一种新型三唑并嘧啶衍生物及其应用

一种新型三唑并嘧啶衍生物及其应用
【专利摘要】本发明提供了一种式Ⅱ所示的新型三唑并嘧啶衍生物及其晶型和制备方法，以及它们在制备抗凝血、抗血栓、治疗或预防脑缺血性疾病或改善睡眠的药物中的应用。
【专利说明】
一种新型三唑并嘧啶衍生物及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及有机化学和药学领域，具体涉及一种新型三唑并嘧啶衍生物及其晶型 和制备方法，以及在制备抗凝血、抗血栓、治疗或预防脑缺血性疾病或改善睡眠的药物中的 应用。
【背景技术】
[0002] 血栓是在凝血过程中通过血小板聚集形成的，在非损伤情况下形成的血栓能够降 低血流速度甚至堵塞末端血管从而引起缺血性脑卒中、组织坏死，粥样动脉硬化、心肌梗死 等疾病。
[0003] 缺血性脑卒中是指突然发生的脑组织局部供血动脉血流灌注减少或血流完全中 断，停止供血、供氧、供糖等，使该局部脑组织崩解破坏。缺血性脑卒中的主要原因为:①动 脉粥样硬化所致血栓栓塞;②心脏来源的栓子所致脑栓塞;③各种原因引起的血管炎、血管 损伤以及外伤等。缺血性脑卒中一般在夜间睡眠中发病，常为次晨起床时发现肢体无力或 偏瘫，多无意识障碍，血压可正常或偏高，可有动脉硬化史。缺血性脑卒中占脑卒中病人总 数的60%~70 %，主要包括脑血栓形成和脑栓塞。血小板的凝聚往往是脑血栓形成的开端， 因此防止血小板凝聚的药物可用来治疗或预防缺血性脑卒中。
[0004] 血小板的激活有多种途径和机制，其中P2Y12受体参与纤维蛋白原受体激活、血栓 形成、血栓素A2生成、外伤引发的血小板聚集等过程。人类的P2Y12受体由342个氨基酸组 成，主要分布于血小板和脑组织中。当内源性刺激因子如ADP等激活P2Y12受体时，会激活 PI3K等通路，进而激活Raplb、Akt、ERK通路，共同引起纤维蛋白原受体的激活，从而激活纤 维蛋白原，引发血栓形成或血小板聚集。这一过程必须在P2Y12受体激活的情况下才可以实 现，因此阻断P2Y12受体可以显著抑制由ADP和其它刺激因子引发的血小板聚集和血栓形 成。
[0005] 目前，全球已有多个P2Y1 2受体抑制剂成功开发上市，其中由阿斯利康 (八81:瓜26116〇3)开发上市的替格瑞洛(1';[038^101')是全球首个可逆的？2￥12抑制剂，2010年 12月在欧盟首次获得上市批准，2011年2月在英国首次上市；2011年8月在美国也获准上市 批准，现已在全球40多个国家上市。替格瑞洛临床上主要用来减少急性冠状动脉综合征 (ACS)患者的血栓性心血管事件的发生率。替格瑞洛的用法用量为：口服，起始剂量180mg， 维持剂量调整为一天两次，每次90mg;治疗时间一般至少12个月。
[0006] 替格瑞洛化学名为：（15,25,31?，55)-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基] 氨基}_5_丙硫基-3H-1，2,3-三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟基乙氧基)-1，2_环戊二 醇，结构如式I所示，其可按CN1432017A中公开的方法制备得到。
[0008] 替格瑞洛具有三唑并嘧啶的独特化学结构，可直接与P2Y12受体可逆性结合，不但 能更快地发挥抑制血小板聚集效应，而且在末次剂量的24小时内，随着血药浓度的下降，抑 制作用快速衰减，血小板功能也随之快速恢复。因此，替格瑞洛是一种可快速起效、强效抑 制血小板聚集、安全性良好的新型口服抗血小板药物，无疑是临床上急性冠状动脉综合征 (ACS)患者抗血小板治疗的更优选择。
[0009] 但替格瑞洛仍存在一些不足之处，比如生物利用度较低（人体中替格瑞洛生物利 用度平均为36%)，用药顺应性不高(在长期用药中，需一天用药两次，增加漏服可能性)等。 因此，有必要开发替格瑞洛的新衍生物，以期在保持替格瑞洛作为可逆P2Y12抑制剂优势的 基础上，进一步提高生物利用度、增强用药顺应性。
[0010] 通过合理的基团修饰可以改善药物理化性质或体内药代动力学性质，提高口服生 物利用度，这是本领域技术人员所公知的。尽管理论上可以根据分子中的化学官能团合理 设计假定的修饰，但母药经基团修饰后产生的是全新的分子实体，该新化合物往往会显示 母药不存在的有害物理化学或生物活性性质。虽然基团修饰化合物看似"简单"，但由于人 体与药物相互作用的复杂性，鉴定具有适当的理化性质、药代动力学性质、体内转化和安全 性是复杂的多学科任务，因此实际中常常通过"合理设计"得到的基团修饰化合物，往往与 预期的结果相差甚远，甚至得到理化性质或生物活性比母药更差的基团修饰化合物。因 此，通过基团修饰开发出改善药物理化性质或体内药代动力学性质的新化合物非常具有不 可预测性，这些新化合物的晶型等固态特征、新用途更是不可预测。
[0011] 本发明在对替格瑞洛基团修饰的研究过程中，惊喜地发现了替格瑞洛的一种经基 团修饰的新型三唑并嘧啶衍生物，该化合物活性与替格瑞洛相当，口服吸收优于替格瑞洛， 在体内可代谢成替格瑞洛，从而延长了作用时间，为临床上减少给药次数、提高顺应性提供 了良好的物质基础;再者，该化合物可以以晶型的固态形式存在，有利于生产、贮存和制剂 的制备；另外，该化合物不仅具有抗凝血、抗血栓的作用、而且还可用于治疗或预防脑缺血 性疾病或改善睡眠。

【发明内容】

[0012] 本发明的一个目的在于提供一种新型三唑并嘧啶衍生物，该化合物不仅具有抗凝 血、抗血栓的作用，可用于治疗或预防脑缺血性疾病或改善睡眠，而且药代动力学性质优于 替格瑞洛。
[0013] 本发明的另一目的在于提供该新型三唑并嘧啶衍生物的制备方法。
[0014] 本发明的又一目的在于提供该新型三唑并嘧啶衍生物的一种晶型和该晶型的制 备方法。
[0015] 本发明的又一目的在于提供包含该新型三唑并嘧啶衍生物或其晶型的药物组合 物。
