作为激酶抑制剂的4－氨基吡咯并嘧啶的制作方法

专利名称：作为激酶抑制剂的4－氨基吡咯并嘧啶的制作方法
相关申请本中请要求1998年9月18日提交的美国临时申请No.60/100954的优先权，并且是1998年3月17日提交的美国申请No.09/042702的部分连续申请，这些参考申请的全部内容都引入本文作为参考。
背景技术：
至少有400种酶被确定为蛋白激酶。这些酶催化靶蛋白底物的磷酸化反应。磷酸化反应一般是使磷酸基从ATP转移到蛋白底物上的反应。靶底物中磷酸基转移到其上面的特定结构是酪氨酸，丝氨酸或苏氨酸残基。因为这些氨基酸残基是磷酰基转移的靶结构，所以这些蛋白激酶常常被称为酪氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸激酶。
酪氨酸，丝氨酸和苏氨酸残基上的磷酸化反应和与之相抵销的磷酸酶反应涉及不计其数的细胞过程，这些过程支承对多种多样的细胞内信号的反应(一般由细胞受体介导)，细胞功能的调节，和细胞过程的激活或失活。一连串的蛋白激酶经常参与细胞内信号转导，并且是实现这些细胞过程所必需的。由于蛋白激酶在这些过程中的遍在性，人们发现蛋白激酶为质膜的内在部分或胞质酶或位于核中，经常是酶复合物的组分。在很多情况下，这些蛋白激酶是酶和结构蛋白复合物的必需元件，所述酶和结构蛋白复合物决定着细胞内何处和何时发生细胞过程。
蛋白质酪氨酸激酶。蛋白质酪氨酸激酶(PTK)是催化细胞蛋白质中的特定酪氨酸残基磷酸化的酶。这些底物蛋白质(经常是酶自身)的翻译后修饰可用作分子开关，用于调节细胞增殖，激活或分化(参见例如Schlessinger和Ulrich，1992，神经元9383-391)。已在很多疾病中观察到异常或过量的PTK活性，所述疾病包括良性和恶性增殖性疾病以及由免疫系统不恰当的激活引起的疾病(例如自身免疫病)，同种异体移植排斥和移植物抗受试者疾病。另外，内皮细胞特异性受体PTK，如KDR和，Tie-2介导血管生成过程，因此参与支持癌症和其它涉及不恰当血管化的疾病(例如糖尿病性视网膜病，由与年龄相关的斑点退化引起的脉络膜新血管生成，牛皮癣，关节炎，早熟视网膜病，婴儿血管瘤)的进程。
酪氨酸激酶可以是受体-型(具有细胞外，跨膜和细胞内结构域)或非-受体型(完全是细胞内的)。
受体酪氨酸激酶(RTK)。RTK包括一大群具有多种多样生物活性的跨膜受体。目前，至少已鉴定出19种不同的RTK亚族。受体酪氨酸激酶(RTK)家族包括对多种细胞类型的生长和分化至关重要的受体(Yarden和Ullrich，生物化学年评，57433-478，1988；Ullrich和Schlessinger，细胞，61243-254，1990)。RTK的固有功能经配体结合被激活，导致受体和多个细胞底物磷酸化，继而导致多个细胞反应(Ullrich & Schlessinger，细胞，61203-212，1990)。因此，受体酪氨酸激酶介导的信号转导由与特定生长因子(配体)的细胞外相互作用起始，接下来一般是受体二聚体化，内在蛋白质酪氨酸激酶活性的刺激和受体转磷酸作用。籍此产生细胞内信号转导分子的结合位点，与一系列便于适当细胞反应(例如细胞分裂，分化，代谢作用，细胞外微环境的变化)的胞质信号分子形成复合物(例见Schlessinger和Ulrich，1992，神经元91-20)。
具有SH2(src同源物-2)或磷酸酪氨酸结合(PTB)结构域的蛋白质以高亲和性与激活的酪氨酸激酶受体及其底物结合以将信号传播至细胞内。这两个结构域识别磷酸酪氨酸(Fantl等，1992，细胞，69413-423；Songyang等，1994，分子细胞生物学，142777-2785；Songyang等，1993，细胞，72767-778；和Koch等，1991，科学，252668-678；Shoelson，Curr.Opin.Chem.Biol(1997)，1(2)，227-234；Cowburn，Curr.Opin.Struct.Biol.(1997)，7(6)，835-838)。已鉴定出几个与受体酪氨酸激酶(RTK)结合的细胞内底物蛋白质。可将它们分为两个大组(1)具有催化结构域的底物；和(2)缺乏该结构域但可用作衔接子并与具有催化活性的分子结合的底物(Songyang等，1993，细胞，72767-778)。受体或蛋白质与其底物的SH2或PTB结构域之间的相互作用的特异性由紧接磷酸化酪氨酸残基周围的氨基酸残基决定。例如，SH2结构域和特定受体上磷酸酪氨酸残基周围的氨基酸序列之间的结合亲和性差异与所观察到的其底物磷酸化分布图的差异相关(Songyang等，1993，细胞，72767-778)。观察结果表明各个受体酪氨酸激酶的功能不仅仅由其表达模式和配体的可利用性决定，也由被特定受体激活的下游信号转导途径阵列以及那些刺激的时间选择和维持时间的长短决定。因此，磷酸化提供了重要的调节步骤，可以决定由特定的生长因子受体以及分化因子受体所征集的信号途径的选择性。
据认为诸如FGFR-1，PDGFR，TIE-2和e-Met的几种受体酪氨酸激酶和与其结合的生长因子对血管生成起作用，但其中的一些可间接促进血管生成(Mustonen和Alitalo，细胞生物学杂志，129895-898，1995)。一种这样的受体酪氨酸激酶(已知为“胎肝激酶1”(FLK-1))是III型RTK亚类的成员。人FLK-1的另一个名称是“含有激酶插入结构域的受体”(KDR)(Terman等，癌基因61677-83，1991)。FLK-1/KDR的另一个名称是“血管内皮细胞生长因子受体2”(VEGFR-2)，因为它以高亲和性与VEGF结合。鼠FLK-1/VEGFR-2也被称为NYK(Oelrichs等，癌基因8(1)11-15，1993)。已分离出编码小鼠，大鼠和人FLK-1的DNA，已报道了核苷酸和编码的氨基酸序列(Matthews等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，889026-30，1991；Terman等，1991，文献同上；Terman等，Biochem.Biophys.Res.Comm.1871579-86，1992；Sarzani等，文献同上；和Millauer等，细胞，72835-846，1993)。多项研究(例如Millauer等，文献同上所报道的)表明VEGF和FLK-1/KDR/VEGFR-2是配体-受体对，它们在血管内皮细胞增殖，血管形成和快速生长(分别被称为血管发生和血管生成)中起着重要作用。
另一种被称为“fms-样酪氨酸激酶-1”(Flt-1)的III型RTK亚类与FLK-1/KDR相关(DeVries等，科学，255989-991，1992；Shibuya等，癌基因，5519-524，1990)。Flt-1的另一个名称是“血管内皮细胞生长因子受体1”(VEGFR-1)。目前，已发现FLK-1/KDR/VEGFR-2和F1t-1/VEGFR-1亚族的成员主要在内皮细胞上表达。这些亚类的成员被血管内皮细胞生长因子(VEGF)配体家族的成员特异性刺激(Klagsburn和D’Amore，细胞因子&生长因子评论7259-270，1996)。相对于与FLK-1/KDR的结合而言，血管内皮细胞生长因子(VEGF)以较高的亲和性与Flt-1结合，并且对血管内皮细胞有促分裂作用(Terman等，1992，文献同上；Mustonen等，文献同上；DeVries等，文献同上)。据信在血管发育过程中Flt-1是内皮结构的形成所必需的。Flt-1的表达与小鼠胚胎中的早期血管发育相关，并与创伤愈合过程中的新血管生成相关(Mustonen和Alitalo，文献同上)。Flt-1在单核细胞，破骨细胞和成骨细胞以及成人组织，如肾小球中的表达显示出该受体的另一个功能，该功能与细胞生长不相关(Mustonen和Alitalo，文献同上)。
如上文所述，最新证据表明VEGF对正常和病理性血管生成起着刺激作用(Jakeman等，内分泌学，133848-859，1993；Kolch等，乳腺癌研究和治疗，36139-155，1995；Ferrara等，内分泌评论，18(1)；4-25，1997；Ferrara等，血管生成的调节(由L.D.Goldberg和E.M.Rosen编)，209-232，1997)。另外，VEGF还参与控制和增强血管的通透性(Connolly等，生物化学杂志，26420017-20024，1989；Brown等，血管生成的调节(由L.D.Goldberg和E.M.Rosen编)，233-269，1997)。已报道了由mRNA的另一种剪接产生的不同形式的VEGF，包括Ferrara等(细胞生物化学杂志，47211-218，1991)描述的4种形式。Ferrara等，文献同上已鉴定出分泌型VEGF和主要与细胞结合的VEGF，已知该蛋白质以由二硫键连接的二聚体形式存在。
最近，已鉴定出几种相关的VEGF同系物。然而，仍未阐明它们在正常生理和疾病过程中的作用。另外，在很多组织中，VEGF家族的成员经常与VEGF共同表达，它们通常能与VEGF形成异二聚体。该特性可能会改变异二聚体的受体特异性和生物学作用，并使下文所述的其特异性功能的阐明进一步复杂化(Korpelainen和Alitalo，细胞生物学最新观点，159-164，1998和其中提及的参考文献)。
胎盘生长因子(PIGF)具有与VEGF序列显著同源的氨基酸序列(Park等，生物化学杂志，26925646-54，1994；Maglione等，癌基因8925-31，1993)。关于VEGF，由mRNA的另一种剪接方式产生了不同种的PIGF，该蛋白质以二聚体的形式存在(Park等，文献同上)。PIGF-1和PIGF-2以高亲和性与Flt-1结合，PIGF-2也倾向于结合neuropilin-1(Migdal等，生物化学杂志，273(35)22272-22278)，它们都不与FLK-1/KDR结合(Park等，文献同上)。据报道当VEGF以低浓度(据称是由于异二聚体形成所致)存在时，PIGF可以增强血管通透性和VEGF对内皮细胞的促分裂作用(Park等，文献同上)。
VEGF-B以两种同种型(167和185个残基)出现，它似乎也能结合Flt-1/VEGFR-1。它在通过调制尿激酶型纤溶酶激活物和纤溶酶激活物抑制剂1的表达和活性以调节细胞外基质降解，细胞粘附和迁移方面起作用(Pepper等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(20)11709-11714)。
VEGF-C起初是作为主要由淋巴内皮细胞表达的VEGFR-3/Flt-4配体被克隆的。经完全加工的VEGF-C也结合KDR/VEGFR-2，并能刺激体外内皮细胞的增殖和迁移以及体内模型的血管生成(Lymboussaki等，美国病理学杂志，1998，153(2)395-403；Witzenbichler等，美国病理学杂志，1998，153(2)，381-394)。转基因过量表达VEGF-C仅导致淋巴管增殖和扩张，而不会对血管产生影响。与VEGF不同的是，VEGF-C的表达不能被低氧诱导(Ristimaki等，生物化学杂志，1998，273(14)，8413-8418)。
最新发现的VEGF-D在结构上与VEGF-C非常相似。据报道，VEGF-D至少能结合并激活两种VEGFR，即VEGFR-3/Flt-4和KDR/VEGFR-2。起初，它是作为成纤维细胞的c-fos诱导型促分裂原被克隆的，它主要在肺和皮肤的间充质细胞内表达(Achen等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1998，95(2)，548-553和其中提及的参考文献)。
关于VEGF，据称在Miles试验中，当注射至皮肤组织时，VEGF-C和VEGF-D能在体内诱导血管通透性的增加(PCT/US97/14696；WO98/07832，Witzenbichler等，文献同上)。这些配体在调制血管高通透性和表达该配体的组织中的内皮细胞反应方面的生理学作用和意义仍不明确。
最近报道了一种由病毒编码的新型血管内皮细胞生长因子VEGF-E(NZ-7VEGF)，它优先利用KDR/Flk-1受体并具有强有力的促分裂活性，而不含有与肝素结合的结构域(Meyer等，EMBO J.1999，18(2)，363-374；Ogawa等，生物化学杂志，1998，273(47)，31273-31282)。VEGF-E序列与哺乳动物VEGF具有25％同源性，并由副痘病毒Orf病毒(OV)编码。副痘病毒会感染绵羊和山羊，偶尔也会感染人，产生伴随血管生成的损害。VEGF-E是约为20kDa的二聚体，它不含碱性结构域，对肝素也无亲和性，但具有所有哺乳动物VEGF中都存在的特征性半胱氨酸结基元，令人惊奇的是，它还具有类似于VEGF-A与肝素-结合的VEGF165同种型的效力和生物活性，即这两种因子都能刺激体外组织因子(TF)释放，培养的血管内皮细胞的增殖，趋化性和快速生长，和体内血管生成。与VEGF165一样，VEGF-E能以高亲和性与VEGF受体-2(KDR)结合，导致受体自身磷酸化，游离的细胞内Ca2+浓度双相增加，与VEGF165相反的是VEGF-E不与VEGF受体-1(Flt-1)结合。
根据不断发现的其它VEGF和VEGFR同系物以及配体和受体异二聚体化的先例，所述VEGF同系物的作用包括形成VEGF配体异二聚体，和/或使受体异二聚体化，或与仍未被发现的VEGFR结合(Witzenbichler等，文献同上)。另外，最新的报道表明neuropilin-1(Migdal等，文献同上)或VEGFR-3/Flt-4(Witzenbichler等，文献同上)或除KDR/VEGFR-2以外的受体可能参与诱导血管通透性(Stacker，S.A.，Vitali，A.，Domagala，T.，Nice，E.，和Wilks，A.F.，“血管生成和癌症”会议，美国癌症研究会，1998年1月，Orlando，FL；Williams，Diabetelogia 40S118-120(1997))。
Tie-2(TEK)是最近发现的内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶家族的成员，它参与关键的血管生成过程，例如血管分支，快速生长，重新制作模型，成熟和稳定。Tie-2是第一个哺乳动物受体酪氨酸激酶，已鉴定出它的激动剂配体(例如刺激受体自身磷酸化和信号转导的angiopoietin 1(“Angl”))和拮抗剂配体(例如angiopoietin2(“Ang2”))。对Tie-2及其配体的表达进行的敲除和转基因操作表明对Tie-2信号在空间和时间上进行严格的控制是新血管系统适当发育所必需的。最新的模型表明通过Ang1配体刺激Tie-2激酶直接参与新血管的分支，快速生长和长出，周围内皮细胞的征集和相互作用支持对维持血管完整和诱导疾病被遏制状态至关重要的细胞。Tie-2的Ang1刺激的缺乏或通过Ang2抑制Tie-2自身磷酸化(在血管退化位点以高水平产生)会导致血管结构和基质接触的损失，导致内皮细胞死亡，尤其是在缺乏生长/存活刺激时更是如此。然而，这种情况更加复杂，因为最近已报道了至少两种另外的Tie-2配体(Ang3和Ang4)，已阐明多种激动剂和拮抗剂形式的angiopoietin异寡聚体化，籍此修饰它们的活性的能力。因此，靶向Tie-2配体-受体相互作用作为抗血管生成的治疗方法较为不利，优选使用激酶抑制策略。
Tie-2可溶性细胞外结构域(“ExTek”)可以破坏乳腺肿瘤异种移植和肺转移模型和肿瘤细胞-介导的眼新血管生成中肿瘤血管系统的建立。通过腺病毒感染，可在啮齿动物中体内产生mg/ml水平的ExTek达7至10天，而无有害的副作用。这些结果表明在正常健康的动物中破坏Tie-2信号途径能被较好地耐受。针对ExTek的Tie-2抑制反应可能是螯合配体和/或产生具有全长Tie-2的非生产性异二聚体的后果。
最近，已发现人关节炎关节的血管滑液关节翳中Tie-2表达显著上调，这与不适当的新血管生成作用一致。这一发现表明Tie-2在类风湿性关节炎的进展中起作用。已在人静脉畸形疾病中鉴定出产生组成型激活的Tie-2形式的点突变。因此，Tie-2抑制剂可用于治疗这种疾病，并可用于其它不适当新血管生成的情况。
非-受体酪氨酸激酶。非-受体酪氨酸激酶代表缺乏细胞外和跨膜序列的细胞酶的集合。目前，已鉴定出超过24个独立的非受体酪氨酸激酶，其包括11个亚族(Src，Frk，Btk，Csk，Abl，Zap70，Fes/Fps，Fak，Jak，Ack和LIMK)。目前，非受体酪氨酸激酶的Src亚族由最大数目的PTK组成，其包括Src，Yes，Fyn，Lyn，Lck，Blk，Hck，Fgr和Yrk。该酶的Src亚族与癌症发生和免疫应答相关。有关非受体酪氨酸激酶的更详细的讨论可参见Bohlen，1993，癌基因82025-2031(列入本文作为参考)。
已发现很多酪氨酸激酶(不论是RTK还是非受体酪氨酸激酶)参与细胞信号途径，所述途径与多种病理状态，包括癌症，牛皮癣和其它过度增殖性疾病或过度免疫应答相关。
开发能调制PTK的化合物。鉴于PTK在控制，调节和调制细胞增殖，与异常细胞增殖相关的疾病和紊乱方面推测的重要性，人们使用多种方法进行了很多尝试以鉴定出受体和非-受体酪氨酸激酶“抑制剂”，所述方法包括使用突变的配体(美国专利4,966,849)，可溶性受体和抗体(申请号WO94/10202；Kendall & Thomas，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.9010705-09；Kim等，1993，自然362841-844)，RNA配体(Jellinek等，生物化学3310450-56；Takano等，1993，细胞分子生物学4358A；Kinsella等，1992，Exp.Cell Res.19956-62；Wright等，1992，细胞生理学杂志，152448-57)和酪氨酸激酶抑制剂(WO 94/03427；WO 92/21660；WO 91/15495；WO 94/14808；美国专利5,330,992；Mariani等，1994，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.352268)。
最近，已尝试鉴定可用作酪氨酸激酶抑制剂的小分子。例如，双单环，双环或杂环芳基化合物(PCT WO 92/20642)和亚乙烯基-氮杂吲哚衍生物(PCT WO 94/14808)通常被描述为酪氨酸激酶抑制剂。苯乙烯基化合物(美国专利5,217,999)，苯乙烯基-取代的吡啶基化合物(美国专利5,302,606)，某些喹唑啉衍生物(EP申请号0566 266 A1；Expert Opin.Ther.Pat.(1998)，8(4)475-478)，硒杂吲哚和硒化物(PCT WO 94/03427)，三环多羟基化合物(PCT WO 92/21660)和苄基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)被描述为可用作能治疗癌症的酪氨酸激酶抑制剂的化合物。苯胺基噌啉(PCT WO97/34876)和喹唑啉衍生的化合物(PCT WO97/22596；PCT WO97/42187)被描述为血管生成和血管通透性的抑制剂。
另外，还尝试鉴定可用作丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂的小分子。例如，双(吲哚基马来酰亚胺)化合物被描述为能抑制特定的PKC丝氨酸/苏氨酸激酶同种型，在VEGF-相关疾病中，所述同种型的信号转导功能与改变的血管通透性有关(PCT WO97/40830；PCT WO97/40831)。Plk-1激酶抑制剂Plk-1是丝氨酸/苏氨酸激酶，它是细胞周期进程的重要调节剂。它在有丝分裂纺锤体装置的装配和动态功能方面起着重要作用。已知Plk-1和相关的激酶与其它细胞周期调节剂，如细胞周期蛋白-依赖型激酶的激活和灭活密切相关。高水平的Plk-1表达与细胞增殖活性相关。经常能在多种来源的恶性肿瘤中发现Plk-1。Plk-1的抑制剂有望通过破坏涉及有丝分裂纺锤体和不适当激活的细胞周期蛋白-依赖型激酶来阻断癌细胞增殖。Cdc2/细胞周期蛋白B激酶抑制剂(Cdc2也称为cdk1)Cdc2/细胞周期蛋白B是另一种属于细胞周期蛋白-依赖型激酶(cdks)家族的丝氨酸/苏氨酸激酶。这些酶参与细胞周期进程的多个时期之间的重要转换。据信失控的细胞增殖(癌症的标志)依赖于这些细胞中升高的cdk活性。通过cdc2/细胞周期蛋白B激酶抑制剂抑制癌细胞中升高的cdk活性能抑制增殖，并可恢复对细胞周期进程的正常控制。
调节CDK的激活是复杂的，但需要联合CDK和调节亚单位细胞周期蛋白家族的成员(Draetta，细胞生物学趋势，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，自然，339275-280(1989)；Solomon等，细胞的分子生物学，313-27(1992))。通过激活和灭活CDK亚单位的磷酸化可进行另一种水平的调节(Draetta，细胞生物学趋势，3287-289(1993))；Murray和Kirsclmer，自然，339275-280(1989)；Solomon等，细胞的分子生物学，313-27(1992)；Ducommun等，EMBO J，103311-3319(1991)；Gautier等，自然339626-629(1989)；Gould和Nurse，自然，3423945(1989)；Krek和Nigg，EMBO J，103331-3341(1991)；Solomon等，细胞，631013-1024(1990))。同等激活和灭活不同的细胞周期蛋白/CDK复合物是细胞周期正常进程所必需的(Pines，生化科学趋势，18195-197(1993)；Sheir，细胞，731059-1065(1993))。必不可少的G1-S和G2-M转换由不同细胞周期蛋白/CDK活性的激活控制。据认为在G1期中，细胞周期蛋白D/CDK4和细胞周期蛋白E/CDK2介导S-期的开始(Matsushima等，分子&细胞生物学，142066-2076(1994)；Ohtsubo和Roberts，科学，2591908-1912(1993)；Quelle等，基因&发育，71559-1571(1993)；Resnitzky等，分子&细胞生物学，141669-1679(1994))。经过S-期的进程需要细胞周期蛋白A/CDK2的活性(Girard等，细胞，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBOJ，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，自然，354314-317(1991)；Zindy等，生物化学&生物物理学研究通讯，1821144-1154(1992))，而细胞周期蛋白A/cdc2(CDK1)和细胞周期蛋白B/cdc2的激活是中期开始所必需的(Draetta，细胞生物学趋势，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，自然，339275-280(1989)；Solomon等，细胞的分子生物学，313-27(1992)；Girard等，细胞，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO J，ll961-971(1992)；Rosenblatt等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89282-2828(1992)；Walker和Maller，自然，354314-317(1991)；Zindy等，生物化学&生物物理学研究通讯，1821144-1154(1992))。因此，CDK调节的失控无疑是过度增殖性疾病和癌症中的多发事件(Pines，细胞生物学最新观点，4144-148(1992)；Lees，细胞生物学最新观点，7773-780(1995)；Hunter和Pines，细胞，79573-582(1994))。
参与介导或维持疾病状态之激酶的抑制剂代表着这些疾病的新疗法。所述激酶的例子包括但不限于(1)抑制癌症中的c-Src(Brickell，Critical Reviews in Oncogenesis，3401406(1992)；Courtneidge，癌症生物学研讨会，5236-246(1994)，raf(Powis，药物学&治疗剂，6257-95(1994))和细胞周期蛋白-依赖型激酶(CDK)1，2和4(Pines，细胞生物学最新观点，4144-148(1992)；Lees，细胞生物学最新观点，7773-780(1995)；Hunter和Pines，细胞，79573-582(1994))，(2)抑制再狭窄中的CDK2或PDGF-R激酶(Buchdunger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92225-2262(1995))，(3)抑制Alzheimers中的CDK5和GSK3激酶(Hosoi等，生物化学杂志(东京)，117741-749(1995)；Aplin等，神经化学杂志，67699-707(1996)，(4)抑制骨质疏松中的c-Src激酶(Tanaka等，自然，383528-531(1996)，(5)抑制2型糖尿病中的GSK-3激酶(Borthwick等，生物化学&生物物理学研究通讯，210738-745(1995)，(6)抑制炎症中的p38激酶(Badger等，药物学和实验治疗剂杂志，2791453-1461(1996))，(7)抑制涉及血管生成之疾病中的VEGF-R1-3和TIE-1和-2激酶(Shawver等，今日药物发现，250-63(1997))，(8)抑制病毒感染中的UL97激酶(He等，病毒学杂志，71405411(1997))，(9)抑制骨和造血疾病中的CSF-1R激酶(Myers等，生物有机&药物化学通讯，7421-424(1997)，和(10)抑制自身免疫病和移植排斥中的Lck激酶(Myers等，生物有机＆药物化学通讯，7417-420(1997))。
另外，当某些激酶未被错误调节，但却仍然是维持疾病状态所必需时，这些激酶的抑制剂可用于治疗疾病。此时，抑制激酶活性可以治愈或减轻这些疾病。例如，诸如人乳头瘤病毒的很多病毒破坏细胞周期并使细胞进入细胞周期的S-期(Vousden，FASEB J，78720879(1993))。在病毒感染之后通过抑制必需的S-期起始活性，如CDK2来防止细胞进入DNA合成可以通过防止病毒复制而破坏病毒生命周期。可使用相同的原理保护身体的正常细胞免受周期-特异性化学治疗剂的毒性(Stone等，癌症研究，563199-3202(1996)；Kohn等，细胞生物化学杂志，5444-452(1994))。抑制CDK 2或4可以防止进入正常细胞周期，并限制对S-期，G2或有丝分裂起作用的细胞毒素的毒性。另外，已证明CDK2/细胞周期蛋白E活性可调节NF-kB。抑制CDK2活性可刺激NF-kB-依赖型基因表达(通过与p300共激活物相互作用而介导的事件)(Perkins等，科学，275523-527(1997))。NF-kB调节涉及炎症反应的基因(如造血生长因子，趋化因子和白细胞粘附分子)(Baeuerle和Henkel，免疫学年评，12141-179(1994))，并可参与抑制细胞内的细胞凋亡信号(Beg和Baltimore，科学，274782-784(1996)；Wang等，科学，274784-787(1996)；VanAntwerp等，科学，274787-789(1996))。因此，抑制CDK2可经由涉及NF-kB的机制抑制由细胞毒药物诱导的细胞凋亡。由此表明抑制CDK2活性也可用于NF-kB调节在疾病病原学中起作用的其它场合。其它例子包括真菌感染曲霉病是无免疫能力之患者的常见感染(Armstrong，临床传染病，161-7(1993))。抑制曲霉属激酶Cdc2/CDC28或Nim A(Osmani等，EMBO J，102669-2679(1991)；Osmani等，细胞，67283-291(1991))可导致真菌受抑制或死亡，改善患有这些感染之患者的治疗效果。
因此，必需鉴定有效的小化合物，该化合物应能通过调制受体和非受体酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶的活性特异性抑制信号转导和细胞增殖，从而调节和调制异常或不适当的细胞增殖，分化或代谢。尤其是，鉴定特异性抑制酪氨酸激酶之功能的方法和化合物是有利的，所述酪氨酸激酶是血管生成过程或导致浮肿，腹水，渗漏，渗出和大分子外渗和基质沉积以及相关疾病的血管通透性过高的形成所必需的。
发明概要本发明提供式I化合物 和其药用盐。
在式I中，A环是六员芳香环或五或六员杂芳香环。A环任选地被一个或多个下列取代基取代取代或未取代的脂族基，卤素，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的杂芳香基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳烷基，氰基，硝基，-NR4R5，-C(O)2H，-OH，取代或未取代的烷氧羰基，-C(O)2-卤代烷基，取代或未取代的烷硫基醚，取代或未取代的烷基亚砜，取代或未取代的烷基砜，取代或未取代的芳硫基醚，取代或未取代的芳基亚砜，取代或未取代的芳基砜，取代或未取代的烷基羰基，-C(O)-卤代烷基，取代或未取代的脂族醚，取代或未取代的芳香醚，取代或未取代的甲酰氨，四唑基，三氟甲基磺酰氨基，三氟甲基羰基氨基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷基酰氨基，取代或未取代的芳基酰氨基，取代或未取代的苯乙烯基和取代或未取代的芳烷基酰氨基。L是下列连接基之一-O-；-S-；-S(O)-；-S(O)2-；-N(R)-；-N(C(O)OR)-；-N(C(O)R)-；-N(SO2R)-；-CH2O-；-CH2S-；-CH2N(R)-； -CH(NR)-；-CH2N(C(O)R))-；-CH2N(C(O)OR)-；-CH2N(SO2R)-；-CH(NHR)-；-CH(NHC(O)R)-；-CH(NHSO2R)-；-CH(NHC(O)OR)-；-CH(OC(O)R)-；-CH(OC(O)NHR)-；-CH＝CH-；-C(＝NOR)-；-C(O)-；-CH(OR)-；-C(O)N(R)-； -N(R)C(O)-；-N(R)S(O)-；-N(R)S(O)2-；-OC(O)N(R)-；-N(R)C(O)N(R)-；-NRC(O)O-；-S(O)N(R)-；-S(O)2N(R)-；N(C(O)R)S(O)-；N(C(O)R)S(O)2-；-N(R)S(O)N(R)-；-N(R)S(O)2N(R)-；-C(O)N(R)C(O)-；-S(O)N(R)C(O)-；-S(O)2N(R)C(O)-；-OS(O)N(R)-；-OS(O)2N(R)-；-N(R)S(O)O-；-N(R)S(O)2O-；-N(R)S(O)C(O)-；-N(R)S(O)2C(O)-；-SON(C(O)R)-；-SO2N(C(O)R)-；-N(R)SON(R)-；-N(R)SO2N(R)-；-C(O)O-；-N(R)P(OR’)O-；-N(R)P(OR’)-；-N(R)P(O)(OR’)O-；-N(R)P(O)(OR’)-；-N(C(O)R)P(OR’)O-；-N(C(O)R)P(OR’)-；-N(C(O)R)P(O)(OR’)O-或-N(C(O)R)P(OR’)-.R和R’各自独立地是-H，酰基，取代或未取代的脂族基，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的杂芳香基，或取代或未取代的环烷基。
或者，L是-RbN(R)S(O)2-，-RbN(R)P(O)-，或-RbN(R)P(O)O-。Rb是亚烷基，当其与所连接的磺酰胺，次膦酰胺，或膦酰胺基一起时形成与A环稠合的五或六员环。
或者，L表示下列结构式之一 R85完成5-，6-，或7-员芳香，杂芳香或杂环烷基环系。
在式I中，R1是-H，2-苯基-1，3-二氧六环-5-基，C1-C6烷基，C3-C8环烷基，C5-C7环烯基或任选取代的芳基(C1-C6烷基)。当R1是烷基，环烷基和环烯基时，可以任选地被一个或多个式-ORa的基团取代，条件是-ORa不在与氮连接的碳原子上。Ra是-H，C1-C6烷基或C3-C6环烷基。
在式I中，R2是-H，取代或未取代的脂族基团，取代或未取代的环烷基，卤素，-OH，氰基，取代或未取代的芳香基团，取代或未取代的杂芳香基团，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳烷基，-NR4R5，或-C(O)NR4R5。
在式I中，R3是取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳香基团，取代或未取代的杂芳香基团，取代或未取代的杂环烷基。当L是NRSO2-，NRC(O)-，-NRC(O)O-，-SO2NR-，-C(O)NR-或-OC(O)NR-时，R3还可以是烷基，烯基或芳烷基。
在式I中，R4，R5和氮原子一起形成3，4，5，6或7-员取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的杂双环烷基或取代或未取代的杂芳香基。
或者，R4和R5各自独立地是-H，氮杂双环烷基，取代或未取代的烷基或Y-Z。
Y是-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，SO2NH-，一CONH-，(CH2)pO-，-(CH2)pNH-，-(CH2)pS-，-(CH2)pS(O)-或-(CH2)pS(O)2-.
