用；
[0026] (5)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤⑷得到的浓缩膏中加入浓度为93%以上乙 醇使其含醇量为80?86%，充分搅拌，静置12小时以上，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇 味，并浓缩至80°C时相对密度为I. 11?1.20,得刺五加提取物二次醇沉膏；
[0027] (6)热压及超滤：热压及超滤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注 射用水稀释至总黄酮含量为7. 5?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. O?5. 0， 搅拌均匀，115?121°C灭菌30?40分钟，冷藏12小时以上；冷藏后的药液经微孔滤膜过 滤澄清后，调PH值5. 5 ± 0. 5，药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超 滤，滤液浓缩至相对密度为I. 11?1. 20,即得到刺五加提取物。
[0028] 所述刺五加提取物中：
[0029] 所述第一次醇沉，包括以下步骤：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏 加入浓度为93%以上的乙醇使得含醇量为74. 5-75. 5%，充分搅拌，静置6-18小时，过滤， 滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80°C时相对密度为I. 11?1. 15,得到刺五加提取物的一 次醇沉膏。
[0030] 所述石硫法处理包括以下步骤：将步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与 醇沉膏体积8-12倍量的水混合，搅拌均匀后过滤，待滤液温度40°C?50°C时，用20%的石 灰乳调节pH值至10. 5?11. 5,搅拌，再用20%的硫酸调节pH值至5. 1?5. 5,继续搅拌， 静置，滤取上清液并回收浓缩至80°C时相对密度为1. 16?1. 19,得到浓缩膏。
[0031] 所述大孔树脂吸附包括以下步骤：将步骤（3)得到的刺五加浓缩膏，用注射用水 稀释至总黄酮含量为8. 0?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值5. 0?5. 4,搅拌均 匀，冷藏12-14h ;冷藏后的药液经0. 45 y m微孔滤膜过滤澄清后，调pH值2. 0-2. 3,滤液以 I. 5BV/h的流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用0. 3?0. 5倍柱体积纯化水冲洗，然后 用3?5体积倍量的50%乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 3?5. 5,将50%洗脱液浓缩至 相对密度为1. 15?1. 20,得到浓缩膏。
[0032] 所述二次醇沉包括以下步骤：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏加入93% 以上乙醇使得含醇量为84. 5-85. 5%，充分搅拌，静置12-16小时，滤取上清液，滤液回收乙 醇至无醇味，并浓缩至80°C时相对密度为1. 14?1. 16,得刺五加提取物二次醇沉膏。
[0033] 所述热压及超滤包括以下步骤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用 注射用水稀释至总黄酮含量为8. 0?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 2? 4. 8,搅拌均匀，115?121°C灭菌30?40分钟，冷藏12小时，冷藏后的药液经微孔滤膜过 滤澄清后，调PH值5. 2-5. 5,药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超 滤，滤液浓缩至相对密度为1. 15?1. 18,即得到刺五加提取物。
[0034] 优选地，所述刺五加提取物由以下方法制备：
[0035] (1)提取：用8?12体积倍量的水提取刺五加药材2?3次，每次提取1?2小 时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；
[0036] (2)第一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入浓度为 93?95%的乙醇使得含醇量为74. 5-75. 5%，搅拌15min后，静置6?18小时，过滤，滤液 回收乙醇至无醇味，并浓缩至80°C时相对密度为I. 11?1. 15,得到刺五加提取物的一次醇 沉膏，备用；
