):每组的肿瘤生长 (n = 5只小鼠/组与A相同，但是源自第二个实验。（C):每组中具有完全肿瘤消退的小 鼠的百分数。（D-G):对照治疗组(D)、RLI独立治疗组(F)、aPDl独立治疗组(F)和aPDl+RLI治 疗组（F)中每只小鼠的肿瘤生长（实验1和2的汇集，n = 10)。采用双向方差分析（2-way AN0VA)进行统计检验测定。*p〈0 ? 05; ***p〈0，001。
[0136] 图4示出了抗-PD1/RLI组合治疗增加了小鼠的总存活。A:每一治疗组的总存活(n =10每组）。
[0137] 结果显示，与独立组相比，抗-PD1+RLI组合治疗增强了抗-肿瘤效应。特别地，RLI/ aPDl治疗增加了具有完全肿瘤消退的小鼠的数量和总存活（图3C和4)。惊奇地，在完全缓解 后的第145天，用CT26肿瘤对采用RLI和抗-PD1组合治疗的无肿瘤小鼠再次攻击，小鼠未显 示任何肿瘤增长，这表明了保护性抗-肿瘤免疫的持久性(数据未示出）。这些结果在证明了 以下情况的另一系列实验中被证实：i)独立组中，当自肿瘤接种后第10天开始治疗，RLI对 肿瘤生长无作用；ii)那时，抗-PD1增加了存活但很少引起完全消退(5.9%)。抗-PD1和RLI 的组合增加了存活和完全缓解(30,4%)，该种缓解为长效缓解。由于小鼠在完全消退后的 145天中仍然为无肿瘤，并且再攻击治愈的小鼠未显示肿瘤恢复，则上述组合诱导了有效的 抗肿瘤记忆免疫响应(数据未示出）。
[0138] 从BALB/C小鼠的右侧皮下注射CT26肿瘤细胞(2.105/小鼠）。第10天，小鼠接受腹 腔内（i .P.)注射低剂量抗-PD1 (克隆mBAT，12yg/小鼠）或对照、2yg RLI CH0(1004-15p)或 对照、或两种治疗的组合。一周后（第17天），小鼠接受第二次注射抗-PD1、RLI或对照。采用 卡尺每周测量肿瘤三次，并按照下式计算肿瘤面积:长度X宽度。当肿瘤尺寸达到300mm 2或 肿瘤溃烂时，将小鼠处死。实验规程示于图5。
[0139] 图6示出了采用两次腹腔内（i . p .)注射低剂量抗-PD1和RLI的组合治疗的患有 CT26肿瘤的小鼠中的CT26肿瘤生长。采用双向方差分析（2-way ANOVA)进行统计检验测 定。***p〈0,001。
[0140] 结果表明，低剂量的仅抗-PD1或RLI不能支撑原发性皮下肿瘤生长的抑制。然而， 将低剂量的抗-PD1与RLI组合允许肿瘤生长抑制。这一实验证实RLI可以与抗-PD1策略协同 作用从而与肿瘤生长斗争，甚至RLI可以与亚适量的抗-PD1治疗协同作用。
[0141]最后，这一低剂量的组合似乎导致了显著的产生强肿瘤抑制的协同作用。
[0142] 2)转移性黑色素瘤
[0143] 第0天，通过在C57B1/6小鼠的右侧皮内（i.d.)注射3X104 B16F10细胞来植入 B16F10肿瘤。通过腹腔内（i.p.)注射用抗-CTLA-4(克隆:UC10-4F10-11 100或克隆:9D9)、 或用抗-PD-1 (克隆RPM1 -14，#BE0146)、或用抗-PD-L1 mAb (克隆：1 OF. 9G2)或抗-PD-L1 mAb (克隆：10F.9G2)与RLI CH0(2yg/小鼠）的组合（自第7天至第25天每周两次腹腔内注射2yg 的RLI CH0)治疗小鼠。每次注射抗-CTLA-4或抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的剂量:第3天为200y g和第6天及第9天为lOOiig。对照组接受相应剂量的抗体同种型。通过物理检查监测随时间 推移的肿瘤尺寸和发病率。
[0144] 3)晚期肺癌
