s)(登录号：XP_ 002750073)或豚鼠（Cavia porcellus)(登录号：NP_001166314)的IL-15Ra的sushi结构域。 [0044]本文所用术语"哺乳动物IL_15Ra的sushi结构域"是指共有序列SEQ ID N0:4。 [0045]优选地，包含哺乳动物IL_15Ra的sushi结构域的氨基酸序列的多肽是指共有序列 SEQ ID N0:5。
[0046]本领域技术人员可简单地识别灵长类动物IL-15Ra的sushi结构域。作为实例，可 以引用来自家兔、食蟹猴、豚尾猴、智人、恒河猴、苏门答腊猩猩、白颈白眉猴或普通狨的IL-15Ra的sush i结构域。
[0047]本文所用术语"灵长类动物IL_15Ra的sushi结构域"指共有序列SEQ ID N0:6。 [0048]优选地，包含灵长类动物IL_15Ra的sushi结构域的氨基酸序列的多肽是指共有序 列SEQ ID N0:7。
[0049] 本领域技术人员可简单地识别人IL_15Ra的sushi结构域，并且所述人IL_15Ra的 sushi结构域是指氨基酸序列SEQ ID N0:8。
[0050] 优选地，包含人IL-15Ra的sushi结构域的氨基酸序列的多肽是指SEQ ID N0:9。
[0051 ] 本文所用术语"IL-15Ra的sushi结构域的衍生物"是指与选自SEQ ID N0:4、SEQ 10如:5、5￡〇10如:6、5￡〇10如:7、5￡〇10如:8和5￡〇10如:9的氨基酸序列具有至少 92% (即对应于约5个氨基酸置换）、优选地至少96% (即对应于约2个氨基酸置换）、更优选 地至少98% (即对应于约1个氨基酸置换）同一性百分数的氨基酸序列。这类衍生物包含L-15Ra的sushi结构域的四个半胱氨酸残基，且本领域技术人员根据其自身的一般知识及本 专利申请的教导可以简单地识别这类衍生物。还应当理解的是天然的氨基酸可以被化学修 饰的氨基酸替换。通常，这种化学修饰的氨基酸能够增加多肽的半衰期。
[0052]根据优选的实施方案，所述缀合物包含（ii)包含IL_15Ra的sushi和铰链结构域或 其衍生物的氨基酸序列的多肽。
[0053]所述IL_15Ra铰链结构域定义为开始于sushi结构域后的第一个氨基酸残基并终 止于第一个糖基化潜在位点前的最后一个氨基酸残基的氨基酸序列。在人IL_15Ra中，所述 绞链区的氨基酸序列由十四个氨基酸组成，所述十四个氨基酸位于该IL_15Ra的sushi结构 域之后，位于相对于所述sushi结构域的C末端位置，即所述IL-15Ra绞链区开始于所述(C4) 半胱氨酸残基后的第一个氨基酸且终止于第十四个氨基酸（以标准的"从N-末端到C-末端" 方向计数）。
[0054] 所述IL-15Ra的sushi和铰链结构域为哺乳动物IL-15Ra的sushi和铰链结构域，优 选地为灵长类动物IL_15Ra的sushi和铰链结构域，更优选地为人IL_15Ra的sushi和铰链结 构域。
[0055]本领域技术人员可简单地识别哺乳动物IL_15Ra的sushi和铰链结构域的氨基酸 序列。本文所用术语"哺乳动物IL-15Ra的sushi和铰链结构域"是指共有序列SEQ ID N0: 10。
[0056]本领域技术人员可简单地识别灵长类动物IL-15Ra的sushi和铰链结构域的氨基 酸序列。本文所用术语"灵长类动物IL-15Ra的sushi和铰链结构域"是指共有序列SEQ ID N0:ll〇
[0057]本领域技术人员可简单地识别人IL_15Ra的sushi和铰链结构域的氨基酸序列。本 文所用术语"人IL_15Ra的sushi和铰链结构域"是指共有序列SEQ ID N0:12。
[0058] 本文所用术语"IL_15Ra的sushi和铰链结构域的衍生物"是指与选自SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 12的氨基酸序列具有至少93% (即对应于约5个氨基酸置 换）、优选地至少97% (即对应于约2个氨基酸置换）、更优选地至少98% (即对应于约1个氨 基酸置换）同一性百分数的氨基酸序列。这类衍生物包含L_15Ra的sushi结构域的四个半胱 氨酸残基，且本领域技术人员根据其自身的一般知识及本专利申请的教导可以简单地识别 这类衍生物。还应当理解的是天然的氨基酸可以被化学修饰的氨基酸替换。通常，这种化学 修饰的氨基酸能够增加多肽的半衰期。