[0037] (3)石硫法处理：将步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均 匀后，进行过滤，待滤液温度45°C时，用20%的石灰乳调节pH值至10. 5?11. 5,搅拌，再用 20%的硫酸调节pH值至5. 1?5. 5,继续搅拌，静置4?8小时，滤取上清液并回收浓缩至 80°C时相对密度为1. 16?1. 19,得到浓缩膏；
[0038] (4)大孔树脂吸附：取步骤（3)得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含 量为8. O?10. Omg/ml，搅拌均勻后，过滤，滤液调pH值5. O?5. 5,搅拌均勻，冷藏12? 18小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调pH值2. 0-2. 3,滤液以I. 5BV/h流速上大 孔树脂柱，然后以同样的流速用〇. 3?0. 5倍柱体积纯化水冲洗，然后用3?5体积倍量的 50 %乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 3?5. 5,将50 %洗脱液浓缩至80°C时相对密度为 1. 13?1. 20,得到浓缩膏，备用；
[0039] (5)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏中加入浓度为93?95% 乙醇使其含醇量为84?85. 5%，充分搅拌，静置12?16小时，滤取上清液，滤液回收乙醇 至无醇味，并浓缩至80°C时相对密度为1. 14?1. 16,得刺五加提取物二次醇沉膏；
[0040] (6)热压及超滤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至 总黄酮含量为8. O?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 2?4. 8,高温蒸汽灭菌， 冷藏12小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调pH值5. 2?5. 5,药液经微孔滤膜 过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为1. 15?1. 20,即得 到刺五加提取物。
[0041]步骤（3)中，所述大孔树脂的型号为 ADS-F8、ADS-17、HPD750、D101、HPD100、 HPD450、AB-8 或DM130。
[0042] 步骤⑷中，纯化水的pH值为3.O。
[0043] 本发明提供的一种刺五加注射液的制备方法，该方法包括以下步骤：刺五加提取 物用水稀释至总黄酮6. O?10mg/ml，加入活性炭，回流煮沸吸附15min，冷却40-50°C， 0. 45 y m滤膜过滤至澄清，用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，再过滤，收集并合并 滤液，停止超滤，滤液调pH值至5. O?6. 0,药液经0. 22 ii m滤芯精滤，分装，经高温蒸汽灭 菌，冷却，即得。
[0044] 优选地，所述方法包括以下步骤：刺五加提取物用水稀释至总黄酮6. Omg/ml，加 入0. 2%活性炭，回流煮沸吸附15分钟，冷却至40-50°C，经0. 45 y m滤膜过滤至澄清；用1 万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，停止超滤，送检、根据含量稀释至总黄酮 2-511^/1111，用20%氢氧化钠溶液调？11值5.2?5.5 ;药液经0.2211111滤芯精滤，灌装于2〇1111 或250ml、500ml安瓶中，封口；高温蒸汽灭菌，并及时冷却至60°C以下，即得刺五加注射液。
[0045] 上述制备方法中，所用的微孔滤膜的孔径均为0. 45 y m。
[0046] 所述高温蒸汽灭菌是指115?121 °C蒸汽灭菌30?40分钟。
[0047] 本发明提供的刺五加注射液具有以下优点：
[0048] 1、本发明制备低浓度钾离子注射液的原因：在石硫法处理后，先经大孔树脂处理， 去掉多余杂质，减少离子的同时也会增加部分其它离子，再经二次醇沉后，形成杂质的同时 会吸附钾离子，一同除去。
[0049] 2、本发明提供的刺五加注射液钾离子含量低，该制剂的钾离子含量控制由国家标 准中 < 1000 U g/ml，降至 800 ii g/ml (或计为 800 ii g/5mg 总黄酮），甚至 550 ii g/ml 以下； 异常毒性小，安全性高。
[0050] 3、经过动物实验显示，受试对象耐受浓度由国家标准中的5mg/ml，提高达到 18mg/ml。本发明提供的刺五加注射液，异常毒性检验结果优于现有市售产品。
[0051] 初步确定本发明提供的刺五加注射剂的安全性，希望为刺五加注射剂的临床使用 打下坚实基础。
【具体实施方式】
[0052] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0053] 实施例1 :刺五加提取物的制备
[0054] (1)提取：用12体积倍量的水（72L)提取刺五加药材6kg 3次，每次提取1小时， 合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；