[0016] 本发明的又一目的在于提供该新型三唑并嘧啶衍生物或其晶型在制备抗凝血或 抗血栓的药物中的用途。
[0017] 本发明的又一目的在于提供该新型三唑并嘧啶衍生物或其晶型在制备治疗或预 防脑缺血性疾病或改善睡眠的药物中的用途。
[0018] 为了实现上述发明目的，本发明首先提供了一种式n所示的三唑并嘧啶衍生物或 其可药用盐、共晶、水合物或溶剂合物，
[0021] 所述"盐"的定义是本技术领域技术人员熟知的，是指由阳离子和阴离子通过离子 键的作用而形成的化合物。
[0022] 所述"共晶"（Co-Crystals)是指一种具有固定化学计量比的多组分晶体，在该晶 体中各组分是以分子水平，通过氢键或其他非共价键、非离子键的作用结合而共存。在药物 共晶中，一般包括药物活性成分和另一种或多种共晶形成体(Co-crystal former)。当单独 的纯共晶形成体在室温下以液态存在时，该共晶也被称为"溶剂合物"，其中溶剂为水时被 称为"水合物"。所述"共晶"还包括这样一些具有固定化学计量比的多组分晶体，在这些晶 体中药物活性成分与其他组分之间，一部分通过氢键或其他非共价键作用，另一部分通过 离子键或介于氢键与离子键之间的作用力而结合。
[0023]所述"盐"或"共晶"还包括盐或共晶的溶剂合物、水合物等形式。当盐或共晶在某 种溶剂中制备、浆化或结晶时，该溶剂有可能进入到盐或共晶晶体中，形成溶剂合物；当该 溶剂为水时，即有可能形成水合物。
[0024]确定"共晶"或"盐"的方法是本技术领域技术人员熟知的，如用单晶X-射线衍射分 析等。
[0025] 根据本发明的目的，本发明提供了式n所示的三唑并嘧啶衍生物或其可药用盐、 共晶、水合物或溶剂合物的制备方法，该方法包括：
[0026] (1 )、将式m化合物与式IV化合物或其酸加成物反应生成式V化合物，
[0028] 式m中，办为？、(：1、8^1、011或(^，其中厶为羟基活化基；
[0029] (2)、将式V化合物脱保护得到式n化合物，
[0031] (3)、可选的，根据需要将式n化合物制成盐、制成共晶、制成水合物或制成溶剂合 物。
[0032] 上述方法步骤（1)中，所述式m化合物中的"羟基活化基"是指这样一种基团，引入 该基团后，能提高作为离去基的羟基的反应活性，包括磺酰基、亚磺酰基、烃酰基等，具体的 如甲磺酰基、三氟甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三氟乙酰基等。
[0033] 上述方法步骤(1)中，所述"酸加成物"是指某一酸性化合物通过离子键、氢键或其 他非共价键的作用与另一化合物相结合的物质，包括盐、共晶、溶剂合物等。所述式IV化合 物为制备替格瑞洛的常用中间体，可商业化购得或按文献方法制得。所述式IV化合物酸加 成物中的酸包括无机酸或有机酸;其中适宜的无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸 或硫酸等；适宜的有机酸选自L-酒石酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、二对甲苯甲酰基-L-酒石 酸、R-扁桃酸、R-a_甲氧基苯乙酸、富马酸、D-苹果酸、D-樟脑磺酸、S-酮基蒎酸、草酸、乙酸、 三氟乙酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。
[0034] 上述方法步骤（1)中，一般需加入一定量的碱中和反应产生的酸或由式IV化合物 酸加成物引入的酸。所述碱包括有机碱或无机碱;其中适宜的有机碱包括叔胺(如三乙胺、 二异丙基乙基胺等）；适宜的无机碱包括碱金属、碱土金属的氢氧化物(如氢氧化锂、氢氧化 钠、氢氧化钾等）、碳酸盐(如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等）、碳酸氢盐(如碳酸氢钠、碳酸氢钾 等）、磷酸盐(如磷酸钠、磷酸钾等）、磷酸氢盐(如磷酸氢钠、磷酸氢钾等)等。
[0035] 上述方法步骤（1)中，当所述式m化合物中心为側时，该步骤可进一步包括先将0H 活化为〇A(A为羟基活化基，定义同上），再与式IV化合物或其酸加成物反应的过程。
[0036] 上述方法步骤(1)中，反应溶剂可选为不混溶于水的溶剂与水的混合溶剂，其中所 述不混溶于水的溶剂可选自甲苯、二氯甲烷等或它们的混合物;反应溶剂也可选为非质子 溶剂，其中所述非质子溶剂选自可乙腈、甲苯、二氯甲烷、丙酮、二甲氧基乙烷、四氢呋喃、二 氧六环、N-甲基吡咯烷酮、N，N_二甲基甲酰胺、N，N_二甲基乙酰胺、六甲基磷酰胺、二甲基亚 砜、环丁砜等或它们的混合物。
[0037] 上述方法步骤（1)中，所述式m化合物与式IV化合物或其酸加成物的投料摩尔比 一般为 0.7:1 到1.3:1。
[0038] 上述方法步骤(1)中，反应温度一般为-10°C至溶剂沸点。
[0039] 上述方法步骤(2)中，所述脱保护的试剂一般为酸，选自有机酸和无机酸;适宜的 有机酸选自甲磺酸或三氟乙酸等;适宜的无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸或硫酸等。
[0040] 上述方法步骤(2)中，反应溶剂一般包含水与有机溶剂组成的混合溶剂，其中有机 溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、二氧六环、乙腈、丙酮、甲苯、二氯甲烷等。
[0041] 上述方法步骤(2)中，反应温度一般为0°C至溶剂沸点。
[0042] 上述方法步骤（1)或（2)中，反应时间的确定可采用本领域常规的方法进行，如采 用TLC、HPLC监控等。
[0043] 上述方法步骤(1)中，所述式m化合物可通过本发明提供的制备方法制备，该方法 包括：
[0044] (a)、将式VI化合物或其酸加成物与式W化合物反应得到式VI化合物，
[0046] 式W和珊中的办定义同上，式W中的R2为？、(：1、8广1或-(^4定义同上；
