一种单克隆抗体及其应用_3

文档序号:9779494阅读:来源:国知局
酶标羊抗鼠多抗、酶标羊抗鼠二抗。
[0058] 作为本发明的一种实施方式,所述抗原检测试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体 PCV2-McABl和/或有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,以及用于对猪圆环病毒2型进行抗 原抗体反应进行检测的检测试剂、阴性对照、阳性对照。
[0059] 作为本发明的一种实施方式,所述抗原检测试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体 PCV2-McABl和/或有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,以及用于对猪圆环病毒2型进行抗 原抗体反应进行检测的检测试剂、阴性对照、阳性对照;其中,所述单克隆抗体PCV2-McABl 选自下列抗猪圆环病毒2型单克隆抗体2F8、3G12、C4D2、E3D4、3B2F4、9C3D2、B69、2E9;其中, 所述单克隆抗体PCV2-McABl为2F8或3G12。
[0060] 本发明还涉及一种抗原检测试剂盒,其中,所述抗原检测试剂盒包括有效量的所 述单克隆抗体PCV2-McABl、有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,以及用于对猪圆环病毒2 型进行抗原抗体反应进行检测的检测试剂;其中,所述抗原检测试剂盒包括缓冲液供应单 元和酶免疫层析检测试纸条;所述缓冲液供应单元用于将缓冲液供给所述酶免疫层析检测 试纸条;所述酶免疫层析检测试纸条包括硝酸纤维素膜(1 ),所述酶免疫层析检测试纸条在 纵向上依次包括底物供应区、样品供应区、检测区;所述底物供应区包括底物垫(3),其上吸 附有干燥的酶底物,所述底物垫(3)与硝酸纤维素膜(1)接触,所述酶底物溶于缓冲液中并 在硝酸纤维素膜(1)上向距所述缓冲液供应单元的远端迀移;所述样品供应区包括酶标垫 (2),其上吸附有酶标记的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,所述酶底物能与所述单克隆抗体 PCV2-McAB2上标记的酶产生显色反应,所述酶标垫(2)与硝酸纤维素膜(1)接触,所述单克 隆抗体PCV2-McAB2溶于缓冲液中并在硝酸纤维素膜(1)上向距所述缓冲液供应单元的远端 迀移;以及所述检测区固定化有所述单克隆抗体PCV2-McABl;其中,所述缓冲液供应单元包 括展开液垫(5 )、底物缓冲液槽(8 )、底物缓冲液(9)和缓冲液按钮,所述底物缓冲液(9)放置 于底物缓冲液槽(8)中,所述缓冲液按钮位于底物缓冲液槽(8)的上方,按下可将所述展开 液垫(5)浸入缓冲液(9)中;所述检测区包括一条检测线(6)、一条质控线(7),其中,所述质 控线(7)较检测线(6)更远离所述样品供应区,在所述检测线(6)上固定化有所述单克隆抗 体PCV2-McABl,在所述质控线(7)上固定化有羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗,且吸附在酶标垫 (2)上的酶标记的所述单克隆抗体PCV2-McAB2对于固定在检测线(6)上的所述单克隆抗体 PCV2-McABl而言是过量的;所述硝酸纤维素膜(1)全段粘附在所述支撑物(10)上,支撑物 (10)连接所述缓冲液供应单元,底物供应区,样品供应区,检测区以及吸水垫(4),所述吸水 垫(4)在距所述缓冲液供应单元的最远端;以及检测样品(11)加入的位置为所述酶标垫(2) 的位置。
[0061] 作为本发明的一种实施方式,所述抗原检测试剂盒中的所述酶免疫层析检测试纸 条包括固相的硝酸纤维素膜1、含有标记试剂的酶标垫2、底物垫3、吸水垫4、展开液垫5、检 测线6、质控线7、底物缓冲液槽8、底物缓冲液9、支撑物10,其中2属于样品供应区,3属于底 物供应区,5、8属于缓冲液供应单元,6、7属于检测区。检测样品11加入的位置为酶标垫2的 位置。所述检测试纸条固定在塑料外壳中,其上从左到右依次固定展开液垫5、底物垫3、酶 标垫2、吸水垫4。硝酸纤维素膜1粘附在支撑物10的全段;吸水垫4卡在硝酸纤维素膜1的顶 端,且与硝酸纤维素膜1有重叠;酶标垫2位于硝酸纤维素膜1的中段,上面干燥有酶标记的 所述单克隆抗体2;底物垫3卡在硝酸纤维素膜1的底端,其上有干燥的酶底物。展开液垫5的 上端覆盖了底物垫3,且其下端位于底物缓冲液槽8的底端。底物缓冲液槽8的上面覆盖了一 层铝箱纸,以防止底物缓冲液9渗漏,其上有缓冲液按钮,按下缓冲液按钮可刺破铝箱纸,并 将展开液垫5的下端浸入到底物缓冲液9中。检测线6位于硝酸纤维素膜1的中上端,其上固 定化有所述单克隆抗体PCV2-McABl。质控线7位于硝酸纤维素膜1的中上端、检测线6的上 游,其上固定化有羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗。