[0055] (2) -次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入95%乙醇 (使含醇量达75% )，充分搅拌，静置6小时；过滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相 对密度为1. 15 (80°C测），得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；
[0056] (3)石硫法处理：取步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏适量加入盛有适 量的纯化水的罐中，补加纯化水至纯化水的用量为醇沉膏体积10倍量（v/v)，搅拌15min 后，进行过滤，待滤液加热至温度45°C时，用20%的石灰乳调节pH值至11.0,搅拌15min， 再用20%的硫酸调节pH值至5. 5,继续搅拌15min，静置4小时，开始滤取上清液回收浓缩 至相对密度为I. 19(80°C测），得到浓缩膏；
[0057] (4)大孔树脂吸附：取步骤（3)得到的浓缩膏适量，加入注射用水稀释至Iml含总 黄酮约10. Omg/ml，搅拌均勻后，过滤，滤液调pH值5. 0,搅拌均勻，冷藏12小时；冷藏后的 药液经0. 45 ii m微孔滤膜过滤澄清后，用稀HCl调pH值2. 0,滤液以I. 5BV/h流速上DlOl 大孔树脂柱，然后以同样的流速（I. 5BV/h)用0. 3倍柱体积纯化水（pH值为3. 0)冲洗，然 后用4倍量的50 %乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 4,将50 %洗脱液浓缩至相对密度为 I. 13(80°C测），得到浓缩膏，备用；
[0058] (5)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏中加入95%乙醇（使含醇 量达85. 5% )，搅拌15min，静置16小时，滤取上清液（剩余药渣离心后过滤取上清液），滤 液回收乙醇至无醇味并浓缩至相对密度为I. 14(80°C测），收膏得刺五加提取物二次醇沉 膏，备用；
[0059] (6)热压及超滤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至 总黄酮含量为10. 〇mg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 2,搅拌均匀，121°C灭菌30分 钟，冷藏12小时。冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调pH值5. 5,药液经微孔滤膜过滤 澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为1. 17 (80°C测），即得到 刺五加提取物。
[0060] 实施例2:刺五加提取物的制备
[0061] (1)提取：用8体积倍量的水（64L)提取刺五加药材8kg 2次，每次提取2小时， 合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；
[0062] (2) -次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入93%乙醇 (使含醇量达74. 5% )，充分搅拌，静置12小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至 相对密度为I. 11 (80°C测），得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；
[0063] (3)石硫法处理：取步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏适量加入盛有适 量的纯化水的罐中，补加纯化水至纯化水的用量为醇沉膏体积12倍量（v/v)，搅拌15min 后，进行过滤，待滤液加热至温度45°C时，用20%的石灰乳调节pH值至11. 5,搅拌15min， 再用20%的硫酸调节pH值至5. 3,继续搅拌15min，静置6小时，开始滤取上清液回收浓缩 至相对密度为I. 17(80°C测），得到浓缩膏；
[0064] (4)大孔树脂吸附：取步骤⑶得到的浓缩膏适量，加入注射用水稀释至Iml含总 黄酮约8. Omg/ml，搅拌均勻后，过滤，滤液调pH值5. 2,搅拌均勻，冷藏14小时；冷藏后的药 液经0. 45 ii m微孔滤膜过滤澄清后，用稀HCl调pH值2. 3,滤液以I. 5BV/h流速上HPDlOO 大孔树脂柱，然后以同样的流速（1.5BV/h)用0.4倍柱体积纯化水（pH值为3.0)冲洗，然 后用5倍量的50%乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 3,将50 %洗脱液浓缩至相对密度为 I. 14(80°C测），得到浓缩膏，备用；
