专利名称：双核大环多胺金属配合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种水解DNA和RNA的仿酶催化剂。
背景技术：
关于DNA和RNA的断裂，限制性内切酶是一种有效的水解催化剂，它能在特定位点切割DNA和RNA分子，但其识别位点仅为4-8个核苷酸，而且只能在数目有限的位点断裂DNA和RNA。
化学合成仿酶水解催化剂是20世纪80年代开始发展起来的一类新型的核酸切割试剂，既有限制性内切酶的高度专一性，又能在人们预先设计的任何位点断裂DNA和RNA，而且具有制备简单，价格便宜等优点，但现有的仿酶水解催化剂——例如近年报道的金属配合物(见(1)Novel Recognition of Thymine Base in Double-Stranded DNA byZinc(II)-Macrocyclic Tetraamine Complexes Appended with Aromatic Groups，EiichiKimura etc，J.Am.Chem.Soc.1999，121，5426-5436；(2)Hamessing thorium(IV)as a catalystRNA and phosphate diester cleavage by a thorium(IV)macrocyclic complex，CongfangWang，Seema Choudhary，Claire B.Vink，Elizabeth A.Secord and Janet R.Morrow，Chem.Commun.，2000，2509-2510；(3)Dinuclear copper(II)complexes that promotehydrolysis of GpppG，a model for the 5’-cap of mRNA，Janet R.Morrow etc，J.Chem.Soc.，Dalton Trans.，1998，Pages 2961-2963；(4)Hydrolysis of Double-Stranded and Single-StrandedRNA in Hairpin Structures by the Copper(II)Macrocycle Cu([9]aneN3)Cl2，Judith N.Burstyn，Inorg.Chem.1997，36，1715-1718)都存在这样或那样的缺点，要么存在水解时间长(水解时间一小时以上)，要么水解液浓度大(水解液浓度一般达mM级)等缺点。
近年来，对双核及多核金属配合物的研究非常活跃，其中对能同时结合两个金属离子的配体的研究，尤为引人注目。Ciampolim，M.等人提供了一种能同时结合两个金属离子的配体——双核大环多胺化合物(见Ciampolim，M.；Fabbrizzi，L.；Perotti，A.；Poggi，A.；Seghi，B.；Zanobini，F.，Inorg.Chem，1987，26，3527)， R＝-(CH2)n-，n＝2，3，4此种化合物的桥连基团R为柔性结构，其对DNA或RNA的催化水解活性较差。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种催化水解活性更好的双核大环多胺金属配合物，此种金属配合物不仅能在低浓度下短时间内有效的切割DNA和RNA，而且具有良好的选择性。
本发明的技术方案是根据天然酶水解DNA和RNA起主导作用的因素(如活性中心结构，疏水微环境，与底物的多种非共价键相互作用及其协同效应)和识别原理设计分子结构，特别是选择了刚性结构的桥连基团。所提供的双核大环多胺金属配合物具有如下的结构式。
上述结构式中，R为桥，M为金属离子。
R可以是下述五种基团中的任一种基团。
R1，R2，R3，R4，R5＝烷基或HM为Zn2+或Cu2+或Cd2+或Ca2+或Ni2+金属离子。
本发明所述的双核大环多胺金属配合物的制备为三个步骤第一是大环多胺的合成；第二是桥联大环多胺的合成；第三是桥联大环多胺与金属离子的络合。上述步骤均在常压下进行，具体操作及工艺条件通过实施例予以说明。
用本发明所述的双核大环多胺金属配合物切割DNA或RNA的操作如下1、将琼脂糖加入容器中，再加入TBE缓冲液(1×)，将装有琼脂糖和TBE缓冲液的容器放在沸水中加热使琼脂糖颗粒溶解，冷却至60℃时倒入带梳子的水平槽中，室温下放置30-40分钟，然后将水平槽放入电泳槽中。
2、加入电泳缓冲液，加入量以淹没胶面约1mm深为宜，然后取出梳子，令样品孔自然充满缓冲液。
3、在EP管中加入双核大环多胺金属配合物、需切割的DNA或RNA、抗坏血酸Vc(还原剂)，双核大环多胺金属配合物的浓度为5μmol/L～100μmol/L，DNA或RNA的浓度为0.010-0.061μg/ml，抗坏血酸Vc(还原剂)的浓度为0.125-0.342mmol/L，控制pH＝6.00-7.50，离子强度I＝0.1左右；将EP管放入恒温水槽内，在37±0.5℃反应30-90分钟后，加入略多于双核大环多胺金属配合物摩尔数的EDTA溶液终止反应。