[0062] 本发明还涉及一种抗原检测试剂盒,其中,所述抗原检测试剂盒包括有效量的所 述单克隆抗体PCV2-McABl、有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,以及用于对猪圆环病毒2 型进行抗原抗体反应进行检测的检测试剂;其中,所述抗原检测试剂盒包括胶体金检测试 纸条,所述胶体金检测试纸条包括底板,所述底板具有第一端和第二端,并且沿所述第一端 向第二端的方向上依次有滤纸、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述硝酸纤维素 膜与金标垫接触或与样品垫、金标垫接触使得抗原与所述单克隆抗体PCV2-McAB2的结合体 能在其上向底板第二端迀移;所述金标垫上含有胶体金标记的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,所述硝酸纤维素膜上近所述底板第二端的位置包括一条检测线和一条质控线,所述 检测线上固定化有所述单克隆抗体PCV2-McABl,所述质控线上固定化有羊抗鼠二抗或羊抗 鼠多抗。
[0063] 本发明还涉及一种抗原检测试剂盒,其中,所述抗原检测试剂盒包括有效量的所 述单克隆抗体PCV2-McABl、有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,以及用于对猪圆环病毒2 型进行抗原抗体反应进行检测的检测试剂;其中,所抗原检测述试剂盒包括荧光免疫检测 试纸条,所述荧光免疫检测试纸条包括底板,所述底板具有第一端和第二端,并且沿所述第 一端向第二端的方向上依次由滤纸、样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述硝酸纤 维素膜与荧光垫接触或与样品垫、荧光垫接触使得与抗原与所述单克隆抗体PCV2-McAB2的 结合体能在其上向底板第二端迀移;所述荧光垫上含有荧光标记的所述单克隆抗体PCV2-McAB2,所述硝酸纤维素膜上包括一条检测线和一条质控线,所述检测线上固定化有所述单 克隆抗体PCV2-McAB 1,所述质控线上固定化有羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗。
[0064] 本发明还涉及一种抗原检测试剂盒,其中,所述抗原检测试剂盒包括包被所述单 克隆抗体PCV2-McABl的ELISA板、含酶标记所述单克隆抗体PCV2-McAB2的反应液、对猪圆环 病毒2型进行抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阴性对照、阳性对照。
[0065] 本发明还涉及一种抗原检测试剂盒,其中,所述抗原检测试剂盒包括包被猪圆环 病毒2型抗原的ELISA板、含所述单克隆抗体的反应液、洗涤液、稀释液、底物显色液、终止 液、阴性对照、阳性对照;其中,含所述单克隆抗体的反应液为含所述单克隆抗体PCV2-McAB2的反应液、或含所述单克隆抗体PCV2-McABl与PCV2-McAB2的混合反应液。
[0066] 作为本发明的一种实施方式,所述抗原检测试剂盒包括包被所述单克隆抗体 PCV2-MCAB1的ELISA板、含酶标记所述单克隆抗体PCV2-MCAB2的反应液、洗涤液、稀释液、底 物显色液、终止液、阴性对照、阳性对照;其中,所述洗涤液为磷酸盐缓冲液,所述稀释液为 含牛血清白蛋白的溶液,所述底物显色液为四甲基联苯胺TMB显色液,所述终止液为2mol/l 的浓H2SO4溶液,所述阴性对照为磷酸盐缓冲液,所述阳性对照为包含灭活纯化后的猪圆环 病毒2型的溶液。
[0067] 本发明涉及一种抗原检测试剂盒,所述抗原检测试剂盒包括包被猪圆环病毒2型 抗原的ELI SA板、含所述单克隆抗体的反应液、洗涤液、稀释液、底物显色液、酶标记的羊抗 鼠二抗、终止液、阴性对照、阳性对照;其中,含所述单克隆抗体的反应液为含所述单克隆抗 体PCV2-McAB2的反应液、或含所述单克隆抗体PCV2-McABl与PCV2-McAB2的混合反应液;其 中,所述洗涤液为磷酸盐缓冲液,所述稀释液为含牛血清白蛋白的溶液,所述底物显色液为 四甲基联苯胺TMB显色液,所述终止液为2mol/l的浓H 2SO4溶液,所述阴性对照为磷酸盐缓冲 液,所述阳性对照为包含灭活纯化后的猪圆环病毒2型的溶液。
[0068] 术语"检测样品"当用于抗体检测试剂盒时包括但不限于动物或患者的血清及组 织样品、动物细胞培养的完整病毒或裂解病毒液等。
[0069] 术语"方法"可以使用酶联免疫吸附(ELISA)、酶免疫检测、胶体金检测、化学发光 免疫检测、放射免疫检测、荧光免疫检测、免疫色谱法及类似检测方法。
