>[0350] ?使用Bradford测定方法，以BSA作为标准物来测定蛋白质浓度。
[0351] ?在-80 °C冷冻膜蛋白。
[0352] 化合物制备
[0353] 所有化合物的溶液都是通过例如Janus或Precision2000的微板液体处理设备 制备。溶解于DMS0中的化合物被储存在冰箱中。自于100%DMS0中的30mM制备化合物。
[0354] 步骤1 :剂量板制备（96孔板）
[0355] ?添加3μL[30mM]化合物储备液至板上的第1列中。
[0356] ?添加 15μL100 %DMS0 至第 1 列中。
[0357] ?添加 10. 81μL100%DMS0 至第 2-12 列中。
[0358] ?自第1列转移5 μ L至第2列中（半对数稀释）。
[0359] ?自第2列转移5μL至第3列中（半对数稀释）。
[0360] ?自第3列转移5 μ L至第4列中（半对数稀释）。
[0361] ?自第4列转移5 μ L至第5列中（半对数稀释）。
[0362] ?自第5列转移5 μ L至第6列中（半对数稀释）。
[0363] ?自第6列转移5 μ L至第7列中（半对数稀释）。
[0364] ?自第7列转移5 μ L至第8列中（半对数稀释）。
[0365] ?自第8列转移5 μ L至第9列中（半对数稀释）。
[0366] ?自第9列转移5 μ L至第10列中（半对数稀释）。
[0367] ?自第10列转移5 μL·至第11列中（半对数稀释）。
[0368] ?自第11列转移5 μL·至第12列中（半对数稀释）。
[0369] 所有化合物都是使用Precision2000微板液体处理设备稀释。最高化合物浓度 是用100%DMS0获得的5mM。
[0370] 步骤2 :工作板制备（96孔板）
[0371] ?化合物用缓冲液稀释50倍。
[0372] ?添加49 μ L缓冲液至96孔板的孔中。
[0373] ?将1 μ L化合物溶液自剂量板转移至工作板的相应孔中。
[0374] ?最高化合物浓度是用2%DMS0获得的100μΜ。
[0375] 步骤3 :测定板制备（96孔板）
[0376] 通过Janus将15 μ L化合物溶液自工作板的各孔转移至测定板的孔中。在各板中 一式两份测定各化合物并且每板有4种化合物。
[0377] 用于ΑΤ2受体结合测定的方法
[0378] ?将12(^1^膜（511^蛋白质/孔）与15 41^[1251]-〇6?42112八和15 41^化合物一起 在RT温育1. 5小时。
[0379] ?通过经UnifilterGF/C板（于0· 3% (ν:v)BSA中预浸渍）快速过滤来终止结 合反应。
[0380] ?用冰冷的洗涤缓冲液将板洗涤三次。
[0381] ?在37 °C将过滤板干燥过夜。
[0382] ?添加50μL闪烁混合物至各孔中。
[0383] ?使用MicroBetaTrilux微板闪烁计数器测定放射性。
[0384] 数据分析
[0385] 使用Prism 5. 0软件通过4参数逻辑分析数据。
[0386] 结果显示于下表中：
[0387]
[0388] 参考文献
[0389]Anand 等人，2012, Angiotensin II Type 2receptor (AT2R) localization and antagonist-mediated inhibition of capsaicin responses and neurite outgrowth in human and rat sensory neurons, Eur. J Pain, 17 (7):1012-1026.