[0065] (5)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏中加入95%乙醇（使含醇 量达84. 5% )，搅拌15min，静置14小时，滤取上清液（剩余药渣离心后过滤取上清液），滤 液回收乙醇至无醇味并浓缩至相对密度为1. 15 (80°C测），收膏得刺五加提取物二次醇沉 膏，备用；
[0066] (6)热压及超滤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至 总黄酮含量为8. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 5,搅拌均匀，121°C灭菌35分 钟，冷藏12小时。冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调pH值5. 4,药液经微孔滤膜过滤 澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为1. 18 (80°C测），即得到 刺五加提取物。
[0067] 实施例3:刺五加提取物的制备
[0068] (1)提取：用12体积倍量的水（120L)提取刺五加药材IOkg2次，每次提取1. 5小 时，合并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用；
[0069] (2) -次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入95%乙醇 (使含醇量达75. 5% )，充分搅拌，静置18小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至 相对密度为1. 14 (80°C测），得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用；
[0070] (3)石硫法处理：取步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏适量加入盛有适 量的纯化水的罐中，补加纯化水至纯化水的用量为醇沉膏体积8倍量（v/v)，搅拌15min后， 进行过滤，待滤液加热至温度45°C时，用20%的石灰乳调节pH值至10. 5,搅拌15min，再用 20 %的硫酸调节pH值至5. 1,继续搅拌15min,静置8小时,开始滤取上清液回收浓缩至相 对密度为I. 16(80°C测），得到浓缩膏；
[0071] (4)大孔树脂吸附：取步骤（3)得到的浓缩膏适量，加入注射用水稀释至Iml含总 黄酮约10. 〇mg/ml，搅拌均勻后，过滤，滤液调pH值5. 4,搅拌均勻，冷藏12小时；冷藏后的 药液经0. 45 ii m微孔滤膜过滤澄清后，用稀HCl调pH值2. 2,滤液以I. 5BV/h流速上DM130 大孔树脂柱，然后以同样的流速（I. 5BV/h)用0. 3倍柱体积纯化水（pH值为3. 0)冲洗，然 后用3倍量的50 %乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 4,将50 %洗脱液浓缩至相对密度为 I. 15(80°C测），得到浓缩膏，备用；
[0072] (5)二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏中加入95%乙醇（使含醇 量达85.0% )，搅拌15min，静置12小时，过滤，滤取上清液（剩余药渣离心后过滤取上清 液），滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至相对密度为1. 16 (80°C测），收膏得刺五加提取物二 次醇沉膏，备用；
[0073] (6)热压及超滤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用水稀释至 总黄酮含量为10. 〇mg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 8,搅拌均匀，115°C灭菌40分 钟，冷藏12小时，冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调pH值5. 2,药液经微孔滤膜过滤 澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤，滤液浓缩至相对密度为1. 15 (80°C测），即得到 刺五加提取物。
[0074] 实施例4:制备刺五加注射液（每支20ml，含总黄酮类物质IOOmg)
[0075] 取实施例1得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮6. Omg/ml，加入IOg活 性炭，回流煮沸吸附15min(是指加入炭后、回流加热至煮沸，开始计时15min，下同），冷却 至50°C，经0. 45 y m滤膜过滤至澄清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶 水，根据含量稀释至总黄酮5. Omg/ml，用20 %氢氧化钠溶液调pH值5. 5;药液经0. 22 ii m滤 芯精滤，灌装20ml，封口；经高温蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。