4、在EP管中加入浓度为0.04mol/L的磷酸氢二钠-盐酸缓冲液，制成样品溶液，混匀后用微量移液器加入凝胶样品孔中并盖上电泳槽，然后在4℃采用4V/cm电压槽电泳(60V左右)，使DNA向阳极移动，观察溴酚蓝显示的电泳情况，当样品到达阳极终止电泳。
5、取下凝胶，在含1ug/ml溴化乙锭的电泳缓冲液中浸泡染色30分钟，水中脱色10分钟后，用紫外灯观察，并用GDS成像系统照相则可检测出切割DNA或RNA的结果。
本发明具有以下有益效果1、由于桥连基团R为刚性结构，因而双核大环多胺金属配合物对DNA和RNA具有良好的切割活性，作水解催化剂用，能在生理条件下，低浓度(双核大环多胺金属配合物的浓度可低至5μmol/L)、短时间(水解时间30分钟左右)内十分有效的切割DNA和RNA。
2、切割反应的选择性好，无带切口环状DNA和RNA出现，并且切割方式也与限制性内切酶相同。
3、如桥连基团R中含中有羟基，双核大环多胺金属配合物切割DNA和RNA活性会更好，尤其是某些桥连基团苯环上的取代基为酚羟基的对位含有排电子基团或酚羟基被甲醚化后，裂解活性将得到提高，某些桥连基团含有较多的共额度或平面结构，催化活性更高。
4、提供了多种金属离子构成的双核大环多胺金属配合物，扩大了水解催化剂的范围。
5、制备方法简单，原材料易于获取。
图1是双核大环多胺Zn(II)配合物催化水解DNA的琼脂糖凝胶电泳图。
具体实施例方式
实施例1本实施例制备双核大环多胺Zn(II)配合物，桥R为基团c，结构式如下 R5＝H工艺步骤为1、大环多胺的合成-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂十二烷的合成N2气保护下，将146.5克(0.26mol)化合物-N，N′，N″-三(对甲基苯磺酰)-二亚乙基三胺溶于300ml无水DMF中，冰浴搅拌下，分批加入17.1克(0.57mol)氢化钠(80％-矿物油)，搅拌反应2小时后，在80-90℃下，滴加入147.0克(0.26mol)化合物-O，O′，N-三(对甲基苯磺酰)-双(2-羟乙基)胺的无水DMF溶液300ml，搅拌反应3小时，放置室温，将混合物倒入1000ml冰水中，过滤收集固体。用水，乙醇洗涤，得白色固体为1，4，7，10-四(对甲基苯磺酰)-1，4，7，10-四氮杂十二烷，产率92.5％。m.p.＝289-290℃。
将160克上述化合物与200ml浓H2SO4混合，加热使其溶解，然后快速升至高温反应10-15min。自然冷却至室温，剧烈搅拌下，加入到1000ml无水乙醚中，过滤，将沉淀物溶于水中，用活性碳脱色，加入100ml浓HCl煮沸，静置，过滤，得白色晶体。将此白色晶体溶于一定量水中，用NaOH溶液调节pH至强碱性，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂，得白色固体为1，4，7，10-四氮杂十二烷，产率63％。m.p.＝108-110℃。
N2气保护下，将12.8mmol的1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于含有39.5mmol三乙胺的无水无醇氯仿溶液中，冰浴下，缓慢地滴加入含有36.2mmol(Boc)2O的120ml无水无醇氯仿溶液中，室温搅拌过夜，去除溶剂，残余物用柱分离得无色非晶形固体为4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂十二烷，产率92.7％。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入0.28克(1.06mmol)2，6-二溴甲基吡啶和0.25克(2.36mmol)无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和0.34克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为2，6-双[4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基]吡啶，产率85％。
将1.3克(1.24mmol)上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为2，6-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)吡啶氢溴酸盐，产率80％。
3、桥联大环多胺与金属离子Zn(II)的络合将0.25克(0.24mmol)的上述化合物溶于5ml的高水中，加NaOH溶液调节pH强碱性，用CHCl3萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，蒸去CHCl3，得淡黄色液体。N2下，将此淡黄色油状液体溶于5ml无水乙醇中，加热至60℃，搅拌下，缓慢地滴入含有0.26g(0.7mmol)Zn(ClO4)2.6H2O的乙醇溶液5ml，加毕，搅拌反应过夜。冷却，过滤，固体用EtOH/H2O重结晶，得白色晶体，产率88.3％。m.p.＞300℃(dec)。