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【主权项】
1.式⑴化合物：其中札是-C ( = 0) CHR6R7、-C ( = 0) NR6R7、-C ( = 0) CH2CHR6R7、-C ( = 0) CH = CR6R7、-C (= S) CHR6R7、-C ( = S) NR6R7、-C ( = S) CH2CHR6R7、-C ( = S) CH = CR6R7、-C ( = NR8) CHR6R7、-C (= NR8) NR6R7^ -C ( = NR8) CH2CHR6R7^P -C ( = NR 8) CH = CR6R7; 私和R3中的一个是氢或氧代（=〇)并且另一个是羧酸、-CH 2C02H、-C ( = 0)-2-葡糖 醛酸、_C( = 0)C( = 0)0H、-CH20H、-C( = 0)NH2、-CH2C( = 0)NH2、-CN、-CH2CN、羧酸生物电 子等排体或-CH2-羧酸生物电子等排体； R4是氢、R 9、-C16烷基 R 9、-C2 6链烯基 R 9、-C2 6炔基 R 9、-OH、-0R9、-OC16烷基 R 9、-OC2 6 链烯基 R9、-OC2 6炔基 R9、_NHC( = 0)R9、-NHC( = 0)(； 6烷基 R9、_NHC( = 0)C2 6链烯基 R9、-NHC ( = 0) C2 6炔基 R 9、-NHC ( = 0) NHR9、-NHC ( = 0) NHC1 6烷基 R9、-NHC ( = 0) NHC2 6链烯 基 R9、-NHC ( = 0) NHC2 6炔基 R 9、-NHC ( = 0) OR9、-NHC ( = 0) OC1 6烷基 R 9、-NHC ( = 0) OC2 6链 烯基 R9、-NHC ( = 0) OC2 6炔基 R9、-NHSO2R9、-NHSO2C 1 6烷基 R9、-NHSO2C2 6链烯基 R9、-NHSO2C2 6 炔基 R9、-S02NHR9、-SO2NHC 1 6烷基 R 9、-SO2NHC2 6链烯基 R 9、-SO2NHC2 6炔基 R 9、-C( = 0) NHR9、-C ( = 0) NHC1 6烷基 R 9、-C ( = 0) NHC2 6链烯基 R 9、-C ( = 0) NHC2 6炔基 R 9、-C ( = 0) R9、-C( = 0)C16烷基 R9、-C( = 0)C26链烯基 R9、-C( = 0)C26炔基 R9、-C( = 0)0R9、-C(= 〇) OC16烷基 R 9、-C ( = 0) OC2 6链烯基 R 9、-C ( = 0) OC2 6炔基 R 9、-C ( = 0) NHR9、-C ( = 0) NHC1 6烷基 R 9、-C ( = 0) NHC2 6链烯基 R 9或-C ( = 0) NHC 2 6炔基 R 9; R5是氢、_〇H、-C丨6烷基、-OC丨6烷基、-C(R iq)3、-OC(Riq)3、芳基、-C16烷基芳基或-OC ! 6 烷基芳基； &和R 7独立地是氢、-C i 6烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂芳基、-CH 2芳基、-CH 2 环烷基、_〇12环烯基、-CH 2杂环基或-CH 2杂芳基；条件是R 6和R 7不都是氢； R8是氢、-C i 6烷基、芳基或-C i 6烷基芳基； Rg是环烷基、环烯基、芳基、杂环基或杂芳基； Rl。各自独立地选自氣和卤素；并且其中烷基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂 环基和杂芳基各自可以任选被取代； 或其可药用盐； 条件是： ⑴RjPR5不都是氢；并且 (ii)当私是-CH 20H、CO2H或羧酸生物电子等排体并且R4是氢、苯基、-0苯基、-C i 4烧 基苯基或-OC1 4烷基苯基，其中烷基是未取代的，联苯基、-0联苯基、萘基或-0萘基时，R5不 是氢、-OC 1 6烷基、苯基、苄基、萘基、联苯基或-0芳基。2. 权利要求1的化合物，其中R1是_C( = 0)CH(芳基）（芳基）、-C( = 0)CH(芳基） (环烷基）、-C( = 0)CH(环烷基）（环烷基）、-C( = 0)N(芳基）（芳基）、-C( = 0)N(芳 基）（环烷基）或_C( = 0)N(环烷基）（环烷基）。3. 权利要求2的化合物，其中R1是-C( = 0)CH(苯基）（苯基）、-C( = 0)CH(苯基） (环己基）、-C( = 0)CH(环己基）（环己基）、-C( = 0)N(苯基）（苯基）、-C( = 0)N(苯 基）（环己基）或-C( = 0)N(环己基）（环己基），其中苯基或环己基各自任选被一个或多 个选自-C1 3烷基、-OC i 3烷基和卤素的取代基取代。4. 权利要求1至3任一项的化合物，其中R 3是氢，并且R 2是-CO 2H、-CH2C02H、-C(= 0)C( = 0)0H、-C( = (D)NHSO2C1 6烷基、-C( = 0)NHS0 2苯基、-C( = 0)NHS0 2CF3、-C(= 0) NHSO2N(C1 6烷基）2、-C ( = 0) NHSO2NH(C1 6烷基）、-C ( = 0) NHSO 2N(CF3) 2、-C ( = 0) NHSO2NH(CF3)、-SO3H 或-PO3H2。