析。
[0111] 接下来记疏水性层析的实施条件。
[0112] 柱装载量：50kg
[0113] 柱：SP-207(1000L容量柱；日本练水）
[0114] 溶出液：0, 50%浓度的乙醇溶液
[0115] 流速：2000L/小时
[0116] 循环：4个循环
[0117] 从填充疏水性吸附树脂的柱的溶出是根据醇浓度进行2次分级分离，分取各 8000L的2个级分。对各级分用试验例1的方法测定ACE抑制活性的结果，0%或50%乙醇 溶出级分的ACE抑制活性值IC 5tl各自未检测，是0. 047 mg/ml。重复分取4个循环，得到蛋 白质量74. 9kg。
[0118] 接下来，使由疏水性层析得到的ACE抑制活性级分（50%乙醇溶出级分）通过超滤 膜（GE公司制模块7. 9英寸X40英寸X2条、过滤面积48. 4m2;分子量1000、压I. 8MPa ;型 号GE8040F1002)，在非透过液得到20倍浓缩液。测定非透过液和透过液的ACE抑制活性， 在透过液得到0. 〇34mg/ml、在非透过液得到0. 110mg/ml的值。
[0119] 减压浓缩透过液，喷雾干燥，大量生产蛋白质量47. 6kg的粉末。收支表示于表1。
[0120] 【表1】工业生产中的每纯化过程的蛋白收支和ACE抑制比活性和全活性
【主权项】
1. 含有鲣、鲣荒节、鲣枯节、宗田鲣、宗田鲣节、沙丁鱼、沙丁鱼节、竹荚鱼、竹荚鱼节、 鲭、鲭节、煮干、或者其他杂节的鱼肉性蛋白质来源的、具有血管紧张素转化酶抑制活性的 二肽的组合物，其特征在于，含有选自下列的至少1种二肽和/或它们的酸加成盐： 由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-酪氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-天冬酰胺的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、 由甲硫氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由异亮氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由谷氨酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由甘氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由丙氨酸-色氨酸的序列组成的二肽。
2. 权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-酪氨酸的氨基酸序列组成的二肽、及 由色氨酸-天冬酰胺的氨基酸序列组成的二肽。
3. 权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、 由甲硫氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由异亮氨酸-色氨酸的序列组成的二肽。
4. 权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由谷氨酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由甘氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由丙氨酸-色氨酸的序列组成的二肽。
5. 权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-酪氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-天冬酰胺的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、 由甲硫氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由异亮氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由谷氨酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由甘氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由丙氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、和/或 它们的酸加成盐。
6. 加工食品或特定保健用食品，其特征在于，含有权利要求1?5之任一项所述的组合 物。
7. 医药组合物，其特征在于，含有权利要求1?5之任一项所述的组合物。
8. 权利要求7所述的医药组合物，其中上述医药组合物是降压剂组合物。
9. 含有选自下列的至少1种二肽及/或这些的酸加成盐的组合物的制造方法： 由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-酪氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-天冬酰胺的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、 由甲硫氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由异亮氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由谷氨酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由甘氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由丙氨酸-色氨酸的序列组成的二肽， 其特征在于包括： (1) 用热水提取鲣、鲣荒节、鲣枯节、宗田鲣、宗田鲣节、沙丁鱼、沙丁鱼节、竹荚鱼、竹荚 鱼节、鲭、鲭节、煮干、或者其他杂节的鱼肉性蛋白质， (2) 粉碎其热水提取节上残留的水不溶性蛋白质，将得到的粉碎物分散到水分而得到 的该水不溶性蛋白质的粒子和蛋白酶在pH5. 0?9. 0的最适条件下，于40?60°C的温度反 应，由此进行该水不溶性蛋白质的酶的水解，其后，使酶反应停止，然后从得到的含水的水 解反应混合物除去水不溶性的粒子，由此，收得含疏水性一亲水性高分子一低分子肽及水 溶性氨基酸的水溶液， (3)将从该水溶液由疏水性树脂柱法得到的吸附级分再装载到超滤（分子量1000)而 通过透过最终纯化。
10. 组合物，其由权利要求9所述的制造方法得到。
11. 权利要求10所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-酪氨酸的氨基酸序列组成的二肽、及 由色氨酸-天冬酰胺的氨基酸序列组成的二肽。
12. 权利要求10所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、 由甲硫氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由异亮氨酸-色氨酸的序列组成的二肽。
13. 权利要求10所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由谷氨酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由甘氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由丙氨酸-色氨酸的序列组成的二肽。
14. 权利要求10所述的组合物，其特征在于，上述组合物含有： 由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-酪氨酸的氨基酸序列组成的二肽、 由色氨酸-天冬酰胺的氨基酸序列组成的二肽、 由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、 由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、 由甲硫氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由异亮氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、 由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由谷氨酰胺-色氨酸的序列组成的二肽、 由甘氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、及 由丙氨酸-色氨酸的序列组成的二肽。
15. 加工食品或特定保健用食品，其含有权利要求10?14之中任一项所述的组合物。
16. 医药组合物，其含有权利要求10?14之中任一项所述的组合物。
17. 权利要求16所述的组合物，其中上述医药组合物是降压剂组合物。
【专利摘要】【课题】提供具有抑制血管紧张素转化酶的活性，由此示血压降低作用的有用的鲣节等来源的含有二肽的组合物。【解决手段】含有鱼肉性蛋白质来源的、具有血管紧张素转化酶抑制活性的二肽的组合物，其特征在于，含有选自下列的至少1种二肽和/或它们的酸加成盐：由色氨酸-亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、由亮氨酸-色氨酸的氨基酸序列组成的二肽、由色氨酸-异亮氨酸的氨基酸序列组成的二肽、由缬氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、由色氨酸-酪氨酸的序列组成的二肽、由色氨酸-甲硫氨酸的序列组成的二肽、由丝氨酸-色氨酸的序列组成的二肽、由天冬酰胺-色氨酸的序列组成的二肽等。
【IPC分类】C07K5-078, A61P9-12, A23L1-305, A61K38-00, C07K5-072, C07K5-062, A61P43-00
【公开号】CN104583227
【申请号】CN201380042777
【发明人】关英治, 朝田仁
【申请人】雅妈喜股份有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年4月10日
【公告号】US20150183822, WO2014002571A1