[0076] 实施例5 :制备刺五加注射液（每支IOOml,含总黄酮类物质300mg)
[0077] 配剂、灌封、灭菌：取实施例2得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮 7. 5mg/ml，加入12g活性炭，回流煮沸吸附15min，冷却至40°C，经0. 45 ii m滤膜过滤至澄 清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀释至总黄酮3. Omg/ ml，用20 %氢氧化钠溶液调pH值5. 4 ;药液经0. 22 ii m滤芯精滤，灌装IOOml，封口；经高温 蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。
[0078] 实施例6 :制备刺五加注射液（每支250ml，含总黄酮类物质500mg)
[0079] 配剂、灌封、灭菌：取实施例3得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮 10. Omg/ml，加入IOg活性炭，回流煮沸吸附15min，冷却至45°C，经0. 45 ii m滤膜过滤至澄 清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀释至总黄酮2. Omg/ ml，用20%氢氧化钠溶液调pH值5.2;药液经0.22 iim滤芯精滤，灌装250ml，封口；经高温 蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。
[0080] 实施例7:制备刺五加注射液（每支250ml，含总黄酮类物质500mg)
[0081] 配剂、灌封、灭菌：取实施例3得到的刺五加提取物，用注射用水稀释至总黄酮 8. Omg/ml，加入15g活性炭，回流煮沸吸附15min，冷却至50°C，经0. 45 ii m滤膜过滤至澄 清；用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，适量顶水，根据含量稀释至总黄酮2. Omg/ ml，用20%氢氧化钠溶液调pH值5.5;药液经0.22 iim滤芯精滤，灌装250ml，封口；经高温 蒸汽灭菌，冷却，即得刺五加注射液。
[0082] 实验例1:检验钾离子含量
[0083] 1、受试药物
[0084] 市售品1，每支20ml，含总黄酮类物质IOOmg;
[0085] 市售品2,每支20ml，含总黄酮类物质IOOmg;
[0086] 市售品3的三种刺五加注射液，其中每支20ml，含总黄酮类物质IOOmg;每支 IOOml,含总黄酮类物质300mg ;每支250ml，含总黄酮类物质500mg ;
[0087] 实施例4-7制成的刺五加注射液；
[0088] 对比例1-3:参照申请号为201210049755. 1的专利的实施例8、9、10制备得到刺 五加注射液。
[0089] 2、检测方法1:按2010年版《中国药典》附录IX S注射剂有关物质检查法
[0090] 钾离子取注射液2ml，蒸干，先用小火炽灼至炭化，再在500-600°C炽灼至完全灰 化，加稀醋酸2ml使溶解。置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。取IOml 纳氏比色管两支，甲管中精密加入标准钾离子溶液（取硫酸钾适量，研细，于IKTC干燥至 恒重，精密称取2. 23g，置IOOOml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备 液。临用前，精密量取贮备液l〇ml，置IOOml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。每Iml 相当于100 U g的K)0. 8ml，加碱性甲醛溶液（取甲醛溶液，用0. lmol/L氢氧化钠溶液调节 pH值至8. 0-9. 0) 0. 6ml、3 %乙二胺四醋酸二钠溶液2滴、3 %四苯硼钠溶液0. 5ml，加水稀释 成10ml，乙管中精密加入供试品溶液lml，与甲管同时依法操作，摇匀，甲、乙两管同置黑纸 上，自上向下透视，乙管中显出的浊度与甲管比较，不得更浓（K彡IOOOy g/ml)。
[0091] 3、检测方法2 :原子吸收光度法测定钾离子含量
[0092] 1)仪器与试剂
[0093] 仪器：HITACHI 180-50型原子吸收分光光度计，日本日立公司。
[0094] 2)溶液的制备
[0095] 对照品溶液的制备取K储备液用超纯水稀释制成高、低2种浓度的对照品溶液。
[0096] 供试品溶液的制备取刺五加注射剂，用超纯水稀释50?100倍，摇匀，即得。
[0097] 3)测定法
[0098] 取对照品溶液和供试品溶液采用火焰法测定供试品溶液中K的含量，计算离子的 含量（mg/ml)。测试参数及对照品溶液浓度见下表1。
[0099] 表1测试参数及对照品溶液
【权利要求】
