液的提取程序。 在25°C和95°C用10mL溶剂对研磨的和完整片剂的6个重复进行提取10分钟。在定轨振荡 器上以lOOrpm振荡提取物，且然后移除等分试样且以0.45ymPTFE过滤器过滤用于HPLC 分析。在这些评价中使用的溶剂是水、盐水、醋、〇. 1MHC1、10%乙醇、40%乙醇、pH2. 0缓冲 液、pH4. 0缓冲液、pH7. 0缓冲液和pH10. 0缓冲液。结果在下表4中表示为％回收率（％标 不量（％labelclaim))和浓度（mg/mL)。 结果概述和讨论 表4.平均结果（n=6)的概述显示于下表中。
[0095] 尽管在重复之间存在相当大的变异性，通常，5-({[2_氨基-3_(4-氨基甲酰 基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲 基）_2_甲氧基-苯甲酸释放（回收率％)的平均量在研磨的和完整片剂之间是相当的。如 预期，在接近沸点条件（95°C)的提取增加了药物释放。对于在25°C提取研磨片剂的最有 效溶剂（>50%)是醋和pH2缓冲液。在升高温度，对于研磨产物允许>50%回收率的溶剂是 醋、0. 1MHC1、10%乙醇、40%乙醇、pH2缓冲液和pH10缓冲液。横跨所有条件，从研磨和 完整片剂的5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯 基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸的提取物浓度范围为 0? 8mg/mL至 9. 2mg/mL。
[0096]F.有机溶剂提取 以与先前描述的水性溶剂提取类似的方式进行该系列的提取。将研磨和完整片剂在定 轨振荡器上以lOOrpm在10mL溶剂中提取10分钟。移除等分试样且以0. 45ymPTFE过滤 器过滤用于HPLC分析。在这些评价中利用的溶剂是95%乙醇、异丙醇、丙酮和己烷。 结果概述和讨论 片剂的有机溶剂提取横跨所有条件是低效的（〈10%)。在该评价中利用的最有效溶剂 是95%乙醇，其提供8. 2% 5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1-(4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸的平均％ 回收率（范围，6. 0%-10. 3%)。
[0098] G?注射器评价 评价从水性提取剩余的提取溶液的可注射性。在该评价中，配备需要的25号针头的 10mL注射器用于尽可能将剩余7mL体积提取溶液抽回至注射器中。棉花球用于通过在抽 吸溶液过程中将针头插入棉花球而过滤溶液。评价成功吸入注射器中的溶液的体积且测 试等分试样以测定装载至注射器中的5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯 基）_丙酰基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲 酸的晕克量。 结果概述和讨论 在粉末状片剂的提取剩余的剩余7mL体积溶液中，可以装载至配备25号针头（棉花 球过滤）的10mL注射器的典型体积为4-5mL的溶液。因此，在制备用于静脉内注射的溶液 的该模拟评价中，可用溶液的损失范围为近似30%至43%。5-({[2-氨基-3-(4-氨基甲酰 基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲 基）-2-甲氧基-苯甲酸的绝对量随着溶剂类型而变化。总体而言，在这些评价中没有对可 注射性的阻力的证据。
[0100] H.多片剂提取 设计该初始系列的提取以评价选择的基于水性的溶剂用于制备片剂用于注射的提取 效率。用水和0. 1MHC1对具有等重量的2个和4个片剂的研磨片剂进行提取。在95°C在定 轨振荡器上以lOOrpm用10mL溶剂进行提取10分钟。提取之后，移除等分试样且用0. 45ym PTFE过滤器过滤用于HPLC分析。设计该研究的原理是，个体可以尝试通过使用热、较大 体积和可能使用酸性介质来提取较大剂量的5-({[2-氨基-3-(4-氨基甲酰基-2, 6-二甲 基-苯基）-丙酰基]-[1-(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧 基-苯甲酸。尽管10mL体积对于注射目的是大的，但看似合理的是，可以尝试此类体积， 尤其是鉴于5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯 基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸的溶解度有限。此外，应 当指出的是，尽管注射高酸溶液（0. 1MHC1)可能导致不适和组织损伤，但一些个体可以尝 试此类程序。
[0101] 结果概述和讨论 在该提取评价中，5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰基-2,6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸的平均提 取效率和浓度显示于表5中。
[0102] 表5.提取评价中的活性成分的平均提取效率
[0103] 似乎水和0. 1MHC1两者在95°C在
2片剂当量提取条仵下已经几乎达到对于 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸的溶解的能力。使潜在可提取的 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸的量加倍至4当量的效果在水和 酸性溶液两者中提供几乎相等浓度的5-({[2-氨基-3-(4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯 基）_丙酰基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲 酸。同时，4片剂条件的％回收率为近似两片剂条件的一半，表明各溶剂已经达到能力限制 条件。
[0104]I?大体积提取 鉴于5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰基-2,6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4-苯 基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸在一些溶剂中表现出 有限的溶解度，个体可尝试用较大体积提取，以尝试分离5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰 基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲 基）_2_甲氧基-苯甲酸用于通过非意欲途径施用。用研磨和完整片剂进行提取评价。在 25°C在定轨振荡器上以lOOrpm用30mL体积的溶剂（水、0? 1MHC1、10%乙醇和95%乙醇） 进行提取10分钟和24小时，然后用0. 45ymPTFE过滤器过滤用于HPLC分析。
[0105] 结果概述和讨论 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸在该提取评价中的平均提取效率和 浓度显示于下表6中。
[0106] 表6.活性成分在提取评价中的提取效率
[0107]与将提取期间延长至24小时相比，在10分钟提取期间之后从研磨片剂的 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸的回收百分比存在较小差异。相 反，提取完整片剂10分钟比24小时效率相当低。其系可能的是，研磨物质的增加的表面积 是10分钟提取后果的快速性的原由。不同溶剂提取物中的5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰 基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲 基）_2_甲氧基-苯甲酸的所有浓度一致地<3mg/mL。