[0145] 肿瘤细胞系TC-1源自C57B1/6小鼠的原发性肺上皮细胞，并是人乳头瘤病毒16 (HPV-16)E6/E7和c-Ha-Ras共转化的。在C57B1/6小鼠的背部，向真皮上部中皮下（s. c.)注 射105个TC-1肺癌细胞。在肿瘤接种后的第10天启动治疗，此时肿瘤变得清晰可见和可感 知，其尺寸《 15-20mm2。在三个单一时间点（第10、14、17天)给予抗-CTLA-4 mAb(100yg/小 鼠，克隆：UC10-4F10-11 100或克隆：9D9)、或抗-PD-l(250yg/小鼠，克隆RPM1-14，# BE0146)、或抗-PD-L1 mAb(100yg/小鼠，克隆：10F.9G2)，和在第 10、13和18天给予此1(2邱/ 小鼠）。每周两次测定的肿瘤生长作为端点（endpoint)，比较单一药剂治疗与每种抗体和 RLI的双重组合的治疗。对照组接受相应剂量的抗体同种型。
[0146] 4)晚期膀胱癌
[0147] MB49肿瘤细胞系源自来源于C57BL/6雄性小鼠的膀胱上皮的致癌物诱导的肿瘤。 在C57B1/6小鼠的背部，向真皮上部中皮下（s.c.)注射10 6个MB49膀胱癌细胞。在肿瘤接种 后的第6天启动治疗，此时肿瘤变得清晰可见和可感知，其尺寸》15mm2。在四个单一时间点 (第6、9、12天）给予抗-CTLA-4 mAb(100yg/小鼠，克隆：UC10-4F10-11 100或克隆：9D9)、或 抗-PD-l(100yg/小鼠，克隆RPM1-14，#BE0146)、或抗-PD-L1 mAb(100yg/小鼠，克隆： 1(^.962)，和在第7、8、10、11、13、14、16和17天给予此1(2邱/小鼠）。比较单一药剂治疗与每 种抗体和RLI的双重组合的治疗。对照组接受相应剂量的抗体同种型。采用卡尺每周测量肿 瘤三次，并按照下式计算肿瘤面积:长度X宽度。当肿瘤尺寸达到300mm 2或肿瘤溃烂时，将 小鼠处死。
[0148] 5)乳腺癌
[0149] 第0天，将5X 104 4T1乳腺癌细胞接种至BALB/c小鼠的乳腺。在肿瘤接种后的第10 天启动治疗，此时肿瘤变得清晰可见和可感知，其尺寸* 15_20mm2。在四个单一时间点（第 10、13、16天）给予抗-CTLA-4 mAb(100yg/小鼠，克隆：UC10-4F10-11 100或克隆：9D9)、或 抗-PD-l(250yg/小鼠，克隆RPM1-14，#BE0146)、或抗-PD-L1 mAb(200yg/小鼠，克隆： 1(^.962)，和在第10、11、13、14、16、17、19和20天给予此1(2邱/小鼠）。比较单一药剂治疗与 每种抗体和RLI的双重组合的治疗。对照组接受相应剂量的抗体同种型。采用卡尺每周测量 肿瘤三次，并按照下式计算肿瘤面积:长度X宽度。第27天时处死小鼠。在双目显微镜下对 肺转移结节进行计数。
[0150] 6)卵巢癌
[0151] 从小鼠卵巢上皮乳头状浆液性腺癌细胞系预先产生了 ID8-VEGF卵巢癌细胞系。在 C57B1/6小鼠的右侧皮下植入5X106 ID8肿瘤细胞。在肿瘤接种后的第10天启动治疗，此时 肿瘤变得清晰可见和可感知，其尺寸* 15_20mm2。在四个单一时间点（第10、13、16天)给予 抗-CTLA-4 mAb(100yg/小鼠，克隆:UC10-4F10-11 100或克隆：9D9)、或抗-PD-l(250yg/小 鼠，克隆1?^1-14，#8￡0146)、或抗-?0-1111^13(200邱/小鼠，克隆 ：1(^.962)，和在第10、11、 13、14、16、17、19和20天给予RLI(2iig/小鼠）。每周两次测定的肿瘤生长作为端点 (endpoint)，比较单一药剂治疗与每种抗体和RLI的双重组合的治疗。对照组接受相应剂量 的抗体同种型。采用卡尺每周测量肿瘤三次，并按照下式计算肿瘤面积:长度X宽度。当肿 瘤尺寸达到300mm 2或肿瘤溃烂时，将小鼠处死。
[0152] 7)前列腺癌:RM-1
[0153] 将2X105个RM-1鼠前列腺癌细胞皮下（s.c.)接种至C57BL/6雌性小鼠。在肿瘤接 种后的第3天启动治疗，此时肿瘤变得清晰可见和可感知，其尺寸》15-20mm 2。在三个单一 时间点（第3、6、9天）给予抗-CTLA-4 mAb(100yg/小鼠，克隆：UC10-4F10-11 100或克隆： 9D9)、或抗-PD-l(250yg/小鼠，克隆RPM1-14，#BE0146)、或抗-PD-L1 mAb(200yg/小鼠，克 隆：10F.9G2)，和在第6、7、9、10、12、13、15、16、18和19天给予此1(2邱/小鼠）。每周两次测定 的肿瘤生长作为端点（endpoint)，比较单一药剂治疗与每种抗体和RLI的双重组合的治疗。 对照组接受相应剂量的抗体同种型。采用卡尺每周测量肿瘤三次，并按照下式计算肿瘤面 积:长度X宽度。当肿瘤尺寸达到300_ 2或肿瘤溃烂时，将小鼠处死。