1. 一种刺五加注射液，其特征在于，含有以下活性成分：含总黄酮I. 8-5. 5mg/ml、紫丁 香苷0. 13-0. 70mg/ml和刺五加苷EO. 06-0. 34mg/ml，钾离子的数量彡800 ii g/ml。
2. 根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述刺五加注射液含有以下活性成分， 按现有规格划分： 每支20ml，总黄酮4. 5-5. 5mg/ml、紫丁香苷0? 32-0. 70mg/ml和刺五加苷E 0? 15-0. 34mg/ml，钾离子的数量< 800 y g/ml ; 每支100ml，含总黄酮2. 7-3. 3mg/ml、紫丁香苷0? 19-0. 42mg/ml和刺五加苷E 0? 09-0. 20mg/ml，钾离子的数量< 500 y g/ml ; 每支250ml，含总黄酮I. 8-2. 2mg/ml、紫丁香苷0? 13-0. 28mg/ml和刺五加苷 E0. 06-0. 14mg/ml，钾离子的数量< 300 u g/ml。
3. 根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述刺五加注射液含有以下活性成分， 按现有规格划分： 每支20ml，含总黄酮4. 5-5. 5mg/ml、紫丁香苷0? 32-0. 70mg/ml和刺五加苷E 0? 15-0. 34mg/ml，钾离子的数量< 550 y g/ml ; 每支100ml，含总黄酮2. 7-3. 3mg/ml、紫丁香苷0? 19-0. 42mg/ml和刺五加苷E 0? 09-0. 20mg/ml，钾离子的数量< 360 y g/ml ; 每支250ml，含总黄酮I. 8-2. 2mg/ml、紫丁香苷0? 13-0. 28mg/ml和刺五加苷 E0.06-0. 14mg/ml，钾离子的数量< 240iig/ml。
4. 根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述刺五加注射液含有以下活性成分， 按现有规格划分： 每支20ml，总黄酮5. 14-5. 23mg/ml、紫丁香苷0? 36-0. 5mg/ml和刺五加苷E 0? 17-0. 25mg/ml，钾离子的数量< 550 y g/ml。
5. -种制备权利要求1-4任一项所述的注射液的方法，其特征在于，该方法包括以下 步骤：刺五加提取物，用注射用水稀释，过滤，调节pH值，精滤，灌封、灭菌，即得刺五加注射 液。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述刺五加提取物由以下方法制备： (1) 提取：用6?12体积倍量的水提取刺五加药材2?3次，每次提取1?2小时，合 并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用； (2) 第一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入浓度为93% 以上的乙醇使得含醇量为74-86%，充分搅拌，静置6小时以上，过滤，滤液回收乙醇至无醇 味，并浓缩至80°C时相对密度为1. 10?1. 18,得到刺五加提取物的一次醇沉膏，备用； (3) 石硫法处理：将步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均匀 后，进行过滤，待滤液温度40°C?50°C时，用20%的石灰乳调节pH值至10. 0?12. 0,搅拌， 再用20%的硫酸调节pH值至5. 0?6. 0,继续搅拌，静置，滤取上清液并回收浓缩至80°C时 相对密度为1. 14?1. 19,得到浓缩膏； (4) 大孔树脂吸附：取步骤（3)得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为 7. 5?10. Omg/ml，搅拌均勻后，过滤，滤液调pH值4. 0?5. 5,搅拌均勻，冷藏12小时以上； 冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2. 0±0. 5,滤液以1. 5?2BV/h流速上大孔 树脂柱，然后以同样的流速用〇. 3?0. 5倍柱体积纯化水冲洗，然后用3?6体积倍量的 50%乙醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. O?6. 5,将50 %洗脱液浓缩至80°C时相对密度为 1. 13?1. 20,得到浓缩膏，备用； (5) 二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏中加入浓度为93%以上乙醇使 其含醇量为80?86%，充分搅拌，静置12小时以上，滤取上清液，滤液回收乙醇至无醇味， 并浓缩至80°C时相对密度为I. 11?1. 20,得刺五加提取物二次醇沉膏； (6) 热压及超滤：热压及超滤：取步骤（5)得到的刺五加提取物二次醇沉膏，用注射用 水稀释至总黄酮含量为7. 5?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过滤，滤液调pH值4. 0?5. 