p是0至6的整数。
Z是取代或未取代的烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基或取代或未取代的杂环烷基。
j是0至6的整数。
但是，当L是-CH2NR-，-C(O)NR-或-NRC(O)-，而R3是氮杂环烷基或氮杂杂芳基时，j是0。另外，当L是-O-且R3是苯基时，j是0。
本发明化合物可用作丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶抑制剂。特别是本发明化合物可用作对于过度增殖性疾病，尤其是癌症和血管生成过程很重要的酪氨酸激酶的抑制剂。例如，这些化合物中的某些是诸如KDR，Flt-1，FGFR，PDGFR，c-Met，TIE-2或IGF-1-R受体激酶的抑制剂。因为这些化合物中的某些是抗血管生成剂，因此它们是用于抑制当血管生成是一个重要因素时的病症发展的重要物质。本发明的某些化合物作为丝氨酸/苏氨酸激酶如PKCs，erk，MAP激酶，MAP激酶激酶，MAP激酶激酶激酶，cdks，plk-1或Raf-1的抑制剂是有效的。这些化合物可用于治疗癌症，过度增殖性疾病。另外，某些化合物是非受体激酶如Src(例如，Iek，blk和lyn)，Tee，Csk，jak，Map，Nik和Syk族激酶的有效抑制剂。这些化合物可用于治疗癌症，过度增殖性疾病和免疫疾病。
当在VEGF-相关的刺激存在下，或与其联合应用时，本发明某些化合物是选择性的TIE-2激酶抑制剂，它们可能是抗血管生成剂(尤其是与一种或多种VEGFR抑制剂联合)，或前血管生成剂(pro-angiogenic)。以这种方式，这类抑制剂可以被用于促进治疗性血管生成，从而治疗例如，局部缺血，梗塞或闭塞，或促进创伤愈合。
本发明提供抑制酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶的激酶活性的方法，包括对所述的激酶施用其浓度足以抑制所述激酶的酶活性的式I所示的化合物。
本发明还包括这些化合物在包含药用有效量的上述化合物和药用载体或赋形剂的药物组合物中的用途。这些药物组合物可以对个体给药从而减缓或停止在血管生成辅助的疾病中血管生成的进程，或治疗水肿，渗漏，渗出或腹水，和其它与血管渗透性过高有关的疾病。某些药物组合物可以对个体给药，通过抑制丝氨酸/苏氨酸激酶如cdks，plk-1，erk等治疗癌症和过度增殖性疾病。发明详述第一优选组的式I化合物中取代基的定义在下面给出。
优选地，L是-N(R)S(O)2-，-S(O)2N(R)-，-N(R)C(O)-或-C(O)N(R)-，-NH-，-NR-或-O-。
优选地，R3是取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的苯并三唑基，取代或未取代的四氢吡喃基，取代或未取代的四氢呋喃基，取代或未取代的二氧六环，取代或未取代的二氧戊环，取代或未取代的喹啉，取代或未取代的噻唑，取代或未取代的异噁唑，取代或未取代的环戊基，取代或未取代的苯并呋喃，取代或未取代的苯并噻吩，取代或未取代的咪唑，取代或未取代的吡咯，取代或未取代的嘧啶基，取代或未取代的indolynyl，取代或未取代的苯并异噁唑基，取代或未取代的苯并异噻唑，取代或未取代的苯并噻唑，取代或未取代的苯并噁唑，取代或未取代的苯并咪唑，取代或未取代的苯并噁二唑，取代或未取代的苯并噻二唑，取代或未取代的异喹啉基，取代或未取代的喹喔啉基，取代或未取代的吲哚或取代或未取代的吡唑，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的吡啶氧基。在一个方案中，R3是取代或未取代的苯基。
R3可以被一个或多个取代基取代。对于R3优选的取代基有F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，-CHO，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，吡啶氧基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的噻唑基，取代或未取代的苄基，取代的或未取代的苯磺酰基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S(O)x-(取代或未取代的芳基)，-S(O)x-其中x＝0，1，2-(取代或未取代的杂芳基)，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的杂环烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc。
Rf，Rg和氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-员取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的杂双环烷基或取代或未取代的杂芳基。
或者，Rf和Rg各自独立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
Rc是氢，或取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基，-W-(CH2)t-OH，或-W-(CH2)tNH-C(O)Rft是0至约6的整数。
W是化学键或-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，或-NRk-。
Rk是-H或烷基。
Rd， Re和与其连接的氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-员取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂双环基。
或者，Rd和Re各自独立地是-H，烷基，烷酰基或-K-D。
K是-S(O)2-，-C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)2-，或直接键(directbond)。
D是取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳香基，取代或未取代的杂芳烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的氨基烷基，取代或未取代的氨基环烷基，COORi，或取代或未取代的烷基。
Ri是取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
对于R3更优选取代基是F，Cl，Br，I，氰基，硝基，OCF3，CH3，和CF3。
优选地，A环是取代或未取代的苯基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，或取代或未取代的吲哚。在一个方案中，A环是取代或未取代的苯基。
A环可以被一个或多个取代基取代。对于A环优选的取代基有F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的苄基，取代或未取代的苯磺酰基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S-(取代或未取代的芳基)，-S-(取代或未取代的杂芳基)，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的杂环烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc。Rf，Rg和Rc如上定义。
A环更优选地被F，Cl，和硝基取代。
R2优选地是氢。
优选地，R1是环戊基或异丙基。
本文所用的芳香基团包括碳环系(例如苄基和肉桂基)和稠合多环芳香环系(例如萘基和1，2，3，4-四氢萘基)。本文所用的芳基指芳香基团。
本文所用的杂芳香基团包括杂芳基环系(例如噻吩基，吡啶基，吡唑基，异噁唑基，噻二唑基，噁二唑基，吲唑基，呋喃基，吡咯基，咪唑，吡唑，三唑，嘧啶，吡嗪，噻唑，异噁唑，异噻唑，四唑，或噁二唑)和其中碳环芳香环，碳环非芳香环或杂环与一个或多个其它杂环稠合的芳香环系(例如苯并(b)噻吩，苯并咪唑，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并噻二唑基，苯并噁二唑基，吲哚，四氢吲哚，氮杂吲哚，吲唑，咪唑并吡啶，嘌呤，吡咯并[2，3-d]嘧啶，吡唑并[3，4-d]嘧啶)和其N-氧化物。
本文所用的芳烷基是通过具有1至约6个碳原子的脂族基与化合物连接的芳香取代基。
本文所用的杂芳烷基是通过具有1至约6个碳原子的脂族基与化合物连接的杂芳香取代基。
本文所用的杂环烷基是具有3至8个原子，并包括至少一个杂原子，如氮，氧，或硫的非芳香环系。
本文所用的酰基是-C(O)NRxRz，-C(O)ORx，-C(O)Rx，其中Rx和Rz各自独立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基团。
本文所用的脂族基团包括直链，支链或环状完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元的C1-C8烃基。“低级烷基”是具有1至6个碳原子的饱和脂族基。
式I化合物可以存在与药用酸所盐。本发明包括这类盐。这类盐的例子包括盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，甲磺酸盐，硝酸盐，马来酸盐，乙酸盐，柠檬酸盐，富马酸盐，酒石酸盐[例如(+)酒石酸盐，(-)-酒石酸盐或其混合物包括外消旋混合物]，琥珀酸盐，苯甲酸盐和与氨基酸如谷氨酸的盐。这些盐可以通过本专业已知的方法制备。
某些具有酸性取代基的式I化合物可以存在与药用碱的盐。本发明包括这类盐。这类盐的例子包括钠盐，钾盐，赖氨酸盐和精氨酸盐。这些盐可以通过本专业已知的方法制备。
某些式I化合物可以存在多于一种晶型，本发明包括各种晶型和其混合物。
某些式I化合物和其盐也可以以溶剂化物，例如水合物形式存在，本发明包括各种溶剂化物和其混合物。
某些式I化合物可以含有一个或多个手性中心，并以不同的光学活性形式存在。当式I化合物含有一个手性中心时，化合物存在两种对映体形式，本发明包括这两种对映体和对映体的混合物，如外消旋混合物。对映体可以通过本专业已知的方法拆分，例如通过形成可以例如，通过结晶分开的非对映体盐；形成可以例如通过结晶，气-液色谱或液相色谱分开的非对映体衍生物或配合物；一种对映体与对映体-专一试剂的选择性反应，例如酶催化酯化；或在手性环境下的气-液或气相色谱，例如脂族手性载体例如结合有手性配体的硅胶或者在手性溶剂存在下。应该理解，当所需的对映体通过上述分离工艺之一转化为另一化学本体时，需要另一步骤来释放所需的对映体形式。另外，特定的对映体可以通过用光学活性试剂，底物，催化剂或溶剂，不对称合成，或通过不对称转移将一种对映体转化为另一种。
当式I化合物含有多于一个手性中心时，可以存在非对映体形式。非对映体对可以通过本专业已知的方法，例如色谱或结晶而分离，而各对中的单个对映体可以如上所述分离。本发明包括式I化合物的各种非对映体和其混合物。
某些式I化合物可以存在不同的互变异构形式或不同的几何异构体，本发明包括式I化合物的各种互变异构体和/或几何异构体，和其混合物。
某些式I化合物可以存在不同的可被分离的稳定构象形式。由于不对称单键，例如因为立体位阻或环张力而限制旋转的扭力不对称，使得不同构象异构体的分离成为可能。本发明包括式I化合物的各种构象异构体和其混合物。
某些式I化合物可以存在两性离子形式，本发明包括式I化合物的各种两性离子形式和其混合物。
优选的式I化合物包括如下N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-(三氟甲氧基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-硝基苯基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-4-氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氰基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-硝基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氟-1-苯磺酰胺，Nl-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3，4-三氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3，4-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-溴-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4，6-三氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-碘-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2，5-二氟-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氰基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-6-甲基-1-苯磺酰胺，N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-氯-2-甲基-1-苯磺酰胺，N2-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4，5-二溴-2-噻吩磺酰胺，N2-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-溴-2-噻吩磺酰胺，N2-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-溴-5-氯-2-噻吩磺酰胺，N3-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氯-3-噻吩磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-氯-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-氯-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺，N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-(2-硝基苯基)甲磺酰胺，和N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二溴-3，6-二氟-1-苯磺酰胺。
本发明化合物具有抗血管生成性质。这些抗血管生成性质是因为至少部分抑制对于血管生成过程必要的蛋白酪氨酸激酶。为此，这些化合物可以用作抗诸如关节炎，动脉粥样硬化，再狭窄，牛皮癣，血管瘤，心肌血管生成，冠状或脑血管侧突，局部缺血性肢血管生成，局部缺血/再灌注损伤，创伤愈合，消化道溃疡螺旋菌相关的疾病，病毒引起的血管生成性疾病，骨折，Crow-Fukase综合征(POEMS)，子痫前期，月经频多，猫抓热，潮红，新血管青光眼和视网膜病如与糖尿病性视网膜病，早熟的视网膜病，或与年龄有关的黄斑变性之类病症的活性剂。另外，这些化合物中的某些可以用作抗实体肿瘤，恶性腹水，von Hippel Lindau病，造血癌和过度增殖性疾病如甲状腺增殖(尤其是Grave，s病)，和囊肿(如多囊卵巢综合征的特征(Stein-Leventhal综合征)性的卵巢基质的多血管和多囊肾病)的活性剂。
而且，这些化合物中的某些可以用作烧伤，慢性肺病，中风，息肉，过敏症，慢性和过敏性炎症，延迟型超敏反应，卵巢过度刺激综合征，脑瘤相关的脑水肿，高原症，外伤或缺氧引起的脑或肺水肿，眼或黄斑水肿，腹水，肾小球性肾炎和其它以血管渗透性过高，渗漏，渗出，蛋白外渗，或水肿为表现的疾病的活性剂。这些化合物也可用于治疗其中蛋白外渗导致纤维蛋白和细胞外基质沉积，促进基质增殖(例如瘢痕疙瘩，纤维变性，硬变和腕管综合征)的疾病。增多的VEGF产生加强了炎症过程如单核细胞补充和激活。本发明的化合物也可用于治疗炎症如肠炎(IBD)和Crohn’s病。
VEGF’s是独特的，其是已知仅有的导致血管渗透性过高和水肿形成的血管生长因子。实际上，与许多其它生长因子的表达或给药有关的血管渗透性过高和水肿似乎是由VEGF产生而介导的。炎性胞质分裂刺激VEGF产生。缺氧导致许多组织中VEGF的明显上调，此后情况包括梗塞，闭塞，局部缺血，贫血，或典型地引起VEGF/VPF介导的应答的循环损伤。常常伴随血细胞渗出的血管渗透性过高，相关水肿，阉割的皮交换和大分子外渗可以导致过量基质沉积，异常的基质增殖，纤维变性，等等。因此，VEGF介导的高渗透性可以明确地导致具有这些病因学特征的疾病。
因为胚泡植入，胎盘发育和胚胎生成是血管生成依赖性的，本发明某些化合物可用作避孕药和抗受精剂。
设想上述疾病由包括KDR/VEGFR-2和/或Flt-1/VEGFR-1和/或TIE-2酪氨酸激酶的蛋白酪氨酸激酶活性介导到显著的程度。通过抑制这些酪氨酸激酶的活性，所列出的疾病进程被抑制，因为该病症的血管生成或相关高渗透性成分被严重消减。通过其对特异性酪氨酸激酶的选择性，本发明某些化合物的作用导致副作用的最小化，而这些副作用在使用选择性较小的酪氨酸激酶抑制剂时会存在。本发明某些化合物也是FGFR，PDGFR，c-Met和IGF-1-R的有效抑制剂。这些受体激酶可以直接或间接地在各种疾病中强化血管生成和过度增殖应答，因此其抑制可以阻止疾病的进程。
本发明化合物对蛋白激酶具有抑制活性。即，这些化合物通过蛋白激酶调节信号传导。本发明化合物抑制丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶类的蛋白激酶。特别是，这些化合物选择性地抑制KDR/FLK-1/VEGFR-2酪氨酸激酶的活性。本发明某些化合物也抑制其它酪氨酸激酶如Flt-1/VEGFR-1，Tie-2，FGFR，PDGFR，IGF-1-R，c-Met，Src-亚族激酶如Lck，Src，fyn，yes等等的活性。另外，本发明某些化合物明显地抑制在细胞增殖和细胞周期进程中扮演必要角色的丝氨酸/苏氨酸激酶如PKC，MAP激酶，erk，CDKs，plk-1，或Raf-1。本发明一般化合物对特定蛋白激酶的效力和特异性常常可以通过取代基(即，R1，R2，R3，A和环1)性质，数量和排列的改变和构象限制而改变和最佳化。另外，某些化合物的代谢物也具有明显的蛋白激酶抑制活性。
当对需要这类化合物的个体给药时，本发明化合物在这些个体内抑制血管渗透性过高和水肿形成。据信，这些化合物通过抑制与血管渗透性过高和水肿形成有关的KDR酪氨酸激酶的活性而发挥作用。KDR酪氨酸激酶也被称为FLK-1酪氨酸激酶，NYK酪氨酸激酶或VEGFR-2酪氨酸激酶。当血管内皮细胞生长因子(VEGF)或其它活化配体(如VEGF-C，VEGF-D，VEGF-E或HIV Tat蛋白)与处于血管内皮细胞表面的KDR酪氨酸激酶受体结合时，KDR酪氨酸激酶被激活。随着这类KDR酪氨酸激酶的激活，血管的高渗透性就发生了，液体从血流中流出血管壁进入间质空间，从而形成水肿区。血细胞渗出常常伴随着此反应。类似地，过度的血管渗透性过高可以扰乱在关键组织和器官(例如，肺和肾)中穿过内皮的正常分子交换，从而引起大分子外渗和沉积。随着对被认为加速随后血管生成过程的KDR刺激的急性反应，延长的KDR酪氨酸激酶刺激导致血管内皮细胞的增殖和趋化性和新血管形成。通过抑制KDR酪氨酸激酶活性，通过阻断活化配体的产生，通过阻断活化配体与KDR酪氨酸激酶受体结合，通过防止受体二聚和磷酸转移作用，通过抑制KDR酪氨酸激酶的酶活性(抑制酶的磷酸化功能)或一些其它中断其下游信号传导的机制(D.Mukhopedhyay等，Caner Res.581278-1284(1998)和其参考文献)，高渗透性和相关的外渗，随后的水肿形成和基质沉积，和血管生成反应，可以被抑制和最小化。
一组优选的本发明化合物具有抑制KDR酪氨酸激酶活性而不明显抑制Flt-1酪氨酸激酶活性(Flt-1酪氨酸激酶也称为VEGFR-1酪氨酸激酶)。KDR酪氨酸激酶和Flt-1酪氨酸激酶两者分别通过VEGF与KDR酪氨酸激酶受体和Flt-1酪氨酸激酶受体结合而被激活。某些优选的本发明化合物是独特的，因为它们抑制被活化配体激活的一种VEGF-受体酪氨酸激酶(KDR)，而不抑制由某些活化配体激活的其它受体酪氨酸激酶，如Flt-1。这样的话，某些优选的本发明化合物在其酪氨酸激酶抑制活性方面是选择性的。
在一个方案中，本发明提供治疗病人的蛋白激酶-介导的病症的方法，包括对病人施用治疗或预防有效量的一种或多种式I化合物。
蛋白激酶-介导的病症”是医学病症，如疾病或其它不好的生理状态，其产生和发展至少部分依赖于至少一种蛋白激酶的活性。蛋白激酶可以是，例如，蛋白酪氨酸激酶或蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。
被治疗的患者可以是任何动物，并且优选地是哺乳动物，如家畜或牲畜。更优选地，患者是人。
“冶疗有效量”是完全或部分抑制病症的进程，或至少部分缓解病症的一种或多种症状的式I化合物或两种或多种这类化合物组合的量。治疗有效量也可以是预防有效量。治疗有效量将取决于患者的体重和性别。被治疗的病症，病情和所需的结果。对于给定的患者，治疗有效量可以通过本专业已知的方法确定。
本发明的方法可用于治疗蛋白激酶-介导的病症，如任何上述病症。在一个实施方案中，蛋白激酶-介导的病症的特征是讨厌的血管生成，水肿，或基质沉积。例如，该病症可以是一种或多种溃疡，如由细菌或真菌感染引起的溃疡，Mooren溃疡和溃疡性结肠炎。该病症也可以是由微生物感染引起的，如Lyme病，脓毒病，脓毒性休克或被单纯疱疹，带状疱疹，人免疫缺损病毒，原生动物，弓形体病或副痘病毒感染；血管生成疾病，如von Hippel Lindau病，多囊肾病，类天疱疮，Paget’s病和牛皮癣；再生性疾病，如子宫内膜异位，卵巢过度刺激综合征，子痫前期或月经频多；纤维变性和水肿性病症，如肉样瘤病，纤维变性，硬变，甲状腺炎，高粘滞性综合征系，Osler-Weber-Rendu病，慢性闭塞性肺病，哮喘，烧伤后的水肿，创伤，放射，中风，缺氧或局部缺血；或炎症/免疫学病症，如系统性狼疮，慢性炎症，肾小球性肾炎，滑膜炎，炎性肠病，Crohn’s病，类风湿性关节炎，骨关节炎，多发性硬化和移植排异反应。合适的蛋白激酶-介导的病症也包括镰形细胞贫血，骨质疏松症，骨硬化病，肿瘤-引起的血钙过多和骨迁移。其它可用本发明方法治疗的蛋白激酶-介导的病症包括眼病如眼和黄斑水肿，眼新血管病，巩膜炎，放射状角膜切开术，眼色素层炎，vitritis，近视，眼窝(opticpits)，慢性视网膜脱离，后-激光并发症，结膜炎，Stargardt’s病和Eales病，以及视网膜病和黄斑变性。
本发明化合物也可用于治疗心血管病如动脉粥样硬化，再狭窄，血管闭塞和颈动脉阻塞病。
本发明化合物也可用于治疗癌症相关的指征如实体肿瘤，肉瘤(尤其是Ewing’s肉瘤和骨肉瘤)，成视网膜细胞瘤，横纹肌肉瘤，成神经细胞瘤，造血性癌，包括白血病和淋巴瘤，肿瘤引起的胸膜或心包渗出，和恶性腹水。
本发明化合物也可用于治疗Crow-Fukase(POEMS)综合征和糖尿病性症如青光眼，糖尿病性视网膜病和微血管病。
激酶的Src，Tec，Jak，Map，Csk，NFkB和Syk族在免疫功能的调节中起着关键作用。Src家族现在包括Fyn，Lck，Fgr，Fes，Lyn，Src，Yrk，Fyk，Yes，Hck，和Blk。现在理解Syk家族只包括Zap和Syk。TEC家族包括Tec，Btk，Rlk和Itk。激酶的Janus家族与生长因子原炎性胞质分裂信号经多个受体的传导有关。虽然BTK和ITK作为激酶Tec家族的成员在免疫学中起着较少被认识的作用，但其通过抑制剂的调节作用可以证明治疗优点。Csk家族现在被认为包括Csk和Chk。激酶的RIP，IRAK-2，NIK，p38MAP激酶，Jnk，IKK-1和IKK-2与关键的原炎性胞质分裂，如TNF和IL-1信号传导途径有关。由于其抑制这些激酶一种或多种的能力，式I化合物可以作为免疫调节剂，用于保持同种异体移植，治疗自身免疫失调和治疗脓毒病，脓毒性休克。由于其调节T细胞，B细胞，肥大细胞，单核细胞和中性白细胞的迁移或活化，这些化合物可被用于治疗诸如自身免疫疾病和脓毒病的疾病。移植排斥的预防，即受试者对实体器官移植物，或移植物对受试者骨髓的排斥预防，受到现有免疫抑制剂毒性的限制，并从改进治疗指数的有效药物获得好处。基因靶实验已经证实了Src在破骨细胞生物学中的主要角色，该细胞对骨吸收有反应。由于其调节Src的能力，式I化合物也可用于治疗骨质疏松症，骨硬化病，Paget’s病，肿瘤-引起的血钙过多和骨迁移。
许多蛋白激酶已经被证明为原癌基因。染色体断裂(在染色体5的ltk激酶断裂点)，如在Abl基因的情况下由BCR(Philadelphia染色体)的易位，在诸如c-Kit或EGFR情况下的截短，或突变(例如Met)导致调节异常蛋白的产生，使其从原癌基因转化为癌基因产物。在其它肿瘤中，癌变由自分泌或旁分泌配体/生长因子受体相互作用驱动。src-族激酶成员典型地与下游信号传导有关，从而加强癌变，它们本身可以通过超表达或突变而变为癌基因。通过抑制这些蛋白的激酶活性，疾病进程可以被破坏。血管再狭窄可能与FGF和/或PDGF-促进的平滑肌和内皮细胞增殖有关。FGFR，PDGFR，IGF1-R和c-Met的体内配体刺激是原血管生成的，并强化血管生成依赖性疾病。单独或联合抑制FGFr，PDGFr，c-Met，或IGF1-R激酶活性可能是抑制这些现象的有效战略。因此，抑制正常或异常的c-kit，c-met，c-fms，src-族成员，EGFr，erbB2，erbB4，BCR-Abl，PDGFr，IGF1-R和其它受体或胞质酪氨酸激酶的激酶活性的式I化合物可能在治疗良性和肿瘤增殖疾病中有价值。