[0059]缀合物的多肽i)和多肽ii)都可以是非共价连接的，例如在专利US 8，124,084 B2 中公开的复合物中。可通过提供合适量的多肽i)，提供合适量的多肽ii)，在合适的pH和离 子条件下混合这两种多肽足以允许复合物（即缀合物)形成的持续时间，并可选地浓缩或纯 化所述复合物，简单地获得所述缀合物或复合物。例如，根据标准方法采用肽合成仪;通过 在细胞或细胞提取物中分别表达每种多肽，然后分离和纯化所述多肽，可形成所述复合物 (即缀合物）的多肽。可选地，通过在相同细胞或细胞提取物中表达多肽i)和多肽ii)，然后 例如采用色谱技术，例如具有针对淋巴因子部分、淋巴因子受体部分或复合物的抗体的亲 和色谱，分离和纯化该复合物，可形成本发明的治疗性多肽复合物。
[0060] 缀合物的多肽i)和多肽ii)还可以是采用双功能蛋白质偶联剂或在融合蛋白中共 价连接的。
[0061] 双功能蛋白质偶联剂是本领域技术人员所熟知的，如使用它们的方法，并且所述 双功能蛋白质偶联剂包括例如N-琥珀酰亚胺基(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(srop)、琥珀酰亚 胺基(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯、亚氨基硫烷（imin 〇thi〇lane)(IT)、亚氨酸 酯的双功能衍生物(如盐酸二甲基己二酰亚胺）、活性酯(例如辛二酸二琥珀酸亚胺）、醛(例 如戊二醛）、双-叠氮化合物(例如双(对-叠氮基苯甲酰基）己二胺）、双-重氮衍生物(例如 双_(对重氮苯甲酰基）乙二胺）、二异氰酸酯(例如甲苯2,6_二异氰酸酯)和双活性氟化合物 (例如1，5_二氣_2,4_二硝基苯）。
[0062] 术语"融合蛋白"指通过连接最初编码单独的蛋白质的两个或更多个基因产生的 蛋白质。其也被称为嵌合蛋白。这种融合基因的翻译产生具有衍生自每种初始蛋白的功能 特性的单一多肽。通过应用于生物学研究或治疗的DNA重组技术人工产生重组融合蛋白。重 组融合蛋白是通过融合基因的遗传工程化产生的蛋白质。这通常涉及从编码第一个蛋白质 的cDNA序列中移除终止密码子，然后通过连接PCR或重叠延伸PCR在框架中附加第二个蛋白 质的cDNA序列。然后，由细胞将该DNA序列表达为单一蛋白质。所述蛋白质可以工程化为包 括两种初始蛋白质的全序列或任一个初始蛋白质序列的仅一部分。
[0063]在一个优选的实施方案中，所述缀合物为融合蛋白。
[0064]白细胞介素15或其衍生物的氨基酸序列可以位于相对于IL_15Ra的sushi结构域 或其衍生物的氨基酸序列的C-末端或N-末端位置。优选地，白细胞介素15或其衍生物的氨 基酸序列位于相对于IL_15Ra的sushi结构域或其衍生物的氨基酸序列的C-末端位置。 [0065]白细胞介素15或其衍生物的氨基酸序列与IL_15Ra的sushi结构域或其衍生物的 氨基酸序列可被第一 "连接子"氨基酸序列隔开。所述第一 "连接子"氨基酸序列可以具有足 以确保融合蛋白形成合适的二级和三级结构的长度。
[0066] 在不显著影响融合蛋白生物活性的情况下，第一连接子氨基酸序列的长度是可以 变化的。通常，所述第一连接子氨基酸序列包含至少1个、但是少于30个氨基酸，如2-30个氨 基酸的连接子，优选10-30个氨基酸的连接子，更优选15-30个氨基酸的连接子，进一步优选 15-25个氨基酸的连接子，最优选18-22个氨基酸的连接子。
[0067] 优选的连接子氨基酸序列是那些允许所述缀合物采用合适构象的序列（即允许通 过IL-15邸/ Y信号传导通路的合适的信号传导活动的构象）。
[0068]最合适的第一连接子氨基酸序列（1)将采用柔性延伸构象，（2)不会显示出发展有 序二级结构的倾向，所述有序二级结构可与融合蛋白的功能结构域相互作用，和(3)将具有 最小的疏水性或带电特性，所述疏水性或带电特性可促进与功能蛋白结构域的相互作用。 [00 69] 优选地，所述第一连接子氨基酸序列包含选自Gly(G)、Asn(N)、Ser(S)、Thr(T)、 Ala(A)、Leu(L)和Gln(Q)的近中性氨基酸，最优选地，所述第一连接子氨基酸序列包含选自 Gly(G)、Asn(N)和Ser(S)的近中性氨基酸。