实施例2本实施例制备双核大环多胺Zn(II)配合物，桥R为基团b，结构式如下 R2＝CH3R3＝H工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入1.06mmol 2，6-二氯甲基-4-甲基苯酚和0.25克(2.36mmol)无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和0.34克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为2，6-双[4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基]-4-甲基-苯酚。产率83.9％。
将1.24mmol上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为2，6-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-4-甲基-苯酚氢溴酸盐，产率78％。
3、桥联大环多胺与金属离子Zn(II)的络合与实施例1相同。
实施例3本实施例制备双核大环多胺Zn(II)配合物，桥R为基团b，结构式如下 R2＝Cl R3＝H工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入1.06mmol2，6-二氯甲基-4-氯苯酚和0.25克(2.36mmol)无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和0.34克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为2，6-双[4，7，10-三(叔丁氧羰酰基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基]-4-氯-苯酚。产率83.9％。
将1.24mmol上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为2，6-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-4-氯-苯酚氢溴酸盐，产率78％。
3、桥联大环多胺与金属离子Zn(II)的络合与实施例1相同。
实施例4本实施例制备双核大环多胺Zn(II)配合物，桥R为基团b，结构式如下 R2＝Cl R3＝CH3工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入1.06mmol2，6-二氯甲基-4-氯苯甲醚和0.25克(2.36mmol)无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和0.34克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为2，6-双[4，7，10-三(叔丁氧羰酰基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基]-4-氯-苯甲醚。产率85％。
将1.24mmol上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为2，6-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-4-氯-苯甲醚氢溴酸盐，产率78％。
3、桥联大环多胺与金属离子Zn(II)的络合与实施例1相同。
实施例5本实施例制备双核大环多胺Zn(II)配合物，桥R为基团e，结构式如下 工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入1.06mmol2，9-二溴甲基菲罗啉和0.25克(2.36mmol)无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和0.34克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为2，9-双[4，7，10-三(叔丁氧羰酰基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基]-菲罗啉。产率63.9％。
将1.24mmol上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为2，9-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-菲罗啉氢溴酸盐，产率50％。
3、双核大环多胺与金属离子Zn(II)的络合与实施例1相同。
实施例6用实施例1～实施例5所制备的不同桥连基团的双核大环多胺Zn(II)配合物与桥连基团为R＝CH2CH2CH2、R＝CH2CH(OH)CH2的双核大环多胺Zn(II)配合物对质粒DNA进行催化水解试验。催化水解实验采用凝胶电泳技术。