在许多病症(例如，实体原发肿瘤和转移，Kaposi’s瘤，风湿性关节炎，由于不良的眼新血管化引起的失明，牛皮癣和动脉粥样硬化)中，疾病进程依持续的血管生成而定。多肽生长因子常常由疾病组织或相关的炎性细胞产生，而其相应的内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶(例如，KDR/VEGFR-2，flt-1/VEGF-1，Tie-2/Tek和Tie)对于刺激内皮细胞生长，迁移，器官化，必要的新功能性脉管系统的区分和确定是很重要的。作为VEGF的血管渗透性因子活性在介导血管渗透性过高方面的结果，VEHFR激酶的VEGF-刺激也被认为在肿瘤腹水，脑和肺水肿形成，胸膜和心包渗出，延迟型过敏反应，创伤，烧伤，局部缺血之后的，组织水肿和器官机能障碍，糖尿病并发症，子宫内膜异位，成年性呼吸窘迫综合征(ARDS)，后心肺旁路相关的第血压和高渗透性，眼水肿导致青光眼或异常新相关形成致盲中扮演重要角色。除VEGF之外，最近确定的VEGF-C和VEGF-D，和病毒编码的VEGF-E或HIV-Tat蛋白经VEGFR激酶的刺激也能引起血管渗透性过高反应。KDR/VEGFR-2和Tie-2也在选定群的生血茎细胞中表达。该群中的某些成员是多性能的，并且可以用生长因子刺激，异化为内皮细胞，并参与血管发生的血管生成过程。为此，这些已经被称为内皮祖先细胞(EPCs)(J.Clin.Investig.1031231-1236(1999))。在一些祖先中，Tie-2可以在其恢复，粘结，调节和演变中扮演角色(Blood，4317-4317(1997))。根据式I的某些可以阻断内皮细胞特异性激酶的激酶活性的药剂可以抑制与这些状况有关的疾病进程。
Tie-2拮抗剂配体(Ang-2)的血管失衡被认为在内皮中诱导不稳定的“可塑的”状态。在高VEGF水平存在下，可以产生强的血管生成反应；但是，在没有VEGF或VEGF-相关的刺激时，可以发生症状明显的血管退化和内皮细胞凋亡(Genes and Devel.131055-1066(1999))。以类似的方式，Tie-2激酶抑制剂可以分别在有或没有VEGF-相关的刺激存在下是促血管生成的(proangiogenic)或抗血管生成的。因此，Tie-2抑制剂可以与适当的前血管生成刺激，如VEGF用于在诸如创伤，梗塞和局部缺血的情况下促进治疗性血管生成。
式I化合物或其盐或含有治疗有效量该化合物的药物组合物可被用于治疗蛋白激酶介导的病症，例如如前所述的良性和赘生的增殖性疾病和免疫系统疾病。例如，这类疾病包括自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎，甲状腺炎，1型糖尿病，多发性硬化，肉瘤病，炎性肠病，Crohn’s病，重症肌无力和系统性红斑狼疮；牛皮癣，器官移植排异(例如肾排异，移植对受试者病)，良性和赘生的增殖性疾病，人类癌症如肺癌，乳腺癌，胃癌，膀胱癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌，前列腺癌和直肠癌，和造血性癌(白血病和淋巴瘤)，和与讨厌的血管形成有关的疾病，例如糖尿病型视网膜病，早熟的视网膜病，由于与年龄有关的黄斑变性的脉络膜新血管形成，和人类婴儿的血管瘤。另外，这类抑制剂可以由于治疗与VEGF介导的水肿，腹水，渗出，和渗出液有关的病症，包括，例如黄斑水肿，脑水肿，急性肺损伤和成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。
本发明化合物也可用于预防上述疾病。
设想上述疾病由包括VEGF受体(例如KDR，Flt-1和/或Tie-2)的蛋白酪氨酸激酶活性介导到明显的程度。通过抑制这些酪氨酸激酶的活性，所列出的疾病进程被抑制，因为该病症的血管生成或相关高渗透性成分被严重消减。通过其对特异性酪氨酸激酶的选择性，本发明某些化合物的作用导致副作用的最小化，而这些副作用在使用选择性较小的酪氨酸激酶抑制剂时会存在。
本发明另一方面提供用作医药，尤其是作为蛋白激酶活性例如酪氨酸激酶活性，丝氨酸和苏氨酸激酶活性的抑制剂的如前定义的式I化合物。本发明还一方面提供如前定义的式I化合物在生产用于抑制蛋白激酶活性的医药中的用途。
在本发明中，可用下列定义“生理上可接受的盐”指保持游离碱的生物效力和性质，通过与无机酸如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸或有机酸如芳基磺酸，羧酸，有机磷酸，甲磺酸，乙磺酸，对甲苯磺酸，水杨酸，乳酸，酒石酸，马来酸等等反应所得的盐。
“烷基”指饱和脂肪烃，包括具有1至6个碳原子的直链或支链基团，或具有3至6个碳原子的环状烃基。
“烷氧基”指“O-烷基”，其中“烷基”如上定义。药物制剂本发明化合物可以本身或者以与合适的载体或赋形剂混合的药物组合物以治疗或改善血管渗透性过高，水肿和相关疾病的剂量对病人给药。这些化合物的混合物也可以以简单混合物或者以配制的药物组合物对病人给药。治疗有效剂量还指足以对新血管形成，过度增殖性疾病进程，水肿，VEGF-相关的高渗透性和/或VEGF-相关的低血压产生预防或缓解作用的化合物量。用于配制和给药本申请化合物的技术可以在“Remington’s Pharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA，最近的版本中找到。
给药途径合适的给药途径可以，例如，包括口服，滴眼，直肠，经粘膜，局部，或盲肠给药；肠胃外输送，包括肌内，皮下，髓内注射，以及鞘内，直接心室内，静脉内，腹膜内，鼻内，或眼内注射。
另外，也可以局部而非系统的方式给药化合物，例如直接往水肿区注射化合物，通常是以储存或缓释制剂给药。
而且，可以在靶药物输送系统，例如，在用内皮细胞-特异性抗体包衣的脂质体内给药。组合物/制剂本发明的药物组合物可以用已知的方法生产，例如，通过常规混合，溶解，造粒，制丸，研末，乳化，胶囊化，捕集或冻干法。
用于本发明中的药物组合物可以用常规方式，用一种或多种生理上可接受的载体包括促进活性化合物加工的赋形剂和辅助剂配制成可药用的制剂。合适的制剂取决于所选择的给药途径。
对于注射，本发明的药剂可以被配制成水溶液，优选在生理上可共容的缓冲液，如Hanks’s溶液，Ringer’s溶液，或生理盐水缓冲液中的溶液。对于经髓内给药，与被渗透的屏障相适应的渗透剂被用于制剂中。这类渗透剂是本专业公知的。
为了口服给药，化合物可以被容易地通过使活性化合物与本专业公知的药用载体结合而配制。这类载体可以使本发明化合物配制成片剂，小丸，糖丸，胶囊，液体，凝胶，糖浆，浆状物，悬浮液等，由被治疗的病人口服摄入。口服的药物制剂可以通过将活性化合物与固体赋形剂结合，任选地研磨产生的混合物，加入辅助剂之后，如果需要，加工颗粒的混合物，得到片剂或糖丸芯。合适的赋形剂有，特别是，填充剂如糖类，包括乳糖，蔗糖，甘露糖醇，或山梨糖醇；纤维素制剂如，例如，玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃著淀粉，明胶，黄蓍胶，甲基纤维素，羟基丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。如果需要，加入崩解剂，如交联聚乙烯基吡咯烷酮，琼脂，或藻酸或其盐如藻酸钠。
糖衣丸芯用合适的包衣装配。为此，可以使用浓糖溶液，该溶液任选地含有阿拉伯胶，滑石，聚乙烯基吡咯烷酮，carbopol胶，聚乙二醇，和/或二氧化钛，生漆溶液，和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可以被加入片剂或糖丸包衣中用于区分和特性化活性化合物剂量的不同组合。
可用于口服的药物制剂包括由明胶制造的推入配合胶囊，以及由明胶和增塑剂，如甘油或山梨糖醇制造的密封软胶囊。推入配合胶囊可以含有与填充剂如乳糖，黏合剂如淀粉，和/或乳化剂如滑石或硬脂酸镁，和任选地稳定剂混合的活性成分。
在软胶囊中，活性化合物可以溶于或悬浮于合适的液体，诸如脂肪油，液体石蜡，或液体聚乙二醇。此外，可以加入稳定剂。所有用于口服的制剂应当是适合口服给药的剂量。
对于口腔含化给药，组合物可能采取传统方式配制的片剂或锭剂。
对于吸入给药，本发明使用的化合物常规的通过压力包装以气雾剂喷射传递或喷雾器传递，使用适当的推进剂，例如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟甲烷，二氧化碳或其他合适的气体。对于压缩气雾剂，可能提供阀释放测定量来确定剂量单位。用于吸入或吹入器的例如明胶等制成的胶囊或筒可以通过含有化合物的粉末混合物以及适当的粉末基质诸如乳糖或淀粉来制成。
化合物可以配制成用于通过注射，例如快速(bolus)注射或连续灌注肠胃外给药。用于注射的制剂可以以单位剂量形式存在，例如在安瓿中或在多剂量容器中，加入防腐剂。该组合物可以采取诸如在油或水性载体中的悬浮液，溶液或乳化液的形式，并可以含有诸如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂的配制剂。
用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶形式活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的悬浮液可以制成油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油如蓖麻油，或合成脂肪酸酯，如油酸乙酯或三甘油酸酯，或脂质体。含水注射液或悬浮液可以含有增加悬浮液黏性的物质，如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇，或葡聚糖。任选地，悬浮液也可以含有合适的稳定剂或增加化合物溶解性的药剂，从而制备高度浓缩的溶液。
或者，活性成分在使用之前可以是与合适的载体，例如无菌的无热原水配制的粉末形式。
化合物也可以被配制成直肠用组合物，如栓剂或保留灌肠剂，例如，含有普通栓剂基如可可脂或其它甘油酯。
除前面所述的制剂外，化合物也可以被配制成储存制剂。这类长时间作用制剂可以通过植入给药(例如皮下或肌内或通过肌内注射)。因此，例如，化合物可以用合适的聚合物或疏水物质配制(例如在合适的油中的乳化液)或与离子交换树脂配制，或难溶衍生物，例如难溶盐配制。
用于本发明疏水化合物的药用载体的例子是共溶剂体系，包括苄基醇，非极性表面活性剂，水-混溶性有机聚合物，和水相。共溶剂体系可以是VPD-共溶剂体系。VPD是3％w/v苄基醇，8％w/v非极性表面活性剂聚山梨酸酯80，和65％w/v聚乙二醇300，在绝对乙醇中加至体积。VPD-共溶剂体系(VPD5W)由用5％糊精水溶液1∶1稀释的VPD组成。该共溶剂体系能够很好地溶解疏水化合物，并在系统给药时产生低毒性。自然，共溶剂体系可以有相当大的变化而不破坏其溶解性和毒性特征。而且，共溶剂成分的同一性可以变化例如，其它低毒性非极性表面活性剂可以被用于代替聚山梨酸酯80；聚乙二醇的级分大小可以变化；其它生物共容聚合物可以代替聚乙二醇，例如聚乙烯基吡咯烷酮；其它糖或多糖可以取代糊精。
或者，可以使用疏水药用化合物的其它输送系统。脂质体和乳化液是疏水药物输送载体的已知例子。某些有机溶剂如二甲亚砜也可被使用，尽管其毒性较大。另外，化合物可以用缓释系统输送，如含有治疗剂的固体疏水聚合物的半渗透基块。各种缓释物质已经确定并且是本专业技术人员已知的。根据其化学性质，缓释胶囊可以在几周直至100天。根据治疗剂的化学性质和生物学稳定性，也可以使用其它用于蛋白稳定的战略。
药物组合物也可以包括合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的例子包括但不限于碳酸钙，磷酸钙，各种糖，淀粉，纤维素衍生物，明胶，和诸如聚乙二醇的聚合物。
许多本发明化合物可以是与药学上共容的抗衡离子的盐。药学上共容的盐可以与许多酸，包括但不限于盐酸，硫酸，乙酸，乳酸，酒石酸，苹果酸，琥珀酸等等形成。盐与相应的游离碱形式相比，在水或其它质子性溶剂中有更大溶解性。有效剂量适用于本发明的药物组合物包括其中含有有效量活性成分以实现其预定目的的组合物。更具体地，治疗有效量指能有效预防病症的发展或减轻存在的症状。有效量的确定在本专业技术人员的能力之内。
对于用于本发明方法中的任何化合物，治疗有效剂量可以从细胞分析开始估计。例如，剂量可以在细胞和动物模型中配制，以实现循环浓度范围，包括在细胞分析中测定的IC50(即，实现给定蛋白激酶活性一半最大抑制的试验化合物浓度)。在一些情况下，需要在3至5％血清白蛋白存在下测定IC50，因为这类测定接近血浆蛋白与化合物的结合效果。这类信息可以用于更精确地测定在人体内的有用剂量。而且，用于系统给药的最优选化合物在完整的细胞中以在血浆中安全地获取的水平有效地抑制蛋白激酶信号传导。
治疗有效剂量指导致病人症状改善的化合物量。这类化合物的毒性和治疗效力可以通过在细胞培养或实验动物中的标准药学过程测定，例如，用于测定最大耐受剂量(MTD)和ED50(50％最大响应的有效剂量)。在毒性和治疗效果之间的剂量比治疗指数，它可以以MTD和ED50之间的比例表达。显示高治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养分析和动物研究所得的数据可被用于配制用于人体内的剂量范围。这类化合物的剂量优选地取决于包括具有小毒性或无毒性的ED50的循环浓度范围。该剂量可以在此范围内根据所用的剂形和所用的给药途径变化。具体的制剂，给药途径和剂量可以由具体医师根据病情选择。(参见例如Fingl等，1975，在“The Pharmacological Basis of Therapeutics”，Ch.l pl)。在治疗危象时，接近MTD的急性快速(bolus)或灌注给药需要得到快速响应。
剂量和间隔可以被个别调节以提供使活性部分的血浆浓度足以保持激酶调节作用，或最小有效浓度(MEC)。MEC将对于各化合物变化，但可以从体外数据估计；例如，用本文所述的分析实现50-90％蛋白激酶抑制需要的浓度。需要实现MEC的剂量将取决于个体的特征和给药途径。但是，HPLC分析或生物试验可被用于测定血浆浓度。
剂量间隔也可以用MEC值测定。化合物将用使血浆水平超过10-90％的时间，优选30-90％，最优选50-90％的模式给药，直至达到所需的症状改善。在局部给药或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
当然，被给药组合物的量将取决于被治疗的受试者，受试者重量，病情，给药方式和主治医师的判断。包装如果需要，组合物存在于可以含有活性成分的一个或多个单位剂型的包装，或调剂装置中。该包装可以例如包括金属或塑料箔，如发泡包装。包装，或调剂装置可以附有给药装置。包含配制于共容药用载体中的本发明化合物也可以被制备，放置于适当的容器中，并标记治疗的适应症。
在一些制剂中，以非常小的尺寸，例如通过流体能量磨所得的颗粒形式使用化合物是有益的。
本发明化合物在生产药物组合物中的用途由如下叙述说明。在该叙述中，术语“活性化合物”指本发明的任何化合物，但特别是作为一个前面的实施例中的最终产物的任何化合物。a)胶囊在胶囊的制备中，10份重的活性化合物和240份重的乳糖可以被分散并掺混。混合物可以被填充到硬胶囊中，各胶囊含有单位剂量或单位剂量的一部分的活性化合物。b)片剂可以从下列成分制备片剂重量份数活性化合物10乳糖 190玉米淀粉 22聚乙烯基吡咯烷酮 10硬脂酸镁 3活性化合物，乳糖和一些淀粉可以被分散，掺混，产生的混合物可以用聚乙烯基吡咯烷酮的乙醇溶液造粒。干燥的颗粒可以与硬脂酸镁和剩余的淀粉掺混。然后将混合物在压片机内压制，给出各含有有单位剂量或单位剂量的一部分活性化合物的片剂。c)肠衣片剂可以通过上面(b)所述的方法制备片剂。该片剂可以用20％纤维素乙酸酯苯二甲酸酯和3％邻苯二甲酸二乙酯在乙醇∶二氯甲烷(1∶1)中的溶液以常规方法包肠衣。d)栓剂在栓剂的制备中，100份重的活性化合物可以被掺入1300份重的三甘油酯栓剂基中，使混合物形成各含有治疗有效量的活性成分的栓剂。
在本发明的组合物中，如果需要，活性化合物可以与其他可相容的药理活性成分结合。例如，本发明化合物可以与一种或多种其他抑制或预防VEGF或血管形成素(angiopoietin)产生，减弱对VEGF或血管形成素的细胞内反应，阻断细胞内信号转导，抑制血管渗透性过高，减轻炎症，或抑制或预防水肿或新血管形成的药剂联合给药。本发明化合物可以在之前，之后或者与其他药剂同时给药，只要给药过程是合适的。其他药剂包括但不限于消炎或消水肿甾类，NSAIDS，ras抑制剂，抗-TNF剂，抗-IL1剂，抗组胺剂，PAF-拮抗剂，COX-1抑制剂，COX-2抑制剂，NO合成酶抑制剂，Akt/PTB抑制剂，IGF-1R抑制剂，PKC抑制剂和PI3激酶抑制剂。本发明化合物和其他药剂要么累加性地作用，要么协同性地作用。因此，抑制血管生成，血管渗透性过高和/或抑制水肿形成的物质这类联合给药与任一物质单独给药相比，可以更大减轻过度增殖疾病，血管生成，血管渗透性过高或水肿的不利作用。在治疗恶性疾病时，预计与抗增殖或细胞毒性化疗联合，高温治疗，大量供氧或放射治疗联合。
本发明也包括使用式I化合物作为医药。
本发明另一方面提供式I化合物或其盐在生产用于治疗哺乳动物，尤其是人类血管渗透性过高，血管生成-依赖性疾病，增殖性疾病和/或免疫系统疾病的药物中的用途。
本发明也提供治疗哺乳动物，尤其是人类血管渗透性过高，血管生成-依赖性疾病，增殖性疾病和/或免疫系统疾病的方法，该方法包括对需要治疗的哺乳动物，尤其是人类施用治疗有效量的式I化合物。
化合物在抑制这些蛋白激酶中的体外效力可以通过下面详细给出的方法测定。
化合物的效力可以通过由试验化合物相对于对照的外源性底物(例如，合成的肽(Z.Songyang等，Nature.373536-539)的磷酰化抑制量测定。用杆状病毒系统生产KDR酪氨酸激酶用从HUVEC细胞分离的cDNA经PCR产生人KDR细胞内结构域(aa789-1354)的编码序列。聚-His6序列被引入此蛋白的N-端。该片断在Xba I和Not I位点被克隆到转染载体pVL1393。重组杆状病毒(BV)用BaculoGold转染试剂(PharMingen)经共转染产生。重组BV被噬斑纯化并经Western分析证实。为了生产蛋白质，将SF-9细胞以2×106/ml的密度在SF-900-II培养基中生长，并以每个细胞0.5个噬斑形成单位(MOI)进行感染。在感染后48小时收获细胞。KDR的纯化通过将50ml Triton X-100裂解缓冲液(20mM Tris，pH8.0，137mMNaCl，10％甘油，1％Triton X-100，1mM PMSF，10μg/ml抑蛋白酶肽，1μg/ml亮抑蛋白酶肽)加入从1L细胞培养物所得的细胞沉淀物而裂解表达(His)6KDR(aa789-1354)的SF-9细胞。裂解液在4℃于SorvalSS-34转子中以19000rpm离心30分钟。将细胞裂解液上样于5ml用50mM HEPES，pH7.5，0.3M NaCl平衡过的NiCl2螯合琼脂糖凝胶柱。用含有0.25M咪唑的相同缓冲液洗脱KDR。用测定激酶活性的SDS-PAGE和ELISA试验(下面)分析柱级分。纯化的KDR被交换到25mM HEPES，pH7.5，25mM NaCl，5mM DTT缓冲液中并在-80℃贮存。人Tie-2激酶生产和纯化用从人胎盘分离的cDNA作为模板，经PCR产生人Tie-2细胞内结构域(aa775-1124)的编码序列。聚-His6序列被引入此蛋白的N-端，该构建体在Xba I和Not I位点被克隆到转染载体pVL1393。用BaculoGold转染试剂(PharMingen)经共转染产生重组BV。重组BV被噬斑纯化并经Western分析证实。为了生产蛋白质，将SF-9细胞以2×106/ml的密度在SF-900-II培养基中生长，并以每个细胞0.5个噬斑形成单位(MOI)进行感染。用于筛选的His-标记激酶的纯化与对于KDR所述的类似。人Flt-1酪氨酸激酶生产和纯化使用杆状病毒表达载体pVL1393(Phar Mingen，Los Angeles，CA)。编码聚His6的核苷酸序列被置于编码人Flt-1整个细胞内激酶结构域(氨基酸786-1338)的核苷酸区的5’方向。使用从HUVEC细胞分离的cDNA文库经PCR产生编码激酶结构域的核苷酸序列。组氨酸残基使得蛋白质亲和纯化类似于KDR和ZAP70。以0.5的感染复数感染SF-9昆虫细胞，感染后48小时收获细胞。EGFR酪氨酸激酶来源EGFR从sigma购买(Cat#E-3641；500单位/50μl)，而EGF配体从Oncogene Research Products/Calbiochem获得(Cat#PF011-100)。ZAP70的表达使用的杆状病毒表达载体是pVL1393(Pharmingen，Los Angeles，CA)。编码氨基酸M(H)6LVPR9S的核苷酸序列被置于编码整个ZAP70(氨基酸1-619)的核苷酸区的5’方向。用从Jurkat无限增殖的T-细胞分离的cDNA文库经PCR产生编码ZAP70编码区的核苷酸序列。组氨酸残基使得蛋白质(见下文)能够亲和性纯化。L VPR9S桥构成凝血酶蛋白裂解识别序列，能够从酶中除去亲和性标记。以0.5感染复数来感染SF-9昆虫细胞，并在感染后48小时收获细胞。ZAP70的提取和纯化通过在由20mM Tris，pH8.0，137mM NaCl，10％甘油，1％ TritonX-100，1mM PMSF，1μg/ml亮抑蛋白酶肽，10μg/ml抑蛋白酶肽和1mM原钒酸钠组成的缓冲液中裂解SF-9细胞。将可溶性的裂解液上样于用50mM HEPES，pH7.5，0.3M NaCl平衡过的螯合琼脂糖凝胶HiTrap柱(Pharmacia)。融合蛋白用25mM咪唑洗脱。将酶贮存在50mM HEPES，pH7.5，50mM NaCl和5mM DTT缓冲液中。蛋白激酶来源Lck，Fyn，Scr，Blk，Csk，和Lyn，和其截短的形式可以购买(例如从Upstate Biotechnology Inc.(Saranac Lake，N.Y)和Santa CruzBiotechnology Inc.(Santa Cruz，Ca.))，或用常规的方法从已知的天然或重组的来源提纯。
PTK酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫吸附试验(ELISA)被用于检测和测量酪氨酸激酶活性的存在。根据例如，Voller等，1980，‘酶联免疫吸附试验”在临床免疫学手册，第2版，由Rose和Friedman，pp 359-371美国微生物学学会(华盛顿)中所述的已知方案进行ELISA。
所公开的方案适于测定特异性PTK的活性。例如，进行ELISA实验的优选方案在下面给出。这些测定化合物活性的方案适合于受体PTK家族其它成员，和非受体酪氨酸激酶的适应性变化在本专业技术人员的能力范围内。为了测定抑制剂选择性，通用的PTK底物(例如聚(Glu4Tyr)的无规共聚物，20000-50000MW)与ATP(典型地5μM)以大约两倍于表观Km的浓度一起在试验中应用。
下列过程被用于分析本发明化合物对KDR，Flt-1，Tie-2，EGFR，FGFR，PDGFR，IGF-1-R，c-Met，Lck，Blk，Csk，Src，Lyn，Fyn和ZAP70酪氨酸激酶活性的抑制作用缓冲液和溶液PGTPoly(Glu，Tyr)4∶1在-20℃贮存粉末。将粉末溶于磷酸缓冲的盐水(PBS)得到50mg/ml溶液。在-20℃贮存1ml等分试样。当制板时，在Gibco PBS中稀释至250μg/ml。反应缓冲液100mM Hepes，20mM MgCl2，4mM MnCl2，5mM DTT，0.02％BSA，200μM NaVO4，pH7.10ATP在-20℃贮存100mM等分试样。在水中稀释至20μM洗涤缓冲液含0.1％Tween 20的PBS抗体稀释缓冲液PBS中的0.1％牛血清白蛋白(BSA)TMB底物在使用之前混合TMB底物和过氧化物溶液9∶1，或使用Neogen的K-Blue底物终止溶液1M磷酸过程1.板的制备在PBS中将PGT储液(50mg/ml，冷冻)稀释至250μg/ml。在Corning修饰的平底高亲和力ELISA板(Corning #25805-96)的每孔加入125μl。在空白对照孔中加入125μlPBS。用密封带盖住并在37℃温育过夜。用250μl洗涤缓冲液洗涤1次，在干燥温箱中于37℃干燥约2小时。在密封的包内于4℃贮存涂覆的板直至使用。
2.酪氨酸激酶反应-在20％的DMSO水溶液中以4倍的浓度制备抑制剂溶液。-制备反应缓冲液-制备酶溶液，使所需的单位为50μl，例如对于KDR，制成1ng/μl，在反应中每孔总共50ng。贮存在冰上。-从100mM水中的储液制造4份20μM的ATP溶液。贮存在冰上-每孔加入50μl酶溶液(根据激酶的特异活性，典型地为5-50ng酶/孔)-加入25μl 4×抑制剂-加入25μl用于抑制剂分析的4×ATP-在室温温育10分钟-通过每孔加入50加入25μl 0.05N Hcl终止反应-洗板**反应的最终浓度5μM ATP，5％DMSO3.抗体结合-将1mg/ml PY20-HRP(Pierce)抗体(磷酰酪氨酸抗体)的等分试样通过两步稀释(100×，然后200×)在0.1％BSA的PBS溶液中稀释至50ng/ml-每孔加入100μl Ab。在室温温育1小时。在4℃温育1小时。-洗涤4×板4.着色反应-制备TMB底物，并且每孔加入100μl-在650nm检测0D，直至达到0.6-用1M磷酸终止。在板读数计上振动。-立即在450nm读取0D最佳温育时间和酶反应条件随酶制备而轻微变化，各批凭经验测定。
对于Lck，在类似的分析条件下所用的反应缓冲液是100mMMOPSO，pH6.5，4mM MnCl2，20mM MgCl2，5mM DTT，0.2％BSA，200mMNaVO4。
式I化合物在治疗与已确定的，包括上面未提到的，和未确定的被式I化合物抑制的蛋白酪氨酸激酶有关的疾病方面有治疗作用。所有在本文举例的化合物在50mM或更低浓度都明显地抑制FGFR，PDGFR，KDR，Tie-2，Lck，Fyn，Blk，Lyn或Src。一些本发明化合物也在50mM或更低浓度都明显地抑制其它酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸激酶如cdc2(cdk1)。cdc2来源人重组酶和分析缓冲液可以购买(New England Biolabs，Beverly，MA.USA)，或用常规的方法从已知的天然或重组的来源提纯。
cdc2分析所用的方案是由购买的试剂提供，很少改变。简单地说，反应在用新鲜300μM ATP(31μCi/ml)和30μg/ml组蛋白IIIss型最终浓度补充的，由50mM Tris pH 7.5，100mM NaCl，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％Brij，5％DMSO和10mM MgCl2组成的缓冲液(商品缓冲液)中进行。体积为80μl含有酶单位的反应在有或没有抑制剂存在下于25℃进行20分钟。通过加入120μl 10％乙酸终止反应。通过将混合物点在磷酸纤维素纸上，接着各用75mM磷酸3洗涤5分钟而从未掺入的标记物分离出底物。在液体闪烁计存在下通过β计数器计数。