[0047] (b)、将式VI化合物在重氮化试剂存在下转化成式m化合物，
[0049] 式m和珊中，的定义同上。
[0050] 上述方法步骤(a)中，所述式VI化合物的酸加成物中的酸包括无机酸或有机酸;其 中适宜的无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸或硫酸等;适宜的有机酸选自L-酒石 酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、二对甲苯甲酰基-L-酒石酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、苯磺 酸、对甲苯磺酸等。
[0051]上述方法步骤(a)中，所述式W化合物与式VI化合物或其酸加成物的投料摩尔比 一般为 3:1 至0.8:1。
[0052]上述方法步骤(a)中，一般需加入一定量的碱中和反应产生的酸或由式VI化合物 酸加成物引入的酸。所述碱包括有机碱或无机碱;其中适宜的有机碱包括叔胺(如三乙胺、 二异丙基乙基胺等）；适宜的无机碱包括碱金属、碱土金属的氢氧化物(如氢氧化锂、氢氧化 钠、氢氧化钾等）、碳酸盐(如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等）、碳酸氢盐(如碳酸氢钠、碳酸氢钾 等）、磷酸盐(如磷酸钠、磷酸钾等）、磷酸氢盐(如磷酸氢钠、磷酸氢钾等)等。
[0053]上述方法步骤(a)中，反应溶剂选自乙醇、异丙醇、三乙二醇、叔丁醇、异丁醇、二甲 氧基乙烷、甲苯、正丁醇、甘油、乙二醇、聚乙二醇-200、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600、聚乙 二醇-800、N-甲基吡咯烷酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、六甲基磷酰胺、二甲基 亚砜、环丁砜、二氧六环等或它们的混合物。
[0054]上述方法步骤(a)中，反应温度一般为70°C至溶剂沸点。
[0055]上述方法步骤(b)中，所述"重氮化试剂"选自亚硝酸或亚硝酸酯等，其中亚硝酸可 由亚硝酸盐(如亚硝酸钠、亚硝酸钾等）与酸(如盐酸、乙酸等)原位制备，其中亚硝酸酯包括 亚硝酸异戊酯等。
[0056]上述方法步骤(b)中，所述式珊化合物与重氮化试剂的投料摩尔比一般为1:0.8至 1:2〇
[0057]上述方法步骤(b)中，溶剂选自甲苯、乙酸、水等或其混合物。
[0058] 上述方法步骤(b)中，反应温度一般为_15°C~40°C。
[0059] 上述方法步骤(a)或(b)中，反应时间的确定可采用本领域常规的方法进行，如采 用TLC、HPLC监控等。
[0060] 上述方法步骤(a)或(b)中，在反应结束后，可进一步包括用本领域常规的方法对 产物进行分离、纯化等后处理或经分离后不经进一步纯化直接用于下一步。
[0061] 上述方法步骤(a)中，所述式W化合物为制备替格瑞洛的常用中间体，可商业化购 得或按文献方法制得;所述式VI化合物或其酸加成物可按下述实施方案中的制备方法制 得。
[0062] 在一实施方案中，本发明提供了一种式VI化合物或其酸加成物的制备方法，该方 法包括：
[0063] (i )、将式IX化合物或其酸加成物经氨基保护得到式X化合物，
[0065]式X中，R3为氨基保护基，R4为氢或与R3-并作为氨基保护基；
[0066] ( ii )、将式X化合物与式XI化合物反应得到式M化合物，
[0068] 式X和M中的R3和R4定义同上，式XI中的抱为？、(：1、8广1、-(?1或-(^4定义同上； [0069] (iii )、将式M化合物去除氨基保护基得到式VI化合物，
[0071] 式M中的R3和R4定义同上；
[0072] ( iv )、可选的，根据需要将式VI化合物转化成式VI化合物的酸加成物。
[0073] 上述方法步骤(i)中，所述式IX化合物为制备替格瑞洛的常用中间体，可商业化购 得或按文献方法制得。所述式K化合物的酸加成物中的酸包括无机酸或有机酸;其中适宜 的无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸或硫酸等;适宜的有机酸选自L-酒石酸、二 苯甲酰基-L-酒石酸、二对甲苯甲酰基-L-酒石酸、草酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、苯磺酸、对 甲苯磺酸等。
[0074] 上述方法步骤(i)中，所述"氨基保护"是本领域的常规技术;常用的氨基保护基包 括节氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、窃甲氧羰基(Fmoc)、稀丙氧羰基(Alloc)、三甲基娃乙 氧羰基(Teoc)、邻苯二甲酰基(Pht)、对甲苯磺酰基(Tos)、三氟乙酰基(Tfa)、邻(对)硝基苯 磺酰基(Ns)、三苯甲基(Trt)、2,4_二甲氧基苄基(Dmb)、对甲氧基苄基(?11113)等 ;所述"R4与R3 一并作为氨基保护基"的情形例如，当氨基保护基选用邻苯二甲酰基(Pht)时，R4与R3-并代 表邻苯二甲酰基。在选用氨基保护基时，优选的氨基保护基为在去除该氨基保护基时所使 用的方法有利于式VI化合物中醚键保持稳定。
[0075]上述方法步骤（i)中，一般需加入一定量的碱中和反应产生的酸或由式IX化合物 酸加成物引入的酸。所述碱包括有机碱或无机碱;其中适宜的有机碱包括叔胺(如三乙胺、 二异丙基乙基胺等）；适宜的无机碱包括碱金属、碱土金属的氢氧化物(如氢氧化锂、氢氧化 钠、氢氧化钾等）、碳酸盐(如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等）、碳酸氢盐(如碳酸氢钠、碳酸氢钾 等）、磷酸盐(如磷酸钠、磷酸钾等）、磷酸氢盐(如磷酸氢钠、磷酸氢钾等)等。
