br>[0032] 本发明提供的两种卡巴他赛药物白蛋白纳米颗粒的制备方法因未采用卡巴他赛 注射液中添加的乙醇及吐温80而避免了其带来的严重过敏反应。
[0033] 通过本发明方法制备的卡巴他赛蛋白纳米颗粒能够以较小体积输送高剂量药理 活性物质，这可以使病人接受大体积液体输注时的不适感和住院时间减至最小。此外，蛋白 质外壳或包衣通常在体内可被蛋白水解酶完全降解，因此，本发明药物组合物因制剂本身 产生的副作用极小。此外，通过采用本发明方法制备的卡巴他赛白蛋白组合物，其中所述卡 巴他赛白蛋白组合物中以纳米颗粒形式存在的载体白蛋白占总白蛋白载体的重量百分含 量在50%以上，大大提高了卡巴他赛白蛋白组合物使用时的纳米靶向性。
【附图说明】
[0034] 图1示出了实施例1的卡巴他赛白蛋白纳米颗粒的粒径分布图。
[0035] 图2示出了实施例4的卡巴他赛白蛋白纳米颗粒的粒径分布图。
[0036] 图3示出了实施例5的卡巴他赛白蛋白纳米颗粒的粒径分布图。
[0037] 图4示出了实施例2的卡巴他赛白蛋白纳米颗粒的zeta电位图。
【具体实施方式】
[0038] 下面将结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不对本发明构成任何限 制。
[0039] 实施例1
[0040] 将300mg的卡巴他赛加入50ml的瓶中，加入20ml的乙醇与氯仿混合溶媒（乙醇： 氯仿体积比=1:1)，溶解并将其在20, 000转/分钟（rpm)的高速剪切下均匀分散在750ml， lmg/ml白蛋白的水溶液中。然后转入均质机中，在15, 000镑/平方英寸（psi)下进行乳化， 产生的体系被转移到超滤浓缩装置里面（PALL，100KD膜包），超滤至50ml。产生的卡巴他 赛组合物颗粒的平均粒径为180nm(Malvern Nano_ZS90,参见图1)，Zeta电位为-15. 3mv， pH为6. 95。通过0.22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即可。经HPLC分析检测，计 算得到卡巴他赛白蛋白组合物载药量为25. 4%，包封率为93. 2%。
[0041] 实施例2
[0042] 将200mg的卡巴他赛加入50ml的瓶中，加入15ml的乙醇与氯仿混合溶媒（乙 醇：氯仿体积比=1:4)，超声溶解并将其在30, 000转/分钟（rpm)的高速剪切下均勾分 散在50ml含15mg/ml白蛋白的生理盐水中。然后转入均质机中，在20, 000镑/平方英 寸（psi)下进行乳化，产生的体系被转移到超滤浓缩装置里面（PALL，100KD膜包），超滤至 25ml。产生的卡巴他赛组合物颗粒的平均粒径为153nm(Malvern Nano_ZS90)，Zeta电位 为-20. 8mv (参见图4)，pH为7. 03。通过0. 22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即 可。经HPLC分析检测，计算得到卡巴他赛白蛋白组合物载药量为18. 2 %，包封率为95. 7 %。
[0043] 实施例3
[0044] 将150mg的卡巴他赛加入50ml的瓶中，加入10ml的丙酮与氯仿混合溶媒（丙酮： 氯仿体积比=1:5)，超声溶解并将其在40, 000转/分钟（rpm)的高速剪切下均匀分散在 15ml含50mg/ml白蛋白的5%的葡萄糖溶液中。然后转入均质机中，在25, 000镑/平方 英寸（psi)下进行乳化，产生的体系被转移到超滤浓缩装置里面（PALL，100KD膜包），超滤 至8ml。产生的卡巴他赛组合物颗粒的平均粒径为138nm(Malvern Nano_ZS90)，Zeta电位 为-32. 4mv，pH为7. 03。通过0. 22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即可。经HPLC 分析检测计算得到卡巴他赛白蛋白组合物载药量为13. 4%，包封率为98. 5%。
[0045] 实施例4