某些本发明化合物在低于50μM的浓度明显地抑制cdc2。PKC激酶来源PKC的催化亚基可以商购(Calbiochem)。PKC激酶试验按照公开的方法(Yasuda，I.，kirshimoto，A.，Tanaka，S.，Tominaga，M.，Sakurai，A.，Nishizuka，Y.生物化学和生物物理学研究通讯3166，1220-1227(1990))进行放射活性激酶试验。简单地说，所有反应都在，由50mM Tris-HCl pH7.5，10mM MgCl2，2mMDTT，1mM EGTA，100μM ATP，8μM肽，5％DMSO和33P ATP(Ci/mM)组成的缓冲液中进行。将化合物和酶在反应器中混合，通过加入ATP和底物混合物启动反应。通过加入10μL终止缓冲液(5mM ATP在75mM磷酸中的溶液)终止反应，一部分混合物被点在磷酸纤维素滤纸上。所点的样品在室温下在75mM磷酸中5至15分钟内洗涤3次。通过液体闪烁计数器将掺入的放射标记物定量。Erk2酶来源重组的鼠酶和分析缓冲液可以购买(New England Biolabs，Beverly，MA.USA)，或用常规的方法从已知的天然或重组的来源提纯。
Erk2酶分析简单地说，反应在用新鲜300μM ATP(31μCi/ml)和30μM髓鞘质碱性蛋白补充的，由50mM Tris pH7.5，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％Brij，5％DMSO和10mM MgCl2组成的缓冲液(商品缓冲液)中，在提供者推荐的条件下进行。掺入放射活性物试验的反应体积和方法如对于PKC(参看上文)所述。T-细胞激活的体外模型基于由促细胞分裂原或抗原的激活，T-细胞被诱导分泌IL-2，支持其随后的增殖相的一种生长因子。因此，可以测量原代T-细胞或作为用于T-细胞激活代替物的适当T-细胞系的IL-2的产生或细胞增殖。这些试验都在文献中详细描述过，其参数也都作成文献(在CurrentProtocols in Imuunology，Vol2，7.10.1-7.11.2中)简单地说，T-细胞可以通过与同种异体刺激素细胞共培养，一种称之为单向混合的淋巴细胞反应被激活。反应者和刺激者外周血单核细胞通过每个生产者指导的Ficoll-Hypaque梯度(Pharmacia)提纯。刺激细胞通过用丝裂霉素C(Sigma)或γ射线治疗而有丝分裂失活。反应者和刺激者细胞在有或没有试验化合物存在下，以2∶1的比例共培养。典型地，105个反应者与5×104个刺激者混合并平铺(200μl体积)在U型底微滴板(Costar Scientific)上。细胞在用热失活的胎牛血清(Hyclone Laboratories)或从雄性供体所得的人体混合的AB血清，5×10-5M 2巯基乙醇和0.5％DMSO补充的RPMI1640中培养，在收获之前(典型地为3天)，培养物用0.5μCi3H胸腺嘧啶(Amersham)脉冲一天。培养物被收获(Betaplate harvester，Wallac)，通过液体闪烁器(Betaplate，Wallac)评价同位素的摄取。
相同的培养体系可以用于通过测量IL-2的生产评价T-细胞的激活。培养启动18至24小时后，除去上清液，通过按照生产者的指导进行ELISA(R和D体系)测量IL-2浓度。T-细胞激活的体内模型化合物的体内效力可以用已知直接测量T-细胞激活或T-细胞已经被证明为效应子的动物模型进行试验。T-细胞可以在体内通过T-细胞受体与单克隆抗-CD3抗体(Ab)恒定区部分的连接作用而激活。在此模型中，BALB/c小鼠在放血前2小时腹膜内给予10μg抗-CD3 Ab。在抗-CD3 Ab给药1小时之前，用单剂量化合物预处理接受试验药物的动物。通过ELISA测量促炎细胞因子干扰素-γ(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的血清浓度(T-细胞激活指示剂)。类似的模型利用以特异性抗原(如匙孔嘁血蓝蛋白(KLH))进行体内T细胞引发，接着以相同抗原再次对染色淋巴结细胞进行体外攻击。如上所述，测定细胞因子的产生以评估培养细胞的激活状态。简单地说，在第0天，用100微克用完全弗氏佐剂(CFA)乳化的KLH皮下免疫C57BL/6小鼠。在免疫前1天，随后在免疫后1，2和3天用化合物预处理动物。在第4天收集染色的淋巴结，以6×106个细胞/ml的密度在组织培养基(添加有热灭活的胎牛血清(Hyclone Laboratories)5×10-5M 2-巯基乙醇和0.5％DMSO)中将淋巴结细胞培养24小时和48小时。然后经ELISA评估培养物上清液中的自泌T细胞生长因子白细胞介素-2(IL-2)和/或IFN-γ水平。
也可以在人疾病的动物模型中检测前导化合物。例如实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)和胶原诱导的关节炎(CIA)动物模型。已描述过大鼠和小鼠的EAE模型，该模型模拟人多发性硬化的表征(参见FASEB J.52560-2566，1991；鼠模型Lab.Invest.4(3)278，1981；啮齿类动物模型免疫学杂志，146(4)1163-8，1991)。简单地说，用髓鞘质碱性蛋白质(MBP)乳剂或其神经发生肽衍生物和CFA免疫小鼠或大鼠。加入细菌毒素，如百日咳博德特氏杆菌以诱导急性疾病。通过经MBP/肽免疫之动物的T细胞过继转移诱导复发/减轻疾病。
可在DBA/1小鼠中通过用II型胶原免疫诱导CIA(免疫学杂志142(7)2237-2243)。早在抗原攻击后10天，小鼠即产生关节炎的征兆，在免疫后长达90天内对关节炎症状进行评分。在EAE和CIA模型中，可以预防性地或在疾病开始时施用化合物。有效的药物应能降低严重性和/或发病率。
本发明的某些化合物可以降低这些模型中的关节炎的严重性和发病率，因为这些化合物能抑制一种或多种血管生成受体PTK和/或参与介导炎症反应的蛋白激酶(如1ck)。
也可在小鼠同种异体移植模型，如皮肤(参见免疫学年评，10333-58，1992；移植57(12)1701-1706，1994)或心脏(Am.J.Anat113273，1963)中检测化合物。简单地说，将C57BL/6小鼠的全厚皮肤移植物移植至BALB/c小鼠。从第6天开始每天检查移植物是否被排斥。在小鼠新生心脏移植模型中，C57BL/6小鼠的新生心脏被异位移植至成年CBA/J小鼠的耳廓。移植后4至7天心脏开始跳动，使用解剖显微镜寻找跳动的停止以肉眼评估排斥。细胞受体PTK试验使用下列细胞试验测定本发明的不同化合物对KDR/VEGFR2的活性和作用水平。可使用本领域众所周知的技术，沿着相同的思路为其它酪氨酸激酶设计利用特异性配体刺激物的类似受体PTK试验。
Western印迹测定的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中由VEGF-诱导的KDR磷酸化1.HUVEC细胞(得自集中的供体)购自Clonetics(San Diego，CA)并根据厂商说明进行培养。此试验仅使用早期的几代(3-8代)。使用完全EBM培养基(Clonetics)，在100mm培养皿(组织培养用Falcon；Becton Dickinson；P1ymouth，英国)中培养细胞。
2.为了评价化合物的抑制活性，用胰蛋白酶消化细胞，并以0.5-1.0×105个细胞/孔的密度接种于6-孔聚簇板(Costar；Cambridge，MA)的每孔中。
3.接种后3至4天，板被90-100％铺满。从所有孔中除去培养基，用5至10ml PBS冲洗细胞，与5ml不合添加物的EBM基本培养基(即血清饥饿)保温18至24小时。
4.在1ml EBM培养基中的细胞内加入连续稀释的抑制剂(终浓度为25μM，5μM或1μM)，于37℃保温1小时。然后在含2ml EBM培养基的所有孔中加入人重组VEGF165(R & D Systems)至终浓度为50ng/ml，并于37℃保温10分钟。使用未经处理或仅用VEGF处理的对照细胞评估背景磷酸化和VEGF诱导的磷酸化。
然后用5至10ml含有1mM正钒酸钠(Sigma)的冷PBS冲洗所有的孔，刮下细胞并在200微升含有蛋白酶抑制剂(PMSF 1mM，抑蛋白酶肽1μg/ml，胃酶抑制剂1μg/ml，亮抑蛋白酶肽1μg/ml，钒酸钠1mM，氟化钠1mM)和1μg/ml DNA酶的RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7，150mM NaCl，1％NP-40，0.25％脱氧胆酸钠，1mM EDTA)中裂解细胞(所有化合物均得自Sigma Chemical Company，St Louis，M0)。以14,000rpm的转速离心裂解物以除去核。
然后通过加入冷(-20℃)乙醇(2倍体积)最少1小时或至多过夜以沉淀等量蛋白质。在含有5％2-巯基乙醇的Laemli样品缓冲液(BioRad；Hercules，CA)中重建沉淀物并煮沸5分钟。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(6％，1.5mm Novex，San Deigo，CA)分辨蛋白质并使用Novex系统转移至硝酸纤维素膜上。用牛血清白蛋白(3％)封闭之后，于4℃用抗-KDR多克隆抗体(C20，Santa Cruz Biotechnology；SantaCruz，CA)或用抗磷酸酪氨酸单克隆抗体(4G10，UpstateBiotechnology，Lake Placid，NY)探测蛋白质过夜。洗涤并与HRP-缀合的山羊抗-兔或山羊抗-小鼠IgG的F(ab)2保温1小时之后，使用发射化学发光(ECL)系统(Amersham Life Sciences，ArlingtonHeight，IL)肉眼观察带。本发明的某些例子以低于50μM的浓度显著抑制细胞VEGF-诱导的KDR酪氨酸激酶磷酸化。体内子宫水肿模型该试验测定了化合物抑制小鼠在用雌激素刺激之后的前几个小时发生的子宫重量急剧增加的能力。已知子宫重量早期增加可能是由子宫血管系统通透性增加引起的水肿所致。Cullinan-Bove和Koss(内分泌学(1993)，133829-837)阐明了雌激素刺激的子宫水肿与子宫中VEGF mRNA表达增加在时间上的密切关系。使用针对VEGF的中和单克隆抗体证实了这些结果，所述抗体能显著降低雌激素刺激之后子宫重量的急剧增加(WO 97/42187)。因此，该系统可用作体内抑制VEGF信号转导和相关高通透性和水肿的模型。材料作为冻干粉末所有激素均购自Sigma(St.Louis，MO)或CalBiochem(La Jolla，CA)，并根据厂商说明进行制备。载体成分(DMSO，Cremaphor EL)购自Sigma(St.Louis，MO)。小鼠(Balb/c，8至12周龄)购自Taconic(Germantown，NY)，并根据研究用动物关怀和使用委员会指南(institutional Animal Care andUse Committee Guidelines)在无病原体的动物房中进行圈养。方法第1天给Balb/c小鼠腹膜内(i.p.)注射12.5个单位怀孕的母马血清促性腺素(PMSG)。第3天给小鼠腹膜内注射15个单位的人绒毛膜促性腺素(hCG)。第4天将小鼠随机分成5至10组，根据溶解性和载体，经腹膜内，静脉内或p.o.途径，以1-100mg/kg的剂量施用试验化合物。载体对照组仅接受载体，留下两组不经处理。
30分钟后，给实验组，载体组和1个未经处理组腹膜内注射17-雌二醇(500μg/kg)。2至3小时之后，通过吸入二氧化碳处死动物。沿中线切开之后，分离出各个子宫，紧靠宫颈下方并在子宫和输卵管的连接处切割以摘下子宫。小心除去脂肪和结缔组织，在称重(湿重)之前不要破坏子宫的完整性。通过在两层滤纸之间用1升盛满水的玻璃瓶挤压以吸干子宫中的流体，在吸干水分之后给子宫称重(干重)。湿重和干重之间的差值即为子宫中的流体含量。将处理组的平均流体含量与未处理或载体处理组的相比较。通过Student’s检验测定显著性。使用未经刺激的对照组监测雌二醇反应。
结果表明当通过多种途径全身施用本发明的某些化合物时能抑制水肿形成。
身为血管生成受体酪氨酸激酶抑制剂的本发明的某些化合物也在新血管生成的Matrigel植入模型中显示出活性。Matrigel新血管生成模型涉及皮下植入的细胞外基质清晰的“marble”内新血管形成，所述新血管生成是由产生促血管生成因子的肿瘤细胞的存在诱导的(例见Passaniti，A等，Lab.Investig(1992)，67(4)，519-528；Anat.Rec，1997，249(1)，63-73；国际癌症杂志，1995，63(5)，694-701；Vasc.Biol.1995，15(11)，1857-6)。优选将该模型保留3至4天，终点包括动物中除去移植物之后较之于未用抑制剂处理对照进行新血管生成的肉眼观察/显象评分，显微镜微血管密度测定和血红蛋白的定量测定(Drabkin法)。此模型也可使用bFGF或HGF作为刺激物。
能抑制一种或多种癌基因，原癌基因或增殖-依赖型蛋白激酶或血管生成受体PTK的本发明的某些化合物也能抑制小鼠中原发性鼠，大鼠或人异种移植肿瘤的生长，或抑制鼠模型中的肿瘤转移。举例现在描述式I化合物的制备方法。这些方法形成本发明的另一方面。该方法优选地在大气压下进行。
式I化合物可以通过下式化合物 其中R1，R2，R3，L和A环如前定义，与甲酰胺在50至250℃的温度范围，任选地在例如4-二甲基氨基吡啶的催化剂存在下缩合而制备。
式I化合物可以通过式(III)化合物 其中Rx是溴或碘，与下列化合物之一R3B(OH)2，R3SnCH3或式III表示的化合物 其中R3如上定义，在催化剂例如钯(O)化合物如Pd(Ph3)4存在下反应而制备。
其中R1表示烷基或芳烷基的式I化合物可以通过使式(IV)化合物 其中R2和R3如前定义，用其中R1表示烷基或芳烷基，而X’表示离去基，例如卤原子，甲磺酰氧基或甲苯磺酰氧基的式R1X’化合物烷基化而制备。
其中R1表示任选取代的环状醚，如四氢呋喃基或四氢吡喃基的式I化合物可以通过使式IV化合物 其中R2和R3如前定义，用其中X’如前定义，R1表示任选取代的环状醚的式R1X’化合物烷基化而制备。
其中R1表示任选被甲酰基取代的环状醚，如四氢呋喃基或四氢吡喃基的式I化合物可以通过使式IV化合物用其中R1表示通过本专业技术人员已知的方法，例如缩醛(参见例如Tetr.Letts.30(46)，1989，6259-6262)保护的甲酰基取代的环状醚的式R1X化合物烷基化，接着脱保护而制备。其中R1表示被(任选取代的氨基)甲基取代的环状醚，如四氢呋喃基或四氢吡喃基的化合物可以通过使其中R1表示被甲酰基取代的环状醚化合物还原性氨基化而制备。
其中R1表示任选取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的式I化合物可以通过4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶与合适的杂芳基硼酸在铜盐催化剂，例如醋酸铜(II)存在下，在反应物的溶剂，例如卤代溶剂，如二氯甲烷存在下，在干燥剂，例如4分子筛存在下，在有机碱，例如三乙胺或吡啶存在下，在0-50℃的温度范围，优选室温进行反应而制备。(对于条件，参见Tet.Letts.(1998)，Vol.392942-2944，和其参考文献，该论文的全文引作本文参考)。这些化合物可以通过本专业已知的方法调配，给出其中R1表示被甲酰基取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的式I化合物。在这些化合物中，甲酰基可以通过本专业已知的方法制备性氨基化，给出其中R1表示被氨基甲基取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的式I化合物。或者，其中R1表示呋喃基，噻吩基或吡咯基的中间体可以进行Mannich反应，给出中R1表示被氨基甲基取代的呋喃基，噻吩基或吡咯基的中间体。
式I化合物可以通过使式V化合物 其中R1，R2，R3，L和A环如前定义，而Ry表示离去基，例如卤原子或苯氧基，与氨或铵盐，例如醋酸铵，在15-250℃的温度范围，优选地在压力容器中反应而制备。
其中R2表示氯，溴或碘的式I化合物可以通过使式VI化合物 其中R1，R2，R3，L和A环如前定义，与卤化剂，例如碘化剂，例如N-碘代琥珀酰亚胺，或溴化剂，例如N-溴代琥珀酰亚胺，或氯化剂，例如N-氯代琥珀酰亚胺反应而制备。
其中-L-R3表示-NHC(O)R3的式I化合物可以通过使式VII化合物 其中R1，R2，R3，L和A环如前定义，而Y表示被保护的胺，与其中Rx表示离去基，例如氯的式R3CORx的化合物反应而制备。或者，其中Y表示卤原子，例如氯的式VII化合物可以与式R3CORx的化合物反应，其产物与氨反应给出式I化合物。类似的方法可以用于制备其中-L-R3是-NRSO2R3的式I化合物。类似的方法可被用于制备其中-L-R3是-NRCO2-R3或-NRCONR’的化合物，R和R’如前定义。
其中-L-R3是-OSO2-的式I化合物可以通过使式VIII化合物 其中R1，R2和A环如前定义，与式R4SO2Rx的化合物反应而制备。
式I化合物然后可以从这类中间体按照后面所述的图解2或图解2的可替换方法制备。
式II化合物可以如图解1所示制备，其中IPA表示丙-2-醇。
图解I 本专业技术人员应该理解，式I化合物可以通过已知的化学反应转化为其它式化合物。例如，烷氧基可以被裂解给出羟基，而硝基可以被还原为胺，胺又可以被酰化，磺酰化或磷酰化，而N-酰基化合物可以被水解为胺。其中-L-是S的式I化合物可以通过本专业技术人员已知的方法被氧化给出其中-L-分别表示SO和SO2的式I化合物。
式III化合物是可以购买到的，或者通过本专业技术人员已知的方法制备。
其中R2表示氢的式IV化合物可以如图解2所示制备。其氨基可以在最后步骤之前被保护，然后在图解2的最后步骤之后，通过本专业技术人员已知的方法脱保护。其中R2不是氢的式IV化合物可以通过类似的方法制备(参见J.Med.Chem.(1990)，33，1984)。
图解2 在图解2中可替换地，(A环)-L-R3在胺化之前可以首先被偶联。而如前定义的取代基R1可替换地可以在进行任一步骤之前存在。
式V化合物可以如图解3所示制备。
图解3 其中(A环)-L-R3不存在的化合物可以如图解4和如J.Med.Chem.，(1998)，31390和其所引用的参考文献所述制备。其中(A环)-L-R3不是氢的化合物可以通过类似的方法制备。
图解4 式VII化合物可以通过类似于制备式IV化合物所述的方法，偶联5-碘化合物而制备。
本专业技术人员应该理解，在取代基与所述方法之一中已经被修饰过的官能团相同，或相似的情况下，这些取代基在该方法进行之前需要保护，在过程后脱保护。否则的话，竞争性副反应就会发生。或者，可以使用另一上述方法，其中取代基不干扰。合适的保护基和其加入和除去方法的例子可以在T.W.Green，John Wiley and Sons，1981出版的教科书“Protective Groups in Organic Synthesis”中找到。例如，合适的胺保护基是甲酰基或乙酰基。
下列实施例化合物用在上面概括的一般制备方法制备实施例1N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺a)N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯将4-溴-2-甲氧基苯胺(34.0g，0.17mol)和重碳酸二叔丁基酯(44.5g，0.20mol)在四氢呋喃(350ml)中的混合物加热回流22小时。使混合物冷却至室温，并减压除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(350ml)，并用1N柠檬酸(200ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发，给出N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯黄色油状物(纯度80％，57.10g，0.15mol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.01(s，1H)，7.63(d，1H)，7.17(d，1H)，7.07(dd，1H)，3.82(s，3H)，1.45(s，9H)；TLC(正庚烷/乙酸乙酯＝2∶1)Rf0.67b)N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯将N-(4-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(纯度80％)(6.25g，16.56mmol)，二硼频那醇酯(5.05g，19.88mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)配合物与二氯甲烷(1∶1)(0.41g，0.50mmol)和乙酸钾(4.88g，49.80mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(100ml)中的混合物在80℃于氮气氛中加热过夜。使混合物冷却至室温，然后减压除去大部分溶剂。将二氯甲烷(100ml)加入残余物中，在硅胶垫上滤除产生的固体。将滤液浓缩给出黑色油状物，将其通过快速硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/正庚烷(1∶2)与2.5％三乙胺作流动相，给出N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯白色固体(纯度65％，4.25g，7.92mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.93(s，1H)，7.83(d，1H)，7.25(d，1H)，7.16(s，1H)，3.83(s，3H)，1.46(s，9H)，1.30(s，12H)；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf18.28min.
c)N-[4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸叔丁基酯将水(25ml)和N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(纯度65％)(4.25g，7.92mmol)的混合物冷冻，并置于真空中，接着在解冻时用氮气填充。加入4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.83g，5.28mmol)，四(三苯膦)钯(O)(0.37g，0.32mmo)，碳酸钠(1.40g，13.20mmol)和乙二醇二甲基醚(50ml)，产生的混合物在80℃于氮气氛中加热过夜。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂，给出残余物，将其分配在水和乙酸乙酯之间。分出有机层，水层再用乙酸乙酯萃取两次。合并的乙酸乙酯萃取液用硫酸镁干燥并蒸发，给出黑色油状物，将其用快速硅胶柱层析纯化，用正庚烷/乙酸乙酯(3∶1)与2％三乙胺作流动相。收集合适的部分，合并并浓缩，给出N-[4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸叔丁基酯白色固体(1.90g，4.29mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.65(s，1H)，7.94(s，2H)，7.74(d，1H)，7.19(d，1H)，7.07(dd，1H)，5.22(m，1H)，3.87(s，3H)，2.19(m，2H)，1.99(m，2H)，1.91(m，2H)，1.73(m，2H)，1.48(s，9H)；TLC(正庚烷/乙酸乙酯＝1∶1)Rf0.58d)4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯胺在0℃将三氟乙酸(2m1)滴加到N-[4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.58g，1.31mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。移走冰浴，反应混合物在室温搅拌3小时。减压除去大部分三氟乙酸和二氯甲烷。残余物再溶于二氯甲烷，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发，给出4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯胺白色固体(0.45g，1.31mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.61(s，1H)，7.78(s，1H)，6.97(d，1H)，6.85(dd，1H)，6.67(d，1H)，5.20(m，1H)，4.78(宽，2H)，3.81(s，3H)，2.18(m，2H)，1.88-2.00(m，4H)，1.72(m，2H)；MH+343.
e)5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺将4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯胺(0.45g，1.31mmol)，氨(15ml，SG0.88)和1，4-二噁烷(15ml)的混合物在120℃于压力器内加热搅拌过夜。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂，给出残余物，将其分配在水和乙酸乙酯之间。分出有机层，水层再用乙酸乙酯萃取两次。合并的乙酸乙酯萃取液用饱和氯化钠溶液洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发，给出5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺褐色固体(0.32g，0.99mmol)1H NMR(DMSO-d6.400MHz)δ8.09(s，1H)，7.24(s，1H)，6.88(d，1H)，6.79(dd，1H)，6.71(d，1H)，6.01(宽，2H)，5.06(m，1H)，4.79(宽，2H)，3.81(s，3H)，2.10(m，2H)，1.87-1.92(m，4H)，1.68(m，2H)；MH+324.