【主权项】
1. 一种用于治疗受试者的癌症的适于同时、单独或顺序施用的组合的药物组合物，所 述组合的药物组合物包含： a) 缀合物，所述缀合物包含：（i)包含白细胞介素15或其衍生物的氨基酸序列的多肽， 和(i i)包含I L-l 5Ra的sush i结构域或其衍生物的氨基酸序列的多肽;编码所述缀合物的多 核苷酸或包含这种多核苷酸的载体;和 b) 拮抗T细胞活化的抑制中牵涉的免疫通路的抗体或其片段，编码所述抗体或其片段 的多核苷酸，或包含这种多核苷酸的载体。2. 根据权利要求1所述的组合的药物组合物，其中： a) 所述缀合物以60yg/kg或更低的剂量，优选地以10yg/kg或更低的剂量，最优选地以5 yg/kg或更低的剂量通过注射给药;和 b) 所述诘抗T细胞活化的抑制中牵涉的免疫通路的抗体或其片段以500yg/kg或更低的 剂量，优选地以1 OOyg/kg或更低的剂量，最优选地以50yg/kg或更低的剂量通过注射给药。3. 根据权利要求1或2所述的组合的药物组合物，其中所述抗体选自CTL-A4、PD-1/PD-L1、PD-1/PD-L2、抑制性 1(11?、0)276、￥1^附、81'1^/爪^]\1、1^63、骱￥0?2和厶001^2厶拮抗剂，优选 PD-1/PD-L1 拮抗剂。4. 根据权利要求3所述的组合的药物组合物，其中所述抗体选自CTL-A4拮抗剂，优选易 普利单抗或t i c i 1 imumab。5. 根据权利要求3所述的组合的药物组合物，其中所述抗体选自抑制性KIR拮抗剂，优 选1-7F9。6. 根据权利要求3所述的组合的药物组合物，其中所述抗体选自PD-1/PD-L1和PD-1/ PD-L2拮抗剂，优选纳武单抗、Merck 3745、CT-01 l、lambrolizumab、AMP514、MDX-l 105或 YW243.55.S70。7. 根据权利要求3所述的组合的药物组合物，其中所述抗体选自CD276拮抗剂，优选8H9 或MGA271。8. 根据权利要求1至7中任一项所述的组合的药物组合物，其中 a) 所述缀合物的多肽i)和多肽ii)在融合蛋白中共价连接;和 b) 所述缀合物与所述抗体或其片段未连接。9. 根据权利要求1至8中任一项所述的组合的药物组合物，其中所述白细胞介素15具有 氨基酸序列SEQ ID N0:1。10. 根据权利要求1至9中任一项所述的组合的药物组合物，其中所述IL_15Ra的sushi 结构域具有氨基酸序列SEQ ID NO:4。11. 根据权利要求1至10中任一项所述的组合的药物组合物，其中所述缀合物具有氨基 酸序列SEQIDN0:16或SEQIDN0:17。
【专利摘要】本发明涉及一种用于治疗受试者的癌症的适于同时、单独或顺序施用的组合的药物组合物，所述组合的药物组合物包含：(a)缀合物，所述缀合物包含：(i)包含白细胞介素15或其衍生物的氨基酸序列的多肽，和(ii)包含IL-15Rα的sushi结构域或其衍生物的氨基酸序列的多肽；编码所述缀合物的多核苷酸或包含这种多核苷酸的载体；和(b)拮抗T细胞活化的抑制中牵涉的免疫通路的抗体或其片段，编码所述抗体或其片段的多核苷酸或包含这种多核苷酸的载体。
【IPC分类】A61K39/395, C07K14/705, C07K16/28, C07K14/715, C07K14/54, A61P35/00
【公开号】CN105579062
【申请号】CN201480052637
【发明人】D·贝查德, N·沙皮, M·德布瓦
【申请人】赛腾制药, 古斯塔夫-鲁西研究所（Igr）
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2014年8月8日
【公告号】CA2920539A1, EP3030262A1, US20160184399, WO2015018529A1