[0076]上述方法步骤（ii )中，所述式XI化合物可商业化购得。
[0077] 上述方法步骤（ii )中，一般需加入一定量的碱，所述碱包括有机碱或无机碱;其中 适宜的有机碱包括叔胺（如三乙胺、二异丙基乙基胺等），碱金属、碱土金属的醇化物（如叔 丁醇锂、叔丁醇钠、叔丁醇钾、叔丁醇镁等)等;适宜的无机碱包括碱金属、碱土金属的氢化 物(如氢化钠、氢化钾等），碱金属、碱土金属的氢氧化物(如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾 等），碳酸盐(如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等），碳酸氢盐(如碳酸氢钠、碳酸氢钾等），磷酸盐 (如磷酸钠、磷酸钾等），磷酸氢盐(如磷酸氢钠、磷酸氢钾等)等。
[0078] 上述方法步骤（iii)中，所述"去除氨基保护基"是本领域的常规技术，优选有利于 式VI化合物中醚键保持稳定的方法，比如使用碱性试剂、氢解等方法去除氨基保护基。
[0079] 上述方法步骤或（m)中，在反应结束后，可进一步包括用本领域常规的 方法对产物进行分离、纯化等后处理或经分离后不经进一步纯化直接用于下一步。
[0080] 本发明在提供制备式n所示的三唑并嘧啶衍生物的基础上，进一步提供了系列中 间体化合物:式m化合物、式v化合物、式vi化合物、式Vi化合物或式xn化合物，它们的结构 及优选化合物汇总于下：
[0082]式中RiSFJUBrJ'OH [0083] 或0A，其中A为羟基活化
[0087]式中RiSFXUBhKOH [0088] 或0A，其中A为羟基活化 [0089]基，
[0091]式中R3为氨基保护基，R4为。氢或与R3-并作为氨基保护
[0092] 基，
[0093] 根据本发明的目的，本发明提供了一种结晶态的式n化合物，进一步地，本发明提 供了式n化合物的一种晶型，将其定义为晶型a。
[0094] 本发明提供的式n化合物晶型A的粉末X-射线衍射图谱的特征为:在20值为4.4° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、20.7° ±0.2°、21.1° 土 0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ±0.2°、27.5° ±0.2° 等位置有特征衍射峰。
[0095] 在一具体实施方案中，本发明提供的式n化合物晶型A的粉末X-射线衍射图谱的 特征为：在29值为4.4° ±0.2°、10.3° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、17.3° ±0.2°、 18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、20.7° ±0.2°、21.1° ±0.2°、21.7° ±0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ± 0 ? 2°、27 ? 5° ± 0 ? 2°、28 ? 2° ± 0 ? 2° 等位置有特征衍射峰。
[0096] 进一步地，本发明所述的式n化合物晶型A以20角度表示的粉末X-射线衍射图谱 在以下位置具有特征衍射峰及相对强度：
[0099]在一具体实施方案中，本发明提供的式n化合物晶型A具有如图1所示的粉末X-射 线衍射图谱所代表的特征，即本发明提供的式n化合物晶型a的粉末x-射线衍射图谱基本 如图1所示。
[0100] 本发明的式n化合物晶型a的粉末x-射线衍射分析是在环境温度及环境湿度下， 经荷兰帕纳科X'Pert PRO型粉末X-射线衍射仪的CuKa源(a= 1.54A)测定完成的。"环境温 度" 一般是0~40 °C ; "环境湿度" 一般是30 %~80 %的相对湿度。
[0101] 在一具体实施方案中，本发明提供的式n化合物晶型A具有如图2所示的差示扫描 量热法(DSC)图谱所代表的特征，即其吸热峰峰值温度是150°C ± 2°C或150°C ± 1°C。
[0102] 在一具体实施方案中，本发明提供的式n化合物晶型A具有如图3所示的热重分析 (TGA)图谱所代表的特征，即本发明提供的式II化合物晶型A的热重分析(TGA)图谱基本如 图3所示。
[0103] 在一具体实施方案中，本发明提供的制备的式n化合物晶型A混合物中式n化合 物晶型A含量(质量含量)一般大于70 %，优选大于80 %，最优选大于90 %。
[0104] 本发明提供了 一种式n化合物晶型A的制备方法，该方法包括：
[0105] (1 )、将式n化合物溶于酯类溶剂中；
[0106] (2)、析出固体；
[0107] (3)、分离析出的固体；
[0108] (4)、可选的，将所分离的固体进行干燥。
[0109] 上述方法步骤（1)中，所述"酯类溶剂"选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、乙酸 正丙酯、乙酸正丁酯等或它们的混合溶剂，优选乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丙酯或它们 的混合物。
[0110] 上述方法步骤(1)中，以ml为单位的所选溶剂用量与以g为单位的式n化合物用量 的比例一般为1:1至30:1;可采用加热的方式进行溶解。
[0111]上述方法步骤(1)中，式n化合物的溶解温度一般为室温至溶剂沸点。
[0112] 上述方法步骤(2)中，所述"析出固体"的方式包括冷却析出固体、加入反溶剂析出 固体、浓缩出部分溶剂后析出固体、加入晶种析出固体等，这些方法可以单独使用也可以组 合使用，可以在静置条件下进行，也可以在搅拌条件下进行。所述"反溶剂"是指在常温下对 式n化合物的溶解性不好的溶剂，如异辛烷、正己烷、正庚烷、石油醚等或它们的混合物，其 中优选异辛烷、正庚烷。