f)N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.026g，0.08mmol)，4-氰基苯磺酰氯(0.019g，0.10mmol)和吡啶(0.40ml)的混合物在室温搅拌过夜。减压除去大部分溶剂，残余物通过制备性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，21ml/min.)纯化，给出N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺黄色固体(0.018g，0.04mmol)1H NMR(DMSO-d6400MHz)δ9.91(s，1H)，8.13(s，1H)，8.05(d，2H)，7.89(d，2H)，7.44(s，1H)，7.27(d，1H)，7.00(dd，1H)，6.98(d，1H)，6.07(宽，2H)，5.07(m，1H)，3.49(s，3H)，2.11(m，2H)，1.88(m，4H)，1.69(m，2H)；MH+489；TLC(乙酸乙酯/甲醇＝9∶1)Rf0.49；RP-HPLC(Hypersil C18，5μum，200A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf14.65min.实施例2N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-(三氟甲基)-1-苯磺酰胺用与N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺相同的方法合成实施例2的化合物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.90(s，1H)，8.22(s，1H)，7.96(s，4H)，7.55(m，1H)，7.29(d，2H)，7.01(m，2H)，5.09(m，1H)，3.49(s，3H)，2.10(m，2H)，1.90(m，4H)，1.69(m，2H)；MH-530；TLC(乙酸乙酯/甲醇＝9∶1)Rf0.64，RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf17.78min.实施例3 N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-(三氟甲氧基)-1-苯磺酰胺用与N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-4-氰基-1-苯磺酰胺相同的方法合成实施例3的化合物。
1H NMR(CDCl3.400MHz)δ8.30(s，1H)，7.86(d，2H)，7.59(d，1H)，7.27(d，2H)，7.13(宽，1H)，7.05(dd，1H)，7.00(s，1H)，6.86(d，1H)，5.26(s，2H)，5.19(m，1H)，3.68(s，3H)，2.26(m，2H)，1.89(m，4H)，1.79(m，2H)；MH+548；TLC(乙酸乙酯)Rf0.34；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf18.18min.实施例4 N2-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-吡啶磺酰胺a)将如Heterocycles，1989，28，1115所述制备的2-吡啶磺酰氯在0℃通入2-吡啶硫醇(2.00g，17.99mmol)在浓盐酸(30ml)中的溶液3小时。反应混合物被倒入冰冷的水(40ml)中，过滤收集产生的沉淀。该沉淀再用冰冷的水洗涤，然后在真空用五氧化磷在0℃干燥2小时，给出2-吡啶磺酰氯白色固体(2.00g，11.26mmol)。
b)N2-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-吡啶磺酰胺将5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.040g，0.12mmol)，2-吡啶磺酰氯(0.026g，0.15mmol)和吡啶(0.40ml)的混合物在0℃搅拌3小时。反应混合物用乙醚稀释，产生的溶液依次用2N盐酸，水和饱和氯化钠水溶液洗涤。有机层浓缩给出残余物，通过制备性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，21ml/min.)纯化，给出N2-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-吡啶磺酰胺白色固体 (0.022g，0.05mmol)1H NMR(CDCl3.400MHz)δ8.71(d，1H)，8.31(s，1H)，8.01(d，1H)，7.87(m，1H)，7.64(d，1H)，7.47(m，1H)，7.41(m，1H)，6.99(m，2H)，6.87(s，1H)，5.19(m，1H)，5.07(s，2H)，3.79(s，3H)，2.23(1m，2H)，1.76-1.88(m，4H)，1.63(m，2H)；MH+465；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf12.65min.实施例5 N3-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-3-吡啶磺酰胺a)如Heterocyclo.Chem.，1992，29，61所述制备3-吡啶磺酰氯。将3-吡啶磺酸(1.45g，9.01mmol)和五氯化磷(2.00g，9.62mmol)的混合物在110℃加热3小时。使混合物冷却至室温，减压(0.1mmHg)蒸馏(b.p.60-65℃)，给出3-吡啶磺酰氯白色固体(1.12g，6.31mmol)。
b)N3-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-3-吡啶磺酰胺将5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.040g，0.12mmol)，3-吡啶磺酰氯(0.030g，0.17mmol)和吡啶(0.40ml)的混合物在0℃搅拌0.5小时。将水加入反应混合物中，接着减压除去大部分吡啶和水。残余物通过制备性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；50％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，21ml/min.)纯化，给出N3-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-3-吡啶磺酰胺白色固体(0.020g，0.04mmol)1HNMR(CDCl3.400MHz)δ8.97(d，1H)，8.76(d，1H)，8.29(s，1H)，8.10(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.40(m，1H)，7.05(d，1H)，7.00(s，1H)，6.85(s，1H)，5.31(宽，2H)，5.20(m，1H)，3.68(s，3H)，2.26(m，2H)，1.80-2.00(m，6H)；MH+465；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf12.23min.实施例6N1-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺a)N1-[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺在0℃，氮气氛中，搅拌下将苯磺酰氯(1.06g，6.00mmol)滴加到4-溴-2-(三氟甲基)苯胺(1.20g，5.00mmol)和吡啶(1.98g，25.0mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。混合物被温热至室温，并搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯(35ml)稀释，并用水(3×10ml)，2N柠檬酸(3×10ml)和食盐水(10ml)洗涤，然后真空蒸发。残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用3∶2庚烷∶二氯甲烷作洗脱剂，给出N1-[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺(1.3g)白色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.10(1H，s)，7.60-8.16(7H，m)，6.9(1H，dd)；tR＝24.27min(RP-HPLC，5-100％乙腈-0.1％TFA，30min)b)N1-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺将N1-[4-溴-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺(0.5g，1.31mmol)，二(频那醇基)二硼(0.402g，1.58mmol)，醋酸钾(0.387g，3.95mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(32mg，0.04mmol)在DMF(10ml)中的混合物在100℃加热17小时。将混合物冷却，加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(32mg，0.04mmol)，然后继续在100℃再搅拌24小时。然后真空除去溶剂，残余物用25ml 4∶1庚烷∶二氯甲烷研制，通过硅藻土垫滤除固体。真空除去溶剂，产生胶状残余物(0.42g)，将其中的(123mg，0.28mmol)加入1，2-二甲氧基乙烷(2.5ml)和水(1.25ml)。将碳酸钠(39mg，0.36mmol)，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(50mg，0.144mmol)和四(三苯膦)钯(O)(9.0mg，0.008mol)加入混合物中，然后在氮气氛中加热回流16小时，冷却并真空除去溶剂。残余物被分配在乙酸乙酯(10ml)和水(6ml)之间。分出水层并用乙酸乙酯(10ml)洗涤。合并的有机层被蒸发，残余物溶于1，4-二噁烷(5ml)和浓氢氧化铵(5ml)，然后在封管内于120℃加热16小时。真空除去溶剂，通过逆向MPLC纯化，用C18柱和25-75％乙腈-0.1TFA，25min作洗脱剂，接着冻干给出N1-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-苯磺酰胺(9mg)褐色无定形固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.05(1H，brs)，8.38(1H，s)，7.57-7.87(10H，m)，7.09(1H，d)，5.11(1H，m)，2.14(2H，m)，1.95(4H，m)，1.7(2H，m)；低分辨MS，m/e(MH+)，502；TR＝16.78min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)实施例7N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-苯基-苯基]-1-苯磺酰胺a)2-氨基-5-溴联苯将2，4，4，6-四溴-2，5-环己二烯-1-酮(12.1g，29.55mmol)分批2-氨基联苯(5.0g，29.55mmol)的二氯甲烷(65ml)溶液中，同时保持温度在-5℃和-10℃之间。使混合物温热至室温，并搅拌20小时。溶液用1N氢氧化钠(1×50ml，1×20ml)萃取两次，然后硫酸镁干燥，用活性炭处理，滤过硅藻土并蒸发给出2-氨基-5-溴联苯(7.2g)黑色油状物，放置固化。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.36-7.48(5H，m)，7.2(1H，dd)，7.08(1H，d)，6.7(1H，d)，4.95(2H，bs)；低分辨MS m/e 249(MH+)；tR=16.03min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ144.5，138.2，131.9，130.6，128.8，128.5，127.7，127.3，117.1，107.1b)1-(4-溴-2-苯基-苯基)-1-苯磺酰胺在＜0℃，氮气氛中将苯磺酰氯(1.71g，9.67mmo1)滴加到2-氨基-5-溴联苯(2.0g，8.06mmol)和吡啶(3.19g，40.3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。将混合物温热至室温并搅拌16小时。然后将混合物用乙酸乙酯(75ml)稀释，并用水(3×15ml)，2N柠檬酸水溶液(3×15ml)，食盐水(15ml)洗涤，硫酸镁干燥，用木炭处理并滤过硅藻土。真空蒸发溶剂，给出N1-(4-溴-2-苯基苯)-1-苯磺酰胺(2.9g)褐色固体。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.62(1H，s)，7.34-8.07(10H，m)，7.19(2H，m)，7.01(1H，d)；低分辨MS m/e388(MH+)；tR=21.2min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)c)N1-[2-苯基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-苯磺酰胺将N1-(4-溴-2-苯基苯基)-1-苯磺酰胺(0.388g，1.00mmol)，二(频那醇基)二硼(0.305g，1.20mmol)，醋酸钾(0.294g，3.00mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(25mg，0.030mmol)在DMF(10ml)中的混合物在100℃加热16.5小时。真空蒸发DMF，残余物通过快速硅胶柱层析用二氯甲烷/庚烷7∶3加2％三乙胺纯化，给出N1-[2-苯基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-苯磺酰胺(0.135g)油状物。tR＝23.13min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)；低分辨MS m/e 434(M-H+)d)N1-[4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-苯基苯基]-1-苯磺酰胺将碳酸钠(57mg，0.54mmol)，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(75mg，0.216mmol)，N1-[2-苯基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基苯]-1-苯磺酰胺(135mg，四(三苯基膦)钯(0)(12.5mg，0.0108mmol)，水(1.25ml)和DMK(2.5ml)的混合物在氮气氛中加热回流16小时，冷却并真空萃取溶剂。残余物分配在乙酸乙酯(10ml)和水(5ml)之间。将有机层蒸发，残余物通过快速硅胶柱层析纯化，给出N1-[4-(2-苯-4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-苯基]-1-苯磺酰胺(55mg)褐色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.56(1H，s)，8.65(1H，s)，8.03(1H，s)，7.3-7.65(12H，m)，7.08(1H，d)，5.21(1H，m)，2.17(2H，m)，1.92(4H，m)，1.71(2H，m)；tR=23.77min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1％TFA，25min)e)N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-苯基苯基]-1-苯磺酰胺将N1-[4-(2-苯基-4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]-1-苯磺酰胺(55mg，0.104mmol)，浓氢氧化铵水溶液(5ml)，和1，4-二噁烷(5ml)的混合物在120℃于封管内加热16小时。将溶液冷却至室温并真空除去溶剂。通过MPLC用C18柱和25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min作洗脱剂纯化，接着冻干给出N1-[4-(4-氨基-2-苯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-苯基]-1-苯磺酰胺(14mg)褐色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.56(1H，s)，8.13(1H，s)，7.31-7.65(13H，m)，7.1(1H，d)，6.08(2H，s)，5.07(1H，m)，2.08(2H，m)，1.9(4H，m)，1.67(2H，m)，低分辨MS m/e510(MH+)；tR＝19.22min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)实施例87-环戊基-5-[1-(苯磺酰基)-2，3-二氢-1H-5-吲哚基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺a)5-溴-1-(苯磺酰基)二氢吲哚在＜0℃，在氮气氛中，搅拌下将苯磺酰氯(1.85g，10.53mmol)滴加5-溴二氢吲哚(2.0g，8.77mmol)和吡啶(3.47g，43.9mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。混合物被温热至室温并搅拌16小时。然后将混合物用二氯甲烷(30ml)稀释，并用2N柠檬酸(3×20ml)，食盐水(20ml)洗涤，硫酸镁干燥，用木炭处理并滤过硅藻土。真空蒸发溶剂，给出5-溴-1-(苯磺酰基)二氢吲哚(3.2g)。1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ7.83(2H，d)，7.68(1H，t)，7.61(2H，t)，7.31-7.43(3H，m)，3.93(2H，t)，2.92(2H，t)；tR＝19.30min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)b)1-(苯磺酰基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)二氢吲哚将5-溴-1-(苯磺酰基)二氢吲哚(1.0g，3.07mmol)，二(频那醇基)二硼(0.935g，3.68mmol)，醋酸钾(0.902g，9.202mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(88mg，0.092mmol)在DMF(20ml)中的混合物在100℃加热16小时。真空蒸发DMF，残余物用甲苯(20mD研制，然后滤过硅藻土除去固体。滤液用水(3×15ml)洗涤，然后硫酸镁干燥，过滤并蒸发，残余物用于下一步。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.83(2H，d)，7.43-7.68(6H，m)，3.94(2H，t)，2.94(2H，t)，1.26(12H，s)；tR＝21.23min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)c)7-环戊基-5-[1-(苯磺酰基)-2，3-二氢-1H-5-吲哚基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺将碳酸钠(92mg，0.087mmol)，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(100mg，0.288mmol)，1-(苯磺酰基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)二氢吲哚(200mg，0.431mmol)，四(三苯基膦)钯(O)(17mg，0.014mmol)，水(3ml)和DME(6ml)的混合物在氮气氛中加热回流16小时，冷却并真空萃取溶剂。残余物分配在乙酸乙酯(10ml)和水(5ml)之间。将有机层蒸发，残余物溶于1，4-二噁烷(6ml)和浓氢氧化铵水溶液(6ml)，然后在120℃封管内加热16小时。将溶液冷却并真空除去溶剂。通过逆向MPLC用C18柱和25-75％乙腈-0.1N醋酸铵，25min作洗脱剂纯化，接着冻干给出7-环戊基-5-[1-(苯磺酰基)-2，3-二氢-1H-5-吲哚基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(23mg)褐色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.11(1H，d)，7.85(2H，d)，7.70(1H，t)，7.54-7.61(3H，m)，7.25-7.33(3H，m)，6.0(2H，s)，5.06(1H，m)，3.96(2H，t)，2.95(2H，t)，2.11(2H，m)，1.90(4 H，m)，1.67(2H，m)；tR＝16.37min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)实施例9N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺a)N1-(4-溴-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺在氮气氛中，搅拌下将苯磺酰氯(2.11g，12.0mmo1)滴加到4-溴-2-氯苯胺(2.06g，10.0mmol)，吡啶(3.95g，50mmol)和二氯甲烷(15ml)溶液中。混合物被搅拌3小时，然后用乙酸乙酯(75ml)稀释，并用水(3×20ml)，食盐水(20ml)洗涤，然后硫酸镁干燥，过滤并蒸发给出3.2g(92％)N1-(4-溴-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺橙色固体。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.10(1H，s)，7.7(2H，d)，7.53-7.65(4H，m)，7.46(1H，d)，7.18(1H，d)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ140.0，131.1，133.0，132.0，130.8，130.3，129.2，128.8，126.6，119.0；低分辨MS m/e346(M－H+)b)N1-(4-溴-2-氯苯基)-N1-甲基-1-苯磺酰胺在0℃，氮气氛中将N1-(4-溴-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺(1.0g，2.89mmol)的DMF(8ml)溶液加入氢化钠(0.14g在矿物油中的60％分散体，3.47mmol)在DMF(7ml)中的混合物。混合物然后用碘代甲烷(0.452g，3.18mmol)处理，同时保持温度＜0℃。使混合物温热至室温，搅拌16小时，然后加入水(100ml)。混合物用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，合并的有机层用水(3×20ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发给出N1-(4-溴-2-氯苯基)-N1-甲基-1-苯磺酰胺(0.55g)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.87(1H，s)，7.55-7.80(6H，m)，7.00(1H，d)，3.11(3H，s)；tR＝19.58min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)c)N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺将N1-(4-溴-2-氯苯基)-N1-甲基-1-苯磺酰胺(0.5g，1.389mmol)，二(频那醇基)二硼(0.423g，1.66mmol)，醋酸钾(0.408g，4.167mmol)和[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(34mg，0.042mmol)在DMF(20ml)中的混合物在100℃加热16小时。真空蒸发DMF，残余物用甲苯(15ml)研制，然后滤过硅藻土，给出N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺(0.25g)黑色油状物，用于下一步。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.93(2H，d)，7.57-7.75(5H，m)，7.07(1H，d)，3.12(3H，s)，1.29(12H，s)d)N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺将碳酸钠(92mg，0.087mmol)，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(100mg，0.288mmol)，N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺(244mg(72％重量纯度)0.432mmol)，四(三苯膦)钯(O)(17mg，0.0144mmol)，水(3ml)和DME(6ml)的混合物在氮气氛中加热回流16小时，冷却并真空除去溶剂。将残余物分配在乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)之间。蒸发有机层，残余物溶于1，4-二噁烷(7ml)和浓氢氧化铵水溶液(7ml)，然后在120℃于封管内加热16小时。将溶液冷却并真空除去溶剂。通过逆向MPLC用C18柱和25-75％乙腈-0.1N醋酸铵，25min作洗脱剂纯化，接着冻干给出N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-N1-甲基-1-苯磺酰胺(20mg)褐色固体。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.15(1H，s)，7.74-7.80(3H，m)，7.64-7.66(2H，m)，7.60(1H，s)，7.39(1H，d)，7.08(1H，d)，6.20(2H，s)，3.16(3H，s)，2.14(2H，m)，1.91(4H，m)，1.69(2H，m)；低分辨MS m/e481(M－H+)；tR＝22.45min(RP-HPLC，25-75％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)实施例10N1-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺a)N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯将5-溴-2-吡啶胺(4.0g，23.1mmol)和重碳酸二叔丁基酯(6.31g，28.9mmol)在四氢呋喃(50ml)中的混合物加热回流20小时。混合物被冷却至室温，减压除去溶剂。加入二氯甲烷(30ml)和乙酸乙酯(30ml)，混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(25ml)萃取。有机层被真空蒸发，约四分之一的残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用95∶5正庚烷/乙酸乙酯作洗脱剂，给出N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(0.6lg)油状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.96(1H，s)，8.34(1H，d)，7.93(1H，dd)，7.77(1H，d)，1.47(9H，s)b)N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯将N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(0.5g，1.83mmol)，六甲基二锡(0.6g，1.832mmol)和四(三苯膦)钯(O)(130mg，0.107mmol)和二甲氧基乙烷(10ml)的混合物在80℃于氮气氛中加热15小时。使混合物冷却至室温，然后减压除去溶剂。将残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作洗脱剂，给出N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(242mg)油状物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.31(1H，s)，8.15(1H，s)，7.65-7.72(2H，m)，1.44(9H，s)，0.24(9H，s)；低分辨MS m/e 481c)N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯将N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(230mg，0.644mmol)，4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(225mg，0.644mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(O)(30mg，0.0322mmol)，三苯胂(50mg，0.161mmol)和DMF(8ml)的混合物在氮气氛中于80℃加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂，给出的残余物分配在水(5ml)和乙酸乙酯(20ml)之间。分出有机层，并再用水(5ml)和食盐水(5ml)萃取，硫酸镁干燥，过滤并蒸发，给出的残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(8∶2)作洗脱剂，给出N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(170mg)褐色固体；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.66(1H，s)，8.58(1H，s)，8.35(1H，s)，7.89(1H，s)，7.82(2H，m)，5.2(1H，m)，2.16(2H，m)，1.92(4H，m)，1.71(2H，m)，1.47(9H，s)；d)5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺在0℃将三氟乙酸(2ml)滴加到N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(165mg，0.4mmol)的二氯甲烷(7ml)溶液中。移走冰浴，反应混合物在室温搅拌6小时。真空除去溶剂，然后将残余物再溶于乙酸乙酯(55ml)，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发，给出5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(133mg)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.63(1H，s)，8.05(1H，dd)，7.86(1H，d)，7.55(1H，d)，6.52(1H，d)，6.06(2H，bs)，5.20(2H，m)，2.16(2H，m)，1.97(4H，m)，1.72(2H，m)；低分辨MS，m/e(MH+)314.
e)N1-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺在氮气氛中，搅拌下，将苯磺酰氯(366mg，2.07mmol)加入5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(125mg，0.4mmol)和吡啶(294mg，3.7mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。混合物在封管内于80℃加热20小时。将混合物冷却并真空蒸发溶剂。残余物再溶于二氯甲烷(50ml)并用饱和碳酸氢钠(15ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发，残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯作洗脱剂，给出N1-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺(90mg)褐色固体。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.3(1H，bs)，8.66(1H，s)，8.2(1H，bs)，7.89-7.99(4H，m)，7.54-7.62(3H，m)，7.2(1H，bs)，5.2(1H，m)，2.16(2H，m)，1.92(4H，m)，1.71(2H，m)；低分辨 MS，m/e(MH+)454.
f)N1-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺将N1-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺(90mg)，浓氢氧化铵水溶液(5ml)，和1，4-二噁烷(5ml)的混合物在120℃于封管内加热16小时。将溶液冷却至室温并真空除去溶剂。通过MPLC用C18柱和25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min作洗脱剂纯化，接着冻干，给出N1-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]-1-苯磺酰胺(20mg)褐色固体。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.12(1H，s)，8.08(1H，bs)，7.92(2H，d)，7.79(2H，d)，7.60(3H，m)，7.44(1H，s)，7.23(1H，d)，6.19(2H，bs)，5.05(1H，m)，2.10(2H，m)，1.91(4H，m)，1.67(2H，m)；低分辨MS m/e 435(MH+).实施例11N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺a)5-(4-氨基-3-氯苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺通过与5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺相同的方法制备实施例11中的该化合物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.29(s，2H)，7.12(dd，1H)，6.88(d，1H)，6.00(宽，2H)，5.41(s，2H)，5.06(m，1H)，2.09(m，2H)，1.87(m，4H)，1.68(m，2H)；MH+329；TLC(乙酸乙酯)Rf0.27；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-100％乙腈 -0.1M醋酸铵25min，lml/min)Rf14.02min.
b)N1-[4-(4-氨基-3-氯苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺将5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.098g，0.30mmol)，2-氰基苯磺酰氯(0.072g，0.36mmol)和吡啶(0.98ml)的混合物在室温搅拌16小时。减压除去大部分吡啶，残余物通过制备性RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，21ml/min.)纯化，给出N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺白色固体(0.025g，0.05mmol)1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.31(s，1H)，8.17(d，1H)，7.70-7.82(m，5H)，7.44(s，1H)，7.40(dd，1H)，7.00(s，1H)，5.27(宽，2H)，5.00(m，1H)，2.23(m，2H)，1.79-1.90(m，6H)；MH+493；TLC(乙酸乙酯)Rf0.30；RP-HPLC(Rainin C18，5μm，200A，25cm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf15.27min.实施例12N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-3-氰基-1-苯磺酰胺用与N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(实施例11)相同的方法制备实施例12的化合物。
1H NMR(CDC13，400MHz)δ8.30(s，1H)，8.07(m，2H)，7.86(d，1H)，7.73(d，1H)，7.65(dd，1H)，7.43(s，2H)，7.05(s，1H)，5.30(宽，2H)，5.20(m，1H)，2.44(m，2H)，1.77-1.89(m，6H)；MH+493；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf15.52min.实施例13N3-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-3-吡啶磺酰胺用与N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(实施例11)相同的方法制备实施例13的化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.97(s，1H)，8.81(dd，1H)，8.33(s，1H)，8.13(dd，1H)，7.77(d，1H)，7.44(m，3H)，7.02(s，1H)，5.21(m，1H)，5.06(宽，2H)，2.24(m，2H)，1.78-1.89(m，6H)；MH+469；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf13.03min.实施例14N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-三氟甲基-1-苯磺酰胺用与N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(实施例11)相同的方法制备实施例14的化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.33(s，1H)，8.09(d，1H)，7.92(d，1H)，7.72(m，2H)，7.64(m，1H)，7.41(s，1H)，7.36(d，1H)，7.00(s，1H)，5.21(多重峰，1H)，5.01(宽，2H)，2.25(m，2H)，1.77-1.91(m，6H)；MH+536；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf18.15min.实施例15N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-3-三氟甲基-1-苯磺酰胺用与N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基]-2-氰基-1-苯磺酰胺(实施例11)相同的方法制备实施例15的化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.29(s，1H)，8.04(d，2H)，7.85(d，1H)，7.77(d，1H)，7.65(m，1H)，7.38(m，2H)，7.07(s，1H)，6.01(宽，2H)，5.20(m，1H)，2.27(m，2H)，1.79-1.90(m，6H)；MH+536；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-98％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf18.43min.实施例16N1-4-[4-氨基-7-(3-羟基环戊基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺a)4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2-环戊烯-1-醇将二甲亚砜(3.5ml)脱气然后在氮气氛中搅拌。保护反应器不受光照，然后加入4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(570mg，2.03mmol)和四(三苯膦)钯(O)(0.05g，0.041mmol)。混合物被搅拌2分钟然后冷却至0℃。然后将混合物用2，4a-二氢-1aH-环戊烷并[b]环氧乙烯(200mg，2.44mmol)处理，即将其溶于四氢呋喃(3.5ml)，在约15分钟内滴加。反应混合物在0℃搅拌3小时，然后温热至室温，并搅拌15小时。然后将混合物用另一批环氧化物(85mg，1.04mmol)和四(三苯膦)钯(O)(0.025g，0.020mmol)处理，并继续再搅拌24小时。然后将混合物分配在乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)之间。分层，水层用二氯甲烷(3×20ml)洗涤。将有机层合并，用水(20ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物用逆向MPLC纯化，用C18柱和25-50％乙腈-0.1N醋酸铵，15min作洗脱剂，接着蒸发乙腈并过滤收集产生的固体，给出4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2-环戊烯-1-醇(365mg)褐色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.66(1H，s)，7.87(1H，s)，6.20(1H，m)，5.93(1H，m)，5.77(1H，m)，5.27(1H，d)，4.72(1H，m)，2.89(1H，m)，1.62(1H，m)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ150.9，150.4，149.9，139.7，133.8，130.9，116.2，73.5，57.8，52.2，41.1；低分辨MS m/e 362(MH+).
b)N1-2-氯-4-[4-氯-7-(4-羟基-2-环戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]苯基-1-苯磺酰胺将碳酸钠(130mg，1.213mmol)，4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2-环戊烯-1-醇(175mg，0.485mmol)，N1-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-苯磺酰胺(475mg，0.727mmol)，四(三苯膦)钯(0)(30mg，0.024mmol)，水(4ml)和DME(8ml)的混合物在氮气氛中加热回流16小时，冷却并真空萃取溶剂。残余物分配在乙酸乙酯(20ml)和水(5ml)之间。水层在用乙酸乙酯(20ml)和二氯甲烷(2×20ml)洗涤。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发给出一油状物，放置固化。通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(7∶3)作洗脱剂，给出N1-2-氯-4-[4-氯-7(4-羟基-2-环戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]苯基-1-苯磺酰胺(45mg)褐色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.06(1H，s)，8.69(1H，s)，7.29-7.80(9H，m)，6.1 9(1H，m)，5.96(1H，m)，5.85(1H，m)，5.22(1H，d)，2.92(1H，m)，1.68(1H，m)；低分辨MS m/e 501(MH+)；tR=14.82min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min).
c)N1-4-[4-氨基-7-(4-羟基-2-环戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺将N1-2-氯-4-[4-氯-7(4-羟基-2-环戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]苯基-1-苯磺酰胺(45mg)溶于1，4-二噁烷(7ml)和浓氢氧化铵水溶液(7ml)，然后在120℃于封管内加热16小时。将溶液冷却至室温并真空除去溶剂给出N1-4-[4-氨基-7-(4-羟基-2-环戊烯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺，不经进一步纯化用于下步。低分辨MS m/e 482(MH+)；tR＝10.75min(RP-HPLC，25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min)。
d)N1-4-[4-氨基-7-(3-羟基环戊基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺将烯烃(45mg)和10％Pd/C(25mg)混合物在氢气氛中于室温和大气压下搅拌19小时，然后滤过0.2μm筒式过滤器，并真空除去溶剂。通过逆向MPLC纯化，用C18柱和25-100％乙腈-0.1N醋酸铵，25min作洗脱剂，接着冻干给出N1-4-[4-氨基-7-(3-羟基环戊基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-氯苯基-1-苯磺酰胺(20mg)褐色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.03(1H，bs)，8.15(1H，s)，7.77(2H，d)，7.29-7.67(7H，m)，6.12(1H，bs)，5.14(1H，m)，4.98(1H，d)，4.23(1H，d)，2.37(1H，m)，2.02-2.12(2H，m)＜1.77(3H，m)；低分辨MS m/e 484(MH+)；tR=11.00 min(RP-HPLC，25-100％乙腈.0.1N醋酸铵，25min)实施例17N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸新戊基酯在氮气中，搅拌下，于0℃将氯甲酸新戊基酯(28μ1，0.186mmol)滴加到5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.155mmol)在吡啶(1ml)和二氯甲烷(1ml)的溶液中。10分钟后，移走冰浴，将产生的混合物搅拌4小时。蒸发溶剂，残余物溶于乙酸乙酯。将有机层洗涤，干燥并蒸发。固体用制备性TLC纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相，给出N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸新戊基酯。1HNMR(CDCl3)δ1.00(s 9H)，1.78(m，2H)，1.90(m，4H)，2.26(m，2H)，3.91(s，2H)，3.94(s，3H)，5.22(m，3H)，6.22(s，1H)，7.01(s，1H)，7.08(d，J=8Hz，1H)，7.25(s，1H)，8.17(br.d，1H)，8.32(s，1H)；LC/MS(MH+＝438).实施例18N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸3-吡啶甲基酯a)4-硝基苯基(3-吡啶甲基)碳酸酯在氮气中，搅拌下，于0℃将N-甲基吗啉(2.0ml，18.5mmol)滴加到氯甲酸p-硝基苯基酯(2.49g，12.3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。20分钟后，移走冰水浴，混合物被温热至室温。往混合物中加入3-吡啶基甲醇(1.0ml，10.3mmol)，产生的溶液被搅拌30分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水，饱和碳酸氢钠，食盐水洗涤。将有机层干燥(硫酸镁)，过滤并蒸发，给出深褐色固体。该固体用乙酸乙酯和庚烷重结晶，给出4-硝基苯基(3-吡啶甲基)碳酸酯。1H NMR(CDCl3)δ5.32(s，2H)，7.38(m，3H)，7.79(m 1H)，7.28(m，2H)，8.66(d，J＝4Hz，1H)，8.72(s，1H).
b)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯往5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(79mg，0.244mmol)的吡啶(1ml)溶液中加入4-硝基苯基(3-吡啶甲基)碳酸酯(111mg，0.405mmol)，接着加入催化量的N，N-二甲基吡啶。产生的混合物在氮气氛中于室温搅拌2天。将溶剂蒸发，残余物溶于乙酸乙酯。将有机层洗涤，干燥并蒸发。固体通过制备性TLC纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯。
1H NMR(CDCl3)δ1.78(m，2H)，1.90(m，4H)，2.26(m，2H)，3.91(s，3H)，5.25(m，5H)，6.98(s，1H)，7.01(s，1H)，7.09(d，J＝8Hz，1H)7.32(m，1H)，7.77(d，J＝8Hz，1H)，8.20(br.d，1H)，8.32(s，1H)，8.64(m，1H)，8.70(s，1H)；LC/MS(MH+＝459).
c)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯盐酸盐将N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯(50mg，0.109mmol)溶于乙酸乙酯(3.0ml)。混合物被冷却至0℃，并通入氯化氢气体半分钟。立即形成沉淀。将烧瓶加盖，溶液在0℃搅拌10分钟。过滤收集固体，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸3-吡啶甲基酯盐酸盐。1HNMR(DMSO-d6)δ1.72(m，2H)，1.93(m，4H)，2.16(m，2H)，3.87(s，3H)，5.15(m，1H)，5.26(s，1H)，7.06(d，J＝2Hz，1H)，7.14(s，1H)，7.64(d，J＝5Hz，1H)7.81(m，2H)，8.10(d，J＝8Hz，1H)，8.47(s，1H)，8.66(d，J＝5Hz1H)，8.78(s，1H)，8.87(s，1H)；LC/MS(MH+＝459)实施例19N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸3-氯环己基酯在氮气中，搅拌下，于0℃将氯甲酸3-氯环己基酯(34mg，0.186mmol)加入5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.155mmol)的吡啶(1ml)和二氯甲烷(1ml)溶液中。10分钟后，移走冰浴，将产生的混合物搅拌4小时。蒸发溶剂，残余物溶于乙酸乙酯。将有机层洗涤，干燥并蒸发。固体用制备性TLC纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相，给出N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸3-氯环己基酯。1H NMR(CDCl3)δ1.46(m，2H)，1.78(m，4H)，1.88(m，4H)，2.00(m，2H)，2.28(m，4H)，3.93(m，4H)，4.84(m，1H)，5.22(m，1H)，5.27(s，2H)，6.97(s，1H)，7.03(s，1H)，7.08(d，J＝8Hz，1H)，7.31(s，1H)，8.18(br.d，1H)，8.32(s，1H)；LC/MS(MH+＝484).实施例20N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-N’-苄基脲在氮气中，搅拌下，将苄基异氰酸酯(241μl，0.194mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液滴加到5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.155mmol)的N，N-二异丙基乙基胺(153μl，0.881mmol)和二氯甲烷(2ml)的溶液中。产生的混合物被搅拌24小时。蒸发溶剂，固体用制备性TLC纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相，给出N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-N’-苄基脲。1HNMR(CDCl3)δ1.78(m，2H)，1.90(m，4H)，2.26(m，2H)，3.86(s，3H)，4.48(d，J＝6Hz，3H)，5.24(m，4H)，6.93(s，1H)，6.98(s，1H)，7.00(s，1H)，7.04(d，J＝8Hz，1H)，7.29(m，5H)，8.17(d，J＝8Hz，1H)，8.31(s，1H)；LC/MS(MH+＝457).实施例21N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.025g，0.08mmol)，氯甲酸苄基酯(0.016g，0.09mmol)，吡啶(0.50ml)和二氯甲烷(0.50ml)的混合物在室温下搅拌过周末并倒入水中。过滤收集产生的沉淀，通过快速硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯/正庚烷(9∶1)作流动相，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯白色固体(0.002g，0.004mmol)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.64(s，1H)，8.13(s，1H)，7.74(d，1H)，7.34-7.45(m，6H)，7.10(d，1H)，7.02(dd，1H)，6.08(宽，2H)，5.16(s，2H)，5.08(m，1H)，3.86(s，3H)，2.11(m，2H)，1.91(m，4H)，1.69(m，2H)；MH+458；TLC(乙酸乙酯) Rf0.32；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，200A，25cm；25％-100％乙腈 -0.1M 醋酸铵 25min，1ml/min)Rf19.00min.实施例22N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯a)5-溴-2-甲氧基苯胺将4-溴-1-甲氧基-2-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮气中加热。加入铁粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃搅拌1小时。使混合物冷却至室温，然后加入水(100ml)，用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有机萃取液用饱和碳酸氢钠(3×25ml)洗涤，然后用食盐水洗涤。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，滤液被减压蒸发，给出一残余物。将该物质通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脱剂，给出5-溴-2-甲氧基苯胺(2.0g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ6.76(s，1H)，6.71(d，1H)，6.61(d，1H)，4.99(bs，2H)，3.74(s，3H)；(TLC(庚烷/乙酸乙酯1∶1)Rf0.5；RP-HPLC(Hypersil HyPurity EliteC18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸铵25min，1ml/min)tr＝13.33min.；MSMH+443.