0,搅拌 均匀，115?121 °C灭菌30?40分钟，冷藏12小时以上；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄 清后，调PH值5. 5±0. 5,药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤， 滤液浓缩至相对密度为I. 11?1. 20,即得到刺五加提取物。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一次醇沉，包括以下步骤：在搅 拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏加入浓度为93%以上的乙醇使得含醇量为 74. 5-75. 5%，充分搅拌，静置6-18小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至80°C时相 对密度为I. 11?1. 15,得到刺五加提取物的一次醇沉膏。
8. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂吸附包括以下步骤：将步骤 (3)得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为8. 0?10. Omg/ml，搅拌均匀后， 过滤，滤液调pH值5. 0?5. 4,搅拌均勻，冷藏12-14h ;冷藏后的药液经0. 45 ii m微孔滤膜 过滤澄清后，调PH值2. 0-2. 3,滤液以I. 5BV/h的流速上大孔树脂柱，然后以同样的流速用 0. 3?0. 5倍柱体积纯化水冲洗，然后用3?5体积倍量的50 %乙醇洗脱，收集洗脱液，调 pH为5. 3?5. 5,将50%洗脱液浓缩至相对密度为1. 15?1. 20,得到浓缩膏。
9. 根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述刺五加提取物由以下方法 制备： (1) 提取：用8?12体积倍量的水提取刺五加药材2?3次，每次提取1?2小时，合 并提取液，浓缩，得到刺五加水煎膏，备用； (2) 第一次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（1)得到的刺五加水煎膏中加入浓度为93? 95%的乙醇使得含醇量为74. 5-75. 5%，搅拌15min后，静置6?18小时，过滤，滤液回收乙 醇至无醇味，并浓缩至80°C时相对密度为I. 11?1. 15,得到刺五加提取物的一次醇沉膏， 备用； (3) 石硫法处理：将步骤（2)得到的刺五加提取物的一次醇沉膏与水混合，搅拌均匀 后，进行过滤，待滤液温度45°C时，用20%的石灰乳调节pH值至10. 5?11. 5,搅拌，再用 20%的硫酸调节pH值至5. 1?5. 5,继续搅拌，静置4?8小时，滤取上清液并回收浓缩至 80°C时相对密度为1. 16?1. 19,得到浓缩膏； (4) 大孔树脂吸附：取步骤（3)得到的刺五加浓缩膏，用注射用水稀释至总黄酮含量为 8. 0?10. Omg/ml，搅拌均勻后，过滤，滤液调pH值5. 0?5. 5,搅拌均勻，冷藏12?18小时； 冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄清后，调PH值2. 0-2. 3,滤液以I. 5BV/h流速上大孔树脂 柱，然后以同样的流速用〇. 3?0. 5倍柱体积纯化水冲洗，然后用3?5体积倍量的50 %乙 醇洗脱，收集洗脱液，调pH为5. 3?5. 5,将50%洗脱液浓缩至80°C时相对密度为1. 13? 1.20,得到浓缩膏，备用； (5) 二次醇沉：在搅拌条件下，向步骤（4)得到的浓缩膏中加入浓度为93?95%乙醇 使其含醇量为84?85. 5%，充分搅拌，静置12?16小时，滤取上清液，滤液回收乙醇至无 醇味，并浓缩至80°C时相对密度为1. 14?1. 16,得刺五加提取物二次醇沉膏； (6)热压及超滤：用注射用水稀释至总黄酮含量为8. O?10. Omg/ml，搅拌均匀后，过 滤，滤液调PH值4. 2?4. 8,高温蒸汽灭菌，冷藏12小时；冷藏后的药液经微孔滤膜过滤澄 清后，调PH值5. 2?5. 5,药液经微孔滤膜过滤澄清后，先后进行10万、3万级的二级超滤， 滤液浓缩至相对密度为1. 15?1. 20,即得到刺五加提取物。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：刺五加提取物用水 稀释至总黄酮6. 0?10mg/ml，加入活性炭，回流煮沸吸附15min，冷却40-50°C，0. 45 ii m滤 膜过滤至澄清，用1万超滤膜过滤，滤至透过液没有流量时，再过滤，收集并合并滤液，停止 超滤，滤液调PH值至5. 0?6. 0,药液经0. 22 y m滤芯精滤，分装，经高温蒸汽灭菌，冷却，即 得。
【文档编号】A61K36/254GK104306417SQ201410508745
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】方同华, 陈景超, 冯慧, 乔云峰, 许照芹, 刘玉成, 季庆亮, 席桂才, 周广红, 范玉奇 申请人:哈尔滨珍宝制药有限公司