[0108]J.小体积提取 个体通常使用较小体积提取，以尝试制备用于注射的溶液。水和盐水是通常使用的用 于注射的溶剂，且包括在本研究中。尽管因为毒性作用，0.1MHC1似乎不可能用作溶剂，但 考虑5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸在片剂中的溶解度特性，其被包括 作为"最坏情况"。用研磨和完整片剂进行该提取评价。在25°C和95°C在定轨振荡器上 以lOOrpm用5mL体积的溶剂（7K、盐水和〇. 1MHC1)进行提取10分钟和24小时，然后用 0. 45ymPTFE过滤器过滤用于HPLC分析。
[0109] 结果概述和讨论 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸在该提取评价中的平均提取效率和 浓度显示于下表7中。
[0110] 表7.活性成分在提取评价中的提取效率
[0111] 将提取温度从25 °C增加至95 °C增加了 5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二 甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧 基-苯甲酸在水和盐水中回收率和溶解度；然而，延长提取时间似乎不会提取额外药物。 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸在水和盐水中的浓度一致地<10mg/ mL。0.1MHC1的使用基本上增加了 5-({[2-氨基-3-(4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯 基）_丙酰基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲 酸在溶液中的回收率（几乎定量）和浓度，尽管在95°C提取24小时似乎产生5-({[2_氨 基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙 基]-氨基} _甲基）-2-甲氧基-苯甲酸的损失（分解）。5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰 基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4-苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲 基）-2-甲氧基-苯甲酸在酸性提取物中的浓度在16-21mg/mL的范围内。
[0112] K?过滤器评估 由于发现含有5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸的物质的 悬浮液是假性升高药物释放和回收的测量值，进行评价以确定不同类型的过滤系统可以如 何影响药物释放测量值。对研磨和完整片剂进行提取。在25°C在定轨振荡器上以lOOrpm 用5mL体积的溶剂（水、0. 1MHC1、10%乙醇和95%乙醇）进行提取10分钟。提取之后，如 下过滤提取物：未过滤的（对照）；〇. 45ymPTFE过滤器；棉花球过滤器；香烟过滤器；和咖 啡过滤纸。
[0113] 结果概述和讨论 5_ ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯基-1H-咪 唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸在该提取评价中的平均提取效率与 浓度显示于下表8中。
[0114] 表8.活性成分在提取评价中的提取效率
[0115] 在用对5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰基-2,6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸表现出有 限溶解度的溶剂（即，水、10%乙醇、95%乙醇）的提取中，过滤对表观药物释放具有实质影 响。在不过滤的情况下，证据似乎说服颗粒悬浮是这些差异的原因。当制备悬浮液用于通过 HPLC测定时，5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯 基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2-甲氧基-苯甲酸变得可溶于HPLC流动相 中，且这是升高的"读数"（测量值）的原因。相反，用0. 1MHC1提取，在过滤或不过滤的情况 下，在药物释放和回收率中显示较小差异。由于5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二 甲基-苯基）-丙酰基]-[1-(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧 基-苯甲酸在〇. 1MHC1中表现出相当大的溶解度，所以不存在将被过滤掉的悬浮颗粒。 应当注意的是，该有点不寻常的行为（在对5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰基-2, 6-二甲 基-苯基）-丙酰基]-[1-(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧 基-苯甲酸具有有限溶解度的溶剂中形成颗粒悬浮液）添加相当大的变异性来源，其将高 度取决于提取过程中采用的条件。无法预期该制剂的该独特特性可以由可尝试用普通家用 溶剂提取的个体轻易地发现。
[0116] 提取溶剂与制剂接触的持续时间量可以显著影响多少活性剂被释放（和溶解于 提取溶剂中）。这对于在所选溶剂中表现出有限溶解度的活性剂尤其如此。综述涉及用 30mL溶剂提取10分钟和24小时的研究中生成的数据通常表明较短提取时间与24小时提 取相比较大的变异性（%RSD)。为了评价提取时间的影响，进行详细的时程研究，以确定提 取时间对数据变异性和对5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸从片剂的 百分比回收的影响。
[0117] 对单一研磨和完整片剂（75mg强度）进行提取。在25°C和95°C在定轨振荡器上以 lOOrpm用22.5mL体积的溶剂（水、0?1MHC1、醋和pH7缓冲液）进行提取。在每个时间点 取出2mL等分试样。时间点如下：10、20、30、45和60分钟，4、12和24小时。用0. 45ymPTFE 过滤器过滤提取物用于HPLC分析。
[0118] 结果概述和讨论 在该提取评价中，5-({[2_氨基-3-(4-氨基甲酰基-2,6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸随着时间 的平均提取效率和％RSD(n=6个重复）显示于下表9中。
[0119] 表9.活性成分随着时间的提取效率
[0120] 经四种溶剂，来自这些数据的平均％RSD的分析显示于下表10中。
[0121] 表10.经四种溶剂的平均％RSD
[0122] 通常，在5_({[2_氨基-3_(4-氨基甲酰基_2,6-二甲基-苯基）-丙酰 基]-[1_(4_苯基-1H-咪唑-2-基）-乙基]-氨基}-甲基）-2_甲氧基-苯甲酸从片剂以 较短时间且于较低提取温度（25°C)的提取与95°C相比存在较大的变异性。此外，在25°C， 研磨片剂的提取与整个片剂相比存在较小变异性。
[0123] 5- ({[2-氨基-3- (4-氨基甲酰基-2, 6-二甲基-苯基）-丙酰基]-[1- (4-苯 基-1H-咪唑-2-基）-乙基