b)N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯将5-溴-2-甲氧基苯胺(1.50g，7.43mmol)，重碳酸二叔丁基酯(1.95g，8.91mmol)在THF(20ml)中的混合物加热回流20小时。混合物被冷却至室温，然后减压除去溶剂。产生的油状物通过快速硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯/庚烷(1∶9)作洗脱剂，给出N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2.19g)无色油状物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.05(s，1H)，7.93(d，1H)，7，16(d，1H)，6.95(d，1H)，3.8(s，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷2∶8)Rf0.4；RP-HPLC(HypersilHvPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1M醋酸铵25min，1ml/min)tr＝21.8min.
c)N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯将N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(1.10g，3.64mmol)，二硼频那醇酯(1.11g，4.37mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)配合物与二氯甲烷(1∶1)(0.09g，0.11mol)和乙酸钾(1.07g，10.9mol)在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中的混合物在80℃于氮气氛中加热16小时。使混合物冷却至室温，然后减压除去大部分溶剂。将二氯甲烷(20ml)加入残余物中，在硅胶垫上滤除产生的固体。将滤液浓缩给出黄色油状物，将其通过快速硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/正庚烷(2∶8)作流动相，给出N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯白色固体(0.96g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.03(s，1H)，7.86(s，1H)，7.35(d，1H)，7.0(d，1H)，3.82(s，3H)，1.46(s，9H)，1.28(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷 2∶8)Rf=0.35；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)Rf22.8min.
d)N-(5-(氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯将4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.35g，1.0mmol)，N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.524g，1.5mmol)，四(三苯膦)钯(O)(0.07g，0.06mmo)，碳酸钠(0.265g，2.5mmol)的混合物在和乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中在80℃于氮气氛中加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂，给出残余物，将其分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之间。分出有机层，水层再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取两次。合并的有机萃取液用水(3×20ml)洗涤，然后硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩为油状残余物，将其用快速硅胶柱层析纯化，用正庚烷/乙酸乙酯(5∶1)作洗脱剂给出N-(5-(氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.64(s，1H)，7.93(s，1H)，7.87(m，2H)，7.17(d，1H)，7.06(d，1H)，5.21(m，1H)，3.86(s，3H)，1.65-2.25(m，8H)，1.45(s，9H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1M 醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝24.25min.MSMH+443.
e)5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺将N-(5-(氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g，0.735mmol)的二氯甲烷(14m1)溶液冷却至0℃，然后用三氟乙酸(1.4ml)处理。溶液在0℃搅拌5分钟，然后温热至室温，并再搅拌16小时。减压蒸发溶剂，残余物分配在二氯甲烷(30ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)之间。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发，给出一泡沫体。将其溶于二噁烷(4ml)和浓(28-30％)氢氧化铵(4ml)，产生的溶液在120℃于密封的压力管内加热20小时。溶剂被蒸发，残余物通过制备性C18 RP-HPLC纯化，冻干后给出5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(85mg)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.21(s，1H)，6.87(d，1H)，6.74(s，1H)，6.58(d，1H)，5.06(1H，m)，4.87(bs，2H)，3.8(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸铵25min，1ml/min)tr11.87min.；MSMH+324.
f)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯将5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.124mmol)的二氯甲烷(1ml)和吡啶(1ml)溶液冷却至0℃，然后用氯甲酸苄基酯(32mg，0.786mmol)处理，同时保持温度低于5℃。将溶液在0℃再搅拌1小时，然后减压除去溶剂。通过制备性RP-HPLC纯化，然后冻干给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯白色固体(25mg)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.75(s，1H)，8.11(s，1H)，7.75(s，1H)，7.1-7.4(m，8H)，6.2(bs，2H)，5.15(s，2H)，5.07(m，1H)，3.8(s3H)，1.6-2.2(m，8H)，RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1 M 醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.63min.；MSMH+458.实施例23N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸苄基酯a)N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯以类似于化合物(2)所述的方法，从5-溴-2-吡啶胺制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.96(s，1H)，8.49(d，1H)，7.93(dd，1H)，7.78(d，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷 5∶95)Rf0.28；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.50min.
b)N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯将N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，6.12mmol)，六甲基二锡(2.0g，6.12mmol)和四(三苯膦)钯(O)(0.424g，0.367mmol)在乙二醇二甲基醚(30ml)中的混合物中于80℃在氮气氛中加热15小时。混合物被冷却至室温，然后减压除去溶剂。产生的物质通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作洗脱剂，给出N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(1.11g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ％98(s，1H)，8.2(t，1H)，7.74(m，2H)，1.47(s，9H)，0.30(t，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯 95∶5)Rf0.2；MSMH+359.
c)N-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯将4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.25g，0.72mmol)，N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.386g，1.08mmol)，四(trwas)(二亚苄基丙酮)二钯(O)(0.033g，0.076mmo)和三苯基胂(0.055g，0.18mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的混合物在65℃于氮气氛中加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂。产生的物质用快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(75∶25)作洗脱剂，给出N-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.83(s，1H)，8.68(s，1H)，8.40(d，1H)，8.02(s，1H)，7.85-7.93(m，2H)，5.21(m，1H)，1.65-2.25(m，8H)，1.49(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯
8∶2)Rf0.18；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝21.68min.
d)5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶-4-胺将N-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g，0.315mmol)的二氯甲烷(5.5ml)溶液冷却至0℃，然后用三氟乙酸(0.6ml)处理。溶液在0℃搅拌5分钟，然后温热至室温，并再搅拌18小时。减压蒸发溶剂，残余物分配在二氯甲烷(30ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)之间。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发，给出5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶-4-胺(92mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1 M醋酸铵25min，1ml/min)tT＝10.73min；MSMH+314.
e)5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺将5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶-4-胺(92mg，0.292mmol)溶于二噁烷(2ml)和浓(28-30％)氢氧化铵(2ml)，产生的溶液在120℃于密封的压力管内加热24小时。溶剂被蒸发给出5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)tr＝6.33min；MsMH+295f)N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯将5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg，0.29mmol)的二氯甲烷(1.5ml)和吡啶(1.5ml)溶液冷却至0℃，然后用氯甲酸苄基酯(75mg，0.44mmol)处理，同时保持温度低于5℃。将溶液温热至室温，然后搅拌3小时。加入氯甲酸苄基酯(75mg，0.44mmol)，混合物被搅拌18小时，再加入氯甲酸苄基酯(75mg，0.44mmol)，混合物再搅拌24小时。加入氯甲酸苄基酯(150mg，0.88mmol)和吡啶(1ml)，混合物被再搅拌24小时。减压蒸发溶剂，然后将残余物分配在乙酸乙酯(25ml)和水(10ml)之间。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发滤液给出一残余物。通过制备性RP-HPLC纯化，然后用乙醚研制给出N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯白色粉末(21mg)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.33(s，1H)，8.36(d，1H)，8.14(s，1H)，7.91(d，1H)，7.84(d，1H)，7.33-7.47(m，6H)，6.11(bs，2H)，5.2(s，2H)，5.06(m，1H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝16.22min；MSMH+429.实施例24N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯a)4-溴-3-甲氧基苯胺将1-溴-2-甲氧基-4-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮气中加热。加入铁粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃搅拌1小时。使混合物冷却至室温，然后加入水(100ml)，用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有机萃取液用饱和碳酸氢钠(3×25ml)洗涤，然后用食盐水洗涤。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，滤液被减压蒸发，给出一残余物。将该物质通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脱剂，给出4-溴-3-甲氧基苯胺(1.22g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.1(d，1H)，6.31(s，1H)，6.1(d，1H)，5.27(bs，2H)，3.72(s，3H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯1∶1)Rf0.33；RP-HPLC(Hypersil HyPurity EliteC18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵25min，1ml/min)tr＝11.05min.
b)N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以化合物(2)所述的方法，从4-溴-3-甲氧基苯胺制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.46(s，1H)，7.4(d，1H)，7.35(s，1H)，6.95(d，1H)，3.78(s，3H)，1.48(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.37；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M 醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.60min.
c)N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯以化合物(3)所述的方法，从N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制备该化合物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.44(s，1H)，7.41(d，1H)，7.17(s，1H)，7.01(d，1H)，3.68(s，3H)，1.48(s，9H)，1.24(s，12H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.28；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.83min.
d)N-(4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以化合物(4)所述的方法，从N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯和4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.41(s，1H)＜8.59(s，1H)，7.72(s，1H)，7.33(s，1H)，7.15(d，1H)，7.04(d，1H)，5.17(m，1H)，3.66(s，3H)，1.6-2.2(m，3H)，1.49(s，9H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M 醋酸铵25min，1ml/min)tr＝21.22min；MSMH+443.
e)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯以将化合物(4)转化为化合物(6)的方式，从N-(4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.87(s，1H)，8.08(s，1H)，7.34-7.45(m，6H)，7.09-7，18(m，3H)，5，79(bs，2H)，5.18(s，2H)，5.04(m，1H)，3.7(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝16.87min；MSMH+458.实施例25N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸苄基酯a)4-[{[7-环戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基}(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基树脂Rink酰胺树脂[负载0.66mmol/g的4-(2’，4’-二甲氧基苯基-Fmoc氨基甲基)苯氧基树脂](6.55g，4.32mmol)通过用N，N-二甲基甲酰胺(2×2min)，哌啶的20％N，N-二甲基甲酰胺溶液(1×5min，1×15min)，N，N-二甲基甲酰胺(5×2min)，二氯甲烷(3×2min)，然后甲醇(3×2min)洗涤而脱保护。该树脂在40℃减压干燥。脱保护的树脂，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.80g，5.19mmol)，二甲亚砜(100ml)，和N，N-二异丙基乙胺(4.5ml)在100℃加热3天，冷却至室温，然后过滤收集树脂，并用N，N-二甲基甲酰胺洗涤。然后将树脂与乙酸(0.13g，2.16mmol)，四氟硼酸O-苯并噻唑-1-基-N，N，N’N’-四甲基脲(0.69g，2.16mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.56g，4.32mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(30ml)一起搅拌。过滤收集树脂，并用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷和甲醇洗涤。将树脂减压干燥至恒重(6.25g)。将树脂，二硼频那醇酯(1.11g，4.37mmol)，醋酸钾(0.822g，9.39mmol)和四(三苯膦)钯(0.24g，0.21mmol)在二甲亚砜(125ml)中，在氮气氛中于85℃加热17小时。过滤收集树脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，乙酸乙酯，然后乙醚洗涤。将树脂减压干燥至重5.49克。
b)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸苄基酯将4-[{[7-环戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基}(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基树脂(0.5g，0.254mmol)，4-溴-2-氟苯胺(0.484g，2.54mmol)，四(三苯膦)钯(0.044g，0.038mmol)，2M磷酸钾水溶液(1.27ml，2.54mmol)和二甲亚砜(10ml)的混合物在85℃加热18小时。将混合物冷却，过滤收集树脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗涤。然后使树脂第二次处于上述偶合条件。将树脂悬浮于二氯甲烷(2ml)和吡啶(2ml)，然后将混合物冷却至0℃，并用氯甲酸苄基酯(0.44g，2.6mmol)处理。在0℃搅拌1小时后，使混合物温热至室温18小时。过滤收集树脂，并用5％三氟乙酸的二氯甲烷(10ml)溶液处理30分钟。滤除树脂，产生的滤液被减压蒸发，给出一残余物，通过制备性C-18 RP-HPLC纯化，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸苄基酯(约10mg)RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 10min，1ml/min)tr＝11.47min；MSMH+446.实施例27N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于实施例25所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝12.07min；MsMH+496实施例28N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氰基苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于实施例25所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr10.93min；MsMH+453实施例295-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯以类似于实施例25所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝13.28min；MsMH+486实施例30N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲基苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于实施例25所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝11.25min；MsMH+442实施例31N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于实施例25所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝11.27min；MsMH+428实施例32N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(27mg，0.083mmol)溶于二氯甲烷(0.8ml)。加入吡啶(0.8ml)，接着加入苯磺酰氯(19mg，0.105mmol)。搅拌过夜后，加入另外19mg苯磺酰氯，将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂，残余物通过制备性薄层色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脱，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺(9mg，0.0188mmol)。
1H NMR (DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.28(m，2H)，3.85(s，3H)，4.38(s，2H)，5.23(m，3H)，6.08(bs，1H)，6.99(m，2H)，7.27，(m，2H)，7.33(m，3H)，7.58(d，J＝8.17Hz，1H)，8.34(s，1H).LC/MS MH+＝478实施例33N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(28mg，0.086mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接着加入2-苯基乙酰氯(14μL，0.105mmol)。搅拌过夜后，加入另外14μL苯基乙酰氯，将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂，残余物通过制备性薄层色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脱，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺(7mg，0.0158mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.25(m，2H)，3.77(s，3H)，3.79(s，2H)，5.21(m，1H)，5.56(bs，2H)，6.89(s，1H)，6.99(s，1H)，7.05(a，J＝8.22，1H)，7.36(m，5H)，7.81(s，1H)，8.27(s，1H)，8.43(d，J＝8.23Hz，1H).LC/MS MH+＝442.实施例34N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-(2-噻吩基)乙酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(31mg，0.096mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接着加入2-(2-噻吩基)乙酰氯(14μL，0.113mmol)。搅拌过夜后，加入另外14μL 2-(2-噻吩基)乙酰氯，将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂，残余物通过制备性薄层色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脱，给出N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-(2-噻吩基)乙酰胺(14mg，0.031mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.25(m，2H)，3.82(s，3H)，3.99(s，2H)，5.19(bs，2H)，5.21(m，1H)，6.93(s，1H)，6.94(s，1H)，7.06(m，3H)，7.31(m，1H)，8.02(s，1H)，8.32(s，1H)，8.42(d，J＝8.22Hz，1H).LC/MS MH+＝448.实施例35-108(一般方法)在表J中列出的实施例化合物是通过苯酚与表I所列出的氟苯如下列图解所示反应而制备的。 R1是异丙基。R100如上所示 经Gilson 215液体自动加样器将5-(4-羟基苯基)-7-异丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(1摩尔当量)在N，N-二甲基甲酰胺中的贮备溶液(6g溶于240ml)加入隔膜密封管中的氟苯(1.25摩尔当量)和碳酸钾(2摩尔当量)的混合物。将反应物在振动下于120℃加热4小时，再于140℃加热1小时，然后在离心蒸发器中蒸发至干。
反应残余物溶于乙酸乙酯/三乙胺(1ml)(9∶1)，并用9∶1乙酸乙酯/三乙胺(4×2ml)洗过二氧化硅垫(3g SiO212mm直径×20mm高)。合并的柱体洗出物被蒸发，给出蜡状固体，涂片或膨胀的泡沫体产物。表I
所得的产物在表J中给出。R100如前所述。
LCMS中所用的条件在后面给出。HPLC RT(mins)是以分钟表示的HPLC保留时间。产物
表J
RT＝以分钟表示的保留时间1＝2-噻吩甲酰基2＝稠合的环给出萘基3.P＝2-甲酰基-1-甲基吡咯-4-基羰基4.A＝2-氨基-5-氯苯基在实施例35-108中制备的化合物如下。实施例354-[4-(4-氨基-7-并丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苯甲醛实施例364-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯苯乙酮实施例374-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯苯甲醛实施例384-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯乙酮实施例394-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲醛实施例402’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-三氟甲基苯丙酮实施例412’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3’-三氟甲基苯乙酮实施例422-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-甲酰基-6-二甲基氨基苄腈实施例432-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苯甲醛实施例442’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4’-甲氧基苯乙酮实施例452-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯苯甲醛实施例462’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-氟苯乙酮实施例472’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲氧基苯乙酮实施例482-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-甲氧基苯甲醛实施例492’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯丙酮实施例502-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氟苯甲醛实施例512’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯乙酮实施例522-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲醛实施例534’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基苯丙酮实施例544-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基2-噻吩基-酮实施例554’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-三氟甲基苯乙酮实施例564-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基苯甲醛实施例574’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-1’-萘乙酮实施例584-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-甲氧基苯甲醛实施例592-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基苯丙酮实施例602-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基苯乙酮实施例612-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-三氟甲基苯乙酮实施例622-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯-5-甲基苯乙酮实施例632-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基苯甲醛实施例644-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲酰基-1-甲基吡咯-2-醛实施例654’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-(甲磺酰基)苯乙酮实施例665-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-1-二氢茚酮实施例672-氨基-2’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-氯二苯酮实施例682’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基苯乙酮实施例694-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苄腈实施例704-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯苄腈实施例714-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-氯苄腈实施例724-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氟苄腈实施例734-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苄腈实施例742-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(4-甲基苯硫基)苄腈实施例752-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2-吡啶硫基)苄腈实施例76{3-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-氰基苯硫基)乙酸甲酯实施例772-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苄腈实施例782-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-三氟甲基苄腈实施例792-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(吡咯-1-基)苄腈实施例802-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基苄腈实施例812-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苄腈实施例825-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-硝基苯甲醛实施例834-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-硝基苯基甲基砜实施例841-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-硝基-4-三氟甲基苯实施例854’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-氯苯乙酮实施例864’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-甲基苯乙酮实施例877-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-苯基二氢茚-1-酮实施例882-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-三氟甲基苯乙酮实施例891-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-9-芴酮实施例906-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3，4-二甲氧基苯甲醛实施例912-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲基苯乙酮实施例922-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2-氧代吖庚因-3-基氨基)苄腈实施例932-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5基)苯氧基]-6-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基苄腈实施例942-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(3-咪唑-1-基)丙基氨基]苄腈实施例952-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-[2-(4-吡啶基)乙基氨基]苄腈实施例962-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2-噻吩基甲基氨基)苄腈实施例972-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(4-氰基哌啶-1-基)苄腈实施例982-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(3-吡啶基甲基氨基)苄腈实施例992-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(4-甲基苯氧基)苄腈实施例1002-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-硫杂吗啉代苄腈实施例1012-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-[(3-二甲基氨基)丙基氨基]苄腈实施例1022-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)苄腈实施例1032-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-(3-甲氧基丙基氨基)苄腈实施例1042-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-二甲基氨基苄腈实施例1052-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲氧基苄腈实施例1062-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-氟苄腈实施例1071-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-硝基-2-三氟甲基苯实施例1081-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-6-氯-2-硝基-4-三氟甲基苯通过下述-般方法制备实施例109-137的化合物。一般方法在表J中列出的羰基化合物(大约50mg)被溶于甲醇(2ml)，然后加入聚合物支载的硼氢化钠[在Amberlite上；IRA-400；每克树脂2.5mmol硼氢化钠；2当量(50mg原料，0.106至0.1345mmol)]。
将混合物在室温振动(轨道振动)24小时，然后过滤，并用甲醇(2×1ml)洗涤树脂，将滤液蒸发，分析残余物。所得的产物列于表K。HPLCRT是以分钟表示的保留时间。 表K产物
1-Th＝噻吩基2＝稠合的环给出萘基在表K中制备的化合物列于如下实施例1094-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苄基醇实施例1104-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯-α-甲基苄基醇实施例1114-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氯苄基醇实施例1124-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯乙酮实施例1134-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苄基醇实施例1142’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-三氟甲基-α-乙基苄基醇实施例1152’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3’-三氟甲基-α-甲基苄基醇实施例1162-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-羟甲基-6-(二甲基氨基)苄腈实施例1172-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-三氟甲基苄基醇实施例1182’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4’-甲氧基-α-甲基苄基醇实施例1192-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯苄基醇实施例1202’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5’-氟-α-甲基苄基醇实施例1212’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲氧基-α-甲基苄基醇实施例1222-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-甲氧基苄基醇实施例1232’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-α-乙基苄基醇实施例1242-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-氟苄基醇实施例1252’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-α-甲基苄基醇实施例1262-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苄基醇实施例1274’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基-α-乙基苄基醇实施例1284-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-α-(2-噻吩基)苄基醇实施例1294’-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2’-三氟甲基-α-甲基苄基醇实施例1304-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-三氟甲基苄基醇实施例1311-{1-4-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]萘基}乙醇实施例1324-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-2-甲氧基苄基醇实施例1332-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基-α-乙基苄基醇实施例1342-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-三氟甲基-α-甲基苄基醇实施例1352-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-三氟甲基-α-甲基苄基醇实施例1362-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-4-氯-5-甲基-α-甲基苄基醇实施例1372-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-硝基苄基醇列于表L中的实施例化合物通过式(AL)的醛与二乙胺在Na(OAc)3BH存在下反应，给出式(AM)的化合物而制备。起始的醛通过在表中给出的较早的实施例中制备。 一般方法该醛用1ml的THF(50ml)和二乙胺(2ml)的储存溶液[相对于40μl二乙胺]处理，并在隔膜密封管中于室温1小时。往各反应物中加入Na(OAc)3BH(20mg±2mg)，然后用氮气冲洗，再加盖，并在室温放置24小时。往各酮反应中加入溶于100ml THF的乙酸溶液(3ml)，并在室温放置过周末。通过加入饱和碳酸钠水溶液(1ml)淬灭反应，并通过振动加盖的试管萃取到二氯甲烷(2ml)中，收集，蒸发。对所有产物进行LCMS，在各种情况下找到靶块。产物 表L
1.p＝1-甲基-2-(二乙基氨基甲基)吡咯-3-羰基在表L中制备的化合物列于如下。实施例1384-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯甲酰基-1-甲基-2-(二乙基氨基甲基)吡咯实施例1395-[4-(4-二乙基氨基甲基-2-三氟甲基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1405-[4-(4-二乙基氨基甲基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1412-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-3-二乙基氨基甲基-6-(二甲基氨基)苄腈实施例1425-[4-(2-二乙基氨基甲基-6-三氟甲基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1435-[4-(2-二乙基氨基甲基-5-甲氧基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1445-[4-(2-二乙基氨基甲基-6-氟苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1455-[4-(2-二乙基氨基甲基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1465-[4-(4-二乙基氨基甲基-3-三氟甲基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1475-[4-(4-二乙基氨基甲基-5-甲氧基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1485-[4-(4-二乙基氨基甲基-4，5-二甲氧基苯氧基)苯基]-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺通式Q实施例149至158的化合物通过式(AL2)的化合物与式(AM2)的胺如下面图解所示的用在-般方法中概述的工艺反应而制备，其中R100如前所述。所得的产物示于表Q。 一般方法Q将醛(440mg)的THF(11ml)贮备溶液等量分在11个隔膜密封的小瓶中。各反应(含有40mg的CHO，0.1075mmol)用过量的列于表Q中的胺(3-10摩尔当量)和Na(OAc)3BH(113mg；0.5375mmol)处理，并在室温放置48小时。混合物用饱和碳酸钠水溶液(1ml)淬灭并振动1小时，萃取到二氯甲烷(3ml)中，用Empore筒分离。使有机层在室温蒸发过夜，残余物溶于乙酸乙酯(2ml)并用2N盐酸(1ml)萃取并涡旋混合。酸层被吸出，用乙酸乙酯(2×1ml)洗涤，吸出操作几次，用4N氢氧化钠碱化。混合物用乙酸乙酯(2ml)萃取，涡旋混合/吸出分离，并用水(2×1ml)洗涤。最终的乙酸乙酯层通过小EMPORE筒(cartridge)分离，并蒸发至干。表Q