1、仪器BDY-Z型恒压恒流电泳仪(上海博通贸易有限公司)FR-180A电泳槽(江苏海门麒麟医用仪器厂)pHS-3TC型数显酸度计(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)TG 328B型电光分析天平(湘仪天平仪器厂)GDS成像系统Olympus公司，Grab-IT2.0 Annotating Image Campture System，带UVP数码相机和White/UV，Fransillunimator。
2、试剂硼酸、蔗糖、溴酚蓝均为A.R质粒DNA(PUC18、PBR322)华美生物技术公司；Takara公司。
抗坏血酸(Vc)，EDTA二钠盐，NaNO3，NaCl用高水重结晶两次。
琼脂糖BR，Takara宝生物工程有限公司。
溴乙锭(EB)AR，Sigma公司产品。
三羟甲基胺基甲烷(Tris)用无水乙醇重结晶两次。
HEPESN-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸。
PIPES1，4-哌嗪-双(2-乙基磺酸)。
水为灭菌高纯水。
所用仪器均在0.10～0.15MPa下灭菌处理。
3、试剂的配制(1)10×TBE电泳缓冲液54gTris-base，4.65gEDTA二钠盐，27.5g硼酸，调节pH至8.00，加水至800mL。长期保存，用时稀释。
(2)凝胶加样缓冲液(6×)0.25％溴酚蓝，40％蔗糖水溶液，4℃保存，长期使用。
(3)溴乙锭染色液500mL(1×)电泳缓冲液(内含1μg/mL EB)。
4、操作步骤(1)将准确称量的琼脂糖加入到100mL的容器中，再加入40mLTBE缓冲液(1×)，将装有琼脂糖和TBE缓冲液的容器放在沸水中加热使琼脂糖颗粒溶解，冷却至60℃时倒入带梳子的水平槽中，室温下放置30-40分钟，然后将水平槽放入电泳槽中。
(2)加入电泳缓冲液(1×)，加入量以淹没胶面约1mm深为宜，然后取出梳子，令样品孔自然充满缓冲液。
(3)在各EP管中加入相应的双核大环多胺Zn(II)配合物、DNA、抗坏血酸Vc(还原剂)等，双核大环多胺Zn(II)配合物的浓度为25μmol/L，DNA的浓度为0.010-0.061μg/ml，抗坏血酸Vc(还原剂)的浓度为0.125-0.342Mm，控制pH＝6.00-7.50，离子强度I＝0.1左右；将EP管放入恒温水槽内，在37±0.5℃反应30-90分钟后，加入略多于双核大环多胺Zn(II)配合物摩尔数的EDTA溶液终止反应。
(4)在EP管中加入浓度为0.04M的磷酸氢二钠-盐酸缓冲液，制成样品溶液，混匀后用微量移液器加入凝胶样品孔中并盖上电泳槽，然后在4℃采用4V/cm电压降电泳(60V左右)，使DNA向阳极移动，观察溴酚蓝显示的电泳情况，当样品到达阳极终止电泳。
(5)取下凝胶，在含1ug/ml溴化乙锭的电泳缓冲液中浸泡染色30分钟、水中脱色10分钟后，用紫外灯观察，DNA呈显多条带，用GDS成像系统照相，所得琼脂糖凝胶电泳图为图1。
图1中，第1行图为未使用双核大环多胺Zn(II)配合物的试验结果；第2行图为用桥连基团R＝CH2CH2CH2的双核大环多胺Zn(II)配合物对质粒DNA进行催化水解的试验结果；第3行图为用桥连基团R＝CH2CH(OH)CH2的双核大环多胺Zn(II)配合物对质粒DNA进行催化水解的试验结果；第4～8行图为用实施例1～实施例5所制备的的双核大环多胺Zn(II)配合物对质粒DNA进行催化水解的试验结果。
从图1可以看出，本发明所提供的五种桥连基团R所构成的双核大环多胺Zn(II)配合物(见第4～8行图)对质粒DNA的催化水解效果明显优于桥连基团R＝CH2CH2CH2、R＝CH2CH(OH)CH2所构成的双核大环多胺Zn(II)配合物(见第2、3行图)，其中，实施例4、实施例5所制备的双核大环多胺Zn(II)配合物(见第7、8行图)的催化水解活性更高。
实施例7本实施例制备双核大环多胺Cu(II)配合物，桥R为基团a，结构式如下 R1＝H工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入1.06mmol2，6-二苄溴(2.36mmol)，加入0.25克无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和0.34克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为2，6-双[4，7，10-三(叔丁氧羰酰基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基]-苯。产率73.9％。
将1.24mmol上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为2，6-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-苯氢溴酸盐，产率58％。
3、桥联大环多胺与金属离子Cu(II)的络合将0.24mmol的上述化合物溶于5ml的高水中，加NaOH溶液调节pH强碱性，用CHCl3萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，蒸去CHCl3，得淡黄色液体。N2下，将此淡黄色油状液体溶于5ml无水乙醇中，加热至60℃，搅拌下，缓慢地滴入含有0.7mmolCu(ClO4)2.6H2O的乙醇溶液5ml，加毕，搅拌反应过夜。冷却，过滤，固体用EtOH/H2O重结晶，得白色晶体，产率80％。