[0070] 术语"检测样品"当用于抗原检测试剂盒时包括但不限于动物或患者的血清、脏器 研磨液、动物细胞培养的完整病毒或裂解病毒液等。
[0071] 本发明还涉及所述抗原检测试剂盒检测样品中猪圆环病毒2型的方法,所述方法 包括:a将检测样品与具有所述单克隆抗体PCV2-McAB2可变区序列的所述抗体或所述抗体 片段,和/或所述单克隆抗体PCV2_McABl进行接触,b检测所述抗体或抗体片段,和/或所述 单克隆抗体PCV2-McAB 1与检测样品中猪圆环病毒2型的反应;其中,所述步骤a中的所述抗 体或所述抗体片段,或所述单克隆抗体PCV2-McABl附着在支持介质上,所述支持介质优选 为微滴定板、磁颗粒、乳胶颗粒、硝化纤维素膜中的任一种;其中,所述步骤b中所述反应可 通过酶显色、荧光、胶体金、化学发光中的任一种方法进行测定。
[0072]作为本发明的一种实施方式,具有所述单克隆抗体PCV2_McAB2可变区序列的所述 抗体或所述抗体片段使用酶标记,所述用于和猪圆环病毒2型进行抗原抗体反应进行检测 的检测试剂为与所述标记的酶产生颜色反应的底物。
[0073] 作为本发明的一种实施方式,所述用于和猪圆环病毒2型进行抗原抗体反应进行 检测的检测试剂为与所述抗体或所述抗体的片段结合的酶标二抗以及与所述标记的酶产 生颜色反应的底物。
[0074] 作为本发明的一种实施方式,所述方法包括:将采集的微生物拭子插入到样品处 理管中,使样品尽可能溶解在溶液中,将处理后的样品滴加至胶体金检测试纸条加样孔中 心,10分钟后判定结果,结果判定标准为:质控线显色则试验成立,检测线显色即为阳性、不 显色即为阴性;质控线未显色则试验不成立,无论检测线是否显色均判定为无效结果,需重 测。
[0075]作为本发明的一种实施方式,所述方法包括:使用样品处理管预处理样品,将所述 预处理样品加入所述酶免疫层析检测试纸条中所述酶标垫的位置,按下缓冲液按钮,30分 钟后观察结果,结果判定标准为:质控线显色则试验成立,检测线显色即为阳性、不显色即 为阴性;质控线未显色则试验不成立,无论检测线是否显色均判定为无效结果,需重测。 [0076]作为本发明的一种实施方式,所述方法包括:使用样品处理管预处理样品,将所述 预处理样品加入所述荧光免疫检测试纸条中所述酶标垫的位置,按下缓冲液按钮,5分钟后 观察结果,结果判定标准为:质控线显色则试验成立,检测线显色即为阳性、不显色即为阴 性;质控线未显色则试验不成立,无论检测线是否显色均判定为无效结果,需重测。
[0077]作为本发明的一种实施方式,所述方法包括:将包被所述单克隆抗体PCV2_McABl 的ELISA板用封闭液进行封闭,用洗涤液进行洗涤;使用样品处理管预处理样品,将所述预 处理样品于稀释液中稀释后加入ELISA反应孔中进行检测反应,同时做阳性对照、阴性对 照,于反应后洗涤;加入稀释的酶标记所述单克隆抗体PCV2-McAB2,于37°C作用40-80min反 应后洗涤;加入底物显色液,于37°C反应10min后加入终止液;用酶标仪读取数据,对结果进 行判定。
[0078]作为本发明的一种实施方式,所述方法包括:将包被猪圆环病毒2型抗原的ELISA 板用封闭液进行封闭,同时做阴性对照、阳性对照,并用洗涤液进行洗涤;使用样品处理管 预处理样品,将所述预处理样品于稀释液中进行稀释后加入ELISA反应孔中进行检测反应, 并用已知浓度的猪圆环病毒2型抗原进行梯度稀释后加入ELISA反应孔中进行检测反应,于 反应后洗涤;将含所述单克隆抗体PCV2-McAB2的反应液,或含所述单克隆抗体PCV2-McABl 和所述单克隆抗体PCV2-McAB2混合的反应液,稀释后加入ELISA反应孔,于37°C反应20-40min,洗涤,同时设空白对照;将酶标记的羊抗鼠二抗稀释后加入ELISA反应孔中,于37°C 反应20-40min,洗涤;加入底物显色液,于37°C反应10min后加入终止液;用酶标仪读取数 据,对结果进行判定。
[0079] 本发明涉及所述试剂盒在用于非诊断目的的猪圆环病毒2型抗原检测检测中的应 用。
[0080] 作为本发明的一种实施方式,本发明提供了包括有效量的所述单克隆抗体PCV2-McABl的试剂盒在用于非诊断目的的猪圆环病毒2型检测中的应用。
[0081] 作为本发明的一种实施方式,本发明提供了包括有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB2的试剂盒在用于非诊断目的的猪圆环病毒2型检测中的应用。
[0082] 作为本发明的一种实施方式,本发明提供了包括有效量的所述单克隆抗体PCV2-McABl和有效量的单克隆抗体PCV2-McAB2的试剂盒在用于非诊断目的的猪圆环病毒2型检 测中的应用。
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