在表Q制备的化合物如下实施例1494-{4-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}哌嗪-1-羧酸乙酯实施例1501-{[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}哌啶-2-羧酸乙酯实施例151N-{4-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}氨基乙酸乙酯实施例152N-{2-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基甲基}-2-氨基乙醇实施例1537-异丙基-5-[4-(2-二甲基氨基甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1547-异丙基-5-[4-(2-(2-噻唑基氨基甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1557-异丙基-5-[4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1567-异丙基-5-[4-(2-吗啉代甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1577-异丙基-5-[4-(2-哌啶子基甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺实施例1587-异丙基-5-[4-(2-吡咯烷子基(pyrrolodino)甲基苯氧基)苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺在实施例35-158中的LCMS所用的条件在下面给出。实施例35-52，64-84和109-126柱Peco R Activity 3mm×3×m C18-PK/5(Perkin Elmer)流动相0.1M醋酸铵缓冲液[pH 4.55]乙腈(梯度-如下)条件 10-100％乙腈5分钟100％腈1分钟100-10％腈2分钟(总分析时间8分钟)波长范围 250-320nm流速 1ml/分钟注射体积 20μlMS方法 APCI11H离子化APcI+ve/-ve质量范围 100-700m/z实施例53-63，85-108和126-137柱5μl Hypersil 100×2.1mm BDS C18流动相0.1M醋酸铵缓冲液[pH4.55]乙腈(梯度-如下)条件 10-100％腈8分钟100-10％乙腈3分钟(总分析时间11分钟)波长范围 250-320nm流速 1ml/分钟注射体积 20°μlMS方法 APCI11H离子化APcI+ve/-ve质量范围 100-700m/z实施例138-158柱5μl Hypersil 100×2.1mm BDS C18流动相0.1M醋酸铵缓冲液[pH 4.55]乙腈(梯度-如下)条件 10-100％乙腈8分钟100％乙腈1分钟100-10％腈2分钟
(总分析时间11分钟)波长范围 250-320nm流速 1ml/分钟注射体积 20°μlMS方法 APCI11H离子化 APcI+ve/-ve质量范围 100-700m/z实施例1597-异丙基-5-(4-(嘧啶-2-基氧基)苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺a)搅拌下，将碘(52.9g)加入4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(29.1g，J.Chem.Soc.1960，131)的N，N-二甲基甲酰胺(400ml)溶液中。往冷却的混合物中分批加入氢氧化钾小丸(31.9g)，使反应混合物的温度保持在20℃左右，该混合物在室温搅拌2小时。以稳定的流量加入硫代硫酸钠溶液(900ml 10％水溶液)，通过外部冷却保持温度在30℃。混合物用乙酸乙酯萃取，将合并的萃取液干燥，过滤并减压蒸发，给出的残余物被加入水(1L)，并用乙酸乙酯(2×150ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液被干燥并蒸发，给出的固体用乙酸乙酯重结晶。所得的固体与甲醇(800ml)一起搅拌，过滤除去不溶物。将滤液蒸发至干，给出浅黄色固体，鉴定为4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶，m.p.219-221℃b)在0℃，搅拌下，氮气氛中将4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(10.0g，见实施例17)分批加入氢化钠(1.6g在矿物油中60％的分散液)的N，N-二甲基甲酰胺(250ml)悬浮液。加完后，使混合物温热至室温，当没有气体逸出时，滴加异丙基溴(34.0ml)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液。混合物在室温下搅拌过夜，然后在外部冰冷的情况下加入水(300ml)淬灭。混合物用乙酸乙酯(3×300ml)洗涤，合并的有机层用水洗涤，干燥，过滤并蒸发，给出4-氯-5-碘-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶黄色固体，m.p.116-118℃。其结构被1H NMR证实。
c)将4-氯-5-碘-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.8g)，4-甲氧基苯硼酸(1.32g)，二(三苯膦)氯化钯(II)(625mg)，甲苯(85ml)，乙醇(11ml)，水(22ml)和碳酸氢钠(2.2g)的混合物在氮气中于105℃加热18小时。使混合物冷却至室温，然后分配在乙酸乙酯(100ml)和食盐水(100ml)之间。分出有机层，水层用乙酸乙酯(2×50ml)洗涤。合并的有机层用水洗涤，干燥，过滤并减压蒸发，给出黑色油状物，冷却时固化。此物通过快速硅胶柱层析纯化，用环己烷/乙酸乙酯(7∶3)作流动相。合并所需的级分并减压浓缩，给出黄色油状物，放置固化，给出4-氯-7-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。其结构被1HNMR证实。
d)将4-氯-7-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.6g)，浓氨水(80ml，S.G..880)和1，4-二噁烷(80ml)的混合物在压力器中于120℃加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂，给出的固体被分配在乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)之间。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用水洗涤，干燥，过滤并蒸发，给出4-氨基-7-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。其结构被1HNMR证实。
e)在-10℃，氮气中，搅拌下将三溴化硼(14.4ml的1M二氯甲烷溶液)滴加到4-氨基-7-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.35g)的二氯甲烷(100ml)溶液中。反应混合物被温热至0℃，并在此温度搅拌1小时。在-10℃再加入三溴化硼(9.6ml的1M二氯甲烷溶液)，反应混合物被温热至0℃，并在此温度搅拌1小时。通过滴加饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)淬灭反应混合物。混合物被放置过夜并分出二氯甲烷层。过滤除去中间的不溶物，干燥给出4-氨基-5-(4-羟基苯基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。其结构被1HNMR证实。
f)4-氨基-5-(4-羟基苯基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.05g)，2-氯嘧啶(23mg)，碳酸钾(39mg)和二甲基甲酰胺(3ml)在振动下于90℃加热26.5小时。然后将混合物在室温再振动24小时。反应混合物被分配在乙酸乙酯(20ml)和2M氢氧化钠溶液(20ml)之间。分出水层并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液和洗出液被合并，干燥，过滤并蒸发，给出的固体通过快速硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)作流动相，给出的固体通过液相色谱LCMS鉴定为7-异丙基-5-(4-(嘧啶-2-基氧基)苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺。其结构被1HNMR证实。实施例1604-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛a)将4-氯-5-碘-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.5g)，4-甲酰基苯硼酸(0.48g)，二(三苯膦)氯化钯(II)(112mg)，甲苯(15ml)，乙醇(2ml)，水(4ml)和碳酸氢钠(0.40g)的混合物于105℃加热8小时。使混合物冷却至室温，然后用盐水稀释，并用乙酸乙酯萃取，给出的油状物通过快速硅胶柱层析纯化，用从20％至40％逐步增加的乙酸乙酯/环己烷作流动相，给出4-(4-氯-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛，m.p.138-140℃。
b)将步骤a)的产物(2.7g)，浓氨水(75ml，S.G.0.880)和1，4-二噁烷(50ml)的混合物在压力器中于120℃加热16小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂。将水加入，混合物用乙酸乙酯萃取，给出的固体用乙酸乙酯研制，过滤，给出的固体被LCMS鉴定为4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛，m.p.198-200℃。实施例161∝-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]苄基醇在-78℃，氮气中，搅拌下将苯基氯化镁(1.5ml的2MTHF溶液)滴加到4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛(0.25g)的甲苯/THF(1∶1，16ml)溶液中。加完后，使混合物温热至0℃，并在此温度保持40分钟。在0℃通过滴加饱和氯化铵溶液(4ml)淬灭反应。使混合物温热至室温并在此温度放置过夜。减压除去溶剂，所得的固体残余物用水洗涤并过滤。残余物用热乙酸乙酯研制，过滤收集，LCMS鉴定为∝-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]苄基醇，m.p.279-281℃。实施例1627-异丙基-5-(3-[(苯基-4-基)亚甲基]-2-羟基吲哚(oxindole))-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺将4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯甲醛(0.2g)，2-羟基吲哚(95mg)，哌啶(0.02ml)和乙醇(5ml)的混合物沸腾回流3小时。混合物被冷却至室温，过滤收集形成的固体，用乙醇重结晶，给出7-异丙基-5-(3-[(苯基-4-基)亚甲基]-2-羟基吲哚)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺。实施例1635-[4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基苄基醇a)将5-溴-2-氟苯甲醛(20.0g)，苯酚(9.26g)，碳酸钾(16.4g)和二甲基甲酰胺(200ml)的混合物在160℃加热5小时。混合物被冷却，用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取，给出5-溴-2-苯氧基苯甲醛油状物。
b)将步骤a)的产物(5.71g)，六甲基二锡(10.0g)，四(三苯膦)钯(O)(1.5g)和甲苯(200ml)的混合物在氮气中沸腾回流搅拌5小时。混合物被冷却并过滤，将滤液蒸发，给出的残余物通过快速柱层析纯化，用2.5-7.5％增加的乙醚中的b.p.40-60℃的石油醚作流动相，给出5-三甲基锡烷基-2-苯氧基苯甲醛。
c)将步骤b)的产物(2.0g)，4-氯-5-碘-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.99g)，三苯胂(0.235g)，和三(二亚苄基丙酮)二钯(O)(0.4lg)和二甲基甲酰胺(20ml)的混合物在氮气中于65℃加热搅拌18小时。将混合物冷却并加入水。混合物用乙酸乙酯萃取，给出的残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用增加量的环己烷中的乙酸乙酯(5-20％)作流动相，给出5-[4-氯-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基苯甲醛。
d)将步骤c)的产物(0.325g)，硼氢化钠(32mg)和甲醇(5ml)的混合物在0℃搅拌30分钟，然后温热至室温，并在此温度搅拌1小时。混合物用50％冰醋酸(2ml)淬灭。减压除去溶剂，往残余物中加入水，然后用乙酸乙酯萃取，给出5-[4-氯-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基苄基醇固体，m.p.157-159℃。
e)将步骤d)的产物(0.18g)，浓氨水溶液(20ml，sg 0.880)和1，4-二噁烷(20ml)的混合物在压力器中于120℃加热搅拌16小时。混合物被冷却，并分配在乙酸乙酯和水之间。蒸发乙酸乙酯萃取液，给出的油状物通过快速柱层析纯化，给出5-[4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基]-2-苯氧基苄基醇，m.p.92-94℃。实施例1644-氨基-7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲腈(carbonitrile)a)将4-苯氧基苯乙酮(150.0g)溶于乙酸(2L)，并在50℃搅拌，同时分批加入吡啶鎓三溴化物(251.6g)。将该褐色的溶液加入水(3L)中，混合物用甲苯(1×800ml然后2×400ml)萃取。合并的甲苯萃取液用水洗涤，然后用碳酸氢钠水溶液洗涤，直至泡腾停止。将合并的甲苯萃取液分出，干燥并过滤，直接用于下面的步骤b)。
b)在氮气中，搅拌下将步骤a)所得的2-溴-4’-苯氧基苯乙酮的甲苯溶液加入环戊基胺(154ml)的甲苯(1L)溶液中，同时保持温度低于5℃。然后将混合物在保持温度低于10℃的情况下搅拌2.5小时，将混合物过滤。滤液通过滴加浓盐酸(120ml)处理，同时保持温度低于10℃。过滤收集沉淀，用丙-2-醇/乙醚(1∶1)研制，给出的固体在40℃真空干燥6.5小时，给出2-环戊基氨基-4’-苯氧基苯乙酮盐酸盐。
c)在氮气中将步骤b)的产物(35.1g)加入丙二腈(9.5g)的甲醇(500ml)溶液中，然后在30分钟内滴加氢氧化钾(17.0g)的水(75ml)溶液，同时保持温度在0和5℃之间。将混合物沸腾回流2.5小时。再加入丙二腈(1.0g)的甲醇(10ml)溶液，混合物再沸腾回流3小时。使混合物在室温放置18小时，然后减压除去甲醇，残余物保持在氮气中。将残余物溶于二氯甲烷(600ml)，用水洗涤，然后用食盐水洗涤，干燥，过滤并蒸发，给出的褐色固体用乙醚研制，给出2-氨基-3-氰基-1-环戊基-4-(4-苯氧基苯基)吡咯，直接用于本实施例的下步。
d)将步骤c)的产物溶于甲酰胺(155ml)，N，N-二甲基甲酰胺(52ml)和甲酸(20.2ml)的混合物中，混合物在氮气中于166℃的外温下加热4小时。混合物被冷却，倒入水(3.5L)，然后用乙酸乙酯3×1500ml)萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用水洗涤，干燥，过滤并蒸发，给出的固体用乙醚研制并过滤，给出的固体用工业甲基化的酒精重结晶，给出7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.178-179。
e)将步骤d)的产物(3.7g)在氮气中于无水的二甲基甲酰胺(120ml)中搅拌，同时在黑暗中于氮气中分批加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.8g)。混合物在黑暗中搅拌18小时，然后处理，给出6-溴-7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.161.5-162.5℃。
f)将步骤e)的产物(449mg)，氰化锌(75mg)和N-甲基吡咯烷酮(10ml)的混合物用三(2-呋喃基)膦(63mg)处理，然后在氮气中彻底除氧，加入三(二亚苄基丙酮)钯(O)(45mg)。混合物被加热至90℃，并保持在该温度20小时。加入乙酸乙酯(20ml)，接着加入氨水溶液(20ml的2M溶液)。将混合物搅拌，然后分出乙酸乙酯层，水层再用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯层和洗出液被干燥，过滤并蒸发，给出的残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯作流动相，给出4-氨基-7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲腈，m.p.117.5-118.5℃。实施例1656-氨基甲基-7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺将前面实施例的产物(0.88lg)溶于温热的乙醇(20ml)，该溶液被加入用氨饱和的乙醇(200ml)中。加入Raney镍(2×1ml)，混合物在氢气中振动6小时。加正压，并周期性地从装置中排空气体。2小时后，容器被抽空几次，并充入氢气。再过2小时后，重复此过程。最后的混合物被振动1.5小时，然后过滤。将滤液蒸发，给出的固体用乙醚研制，过滤收集，给出的粗固体被溶于乙酸乙酯。分批加入马来酸(0.2g)的乙酸乙酯溶液，直至不再形成沉淀。产生的混合物被温热和研制，然后冷却16小时。过滤收集固体，给出6-氨基甲基-7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.196.5-197.5℃。实施例1667-叔丁基-5-(N-甲酰基-4-苯基氨基苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶将7-叔丁基-5-(4-碘苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(1.0g)，甲酰苯胺(1.0g)，无水碳酸钾(1.0g)，碘化铜(I)(100mg)，铜粉(80mg)和N-甲基吡咯烷(5ml)的混合物在107℃于氮气中搅拌22小时。混合物被冷却并加入水。混合物用乙酸乙酯萃取，给出的残余物通过逆向制备性HPLC纯化，给出7-叔丁基-5-(N-甲酰基-4-苯基氨基苯基)吡咯并[2，3-d]嘧啶，m.p.163-164℃。实施例1673-{4-[4-氨基-7-叔丁基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}苄基醇以类似于前面实施例的方法，使7-叔丁基-5-(4-碘苯基)吡咯并[2，3-]嘧啶-4-基胺(392mg)与3-羟基苄基醇(372mg)反应，给出3-{4-[4-氨基-7-叔丁基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]苄基醇。实施例168N-[2-[(4-氨基-7-异丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}将5-[4-(2-氨基苯氧基)苯基]-7H-异丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(43mg)，氰化钾(11mg)，冰醋酸(7ml)和乙醇(3ml)的混合物在70℃加热2小时。再加入冰醋酸(7ml)和氰化钾(11mg)，并继续在75℃加热6小时。将混合物减压蒸发。往残余物中加入水，混合物用二氯甲烷萃取，给出N-[2-[(4-氨基-7-异丙基吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苯基}脲固体。实施例1697-(2-羟基乙基)-5-{4-[4-(2-羟基乙氧基)苯氧基]苯基}吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺通过5-{4-[4-(2-羟基)苯氧基]苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺与碳酸亚乙基酯在含有催化量的氢氧化钠粉末的N，N-二甲基甲酰胺中于沸点反应1小时制备7-(2-羟基乙基)-5-{4-[4-(2-羟基乙氧基)苯氧基]苯基}吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.166-166.5℃。在处理并通过快速硅胶柱层析纯化后得到产物。实施例1705-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]二氢茚-1-醇通过按照实施例109至137的方法还原实施例32的产物，制备5-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]二氢茚-1-醇。实施例1716-氨基-2-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苄腈按照实施例35至108的方法制备6-氨基-2-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]苄腈。实施例1722-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲基苄腈按照实施例35至108的方法制备2-[4-(4-氨基-7-异丙基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯氧基]-5-甲基苄腈。实施例1737-异丙基磺酰基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺将5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(1.57g)溶于干燥的二甲基甲酰胺(30ml)，并在搅拌下加入氢化钠(0.22g在矿物油中的60％分散液)。将混合物搅拌30分钟，然后加入异丙基磺酰氯(0.74g)，混合物在室温下搅拌18小时。往混合物中加入水直至没有沉淀产生。过滤收集固体，通过快速硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作流动相，给出7-异丙基磺酰基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺，m.p.162-162.5℃。实施例1747-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]双环[3.3.0]辛-3-醇a)在0℃将硼氢化钠(547mg)分批加入顺式-双环[3.3.0]辛烷-3，7-二酮(2.0g)的甲醇(20ml)溶液中。混合物在0℃搅拌1小时，然后温热至室温，并使其在室温放置18小时。混合物用2M氢氧化钠溶液淬灭，然后减压浓缩。将残余物分配在乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)之间。分出水层并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液和洗出液被干燥，过滤并蒸发，给出的油状物放置结晶，给出顺式-双环[3.3.0]辛烷-3，7-二醇。
b)将步骤a)的二醇(0.8g)，吡啶(10ml)和对甲苯磺酰氯(1.17g)的混合物在0℃搅拌2小时，然后在室温放置18小时。混合物被倒入5M盐酸中，并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用2M盐酸洗涤，然后干燥，过滤并蒸发，给出主要含有顺式-7-甲苯磺酰氧基双环[3.3.0]辛烷-3-醇的油状物，直接用于本实施例的下步。
c)在氮气中，于0℃搅拌下将5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基胺(193mg)加入氢化钠(52mg，在矿物油中的60％分散液)在二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物。混合物在室温搅拌1小时，然后在搅拌下加入步骤c)的产物(190mg)。混合物被温热至90℃，然后在此温度加热6小时。将混合物冷却至室温，并分配在水和乙酸乙酯之间。分出乙酸乙酯层，水层用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液和洗出液用水洗涤，干燥，过滤并蒸发，给出的油状物通过快速硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯，然后用含有逐渐增加量的直到10％的甲醇的乙酸乙酯作流动相。收集合适的级分，合并和蒸发，给出的固体用冷乙醚洗涤，给出7-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]双环[3.3.0]辛-3-醇，m.p.193-194℃。实施例1754-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]环己醇在搅拌下-次性将硼氢化钠(500mg，13mmol)加入4-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]环己-1-酮(780mg，2.0mmol)的甲醇(500ml)溶液中，混合物在氮气氛中搅拌1小时，然后放置过夜。减压除去溶剂，残余物分配在2M氢氧化钠水溶液(100ml)和二氯甲烷(100ml)之间。分出有机层，水层再用二氯甲烷(2×100ml)萃取。合并的有机萃取液用水(150ml)洗涤，碳酸钾干燥，并用Biotage 40S柱层析纯化，用乙酸乙酯/三乙胺(98∶2至95∶5)和乙酸乙酯/乙醇(95∶5)作流动相，给出4-[4-氨基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基]环己醇白色固体(750mg，1.9mmol)，熔点199-200deg.C.LC/MSHypersil BDS C18(100×2.1mm)0.1M醋酸铵/乙腈，10-100％乙腈，8分钟)MH+401，tr＝4.12分钟。实施例176N-[5-(4-氨基--7--环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯a)5-溴-2-甲氧基苯胺将4-溴-1-甲氧基-2-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮气氛中加热。加入铁粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃的温度下搅拌1小时。将混合物冷却至室温，然后加入水(100ml)，混合物用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有机萃取液用饱和碳酸氢钠(3×25ml)洗涤，然后用食盐水洗涤。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发滤液，给出残余物。该物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脱剂，给出5-溴-2-甲氧基苯胺(2.0g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)6.76(s，1H)，6.71(d，1H)，6.61(d，1H)，4.99(bs，2H)，3.74(s，3H)；(TLC(庚烷/乙酸乙酯 1∶1)Rf0.5；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5m，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝13.33min.；MSMH+443.
b)N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2)将5-溴-2-甲氧基苯胺(1.50g，7.43mmol)，和重碳酸二叔丁基酯(1.95g，8.91mmol)在THF(20ml)中的混合物加热回流20小时。混合物被冷却至室温，然后减压除去溶剂。产生的油状物通过快速硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯/庚烷(1∶9)作洗脱剂，给出N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(2.19g)无色油状物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.05(s，1H)，7.93(d，1H)，7，16(d，1H)，6.95(d，1H)，3.8(s，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷 2∶8)Rf0.4；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸铵25min，1ml/min)tr＝21.8min.
c)N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(3)将N-(5-溴-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(1.10g，3.64mmol)，二硼频那醇酯(1.11g，4.37mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)配合物与二氯甲烷(1∶1)(0.09g，0.11mmol)和乙酸钾(1.07g，10.9mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中的混合物在80℃于氮气氛中加热16小时。使混合物冷却至室温，然后减压除去溶剂。将二氯甲烷(20ml)加入残余物中，在硅胶垫上滤除产生的固体。将滤液浓缩给出黄色油状物，将其通过快速硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯/正庚烷(2∶8)作流动相，给出N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.96g)
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.03(s，1H)，7.86(s，1H)，7.35(d，1H)，7.0(d，1H)，3.82(s，3H)，1.46(s，9H)，1.28(s，12H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷2∶8)Rf＝0.35；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5um，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸铵25min，1ml/min)tr＝22.8mmd)N-(5-(氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(4)将4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.35g，1.0mmol)，N-[2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯(0.524g，1.5mmol)，四(三苯膦)钯(O)(0.07g，0.06mmo)和碳酸钠(0.265g，2.5mmol)的混合物在乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中于80℃在氮气氛中加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂。残余物分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之间。分出有机层，水层再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取。合并的有机萃取液用水(3×20ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩为油状物。将其用快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(5∶1)作流动相，给出N-(5-(氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.64(s，1H)，7.93(s，1H)，7.87(m，2H)，7.17(d，1H)，7.06(d，1H)，5.21(m，1H)，3.86(s，3H)，1.65-2.25(m，8H)，1.45(s，9H)；RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵25min，1ml/min)tr＝24.25min.MSMH+443.
e)5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺将N-(5-(氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯(0.325g，0.735mmol)的二氯甲烷(14ml)溶液冷却至0℃，然后用三氟乙酸(1.4ml)处理。该溶液在0℃搅拌5分钟，然后温热至室温并搅拌16小时。减压除去溶剂，残余物分配在二氯甲烷(30ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)之间。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发为泡沫体。此物被溶于二噁烷(4ml)和浓(28-30％)氢氧化铵(4ml)，产生的溶液在120℃于密封的压力管中加热20小时。蒸发溶剂，残余物通过制备性C18 RP-HPLC纯化，冻干后给出5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(85mg)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.10(s，1H)，7.21(s，1H)，6.87(d，1H)，6.74(s，1H)，6.58(d，1H)，5.06(1H，m)，4.87(bs，2H)，3.8(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈-0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝11.87min.；MSMH+324.
f)N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯将5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.124mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液和吡啶(1ml)冷却至0℃，然后用氯甲酸苄基酯(32mg，0.186mmol)处理，同时保持温度低于5℃。将溶液在0℃再搅拌1小时，然后减压除去溶剂。通过制备性RP-HPLC纯化，然后冻干给出N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯(25mg)白色粉末1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.75(s，1H)，8.11(s，1H)，7.75(s，1H)，7.1-7.4(m，8H)，6.2(bs，2H)，5.15(s，2H)，5.07(m，1H)，3.8(s3H)，1.6-2.2(m，8H)，RP-HPLC(HypersilHyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.63min.；MSMH+458.实施例177N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸苄基酯a)N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯以化合物(2)所述的方法从5-溴-2-吡啶胺制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.96(s，1H)，8.49(d，1H)，7.93(dd，1H)，7.78(d，1H)，1.47(s，9H)；TLC(乙酸乙酯/庚烷5∶95)Rf0.28；RP-HPLC (Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.50min.
b)N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯将N-(5-溴-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，6.12mmol)，六甲基二锡(2.0g，6.12mmol)和四(三苯膦)钯(O)(0.424g，0.367mmol)在乙二醇二甲基醚(30ml)中的混合物在80℃于氮气氛中加热15小时。使混合物冷却至室温，然后减压除去溶剂。将残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作洗脱剂，给出N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.11g)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.98(s，1H)，8.2(t，1H)，7.74(m，2H)，1.47(s，9H)，0.30(t，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯95∶5)Rf0.2；MSMH+359.
c)N-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯将4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.25g，0.72mmol)，N-[5-(1，1，1-三甲基锡烷基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.386g，1.08mmol)，三(trwas)(二亚苄基丙酮)二钯(O)(0.033g，0.076mmol)和三苯胂(0.055mg，0.18mmol)和在N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的混合物在氮气氛中于65℃加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂。给出的残余物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(75∶25)作洗脱剂，给出N-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g)；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.83(s，1H)，8.68(s，1H)，8.40(d，1H)，8.02(s，1H)，7.85-7.93(m，2H)，5.21(m，1H)，1.65-2.25(m，8H)，1.49(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯 8∶2)Rf0.18；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/mm)tr＝21.68min.
d)5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺将N-[5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(0.13g，0.315mmol))的二氯甲烷(5.5ml)溶液冷却至0℃，然后用三氟乙酸(0.6ml)处理。溶液在0℃搅拌5分钟，然后温热至室温，并且再搅拌18小时。减压蒸发溶剂，残余物分配于二氯甲烷(30ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)之间。有机层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，给出5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(92mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)tr＝10.73min；MSMH+314e)5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺将5-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶胺(92mg，0.291mmol)溶于二噁烷(2ml)和浓(28-30％)氢氧化铵(2ml)，产生的溶液在封管内于120℃加热24小时。蒸发溶剂给出5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg)RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.)tr＝6.33min；MSMH+295f)N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯将5-(6-氨基-3-吡啶基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(105mg，0.29mmol)的二氯甲烷(1.5ml)溶液和吡啶(1.5ml)冷却至0℃，然后用氯甲酸苄基酯(75mg，0.44mmol)处理，同时保持温度低于5℃。将溶液温热至室温，然后搅拌3小时。加入氯甲酸苄基酯(75mg，0.44mmol)，混合物再搅拌24小时。加入氯甲酸苄基酯(150mg，0.88mmol)和吡啶(1ml)，混合物再搅拌24小时。减压除去溶剂，然后将残余物分配在乙酸乙酯(25ml)和水(10ml)之间。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发滤液给出残余物。通过制备性RP-HPLC纯化，然后用乙醚研制给出N-[5-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-吡啶基]氨基甲酸酯(21mg)白色粉末1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.33(s，1H)，8.36(d，1H)，8.14(s，1H)，7.91(d，1H)，7.84(d，1H)，7.33-7.47(m，6H)，6.11(bs，2H)，5.2(s，2H)，5.06(m，1H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝16.22min；MSMH+429.实施例178N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯a)4-溴-3-甲氧基苯胺将1-溴-2-甲氧基-4-硝基苯(3.0g，12.9mmol)和冰醋酸(25ml)的混合物在100℃于氮气氛中加热。加入铁粉(2.2g，38.8mmol)，混合物在100℃的温度下搅拌1小时。将混合物冷却至室温，然后加入水(100ml)，混合物用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。合并的有机萃取液用饱和碳酸氢钠(3×25ml)洗涤，然后用食盐水洗涤。有机溶液用硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发滤液，给出残余物。该物通过快速硅胶柱层析纯化，用庚烷/乙酸乙酯(6∶4)作洗脱剂，给出4-溴-3-甲氧基苯胺(1.22g)1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.1(d，1H)，6.31(s，1H)，6.1(d，1H)，5.27(bs，2H)，3.72(s，3H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯1∶1)Rf0.33；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝11.05min.
b)N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以类似于化合物(2)的方法从4-溴-3-甲氧基苯胺制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.46(s，1H)，7.4(d，1H)，7.35(s，1H)，6.95(d，1H)，3.78(s，3H)，1.48(s，9H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.37；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.60min.
c)N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯以类似于化合物(3)的方法从N-(4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.44(s，1H)，7.41(d，1H)，7.17(s，1H)，7.01(d，1H)，3.68(s，3H)，1.48(s，9H)，1.24(s，12H)；TLC(庚烷/乙酸乙酯8∶2)Rf0.28；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝18.83min.
d)N-[4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯以类似于化合物(4)的方法，从N-[3-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁基酯和4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶制备该化合物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.41(s，1H)＜8.59(s，1H)，7.72(s，1H)，7.33(s，1H)，7.15(d，1H)，7.04(d，1H)，5.17(m，1H)，3.66(s，3H)，1.6-2.2(m，3H)，1.49(s，9H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18.5μm，200A，250×4.6mm；25-100％乙腈 -0.1M醋 酸铵 25min，1ml/min)tr＝21.22min；MSMH+443.