[0046] 将300mg的卡巴他赛加入50ml的瓶中，加入25ml的乙醇溶液，超声溶解后得到有 机相。将l〇〇mg谷胱甘肽加入到75ml，含10mg/ml白蛋白，pH5. 0的磷酸缓冲液中，80°C孵 育6min后得到水相。将有机相在1，000转/分钟（rpm)的剪切下均匀分散水相中，产生的 体系被转移到超滤浓缩装置里面（PALL，300KD膜包），超滤至25ml。产生的卡巴他赛组合物 颗粒的平均粒径为68nm(Malvern Nan〇-ZS90,参见图2)，Zeta电位为-39. 2mv，pH为5. 14， 通过0. 22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即可，经HPLC分析检测，计算得到卡巴他 赛白蛋白组合物载药量为25. 5 %，包封率为97. 3 %。
[0047] 实施例5
[0048] 将300mg的卡巴他赛溶解被加入到在50ml的瓶中，并且溶在加入20ml的丙酮溶 液中，超声溶解后得到有机相。将l〇〇mg巯基乙醇加入到150ml，含5mg/ml白蛋白，pH6.0 的磷酸缓冲液中，37°C孵育10h后得到水相。将有机相在10, 000转/分钟（rpm)剪切下均 匀分散水相中，产生的体系被转移到超滤浓缩装置里面（PALL，100KD膜包），超滤至30ml。 产生的卡巴他赛组合物颗粒的平均粒径为107nm(Malvern Nan〇-ZS90,参见图3)，Zeta电 位为-35. 4mv，pH为6. 45,通过0. 22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即可，经HPLC 分析检测，计算得到卡巴他赛白蛋白组合物载药量为25. 8 %，包封率为94. 3 %。
[0049] 实施例6
[0050] 将150mg的卡巴他赛溶解被加入到在50ml的瓶中，并且溶在加入5ml的乙醇溶液 中，超声溶解后得到有机相。将l〇〇mg乙酰半胱氨酸加入到25ml，含30mg/ml白蛋白，pH8. 0 的磷酸缓冲液中，60°C孵育3h后得到水相。将有机相在5, 000转/分钟（rpm)剪切下均匀分 散水相中，产生的体系被转移到超滤浓缩装置里面（PALL，100KD膜包），超滤至10ml。产生 的卡巴他赛组合物颗粒的平均粒径为123nm (Malvern Nano_ZS90)，Zeta电位为-35. 4mv， pH为7. 85,通过0. 22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即可，经HPLC分析检测，计算 得到卡巴他赛白蛋白组合物载药量为14. 6 %，包封率为94. 3 %。
[0051] 对比实施例7
[0052] 参考专利文献CN102458112A中的实施例12制备卡巴他赛白蛋白纳米粒的方法： 将64. 9mg卡巴他赛溶解在0.56ml氯仿-叔丁醇（10. 2 : l，v/v)中。然后将该溶液加 入到18ml 5 % (w/v) HSA溶液中。为了形成粗乳液，将混合物以10, OOOrpm预匀化5分钟 (?FLUiCOtFA 30model)，然后转移至微射流内（Microfulidics),以 19,000psi 进行乳 化。将所得的体系转移至旋转蒸发器中，于40°C在减压下（40mm Hg)快速地去除氯仿和 叔-丁醇10分钟。用注射用水将所得的悬浮液制成20ml，产生的卡巴他赛组合物颗粒的 pH为6. 9，Zeta电位为-19mv，卡巴他赛颗粒平均直径为101nm(Malvern Nano_ZS90)。通 过0. 22 μ m的无菌滤头过滤除菌，冷冻干燥48h即可。经HPLC分析检测计算，得到卡巴他 赛白蛋白组合物载药量为6. 1 %，包封率为86. 3 %。
[0053] 对比实施例8
[0054] 参考专利文献CN103393632A中的实施例5制备卡巴他赛白蛋白纳米粒的方 法：将500mg卡巴他赛溶解于3. 0ml的三氯甲烷及0.5ml的无水乙醇中，有机相加入到 59ml (8. 47 %，w/v)的人血白蛋白水溶液中，混合物在低转速条件下剪切均浆3分钟形成粗 乳液（FLUKX)_R FA 30model)，转移至高压均衆器内（Microfuli