[0113] 上述方法步骤(3)中，所述"分离"的方式可以采用抽滤或离心。
[0114] 上述方法步骤(4)中，所述"干燥"的温度一般为20~120 °C，优选40~100 °C ;可以 常压干燥，也可以减压干燥。
[0115] 在一实施方案中，本发明的式n化合物晶型A的制备方法包括：
[0116] (1)、将式n化合物溶于乙酸异丙酯中；
[0117] (2)、冷却或加入反溶剂析晶；其中反溶剂选自异辛烷、正己烷、正庚烷、石油醚等 或它们的混合物，优选异辛烷、正庚烷；
[0118] (3)、分离析出的固体；
[0119] (4)、可选的，将所分离的固体进行干燥;干燥温度一般为20~120°C，优选40~100 °c;可以常压干燥，也可以减压干燥。
[0120]本发明的另一目的在于提供含有式n化合物、结晶态式n化合物或式n化合物晶 型a的药物组合物和将式n化合物、结晶态式n化合物或式n化合物晶型a用于制造人用药 物的应用。
[0121]为了实现该目的，一方面本发明提供了一种包含治疗有效量的式n化合物、结晶 态式n化合物或式n化合物晶型a和药用辅料的药物组合物。
[0122]另一方面，本发明提供了式n化合物、结晶态式n化合物或式n化合物晶型a在制 备抗凝血、抗血栓、治疗或预防脑缺血性疾病或改善睡眠的药物中的应用。一般是将治疗有 效量的式n化合物、结晶态式n化合物或式n化合物晶型a与一种或多种药用辅料制成药 物组合物或制剂，该药物组合物或制剂是以本技术领域中熟知的方式进行制备的。
[0123] 上述药物组合物或制剂可作为一种抗凝血或抗血栓的药物，主要用于治疗或预防 具有冠状动脉、脑血管或外周血管疾病患者的血栓形成及其并发症，特别的，用来减少急性 冠状动脉综合征患者的血栓性心血管事件的发生率。另外，上述药物组合物或制剂可作为 一种治疗或预防脑缺血性疾病(如缺血性脑卒中等)或改善睡眠的药物。
[0124] 上述药物组合物或制剂的剂型包括:片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂、散剂、舌 下片剂、混悬剂、溶液剂、可注射制剂、气雾剂、干粉剂、栓剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂等。它 们根据各自剂型的特点，给药途径包括口服、舌下、肠道外（如静脉注射、肌内注射、皮下注 射等）、经肺/气管或经皮等。
[0125] 上述组合物或制剂的给药量根据患者病情性质和严重性、给药途径和患者年龄、 体重等进行调整，一般日剂量在lmg至lg之间，优选30mg至300mg之间；每日可以一次给药， 也可以多次给药。
[0126] 上述药物组合物或制剂中还可以包含其他适宜的活性成分。
[0127] 在一具体实施方案中，本发明提供的药物组合物为口服固体制剂，优选片剂或胶 囊剂。该口服固体制剂除活性成分式n化合物、结晶态式n化合物或式n化合物晶型a外， 还含有药用辅料，所述的药用辅料均是本领域常规的药用辅料，包括填充剂、崩解剂、粘合 剂、润滑剂等。
[0128] 所述的填充剂一般包括甘露醇、磷酸氢钙、微晶纤维素、预胶化淀粉、乳糖、蔗糖、 硫酸钙、微粉硅胶等，它们可以单独使用也可以混合使用。
[0129] 所述的崩解剂一般包括羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素钠、微晶 纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸 氢钠等，它们可以单独使用也可以混合使用。
[0130] 所述的粘合剂一般包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、聚维酮、微 晶纤维素、淀粉浆、水、各种浓度的乙醇溶液等，它们可以单独使用也可以混合使用。
[0131] 所述的润滑剂一般包括硬脂酸镁、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸钙、棕榈酸、硅酸铝、硬 脂酰胺、固体聚乙二醇等，它们可以单独使用也可以混合使用。
[0132] 如果需要的话，还可以向上述药物组合物或制剂中添加其他辅料，如甜味剂(如阿 司帕坦、甜菊素等）、着色剂(如二氧化铁、二氧化钛等）、稳定剂(如维生素 E、麝香草酚、甘氨 酸等）、表面活性剂(如月桂硫酸钠等)等。
[0133] 上述口服固体制剂的制备可以按照本技术领域中制备口服固体制剂的常规方法 进行，如：片剂可以采用湿法制粒压片等方式制备，胶囊可采用湿法制粒装胶囊等方式制 备。当所述口服固体制剂为片剂时，可根据需要对其进一步包衣，制成薄膜衣片剂或糖衣片 剂。包衣基质包括纤维素类、丙烯酸树脂类、糖类，如羟丙级甲基纤维素、蔗糖等，其中还可 添加增塑剂、抗粘剂、遮光剂。
[0134] 试验表明，本发明提供的式n化合物、结晶态式n化合物或式n化合物晶型a活性 与替格瑞洛相当，口服吸收优于替格瑞洛，在体内可代谢成替格瑞洛，从而延长了作用时 间，为临床上减少给药次数、提高顺应性提供了良好的物质基础;再者，式n化合物、结晶态 式n化合物或式n化合物晶型a的理化性质有利于生产、贮存和制剂的制备；另外，该化合 物不仅具有抗凝血、抗血栓的作用，而且还可用于治疗或预防脑缺血性疾病或改善睡眠。
【附图说明】
[0135] 图1为式n化合物晶型A的粉末X-射线衍射(PXRD)图谱。
[0136] 图2为式n化合物晶型A的差示扫描量热(DSC)图谱。
[0137] 图3为式II化合物晶型A的热重分析(TGA)图谱。
【具体实施方式】
[0138] 下面将结合实施例对本发明作进一步说明，可以使本领域专业技术人员更全面的 理解本发明，但不以任何方式限制本发明的范围。
[0139] 实施例中1H NMR和13C NMR测试是以氘代二甲基亚砜作为测试溶剂，以四甲基硅烷 作内标，用Bruke AV-II 400MHz核磁共振仪在室温下测定的。