e)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于将化合物(4)转化为化合物(6)的方法，从N-[4-(4-氯-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-3-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁基酯制备该化合物1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.87(s，1H)，8.08(s，1H)，7.34-7.45(m，6H)，7.09-7，18(m，3H)，5，79(bs，2H)，5.18(s，2H)，5.04(m，1H)，3.7(s，3H)，1.6-2.2(m，8H)；RP-HPLC(Hypersil HyPurity Elite C18，5μm，200A，250×4.6mm；25-100％ 乙腈 -0.1M 醋酸铵 25min，1ml/min)tr＝16.87min；MSMH+458.实施例179N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸苄基酯a)4-[{[7-环戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基)(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基树脂球状(Rink)酰胺树脂[负载0.66mmol/g的4-(2’，4’-二甲氧基苯基-Fmoc氨基甲基)苯氧基树脂](6.55g，4.32mmol)通过用N，N-二甲基甲酰胺(2×2min)，哌啶的20％N，N-二甲基甲酰胺溶液(1×5min，1×15min)，N，N-二甲基甲酰胺(5×2min)，二氯甲烷(3×2min)，然后甲醇(3×2min)洗涤而脱保护。该树脂在40℃减压干燥。脱保护的树脂，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.80g，5.19mmol)，二甲亚砜(100ml)，和N，N-二异丙基乙胺(4.5ml)在100℃加热3天，冷却至室温，然后过滤收集树脂，并用N，N-二甲基甲酰胺洗涤。然后将树脂与乙酸(0.13g，2.16mmol)，四氟硼酸0-苯并噻唑-1-基-N，N，N’N’-四甲基脲(0.69g，2.16mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.56g，4.32mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(30ml)一起搅拌30分钟。过滤收集树脂，并用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷和甲醇洗涤。将树脂减压干燥至恒重(6.25g)。将树脂，二硼频那醇酯(1.11g，4.37mmol)，醋酸钾(0.822g，8.39mmol)和四(三苯膦)钯(0.24g，0.21mmol)在二甲亚砜(125ml)中，在氮气氛中于85℃加热17小时。过滤收集树脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，乙酸乙酯，然后乙醚洗涤。将树脂减压干燥至重5.49克。
b)N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸苄基酯将4-[{[7-环戊基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]氨基}(2，4-二甲氧基苯基)甲基]苯氧基树脂(0.5g，0.254mmol)，4-溴-2-氟苯胺(0.484g，2.54mmol)，四(三苯膦)钯(0.044g，0.038mmol)，2M磷酸钾水溶液(1.27ml，2.54mmol)和二甲亚砜(10ml)的混合物在85℃加热18小时。将混合物冷却，过滤收集树脂，然后用N，N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷洗涤。然后使树脂第二次处于上述偶合条件。将树脂悬浮于二氯甲烷(2ml)和吡啶(2ml)，然后将混合物冷却至0℃，并用氯甲酸苄基酯(0.44g，2.6mmol)处理。在0℃搅拌1小时后，使混合物温热至室温18小时。过滤收集树脂，并用5％三氟乙酸的二氯甲烷(10ml)溶液处理30分钟。滤除树脂，产生的滤液被减压蒸发，给出的残余物通过制备性C-18 RP-HPLC纯化，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基]氨基甲酸苄基酯(约10mg)RP-HPLC(HypersilHS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min)tr＝11.47min；MSMH+446。实施例180N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-(三氟甲基)苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于PH 454098所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝12.07min；MsMH+496实施例181N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氰基苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于PH454098所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％乙腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝10.93min；MsMH+453实施例1825-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯以类似于PH 454098所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝13.28min；MsMH+486实施例183N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲基苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于PH454098所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝11.25min；MsMH+442实施例184N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)苯基]氨基甲酸苄基酯以类似于PH 454098所述的方式制备该化合物RP-HPLC(Hypersil HS C18，5μm，100A，250×4.6mm；25％-100％腈-0.1M醋酸铵，10分钟，1ml/min.)tr＝11.27min；MsMH+428实施例185N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(27mg，0.083mmol)溶于二氯甲烷(0.8ml)。加入吡啶(0.8ml)，接着加入苯基甲磺酰氯(19mg，0.105mmol)。搅拌过夜后，加入另外19mg苯磺酰氯，将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂，残余物通过制备性薄层色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脱，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]苯基甲磺酰胺(9mg，0.0188mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.89(m，6H)，2.28(m，2H)，3.85(s，3H)，4.38(s，2H)，5.23(m，3H)，6.08(bs，1H)，6.99(m，2H)，7.27，(m，2H)，7.33(m，3H)，7.58(d，J＝8.17Hz，1H)，8.34(s，1H).LC/MS MH+＝478实施例186N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(28mg，0.086mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接着加入2-苯基乙酰氯(14μL，0.105mmol)。搅拌过夜后，加入另外14μL苯基乙酰氯，将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂，残余物通过制备性薄层色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脱，给出N-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-苯基乙酰胺(7mg，0.0158mmol)。
1H NMR(DMSO-d6)1.89(m，6H)，2.25(m，2H)，3.77(s，3H)，3.79(s，2H)，5.21(m，1H)，5.56(bs，2H)，6.89(s，1H)，6.99(s，1H)，7.05(d，J＝8.22，1H)，7.36(m，5H)，7.81(s，1H)，8.27(s，1H)，8.43(d，J＝8.23Hz，1H).LC/MS MH+＝442.实施例187N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基]-2-(2-噻吩基)乙酰胺将5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(31mg，0.096mmol)溶于二氯甲烷(1ml)。加入吡啶(1ml)，接着加入2-(2-噻吩基)乙酰氯(14μL，0.113mmol)。搅拌过夜后，加入另外14μL 2-(2-噻吩基)乙酰氯，将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂，残余物通过制备性薄层色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脱，给出N1-[4-(4-氨基-7-环戊基-7H- 实施例182 实施例183 实施例184 实施例185 实施例186实施例187
制备吡咯并嘧啶芳基磺酰胺的一般工艺往0.225M 5-(4-氨基-3-氟苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-氨基(pyrimidin-4-amino)的吡啶溶液中加入1当量取代的芳基磺酰氯。此混合物在45℃加热混合24小时。产物从反应混合物中通过制备性RP-HPLC(Hypersil BDS C18，(5μm包装；100×21.2mm)用梯度的0.05M，pH4.5醋酸铵水溶液/乙腈(0-100％，25分钟，流速25ml/分钟)纯化。
实施例188-249的化合物通过上述一般方法制备。各实施例化合物的通过质谱(MH+)测定的分子量，和以分钟表示的HPLC保留时间(RT)在下面列出。 实施例188 实施例189MH+469.9MH+469.92RT 3.03 RT 2.99 实施例190实施例191MH+485.89 MH+465.9RT 3.12RT 3.11 实施例192 实施例193MH+501.97 MH+519.88RT 3.22 RT 3.15 实施例194 实施例195MH+519.84MH+561.73RT 3.19 RT 3.2 实施例196 实施例197MH+555.77 MH+476.89RT 3.45 RT 2.85 实施例198 实施例199MH+469.9 MH+496.93RT 2.92 RT 3.65 实施例200 实施例201MH+496.94 MH+485.87RT 3.66 RT 3.79 实施例202实施例203MH+496.9 MH+487.9RT 3.65 RT 3.55 实施例204 实施例205MH+535.9 MH+530.92RT 3.82RT 3.43 实施例206 实施例207MH+541.95 MH+465.89RT 3.35RT 3.45 实施例208 实施例209MH+602.99 MH+503.85RT 3.56 RT 3.48 实施例210 实施例211MH+503.88 MH+483.9RT 3.53 RT 3.47 实施例212 实施例213MH+567.74 MH+577.88RT 3.53 RT 3.65 实施例214 实施例215MH+603.05 MH+501.93RT 3.4RT 3.16 实施例216 实施例217MH+564.96 MH+577.88RT 3.34RT 3.5 实施例218 实施例219MH+545.01 MH+545.04RT 3.5 RT 3.58 实施例220 实施例221MH+487.9 MH+499.92RT 3.43 RT 3.46 实施例222 实施例223MH+510.88 MH+505.93RT 3.41 RT 3.46 实施例224 实施例225MH+553.96 MH+587.97RT 3.55 RT 3.6 实施例226 实施例227MH+553.9MH+487.9RT 3.88 RT 3.6 实施例228 实施例229MH+587.9 MH+545.8RT 3.9 RT 3.93 实施例230 实施例231MH+615.8 MH+487.9RT 4.02RT 3.6 实施例232 实施例233MH+549.8 MH+533.8RT 3.82 RT 3.89 实施例234实施例235MH+519.9 MH+555.8RT 3.74 RT 3.93 实施例236 实施例237MH+496 MH+514RT 3.49RT 3.92 实施例238 实施例239MH+519.9 MH+528RT 3.78RT 3.84 实施例240实施例241MH+502 MH+532RT 3.66 RT 3.85 实施例242实施例243MH+4.16 MH+3.97RT 4.16 RT 3.97 实施例244 实施例245MH+547.9 MH+503RT 2.72RT 3.64 实施例246 实施例247 实施例248 实施例249实施例250-269的一般合成往5-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(或5-(4-氨基-3-氟苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺或5-(4-氨基-3-氯苯基)-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺)的0.225M吡啶溶液中加入1当量取代的芳基磺酰氯。此混合物在45℃加热混合24小时。产物从反应混合物中通过制备性C18RP-HPLC纯化。在Hypersil HyPurity Elite C18柱，((5μm，200A)，250×4.6mm)；用线性梯度的25％-100％乙腈/0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.上得到在表中列出的分析性RP-HPLC RT。
注意，当引入反应活性取代基时，需要适当的保护基操作。
实施例250-269的化合物通过上述一般方法制备。各实施例化合物的通过质谱(MH+)测定的分子量，以分钟表示的HPLC保留时间(RT)在下面列出。 实施例250 实施例251MH+478.1 MH+494.1RT 13.9 RT 15.68 实施例252 实施例253MH+498.0 MH+514.0RT 15.12 RT 17.7 实施例254实施例255MH+464.1 MH+480.1RT 10.4 RT 11.2通过用在二氯甲烷中的BBr3处理从实施例251制备 实施例256 实施例257MH+482.1MH+542.1，544.0RT 15.65RT 17.45 实施例258 实施例259MH+509.2 MH+557.2RT 15.8 RT 19.55 实施例260 实施例261MH+477.1MH+512.0RT 11.6 RT 17.62通过实施例258的Pd-C加氢制备 实施例262 实施例263MH+506.0 MH+502.0RT 9.93 RT 18.23 实施例264 实施例265MH+502.0 MH+502.0RT 18.02 RT 17.6 实施例266 实施例267MH+507.1 MH+486.1RT 12.2 RT 15.68通过用DMF中的EDC，HOAt，ME2NH处理实施例262制备 实施例268实施例269MH+486.1 MH+486.1RT 16.35 RT 16.7化合物270-282用下列方法合成。途径1a)适当的溴代芳基磺酰胺(0.735mmol)，二频那醇合乙硼烷(bispinacolatodiborane)(0.225g，0.88mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)配合物(与二氯甲烷(1∶1))(2mg，0.002mmol)和乙酸钾(0.216g，2.205mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的混合物在100℃于氮气氛中加热16小时。使混合物冷却至室温，然后减压除去溶剂。将二氯甲烷(20ml)加入残余物中，在硅胶垫上滤除产生的固体。将滤液浓缩给出黄色油状物，将其通过快速硅胶柱层析纯化，给出磺酰氨基芳基硼酸酯。
b)将4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.35g，1.0mmol)，磺酰氨基芳基硼酸酯(1.5mmol；从上面步骤a)所得)，四(三苯膦)钯(O)(0.07g，0.06mmo)，碳酸钠(0.265g，2.5mmol)的混合物在乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中在80℃于氮气氛中加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂。残余物分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之间。分出有机层，水层再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取。合并的有机萃取液用水(3×20ml)洗涤，然后硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩为油状物，将其用快速硅胶柱层析纯化给出相应的磺酰氨基芳基4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶。
c)4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶(典型地10-20mmol；从上面1(b)得到的)与二噁烷(100ml)和浓氢氧化铵(100ml)在压力器中混合。混合物在120℃加热过夜。除去溶剂，残余物通过RP-HPLC纯化，给出所需的最终4-氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶产物。途径2a)适当的溴代苯胺(2.4mmol)，二频那醇合乙硼烷(0.735g，2.88mmol)，[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)配合物(与二氯甲烷(1∶1))(59mg，0.072mmol)和乙酸钾(0.707g，7.205mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的混合物在100℃于氮气氛中加热16小时。使混合物冷却至室温，然后减压除去溶剂。将甲苯(20ml)加入残余物中，混合物用水(25ml)洗涤。有机相用硫酸镁干燥，真空浓缩，通过快速硅胶柱层析纯化，给出苯胺基硼酸酯。
b)将苯胺基硼酸酯(1.01mmol；从上面2(a)得到的)，4-氯-7-环戊基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.24g，0.67mmol)，四(三苯膦)钯(O)(0.04g，0.033mmo)和碳酸钠(0.215g，2.03mmol)的混合物在乙二醇二甲基醚(10ml)和水(5ml)的混合物中在80℃于氮气氛中加热18小时。使混合物冷却至室温，减压除去溶剂。残余物分配在水(15ml)和乙酸乙酯(25ml)之间。分出有机层，水层再用乙酸乙酯(2×25ml)萃取。合并的有机萃取液用水(3×20ml)洗涤，然后硫酸镁干燥，过滤。将滤液减压浓缩为油状物，将其用快速硅胶柱层析纯化给出相应的4-氯-7-环戊基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。
c)4-氯-7-环戊基-5-(4-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.201mmol；从上面2(b)得到的)，芳基磺酰氯(0.402mmol)和吡啶(1.005mmol)在二氯甲烷中的混合物在室温搅拌16小时。除去溶剂，磺酰氨基4-氯-吡咯并嘧啶产物通过RP-HPLC纯化。
d)磺酰氨基4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶(典型地10-20mmol；从上面2(c)得到的)与二噁烷(100ml)和浓氢氧化铵(100ml)在压力器中混合。混合物在120℃加热过夜。除去溶剂，残余物通过RP-HPLC纯化，给出所需的最终磺酰氨基4-氨基-吡咯并[2，3-d]嘧啶产物。
在Hypersil HyPurity Elite C18柱((5μm，200A)，250×4.6mm)上；用线性梯度的25％-100％乙腈/0.1M醋酸铵，25分钟，1ml/min.得到在表中列出的分析性RP-HPLC RT。注意，当引入反应活性取代基时，需要适当的保护基操作。 实施例270 实施例271MH+422.2 MH+452RT 14.03 RT 16.28 实施例272 实施例273MH+468.1 MH+448.2RT 17.12 RT 18.37 实施例274 实施例275MH+477.1MH+432.1RT 20.53RT 18.85 实施例276 实施例277MH+476 MH+488.2RT 13.26 RT1 7.7 实施例278 实施例279MH+477.1 MH+492.1RT 13.45 RT 17.52 实施例280实施例281MH+470.1 MH+464.2RT 15.08 RT 14.82 实施例282MH+464.2RT 14.15用如实施例188-249所述的一般方法也可制备下列化合物。 实施例283MH+645.8RT 3.66 实施例284MH+673.1RT 3.73 实施例285MH+524RT 3.52 实施例286MH+516.1RT 3.42 实施例287 实施例288 实施例289 实施例290 实施例291 实施例292 实施例293
权利要求
1.下列结构式表示的化合物 和其药用盐。A环是六员芳香环或五或六员杂芳香环，其任选地被一个或多个下列取代基取代取代或未取代的脂族基，卤素，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的杂芳香基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳烷基，氰基，硝基，-NR4R5，-C(O)2H，-OH，取代或未取代的烷氧羰基，-C(O)2-卤代烷基，取代或未取代的烷硫基醚，取代或未取代的烷基亚砜，取代或未取代的烷基砜，取代或未取代的芳硫基醚，取代或未取代的芳基亚砜，取代或未取代的芳基砜，取代或未取代的烷基羰基，-C(O)-卤代烷基，取代或未取代的脂族醚，取代或未取代的芳香醚，取代或未取代的甲酰氨，四唑基，三氟甲基磺酰氨基，三氟甲基羰基氨基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的烷基酰氨基或烷基羧酰氨基，取代或未取代的芳基酰氨基或芳基羧酰氨基，取代或未取代的苯乙烯基和取代或未取代的芳烷基酰氨基或芳烷基羧酰氨基；L是-O-；-S-；-S(O)-；-S(O)2-；-N(R)-；-N(C(O)OR)-；-N(C(O)R)-；-N(SO2R)--CH2O-；-CH2S-；-CH2N(R)-；-CH(NR)-；-CH2N(C(O)R))-；-CH2N(C(O)OR)-；-CH2N(SO2R)-；-CH(NHR)-；-CH(NHC(O)R)-；-CH(NHSO2R)-；-CH(NHC(O)OR)-；-CH(OC(O)R)-；-CH(OC(O)NHR)-；-CH＝CH-；-C(＝NOR)-；-C(O)-；-CH(OR)-；-C(O)N(R)-；-N(R)C(O)-；-N(R)S(O)-；-N(R)S(O)2-；-OC(O)N(R)-；-N(R)C(O)N(R)-；-NRC(O)O-；-S(O)N(R)-；-S(O)2N(R)-；N(C(O)R)S(O)-；N(C(O)R)S(O)2-；-N(R)S(O)N(R)-；-N(R)S(O)2N(R)-；-C(O)N(R)C(O)-；-S(O)N(R)C(O)-；-S(O)2N(R)C(O)-；-OS(O)N(R)-；-OS(O)2N(R)-；-N(R)S(O)O-；-N(R)S(O)2O-；-N(R)S(O)C(O)-；-N(R)S(O)2C(O)-；-SON(C(O)R)-；-SO2N(C(O)R)-；-N(R)SON(R)-；-N(R)SO2N(R)-；-C(O)O-；-N(R)P(OR’)O-；-N(R)P(OR’)-；-N(R)P(O)(OR’)O-；-N(R)P(O)(OR’)-；-N(C(O)R)P(OR’)O-；-N(C(O)R)P(OR’)-；-N(C(O)R)P(O)(OR’)O-或-N(C(O)R)P(OR’)-，其中R和R’各自独立地是-H，酰基，取代或未取代的脂族基，取代或未取代的芳香基，取代或未取代的杂芳香基，或取代或未取代的环烷基；或L是-RbN(R)S(O)2-，-RbN(R)P(O)-，或-RbN(R)P(O)0-，其中Rb是亚烷基，当其与所连接的磺酰胺，次膦酰胺，或膦酰胺基一起时形成与A环稠合的五或六员环；或者L表示下列结构式之一 其中R85与次膦酰胺，或膦酰胺一起是5-，6-，或7-员芳香，杂芳香或杂环烷基环系；R1是-H，2-苯基-1，3-二氧六环-5-基，C1-C6烷基，C3-C8环烷基，C5-C7环烯基或任选地取代的phen(C1-C6烷基)，其中烷基，环烷基和环烯基任选地被一个或多个式-ORa的基团取代，条件是-ORa不在与氮连接的碳原子上；Ra是-H，C1-C6烷基或C3-C6环烷基；R2是-H，取代或未取代的脂族基团，取代或未取代的环烷基，卤素，-OH，氰基，取代或未取代的芳香基团，取代或未取代的杂芳香基团，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳烷基，-NR4R5，或-C(O)NR4R5；R3是取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳香基团，取代或未取代的杂芳香基团，取代或未取代的杂环烷基；或者L是NRSO2-，NRC(O)-，-NRC(O)O-，-SO2NR-，-C(O)NR-或-OC(O)NR-，而R3是取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基或取代或未取代的芳烷基；条件是当L是-CH2NR-，-C(O)NR-或-NRC(O)-和R3是氮杂环烷基或氮杂杂芳基时，j是O；和条件是当L是-O-，而R3是苯基时，j是O；R4，R5和氮原子一起形成3，4，5，6或7-员取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的杂双环烷基或取代或未取代的杂芳香基；或R4和R5各自独立地是-H，氮杂双环烷基，取代或未取代的烷基或Y-Z；Y是选自如下的基团-C(O)-，-(CH2)p-，-S(O)2-，-C(O)O-，-SO2NH-，-CONH-，(CH2)pO-，-(CH2)pNH-，-(CH2)pS-，-(CH2)pS(O)-，和-(CH2)pS(O)2-；p是0至6的整数；Z是取代或未取代的烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基或取代或未取代的杂环烷基；而j是0至6的整数。
2.权利要求1的化合物，其中R3选自取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的苯并三唑基，取代或未取代的四氢吡喃基，取代或未取代的四氢呋喃基，取代或未取代的二氧六环，取代或未取代的二氧戊环，取代或未取代的喹啉，取代或未取代的噻唑，取代或未取代的异噁唑，取代或未取代的环戊基，取代或未取代的苯并呋喃，取代或未取代的苯并噻吩，取代或未取代的苯并异噁唑基，取代或未取代的苯并异噻唑，取代或未取代的苯并噻唑，取代的或未取代的bezoxazole，取代或未取代的苯并噁唑，取代或未取代的苯并咪唑，取代或未取代的苯并噁二唑，取代或未取代的苯并噻二唑，取代或未取代的异喹啉，取代或未取代的喹喔啉，取代或未取代的吲哚或取代或未取代的吡唑。
3.权利要求2的化合物，其中R3被一个或多个选自如下的取代基取代F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的苄基，取代的或未取代的苯磺酰基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S-(取代或未取代的芳基)，-S-(取代或未取代的杂芳基)，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的杂环烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc；Rf，Rg和氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-员取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的杂双环烷基或取代或未取代的杂芳基；Rf和Rg各自独立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基；和Rc是氢，或取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基，-W-(CH2)t-OH；t是0至约6的整数；W是键或-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，或-NRk-；Rk是-H或烷基；和Rd，Re和与其连接的氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-员取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂双环基；或Rd和Re各自独立地是-H，烷基，烷酰基或-K-D；K是-S(O)2-，-C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)2-，或直接键；D是取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳香基，取代或未取代的杂芳烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的氨基烷基，取代或未取代的氨基环烷基，COORi，或取代或未取代的烷基；和Ri是取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
3.权利要求3的化合物，其中R3是取代或未取代的苯基，threnyl，苯并噁二唑基，或苯并噻二唑基。
4.权利要求1的化合物，其中A环选自取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，或取代或未取代的吲哚。
5.权利要求5的化合物，其中A环被一个或多个选自如下的取代基取代F，Cl，Br，I，CH3，NO2，OCF3，OCH3，CN，CO2CH3，CF3，叔丁基，吡啶基，取代或未取代的噁唑基，取代或未取代的苄基，取代或未取代的苯磺酰基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的氨基，羧基，取代或未取代的四唑基，苯乙烯基，-S-(取代或未取代的芳基)，-S-(取代或未取代的杂芳基)，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的杂环烷基，炔基，-C(O)NRfRg，Rc和CH2ORc；Rf，Rg和氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-员取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的杂双环烷基或取代或未取代的杂芳基；或Rf和Rg各自独立地是-H，取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基；和Rc是氢，取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，-W-(CH2)t-NRdRe，-W-(CH2)t-O-烷基，-W-(CH2)t-S-烷基，-W-(CH2)t-OH；t是0至约6的整数；W是键或-O-，-S-，-S(O)-，-S(O)2-，或-NRk-；Rk是-H或烷基；和Rd，Re和与其连接的氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-员取代或未取代的杂环烷基或取代或未取代的杂双环烷基或取代的或未取代的杂芳香基；或Rd和Re各自独立地是-H，烷基，烷酰基或-K-D；K是-S(O)2-，-C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)2-，或直接键；D是取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳香基，取代或未取代的杂芳烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的氨基烷基，取代或未取代的氨基环烷基，COORi，或取代或未取代的烷基；和Ri是取代或未取代的脂族基或取代或未取代的芳香基。
6.权利要求6的化合物，其中A环是取代或未取代的苯基。
7.权利要求1的化合物，其中R1是环戊基，羟基环戊基或异丙基。
9.选自如下的一组化合物N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-(三氟甲氧基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-硝基苯基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-3-(三氟甲基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-4-氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氯苯基)-2-氰基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-硝基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-甲氧基苯基)-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3，4-三氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3，4-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-溴-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，6-二氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4，6-三氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，4-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-碘-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，3-二氯-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4-溴-2，5-二氟-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-4-氰基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2-氯-6-甲基-1-苯磺酰胺；N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-氯-2-甲基-1-苯磺酰胺；N2-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-4，5-二溴-2-噻吩磺酰胺；N2-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-溴-2-噻吩磺酰胺；N2-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-3-溴-5-氯-2-噻吩磺酰胺；N3-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二氯-3-噻吩磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-氯-2，1，3-苯并噁二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-7-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-甲基-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N4-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-5-氯-2，1，3-苯并噻二唑-4-磺酰胺；N-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-(2-硝基苯基)甲磺酰胺；和N1-(4-(4-氨基-7-环戊基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)-2-氟苯基)-2，5-二溴-3，6-二氟-1-苯磺酰胺；和其药用盐。
10.权利要求1的化合物，其中R2是-H。
11.权利要求1的化合物，其中L是-O-，-NHSO2R-，-NHC(O)O-，或-NHC(O)R-。
12.抑制蛋白激酶活性的方法，包括施用权利要求1的化合物或其生理上可接受的盐，前药或生物活性代谢物。
13.权利要求12的方法，其中所述的蛋白激酶选自KDR，FGFR-1，PDGFRβ，PDGFRα，IGF-1R，c-Met，Flt-1，TIE-2，Lck，Src，fyn，Lyn，Blk，和yes。
14.权利要求12的方法，其中所述的蛋白激酶活性影响过度增殖疾病。
15.权利要求12的方法，其中所述的蛋白激酶活性影响血管生成，血管渗透性过高，免疫应答或炎症。
16.治疗具有由蛋白激酶活性介导疾病的患者的方法，所述的方法包括对患者施用治疗有效量的如权利要求1定义的化合物或其生理上可接受的盐，前药或生物活性代谢物的步骤。
17.权利要求16的方法，其中所述的蛋白激酶选自KDR，FGFR-1，PDGFRβ，PDGFRα，IGF-1R，c-Met，Flt-1，TIE-2，Lck，Src，fyn，Lyn，Blk，和yes。
18.权利要求16的方法，其中的由蛋白激酶介导的病症是过度增殖性疾病。
19.权利要求16的方法，其中所述的蛋白激酶活性影响血管生成，血管渗透性过高，免疫应答或炎症。
20.权利要求16的方法，其中所述的蛋白激酶活性影响血管生成，血管渗透性过高。
21.权利要求16的方法，其中蛋白激酶是蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶或蛋白酪氨酸激酶。
22.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是一种或多种溃疡。
23.权利要求21的方法，其中溃疡是由细菌或真菌感染引起的；或者溃疡是Mooren溃疡；或者溃疡是溃疡性结肠病的症状。
24.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是Lyme病，脓毒病，或被单纯性疱疹，带状疱疹，人免疫缺损病毒，副痘病毒，原生动物，弓形体病感染。
25.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是VonHippel Lindau病，类天疱疮，牛皮癣，Paget’s病或多囊肾病。
26.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是纤维变性，肉瘤，硬变，甲状腺炎，高粘度综合症，Osler-Weber-Rendu病，慢性闭塞性肺病，哮喘，渗出，腹水，胸膜渗漏，心包渗漏，肺水肿，脑水肿或烧伤后的水肿，创伤，放射，中风，缺氧或局部缺血。
27.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是卵巢过度刺激综合症，子痫前期，月经频多，或子宫内膜异位。
28.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是慢性炎症，系统性狼疮，肾小球性肾炎，滑膜炎，炎性肠病，Crohn’s病，肾小球肾炎，类风湿性关节炎和骨关节炎，多发性硬化和移植排异。
29.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是镰状细胞贫血。
30.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是眼病。
31.权利要求29的方法，其中的眼病是眼和黄斑水肿，眼新血管病，巩膜炎，放射状角膜切开术，眼色素层炎，vitritis，近视，眼窝，慢性视网膜脱离，后-激光并发症，结膜炎，Stargardt’s病和Eales病，以及视网膜病和黄斑变性。
32.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是心血管病。
33.权利要求31的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是动脉粥样硬化，再狭窄，局部缺血/再灌注损伤，血管闭塞，静脉变形，和颈动脉阻塞病。
34.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是癌症。
35.权利要求33的方法，癌症是实体肿瘤，肉瘤，纤维肉瘤，骨瘤，黑素瘤，成视网膜细胞瘤，横纹肌肉瘤，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，畸胎瘤，造血性癌，和恶性腹水。
36.权利要求34的方法，其中癌症是Kaposi’s肉瘤，Hodgkin’s病，淋巴瘤，骨髓瘤或白血病。
37.权利要求16的方法，其中由蛋白激酶介导的病症是Crow-Fukase(POEMS)综合症和糖尿病。
38.权利要求36的方法，其中糖尿病症是胰岛素-依赖性糖尿病青光眼，糖尿病性视网膜病和微血管病。
39.降低患者生育力的方法，所述的方法包括对患者施用治疗有效量的如权利要求1定义的式I化合物或其生理上可接受的盐，前药或生物活性代谢物的步骤。
40.权利要求16的方法，其中式I化合物或其生理上可接受的盐，前药或生物活性代谢物以有效促进血管生成或血管发生的量给药。
41.权利要求39的方法，其中蛋白激酶是Tie-2。
42.权利要求39的方法，其中式I化合物或其生理上可接受的盐，前药或生物活性代谢物与促血管生成生长因子联合给药。
43.权利要求41的方法，其中促血管生成生长因子选自VEGF，VEGF-B，VEGF-C，VEGF-D，VEGF-E，HGF，FGF-1，FGF-2，其衍生物和抗独特型抗体。
44.权利要求39的方法，其中蛋白激酶介导的病症是贫血，局部缺血，心肌梗塞，移植排斥，创伤，坏疽或坏死。
44.权利要求16的方法，其中蛋白激酶活性与T细胞活化，B细胞活化，肥大细胞脱粒，单核细胞活化，炎性反应增强或其组合有关。
全文摘要
具有结构式式(Ⅰ)的化合物和其生理上可接受的盐是丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶活性抑制剂。其活性被这些化合物抑制的几种激酶与免疫学,过度增殖或血管生成过程有关。因此,这些化合物可以缓解其中血管生成或内皮细胞过度增殖是病因的病症。这些化合物可以用于治疗癌症,过度增殖疾病,类风湿性关节炎,免疫系统疾病,移植排异,和炎症。
文档编号A61P9/00GK1326457SQ99813218
公开日2001年12月12日 申请日期1999年9月17日 优先权日1998年9月18日
发明者D·克莱德伍德, L·D·阿诺德, H·迈兹迪亚斯尼, G·赫斯特, B·B·邓 申请人:巴斯福股份公司