一种制备布舍瑞林的方法
【专利摘要】本发明提供一种通过固相合成布舍瑞林树脂并在碱性条件下使肽链与树脂分离而制备布舍瑞林的方法。
【专利说明】一种制备布舍瑞林的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种制备瑞林类药物的方法，更具体地，涉及一种固相合成瑞林类药物的方法。
【背景技术】
[0002]布舍瑞林是一种促黄体生成素释放激素类似物，短期小剂量给药用于治疗性功能低下、不排卵、青春期迟缓等；长期大剂量给药时，用于治疗一些激素依赖性疾病，如前列腺癌、子宫肌瘤、乳腺癌、子宫内膜异位症及青春期性早熟等。其不仅易吸收、生物利用度高、生物活性强，而且疗效显著，具有广阔的市场前景。
[0003]目前，其合成方法主要有液相合成和固相合成。其中，液相合成的反应和纯化步骤繁杂，造成生产率低，所以应用价值不高。固相合成是用树脂、玻璃等作为载体，使氨基酸以一定的顺序逐一偶联，延长肽链，然后使肽链与载体分离，得到全肽。固相合成克服了液相合成的上述缺点，成为合成肽类化合物的首选方法。传统的固相合成中，使肽链与载体分离通常采用酸裂解法，所用试剂为氢氟酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等，但是该条件通常会引起一些副反应，不仅会降低产率，而且还增加纯化难度，不利于生产。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种通过在碱性条件下使固相合成的肽链与树脂分离而制备布舍瑞林的方法，包括:
[0005]I)使Fmoc-Pro-OH与羟基树脂在偶联剂体系和有机碱的存在下于溶剂中反应，生成 Fmoc-Pro-树脂；
`[0006]2)使Fmoc-Pro-树脂在有机碱的存在下脱除Fmoc，然后使其在偶联剂体系和有机碱的存在下于溶剂中与Fmoc-Arg(R1)-OH偶联，重复脱Fmoc和偶联的步骤，依次偶联 Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser (tBu)-OH、Fmoc-Tyr (R2)-OH、Fmoc-Ser (R3)-0H、Fmoc-Trp (R4) -OH、Fmoc-His (Trt) -OH 和 Pyr-OH,得到妝树脂 Pyr-His (Trt) -Trp (R4) -Ser (R3) -Tyr (R2) -D一Ser (tBu) -Leu-Arg (R1) -Pro-树脂；
[0007]3)使肽树脂与乙胺在溶剂中反应,生成全保护肽Pyr-His (Trt) -Trp (R4) -Ser (R3)-Tyr (R2) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (R1) -Pro-NHEt ；
[0008]4)使全保护肽脱除侧链，得到布舍瑞林；
[0009]其中
[0010]R1 为 H、NO2 或 HCl ;
[0011]R2 为 H、2-ClTrt、4-N02Z *Bzl ；
[0012]R3 为 H 或 Trt ;
[0013]R4 为 H 或 2-ClTrt。
[0014]本发明方法避免了现有技术中酸裂解法导致的副反应，进而提高了产率并降低了纯化难度。【具体实施方式】
[0015]本文中，“替代度”指的是单位量的树脂负载的物质(例如苯甲酸或氨基酸等)的数量，单位为“mmol/g”。
[0016]本文中，“适量”表示所修饰的物质的用量对反应而言不是关键的，只要能达到所需目的即可，无需限于一个具体范围，而且还可以一次添加或分多次添加，本领域技术人员可以根据经验结合实际情况进行选择，例如通过检测反应终点来控制用量。
[0017]本文中，“适当时间”表示所修饰的时间对反应而言不是关键的，只要能达到所需目的即可，无需限于一个具体范围，本领域技术人员可以根据经验结合实际情况进行选择，例如通过检测反应终点来控制时间。
[0018]本文中出现的缩写所表示的中文含义列举在表1中。
[0019]表1.文中缩写的含义
[0020]
【权利要求】
1.一种制备布舍瑞林的方法，包括: 1)使Fmoc-Pro-OH与羟基树脂在偶联剂体系和有机碱的存在下于溶剂中反应，生成Fmoc-Pro-树脂； 2)使Fmoc-Pro-树脂在有机碱的存在下脱除Fmoc，然后使其在偶联剂体系和有机碱的存在下于溶剂中与Fmoc-Arg (R1) -OH偶联，重复脱Fmoc和偶联的步骤，依次偶联 Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser (tBu)-OH、Fmoc-Tyr (R2)-OH、Fmoc-Ser (R3)-0H、Fmoc-Trp (R4) -OH、Fmoc-His (Trt) -OH 和 Pyr-OH,得到妝树脂 Pyr-His (Trt) -Trp (R4) -Ser (R3) -Tyr (R2) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (R1) -Pro-树脂； 3)使肽树脂与乙胺在溶剂中反应，生成全保护肽Pyr-His(Trt) -Trp (R4) -Ser (R3) -Tyr(R2) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (R1) -Pro-NHEt ； 4)使全保护肽脱除侧链，得到布舍瑞林； 其中
R1 为 H、NO2 或 HCl ；
R2 为 H、2-ClTrt、4-N02Z 或 Bzl ;
R3 为 H 或 Trt ;
R4 为 H 或 2-ClTrt。
2.权利要求1的方法，其中 R1优选为H或NO2,更优选为NO2 `； R2优选为H或2-ClTrt，更优选为H ； R3优选为Trt ； R4优选为H。
3.权利要求1或2的方法，其中在步骤3)中，乙胺溶液中乙胺的体积浓度为5-95%，优选10-90%，更优选15-85% ;乙胺溶液的用量为2-20mL/g树脂，优选5_15mL/g树脂，更优选8-12mL/g树脂。
4.权利要求1或2的方法，其中在步骤3)在室温下进行。
5.权利要求1或2的方法，其中在步骤4)中，可采用氢化还原法脱除侧链，其中所用催化剂为钼碳、钯碳或雷尼镍，反应在加压下于室温进行。
6.权利要求1或2的方法，其中步骤4)中的布舍瑞林可采用所有常用于纯化肽的方法进行纯化，例如，但不限于，不良溶剂沉淀法、HPLC、凝胶色谱或离子色谱，优选先用不良溶剂沉淀，再借助HPLC进一步纯化。
7.权利要求1或2的方法，其中所用羟基树脂可为，但不限于，Wang树脂、Pam树脂或HMBA 树脂，其替代度可为 0.05-2.0mmol/g,优选 0.08-1.5mmol/g,更优选 0.1一1.2mmol/g。
8.权利要求1或2的方法，其中步骤I)结束后，树脂的替代度可为0.05-2.0mmoI/g,优选 0.08-1.Smmol /g,更优选 0.1-0.8mmol/g。
9.权利要求1或2的方法，其中在步骤I)中，Fmoc-Pro-OH与羟基树脂与反应之后，优选地在适量的上述有机碱的存在下用适量的酸酐(例如，但不限于，甲酸酐、乙酸酐、丙酸酐、异丙酸酐或丁酸酐，优选乙酸酐)处理树脂。
10.权利要求1或2的方法，其中在步骤2)中，使Fmoc脱除的试剂优选体积浓度为5-90 %，优选10-70 %，更优选15-50 %的哌啶的DMF溶液，其用量不受限制，适量即可。
【文档编号】C07K1/04GK103517915SQ201280010255
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年9月27日 优先权日:2012年9月27日
【发明者】张文治, 潘俊锋, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司