[0140] 实施例中质谱测试是用Agilent Quadrupole LC/MS 6120B，ESI正模式完成的。 [0141 ]实施例中粉末X-射线衍射分析是由荷兰帕纳科X'Pert PRO型粉末X-射线衍射仪 测定的，测试条件为以构型、扫描范围为4° -50°，步长为0.0130°，连续扫描。测试光源为 铜靶Ka辐射；电压和电流分别为40kV和40mA。制样方法为:在环境条件下用药匙取适量样 本置于玻璃载样片的凹槽中，用载玻片适当碾压，使样品均匀分布在载样片凹槽中，再用载 玻片将样品表面刮平。测试期间样品在其自身平面内不旋转。
[0142] 实施例中差示扫描量热分析是由耐驰生产的DSC 214Polyma型差示扫描量热仪测 定的。测试条件为:升温速率为10 °C /min，测试温度范围为35 °C -220 °C。
[0143] 实施例中热重分析是由耐驰生产的TG 209F3型热重分析仪测定的。测试条件为： 升温速率为10 °C /min，测试温度范围35 °C -350 °C。
[0144] 实施例 1 2-[[(3&1?，43,61?，6&3)-6-氨基四氢-2,2-二甲基-纽-环戊二烯并-1，3-二氧基-4-基]氧基]-环丙基甲基乙基醚(式VI化合物）的制备
[0145] 步骤丨：^[(3&3,41?，63,6&10-四氢-6-(2-羟基乙氧基)-2,2-二甲基-411-环戊二烯 并-1，3-二氧基-4-基]-氨基甲酸苄酯(式X-1化合物)的制备
[0147]将2-[ [ (3aR，4S，6R，6aS)-6_氨基四氢-2，2-二甲基-4H-环戊二烯并-1，3-二氧杂-4-基]氧基]-乙醇L-酒石酸盐（式IX化合物的L-酒石酸盐）106.06g、甲基异丁基甲酮 1500ml、碳酸钾131.618和水658!111混合，然后在25~35°(：下滴加氯甲酸苄酯（0^-(：1) 54.16g，滴加完后继续搅拌约14小时，停止反应，分出上层有机相，水相用甲基异丁基甲酮 500ml反萃，合并有机相，减压浓缩，浓缩物经硅胶柱层析纯化得式X -1化合物。
[0148] 咕 Mffi(400MHz，DMS0-d6)S: 1.215(s，3H) ;1.359(s，3H) ;1.715-1.769(111，1H); 2.083-2.147(m,lH)；3.415-3.509(m,4H)；3.785-3.839(m,2H)；4.406-4.420(d,lH)； 4.467-4.482(d,lH)；4.714-4.739(m,lH)；5.027(s,2H)；6.855-6.875(d,lH)；7.293-7.372 (m，5H)〇
[0149] (+)-ESI-MS:352.2〇
[0150] 步骤ii 4-[(3&5,41?，65,6&10-四氢-6-(2-环丙基甲氧基乙氧基）-2,2-二甲基-4H-环戊二烯并-1，3-二氧基-4-基]-氨基甲酸苄酯(式M-l化合物）的制备
[0152] 氮气保护下，将式X -1化合物48.00g和N，N-二甲基甲酰胺300mr混合，然后在-5~ 5 °C下分批加入叔丁醇钾18.37g，再在-5~5 °C下搅拌约1小时后滴加溴甲基环丙烷(式XI-1 化合物)22.14g和N，N-二甲基甲酰胺15ml的混合溶液，加完后在-5~5 °C下继续搅拌反应约 5小时；加水200ml淬灭反应，然后加乙酸乙酯400ml萃取，分出有机相，有机相依次经水 400ml X 3洗涤、饱和氯化钠水溶液200ml洗涤、无水硫酸钠干燥、减压浓缩，浓缩物经硅胶柱 层析纯化得式M-1化合物。
[0153] Mffi(400MHz，DMS0-d6)S:-0.023-0.012(m，2H);0.276-0.319(m，2H) ;0.803-0.874(m,lH)；1.154(s,3H)；1.297(s,3H)；1.679-1.714(m,lH)；1.998-2.061(m,lH)； 3.039-3.180(m,2H)；3.428-3.525(m,4H)；3.743-3.809(m,2H)；4.350-4.366(d,lH)； 4.415-4.431(d，lH);4.912-4.986(m，2H);6.56卜6.582(d，lH);7.254-7.324(m，5H)。
[0154] (+)-ESI-MS:406.2〇
[0155] 步骤iii : 2-[ [ (3aR，4S，6R, 6aS)-6-氛基四氛-2，2-二甲基环戊二稀并 -1，3-二 氧基-4-基]氧基]-环丙基甲基乙基醚(式VI化合物）的制备
[0157] 将XH-1化合物29.00g、无水乙醇250ml和10%钯碳11.60g混合，通入氢气，在20~ 25°C下搅拌约21小时;过滤，用无水乙醇50ml洗涤滤饼并合并入滤液，滤液经减压浓缩得式 VI化合物。
[0158] (+)-ESI-MS：272.3〇
[0159] 实施例2 2-[{(3&1?，43,61?，6&3)-6-[7-溴-5-(丙硫基)-311-[1，2,3]三唑并[4,5- d]嘧啶-3-基]-2,2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d] [1,3]二氧杂环戊烯-4-基}氧基]-1-环丙基甲基乙基醚(式m-2化合物）的制备
[0160]步骤a: 2- [ ((3aR，4S，6R，6aS) -6- {[ 5-胺基-6-溴-2-(丙硫基）嘧啶-4-基]氨基}-2,2_二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][l，3]二氧杂环戊烯-4-基)氧基]-1-环丙基甲基乙基 醚(式珊-2化合物）的制备
[0162] 将式VI化合物17.20g、式VH-1化合物23.87g和N-甲基吡咯烷酮67mr混合，加入三 乙胺22.45g，氮气保护下在86~93 °C下搅拌约6小时；加水70ml和乙酸异丙酯200ml萃取，分 出有机相，水相用乙酸异丙酯l〇〇ml反萃，合并有机相，有机相依次经水150ml X3洗涤、减压 浓缩，浓缩物经硅胶柱层析纯化后得式珊-2化合物。