5. 权利要求4的化合物，其中R2是-CO 2H或-C( = 0)NHSO2N(C1 4烷基）2。6. 权利要求1至5任一项的化合物，其中R4是-OH、-芳基、-杂环基、-杂芳基、-C i 6 烷基芳基、-OC1 6烷基芳基、-C 2 6链烯基芳基、-OC 2 6链烯基芳基、-C 2 6炔基芳基、-OC 2 6炔基 芳基、-SO2NH芳基、-SO2NHC1 6烷基芳基、-SO 2NHC2 6链烯基芳基、-SO 2NHC2 6炔基芳基、-NHSO 2 芳基、-NHSO2C1 6烷基芳基、-NHSO 2C2 6链烯基芳基、-NHSO 2C2 6炔基芳基、-NHC ( = 0) NH芳 基、-NHC( = 0)NHC1 6烷基芳基、-NHC( = 0)NHC26链烯基芳基、-NHC( = 0)NHC26炔基芳 基、-NHCO2芳基、-NHCO A 6烷基芳基、-NHCO 2C2 6链烯基芳基、-NHCO 2C2 6炔基芳基，它们各 自可以任选被取代。7. 权利要求6的化合物，其中R4是苯基、苯并3霉唑、4-苯基3恶唑、1-哌啶、4-苯 基-1-哌啶、-C 1 6烷基苯基、-OC1 6烷基苯基、-C2 6链烯基苯基、-OC2 6链烯基苯基、-C2 6炔基 苯基、-OC2 6炔基苯基、-SO 2NH苯基、-SO2NHC1 6烷基苯基、-SO 2NHC2 6链烯基苯基、-SO 2NHC2 6 炔基苯基、-NHSO2苯基、-NHSO 2Q 6烷基苯基、-NHSO 2C2 6链烯基苯基、-NHSO 2C2 6炔基苯 基、-NHC ( = 0) NH 苯基、-NHC ( = 0) NHC1 6烷基苯基、-NHC ( = 0) NHC 2 6链烯基苯基、-NHC (= 0) NHC2 6炔基苯基、-NHCO 2苯基、-NHCO A 6烷基苯基、-NHCO 2C2 6链烯基苯基、-NHCO 2C2 6炔 基苯基。8. 权利要求7的化合物，其中R4是苯基、苯并唑、4-苯基$恶唑、1-哌啶、4-苯 基-1-哌啶、-C1 3烷基苯基、-OC1 3烷基苯基、-C2 3链烯基苯基、-OC2 3链烯基苯基、-C2 3炔基 苯基、-OC2 3炔基苯基、-SO 2NH苯基、-SO2NHC1 3烷基苯基、-SO 2NHC2 3链烯基苯基、-SO 2NHC2 3 炔基苯基、-NHSO2苯基、-NHSO 2Q 3烷基苯基、-NHSO 2C2 3链烯基苯基、-NHSO 2C2 3炔基苯 基、-NHC ( = 0) NH 苯基、-NHC ( = 0) NHC1 3烷基苯基、-NHC ( = 0) NHC 2 3链烯基苯基、-NHC (= 0) NHC2 3炔基苯基、-NHCO 2苯基、-NHCO A 3烷基苯基、-NHCO 2C2 3链烯基苯基或-NHCO 2C2 3炔 基苯基。9. 权利要求1至8任一项的化合物，其中R 5是氢、-OH、-OC i 6烷基或-OC (R 10) 3 〇10. 权利要求9的化合物，其中R 5是-OH、-OC i 6烷基或OC(R 1Q)3。11. 权利要求10的化合物，其中R 5是-OH、-OCH 3、-OCF3S -OCHF 2。12. 药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至11任一项的式（I)化合物或其可 药用盐和可药用载体。13. 治疗或预防个体的神经病性疼痛的方法，所述方法包括施用权利要求1至11任一 项的式（I)化合物或其可药用盐。14. 治疗或预防个体的特征在于神经元超敏性的病症的方法，所述方法包括施用权利 要求1至11任一项的式（I)化合物或其可药用盐。15. 治疗或预防个体的炎性疼痛的方法，所述方法包括施用权利要求1至11任一项的 式（I)化合物或其可药用盐。16. 治疗或预防个体的神经传导速度受损的方法，所述方法包括施用权利要求1至11 任一项的式（I)化合物或其可药用盐。17. 在个体中产生镇痛的方法，所述方法包括施用权利要求1至11任一项的式（I)化 合物或其可药用盐。18. 治疗或预防个体的细胞增殖障碍的方法，所述方法包括施用权利要求1至11任一 项的式（I)化合物或其可药用盐。19. 治疗或预防个体的与骨再吸收和骨形成之间的不平衡相关的障碍的方法，所述方 法包括施用权利要求1至11任一项的式（I)化合物或其可药用盐。20. 治疗个体的与神经再生异常相关的障碍的方法，所述方法包括施用权利要求1至 11任一项的式（I)化合物或其可药用盐。
【专利摘要】本发明通常涉及可用于拮抗血管紧张素II？2型(AT2)受体的化合物。更特别的是，本发明涉及取代的异喹啉化合物及其作为AT2受体拮抗剂的用途。描述了包含化合物的药物组合物和它们在调节AT2受体中的用途以及需要调节AT2受体的疗法。
【IPC分类】A61K31/472, C07D217/26, A61P25/02, A61K31/522, A61K31/4375
【公开号】CN105358532
【申请号】CN201480038866
【发明人】T·D·麦卡锡, A·内勒尔
【申请人】诺华股份有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年7月8日
【公告号】EP3019477A1, US20160145213, WO2015003223A1