=7.0,加入四腔室水浴槽中，一般组织温度在37Π (1Χ骨骼 肌调节温度为25 °C，其中通过95 %氧气-5 %二氧化碳，30min以上。
[0143] 分离完整的趾长伸肌(EDL)，骨骼肌组织分离的完整与否对实验最后的结果影响 很大。将完整分离的EDL固定在两个电极之间（这个步骤在电解液中操作，动作尽量要快）， 先在电解液中平衡IOmin。
[0144] 抽搐张力检测的条件:使用IOV电压，持续时间为0.3ms的方波。重复3次，每次隔10 秒一次。
[0145] 强直张力检测的条件:使用IOV电压，持续时间为200ms的一串波，其中每个为持续 时间为〇. 3ms的方波。重复3次，每次间隔3min。
[0146] 结果：
[0147] 图20:野生型小鼠（WT)、miR-127转基因小鼠〇6)、111(11;1^1?-127小鼠和111(匕小鼠血 清中肌酸激酶（CK)水平检测结果。结果显示，跑步后4h，WT和TG小鼠血清CK值无显著性差 异;mdx;miR-127小鼠血清CK显著性低于mdx小鼠。这说明111丨1?-127缓解了111(^小鼠的肌膜破 损程度。
[0148] 图21:mdx;miR-127和mdx腓肠肌(Gas)伊文思蓝(EBD)浸润面积及Laminin免疫荧 光染色。作为代表，仅显示了腓肠肌中伊文思蓝浸染损伤肌肉的染色结果图片。
[0149] 图22:基于图21染色结果，统计mdx;miR-127和mdx腓肠肌(Gas)中伊文思蓝浸染的 面积。结果显不，mdx ;miR_127小鼠肌群伊文思蓝浸染面积明显减少。同样说明miR-127缓解 了 mdx小鼠的肌膜破损程度。
[0150] 图23:记录11^6、11^;11^-127和11^小鼠达到疲劳程度时的跑步时间。结果显示， WT和TG小鼠跑步时长没有显著差异;mdx ;miR-l 27小鼠组跑步时间显著长于mdx小鼠组。
[0151] 图24:为mdx;miR-127和mdx肌肉爆发力检测结果。结果显示，WT和TG小鼠肌肉爆发 力没有显著差异;mdx ;miR-127小鼠肌肉爆发力显著大于mdx小鼠组。
[0152] 图25:为mdx; mi R-127和mdx肌肉耐力检测结果。结果显示，WT和TG小鼠肌肉耐力没 有显著差异;mdx ;miR_127小鼠肌肉耐力显著大于mdx小鼠组。
[0153] 综合上述，在人类DMD疾病模型mdx小鼠中过表达miR-127可以显著地改善mdx小鼠 的病理表型和生理功能。
[0154] 参考文献
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【主权项】
1. 如下1)至3)中任一物质在制备治疗肌肉疾病的药物中的用途： 1. miR-127； 2) 含有miR-127的编码基因的重组载体； 3) 含有miR-127的编码基因的重组病毒。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述miR-127的核苷酸序列如SEQ ID No.l 所示。3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肌肉疾病是肌肉损伤，优选是急性肌 肉损伤。4. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肌肉疾病是肌营养不良，任选是 Duchenne/Becker型肌营养不良、面肩-肱型肌营养不良、肢带型肌营养不良、股四头肌型肌 营养不良、远端型肌营养不良、进行性眼外肌麻痹型肌营养不良或眼肌-咽肌型肌营养不 良。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物通过促进成肌细胞 的分化治疗所述肌肉疾病，所述促进成肌细胞的分化优选是提高成肌素和/或肌球蛋白重 链的表达。6. 根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物通过促进骨骼肌损 伤再生治疗所述肌肉疾病，所述促进骨骼肌损伤再生优选是促进骨骼肌干细胞的增殖和分 化。7. 根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物通过改善病理和生 理表型治疗所述肌肉疾病，所述改善病理和生理表型优选是降低血清肌酸激酶水平、和/或 改善肌肉疲劳、和/或提高肌纤维张力及爆发力。8. 如下1)至3)中任一物质在促进骨骼肌干细胞分化的药物中的用途： 1. miR-127； 2) 含有miR-127的编码基因的重组载体； 3) 含有miR-127的编码基因的重组病毒。9. 一种重组细胞，其是将miR-127、含有miR-127的编码基因的重组载体或含有miR-127 的编码基因的重组病毒导入至出发细胞中得到的重组细胞。10. 如权利要求9所述的重组细胞在制备治疗肌肉疾病的药物中的用途，或制备促进骨 骼肌干细胞分化的药物中的用途。
【专利摘要】本发明公开了miR-127在制备治疗肌肉疾病的药物中的用途。本发明提供了如下1)至3)中任一物质在制备治疗肌肉疾病的药物中的用途：1)miR-127；2)含有miR-127的编码基因的重组载体；3)含有miR-127的编码基因的重组病毒。其可用于制备治疗肌肉疾病的药物，有效治疗肌肉疾病。
【IPC分类】A61K48/00, C12N5/10, A61P21/00, A61K31/7105
【公开号】CN105688227
【申请号】CN201610073384
【发明人】朱大海, 张勇, 翟丽丽, 武日茂
【申请人】中国医学科学院基础医学研究所
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2016年2月2日