一种胰岛素抗体印迹聚合物及其制备方法、应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物工程领域，特别涉及一种胰岛素抗体印迹聚合物及其制备方法、 应用。
【背景技术】
[0002] 胰岛素抗体是1型糖尿病一种重要标记物。胰岛素抗体可能系细胞破坏所产生， 因此胰岛素自身抗体的检测可作为自身免疫性细胞损伤的标志，对于对糖尿病和低血糖 的诊断、鉴别诊断及治疗具有非常重要的意义。因此，检测血清中抗胰岛素抗体可有助于糖 尿病的及时发现。
[0003] 现有的血清中抗胰岛素抗体的检测都是采用试剂盒进行检测。该方法方便有效， 试剂盒具体包含用于检测血清蛋白中抗胰岛素抗体的所有试剂和对照液，包括载体、抗原 或抗体、酶底物、阴性对照品和阳性对照品、结合物以及标本的稀释液、洗涤液、酶反应终止 液。目前，在检测血清中抗胰岛素抗体的抗原须经包被封闭，耗时费力，使用繁琐。抗原一般 成本较高且不能重复利用。导致Elisa试剂盒的成本提高。因此，提供一种操作简便、节省检 测时间、成本低的检测工具及方法具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明提供一种胰岛素抗体印迹聚合物及其制备方法、应用。本发明将 印迹技术与磁性分离结合，应用于血清中胰岛素抗体ELISA检测中。本发明通过印迹聚合微 球替代了传统的抗原，无需再进行包被和封闭过程，大大节约了检测时间。印迹聚合微球较 传统抗原稳定，对于环境耐受性高，制备和储存简单，成本低。
[0005] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0006] 本发明提供了一种胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物，其具有以Fe304@Si02磁性硅 球载体为芯，胰岛素抗体分子印迹聚合物为壳的芯壳结构。
[0007] 分子印迹技术是一种可以合成特异性捕获模板分子的聚合物的一门技
[0008] 术。主要原理是:通过共价键、氢键、静电作用、疏水作用等作用，将该分子与可聚 合的功能单体进行组装，并于交联剂共聚反应。反应结束洗脱模板分子即可在聚合物形成 与印迹分子的形状、大小、电荷分布具有互补性的印迹孔腔。因此，制备的分子印迹聚合物 对印迹分子具有良好的选择性。基于分子印迹技术的高选择性、吸附能力强和磁性纳米粒 子的比表面积大，在磁场作用下容易分离等优点。
[0009] 在本发明的一些具体实施方案中，所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物，所述 Fe3〇4@Si〇2磁性硅球载体为在Fe3〇4纳米颗粒表面包裹硅壳后制得。
[0010] 在本发明的一些具体实施方案中，所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物，所述胰 岛素抗体分子印迹聚合物以胰岛素抗体为模板分子，甲基丙烯酸和/或丙烯酰胺为功能单 体，通过交联剂和引发剂发生聚合反应后，洗脱所述模板分子制得。
[0011] 在本发明的一些具体实施方案中，所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物，所述 Fe3〇4@Si〇2磁性娃球载体与所述模板分子的质量比为（55~65): 11;所述模板分子、所述功 能单体的质量比为1: (2~3);所述功能单体包括甲基丙烯酸和丙烯酰胺时，所述甲基丙烯 酸和丙烯酰胺的质量比为(1~2) :1;
[0012]所述交联剂为N，N-亚甲基双丙烯酰胺，所述引发剂为水溶性常温引发剂，所述水 溶性常温引发剂包括亚硫酸氢钠/过硫酸铵体系或亚硫酸亚铁/过硫酸铵体系。
[0013]本发明还提供了所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物的制备方法，包括如下步 骤：
[0014] 步骤1:制备获得Fe3〇4纳米颗粒；
[0015] 步骤2:在所述Fe3〇4纳米颗粒表面包裹硅壳，制备获得Fe3〇4@Si〇2磁性硅球载体； [00?6]步骤3:将所述Fe3〇4@Si〇2磁性娃球载体、功能单体、模板分子、交联剂混合，通过引 发剂引发聚合;再经洗脱液将模板分子洗脱，制备获得胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物。