[0163] 咕匪1?(4001他，0150-(16)8:0.113-0.150(111，211);0.407-0.453(111，211) ;0.940-0.977(m，4H); 1.226(s，3H); 1.383(s，3H); 1.597-1.689(111，2H); 1.794-1.850(111，1H); 2.244-2.309(m，1H);2.957-2.993(m，2H);3.229-3.246(d，2H);3.498-3.601(m，4H); 3?865-3?886(t，1H);4.260-4?302(m，1H);4?508-4.549(m，2H) ;4.626(s，2H);6.556-6.573 (d，lH)〇
[0164] (+)-ESI-MS：517.2,519.2〇
[0165] 步骤 13:2-[{(3&1?，43,61?，6&3)-6-[7-溴-5-(丙硫基）-311-[1，2,3]三唑并[4,5-(1] 嘧啶-3-基]-2,2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d] [1,3]二氧杂环戊烯-4-基}氧基]-1-环 丙基甲基乙基醚(式m-2化合物）的制备
[0167] 将珊-2化合物24.50g和甲苯245mr混合，然后在0~10°C下依次加入乙酸15.61g和 亚硝酸钠水溶液(亚硝酸钠5.55g+水8.9ml)，加完后继续在0~10°C下搅拌约1小时；加入 碳酸钾水溶液(碳酸钾17.00g+水94ml)淬灭反应，分出有机相，得式m-2化合物的甲苯溶 液，可直接用于下一步反应。
[0168] (+)-ESI-MS：528.2,530.2〇
[0169] 实施例 3(13,25,31?，55)-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氟苯基)-环丙基]氨基}-5- (丙硫基)-3H-[l，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-环丙基甲氧基乙氧基)-1，2_环戊 烷二醇(式n化合物)的制备
[0170]步骤 1:2-({(3&1?，43,61?，6&3)-6-{[7-{[(11?，23)-2-(3,4-二氟苯基)-环丙基]氨 基}-5_(丙硫基)-3H-[l，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]_2,2_二甲基四氢-3aH-环戊二烯 并[d][l，3]二氧杂环戊烯-4-基}氧基]-1-环丙基甲基乙基醚(式V化合物)的制备
[0172] 将实施例2所得的式m-2化合物的甲苯溶液、水70ml和（11?，25)-2-(3,4-二氟苯 基)环丙基胺R-扁桃酸盐(式IV化合物的R-扁桃酸盐)15.18g混合，然后在0~10°C下滴加三 乙胺11.95g，滴完后再在10~20°C下搅拌约2小时；分出有机相，有机相依次经乙酸水溶液 (乙酸1.96g+水245ml)和饱和氯化钠水溶液250ml洗涤后得式V化合物的甲苯溶液，可直接 用于下一步反应。
[0173] (+)-ESI-MS：617.3〇
[0174] 步骤 2:(lS，2S，3R，5S)-3-[7-{[(lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基)-环丙基]氨基}-5-(丙硫基)-3H-[l，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-环丙基甲氧基乙氧基)-l，2-环戊 烷二醇(式n化合物)的制备
[0176] 将步骤1所得式V化合物的甲苯溶液和盐酸甲醇溶液(浓盐酸39.4ml+甲醇55ml) 混合，在10~15°C下搅拌约4.5小时；加水100ml，然后在0~10°C下用三乙胺调pH约为8,分 出有机相，水相用乙酸异丙酯250ml X2反萃，合并有机相，有机相依次经水200ml洗涤、饱和 氯化钠水溶液200ml洗涤、无水硫酸钠干燥和减压浓缩，得式II化合物。
[0177] 咕 Mffi(400MHz，DMS〇-d6)5:0.127-0.163(m，2H);0.417-0.462(m，2H);0.807-0.843and 0.941-1.006(m,4H)；1.343-1.393(m,lH)；1.468-1.579and 1.661-1.715(m, 3H) ;2.〇n-2.081(m，lH) ;2.103-2.149and 2.253(m，lH) ;2.6(U-2.676(m，lH) ;2.82卜 2.890(m，lH);2.916-2.985(m，lH);3.083-3.093and 3.129-3.178(m，lH);3.232-3.249(d， 2H)；3.509-3.631(m,4H)；3.759-3.785(maH)；3.950(maH)；4.546-4.596(maH)；4.941-5.009(q，lH) ;5.031-5.041(d，lH); 5.099-5.115(d，lH) ;7.066(111，1H) ;7.262-7.350(111， 2H);8?913-8?924and 9?326-9?336(d，1H)。
[0178] 13C 匪R( 100MHz，DMS〇-d6) S : 3 ? 30，10 ? 96，13 ? 42，15 ? 44，22 ? 77，24 ? 48，32 ? 82， 33.62,34.51，61.09,68.94,69.61，74.26,74.76,75.17,82.32，115.24，115.42，117.38， 117.55,123.25,123.28,123.31，123.66,139.37,139.68,139.72,139.74,139.78,146.99， 147?11，148?59，148?72，149?41，149?53，149?86，151?02，151?15，154?43，155?85，168?79， 169.65 〇