实施例8本实施例制备双核大环多胺Ca(II)配合物，桥R为基团d，结构式如下 R4＝H工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成N2气保护下，将1.0克(2.12mmol)化合物-4，7，10-三(叔丁氧羰酰)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷溶于50ml无水乙腈中，加入1.06mmol4，4′-二溴甲基联二苯和0.25克(2.36mmol)无水Na2CO3，回流反应72h，过滤除去不溶物，蒸出溶剂，残余物用水溶解，CHCl3萃取，合并有机相，用无水Na2SO4干燥，除去溶剂。残余物溶于无水无醇氯仿中，冰浴下，加入0.3g(0.21mmol)三乙胺和034克苄氧羰酰氯，室温反应过夜，减压蒸去溶剂，残余物用硅胶H柱层析分离，得无色无定形固体为4，4’-双(4，7，10-三(叔丁氧羰酰基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-联二苯。产率70％。
将1.24mmol上述化合物溶于20ml无水乙醇中，冰浴搅拌下，缓慢地滴加入15ml40％HBr溶液，室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，残余物用EtOH/24％HBr重结晶，得白色晶体为4，4’-双(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-甲基)-联二苯氢溴酸盐，产率48％。
3、桥联大环多胺与金属离子Ca(II)的络合将0.24mmol的上述化合物溶于5ml的高水中，加NaOH溶液调节pH强碱性，用CHCl3萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，蒸去CHCl3，得淡黄色液体。N2下，将此淡黄色油状液体溶于5ml无水乙醇中，加热至60℃，搅拌下，缓慢地滴入含有0.7mmolCa(ClO4)2.6H2O的乙醇溶液5ml，加毕，搅拌反应过夜。冷却，过滤，固体用EtOH/H2O重结晶，得白色晶体，产率85.1％。
实施例9本实施例制备双核大环多胺Ni(II)配合物，桥R为基团b，结构式如下 R2＝CH3R3＝H工艺步骤为1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成与实施例2相同。
3、桥联大环多胺与金属离子Ni(II)的络合将0.24mmol的上述化合物溶于5ml的高水中，加NaOH溶液调节pH强碱性，用CHCl3萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，蒸去CHCl3，得淡黄色液体。N2下，将此淡黄色油状液体溶于5ml无水乙醇中，加热至60℃，搅拌下，缓慢地滴入含有0.7mmolNi(ClO4)2.6H2O的乙醇溶液5ml，加毕，搅拌反应过夜。冷却，过滤，固体用EtOH/H2O重结晶，得白色晶体，产率82％。
实施例10本实施例制备双核大环多胺Cd(II)配合物，桥R为基团b，结构式如下 R2＝Cl R3＝CH3工艺步骤为
1、大环多胺的合成与实施例1相同。
2、桥联大环多胺溴酸盐的合成与实施例4相同。
3、桥联大环多胺与金属离子Cd(II)的络合将0.24mmol的上述化合物溶于5ml的高水中，加NaOH溶液调节pH强碱性，用CHCl3萃取，合并有机相，无水Na2SO4干燥，蒸去CHCl3，得淡黄色液体。N2下，将此淡黄色油状液体溶于5ml无水乙醇中，加热至60℃，搅拌下，缓慢地滴入含有0.7mmolCd(ClO4)2.6H2O的乙醇溶液5ml，加毕，搅拌反应过夜。冷却，过滤，固体用EtOH/H2O重结晶，得白色晶体，产率80％。
权利要求
1.一种双核大环多胺金属配合物，其结构式如下 上述结构式中，R为桥，M为金属离子，R是下述五种基团中的任一种基团。 R1，R2，R3，R4，R5＝烷基或H
2.根据权利要求1所述的双核大环多胺金属配合物，其特征在于M为Zn2+或Cu2+或Cd2+或Ca2+或Ni2+金属离子。
3.权利要求1或权利要求2所述的双核大环多胺金属配合物作为DNA和RNA水解催化剂的应用。
全文摘要
本发明提供的双核大环多胺金属配合物具有如下的结构式上述结构式中，R为桥，M为金属离子。此种双核大环多胺金属配合物作水解催化剂用，能在生理条件下，低浓度(浓度可低至5μmol/L)、短时间(水解时间30分钟左右)内有效的切割DNA和RNA，切割反应的选择性好，无带切口环状DNA和RNA出现，并且切割方式也与限制性内切酶相似。
文档编号C07F15/04GK1528763SQ200310110730
公开日2004年9月15日 申请日期2003年10月14日 优先权日2003年10月14日
发明者谢如刚, 余孝其, 向清祥, 夏传琴 申请人:四川大学