[0017] 在本发明的一些具体实施方案中，所述制备方法中所述胰岛素抗体分子印迹聚合 物以胰岛素抗体为模板分子，甲基丙烯酸和/或丙烯酰胺为功能单体，通过交联剂和引发剂 发生聚合反应后，洗脱所述模板分子制得。
[0018] 在本发明的一些具体实施方案中，所述制备方法中所述Fe3〇4@Si02磁性硅球载体 与所述模板分子的质量比为(55~65): 11;所述模板分子、所述功能单体的质量比为1: (2~ 3);所述功能单体包括甲基丙烯酸和丙烯酰胺时，所述甲基丙烯酸和丙烯酰胺的质量比为 (1~2)山
[0019] 所述交联剂为N，N-亚甲基双丙烯酰胺，所述引发剂为水溶性常温引发剂，所述水 溶性常温引发剂包括亚硫酸氢钠/过硫酸铵体系或亚硫酸亚铁/过硫酸铵体系。
[0020] 在本发明的一些具体实施方案中，所述制备方法中所述洗脱液包括去离子水、 36% (w/w)的NaCl溶液、10% (w/v)SDS溶液、10% (v/v)的醋酸溶液。
[0021] 本发明还提供了所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物或所述制备方法制得的胰 岛素抗体磁性分子印迹聚合物在制备检测胰岛素抗体的制剂或检测工具中的应用。
[0022]作为优选，检测工具可以为试剂盒。
[0023] 本发明提供了一种胰岛素抗体检测试剂盒，包括所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚 合物或所述制备方法制得的胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物。
[0024] 本发明还提供了一种胰岛素抗体的检测方法，取所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚 合物或所述制备方法制得的胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物与待测样本混合孵育，再与二 抗混合孵育，加入显色液显色，终止反应，检测，获得所述待测样本中胰岛素抗体的含量。
[0025] 在本发明的一些具体实施方案中，所述胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物与待测样 本混合孵育的温度为37°C，时间为1~1.5h。
[0026] 在本发明的另一些具体实施方案中，所述二抗为抗胰岛素抗体，所述在于二抗混 合孵育的温度为37°C，时间为40~50min。
[0027] 在本发明的另一些具体实施方案中，所述显色液包括显色液A和显色液B;其中显 色液A包括十二水磷酸二氢钠、柠檬酸、过氧化脲;所述十二水磷酸二氢钠、柠檬酸、过氧化 脲的质量比为(60~62) :17:1混合;所述显色液B包括乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸、TMB、二甲 基亚砜，所述乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸、TMB、二甲基亚砜的质量比为1: (7~7.5): (1.4~ 1.5):(37~38);所述显色的时间为10~1511^11。
[0028]在本发明的另一些具体实施方案中，所述检测可以为ELISA检测。本领域常规的检 测方法均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
[0029]本发明提供了一种胰岛素抗体磁性分子印迹聚合物，其具有以Fe304@Si0 2磁性硅 球载体为芯，胰岛素抗体分子印迹聚合物为壳的芯壳结构。本发明通过印迹聚合微球替代 了传统的抗原，无需再进行包被和封闭过程，大大节约了检测时间。印迹聚合微球较传统抗 原稳定，对于环境耐受性高，制备和储存简单，成本低。本发明中使用的印迹聚合微球可反 复使用，洗脱较为简单。96孔板也可以洗脱重复利用，避免了材料的浪费。为环境友好型产 品。
【附图说明】
[0030] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0031] 图1示本发明提供的磁性印迹聚合物的透射电镜图；胰岛素抗体印迹聚合物的组 成结构为球状结构，Fe30 4为核心，经Si02包裹为磁性硅球，外面合成一层聚丙烯酰胺-甲基 丙烯酸膜;在该聚合物表面含有大量