[0070] 连接子序列的实例描述于美国专利No. 5,073,627和No. 5,108,910中。
[0071] 更特别地适用于本发明的示例性柔性连接子包括由SEQ ID N0: 13 (SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ)、SEQ ID N0:14(SGGSGGGGSGGGSGGGGSGG)或SEQ ID N0:15 (SGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ)的序列编码的那些连接子。
[0072] 进一步优选地，所述缀合物为具有序列SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 17的融合蛋 白。
[0073] 免疫抑制受体拮抗剂抗体
[0074]术语"抗体"是指免疫球蛋白分子，其对应于包含通过二硫键互连的两个相同的重 (H)链(全长时约50-70kDa)和两个相同的轻(L)链(全长时约25kDa)的四个多肽链的四聚 体。轻链分为k和A。重链分为y、y、a、S或e，并将抗体的同种型分别限定为IgG、IgM、IgA、IgD 和IgE。每个重链由N-末端重链可变区（缩写为HCVR)和重链恒定区组成。对于IgG、IgD和 IgA，所述重链恒定区由三个结构域(CHI、CH2和CH3)组成;对于IgM和IgE，所述重链恒定区 由四个结构域(CHI、CH2、CH3和CH4)组成。每个轻链由N-末端轻链可变区（缩写为LCVR)和轻 链恒定区组成。所述轻链恒定区由一个结构域CL组成。可将所述HCVR和LCVR区进一步细分 为被称为互补决定区（CDR)的高变区，穿插着被称为构架区(FR)的更保守的区域。每个HCVR 和LCVR由自氨基末端至羧基末端按如下顺序排列的三个⑶R和四个FR组成:FR1、⑶R1、FR2、 CDR2、FR3、CDR3、FR4。根据熟知的惯例给每个结构域分配氨基酸。抗体结合特定抗原的功能 能力取决于每个轻链/重链对的可变区，且主要由CDR确定。
[0075]本文所用术语"抗体"是指单克隆抗体本身。单克隆抗体可以是人抗体、嵌合抗体 和/或人源化抗体。
[0076] 有利地，术语抗体是指IgG，如IgGl、IgG2(IgG2a或IgG2b)、IgG3和IgG4。优选地，术 语抗体是指IgGl或IgG2,更优选地指IgG2a。
[0077] "嵌合抗体"是指由鼠免疫球蛋白的可变区和人免疫球蛋白的恒定区组成的抗体。 该改变仅包括用鼠恒定区取代人抗体的恒定区，从而产生对药物用途可具有可接受的足够 低的免疫原性的人八鼠嵌合体。已经报道了许多用于产生这种嵌合抗体的方法，从而这些方 法构成了本领域技术人员的常识的一部分(参见，例如美国专利No.5,225,539)。
[0078] "人源化抗体"是指部分或全部由这样的氨基酸序列组成的抗体:所述氨基酸序列 通过改变具有非人互补决定区（CDR)的抗体的序列而衍生自人抗体种系。所述抗体的可变 区以及最终的CDR的这种人源化可通过本领域目前熟知的技术进行。作为实例，英国专利申 请GB 2188638A和美国专利No. 5，585，089公开了重组抗体的生产工艺，其中抗体被取代的 唯一部分是互补决定区或"CDR'CDR移植技术已用于产生由鼠CDR和人可变区框架和恒定 区组成的抗体(参见，例如RIECHMANN等，Nature，vol. 332，p: 323-327，1988)。这些抗体保留 了对F c依赖性效应子功能所必需的、但是不太可能引起针对该抗体的免疫响应的人恒定 区。作为实例，可变区的框架区被相应的人框架区置换，保持非人CDR基本完整，或甚至用衍 生自人基因组的序列替换CDR。在遗传修饰的小鼠中产生完全人抗体，所述小鼠的免疫系统 已被改变以对应于人免疫系统。如上述，使用所述抗体的免疫特异性片段，包括代表单链形 态的片段，对于用在本发明方法中是足够的。
[0079] 人源化抗体还指这样的抗体：所述抗体包含人框架、至少一个源自非人抗