[0179] (+)-ESI-MS：577.3〇
[0180] 实施例4式n化合物晶型A的制备
[0181] 将式n化合物2g在40~50°C下溶于乙酸异丙酯6ml中，然后加入异辛烷6ml，搅拌 析晶约4小时，过滤，滤饼在40~45 °C下减压干燥，得式II化合物晶型A。
[0182] 所测的粉末X-射线衍射图谱见图1，其测量值如下表(取相对强度大于5%的衍射 峰对应的测量值）：
[0184]所测的差示扫描量热(DSC)图谱见图2。所测的热重分析(TGA)图谱见图3。应当理 解用其他类型设备或用不同于上述的条件可能给出不同的温度读数。因此，所提供的数字 不能作为绝对值。本领域技术人员应明白这些温度的准确值将受化合物纯度、样品重量、加 热速率和粒径的影响。
[0185] 实施例5式n化合物晶型A的制备
[0186] 将式n化合物2g在50~55°C下溶于乙酸异丙酯2ml中，然后加入异辛烷4ml，搅拌 析晶约4小时，过滤，得晶型A。
[0187] 实施例6式n化合物晶型A的制备
[0188] 将式n化合物2g在室温下溶于乙酸异丙酯12ml中，然后加入异辛烷20ml，搅拌析 晶约4小时，过滤，滤饼在70~75°C下减压干燥，得晶型A。
[0189] 实施例7式II化合物晶型A的制备
[0190] 将式n化合物2g在40~50°C下溶于乙酸乙酯4ml中，然后冷却至-10~0°C，搅拌析 晶约2小时，过滤，滤饼40~45°C下减压干燥，得晶型A。
[0191] 实施例8式n化合物晶型A的制备
[0192] 将式n化合物2g在40~50 °C下溶于乙酸异丙酯20ml中，然后加入正庚烷40ml，搅 拌析晶约4小时，过滤，滤饼在40~45°C下减压干燥，得晶型A。
[0193] 实施例9式n化合物晶型A的制备
[0194] 将式n化合物2g在40~50°C下溶于乙酸异丙酯4ml和乙酸乙酯2ml中，然后加入异 辛烷8ml，搅拌析晶约4小时，过滤，滤饼90~100°C下减压干燥，得晶型A。
[0195] 实施例10式n化合物晶型A稳定性试验
[0196] 以下为式II化合物晶型A在高温、高湿条件下进行试验，15天后进行有关物质和晶 型检测。
[0197] 有关物质用HPLC法进行检测：
[0198] 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶(Agilent ZORBAX SB-C18,4.6 X 150mm，1.8y m)为固定相，以0.01m〇l/L的NaH2P〇4缓冲溶液(用磷酸调节pH至3.5)为流动相六、乙腈为流动 相B，柱温为40 °C，流速为lml/min，检测波长为242nm，照下表梯度洗脱：
[0200] 流动相的配制：取二水合磷酸二氢钠1.56g，加水1000ml溶解，用磷酸调节pH3.5， 用0.22mi滤膜过滤即得流动相A;取色谱乙腈为流动相B。
[0201] 供试品溶液：（避光操作）取本品约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解 并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0202] 测定法:照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD)试验。
[0203] 检测结果如下：
[0204]
[0205] 该试验结果表明：式n化合物晶型A具有良好的稳定性。
[0206] 实施例11含式n化合物晶型A的片剂及其制备
[0207] 处方：
[0209] 制备:将上表组分中的式n化合物晶型A、甘露醇、二水合磷酸氢钙、羟丙基纤维素 和羧甲基淀粉钠混匀，用水湿法制粒，干燥，整粒，与硬脂酸镁混匀，压片，即得。
[0210] 实施例12抗血小板聚集的体外药效学试验
[0211] 本发明通过抑制ADP诱导兔血小板聚集试验评价了式n化合物与替格瑞洛的体外 活性。
[0212] 取兔后肢静脉血离心，分出富含血小板的血浆，分别加入溶媒、一系列浓度的式n 化合物或替格瑞洛，在37°C共同孵育5min后，加入ADP诱导血小板聚集。加入ADP后检测5min 内血小板最大聚集率(PAGm)。各组均设3个平行管。
[0213] 分组及加样情况如下：
[0214]
[0215] 溶媒DMS0在血小板体系中的终浓度为0.1%，与空白对照组相比，不会对血小板体 系产生影响。
[0217]不同浓度的式II化合物与替格瑞洛组5min内最大聚集率和抑制率的对比如下：
[0219] 该试验结果表明：式n化合物在体外具有与替格瑞洛类似的抗血小板活性。
[0220] 实施例13抗血小板聚集的体内药效学试验
[0221] 本发明通过Beagle犬血小板聚集试验评价了式II化合物与替格瑞洛的体内活性。
[0222] 6条雄性Beagle犬随机分为2组，禁食过夜后按照等摩尔比分别经口给予式II化合 物和替格瑞洛。首次给药后清洗7天，进行第2轮给药。给药后定时取血测定相应指标。
[0223] 每次药前及药后0.5、1、1.5、2、4、8、24、30各采集全血2mL，3.2%枸橼酸钠1:9抗 凝。低速离心(300g)5min制取富血小板血衆(PRP)。剩余样品继续高速离心(3000g)10min制 取贫血小板血浆(PPP)。以PPP调整PRP至血小板浓度为2 X 108/mL，检测血小板最大聚集率， 计算血小板聚集抑制率。
[0225] 该试验结果表明，式II化合物的血小板聚集抑制率在给药后8小时内低于替格瑞 洛，但在8小时后，高于替格瑞洛。
[0226] 实施例14体内药代动力学试验
[0227] 本发明通过SD大鼠经口给药评价了式II化合物与替格瑞洛的体内药代动力学。
[0228] 16只SD大鼠，随机分为2组，每组8只（雌雄各半），禁食过夜后按照等摩尔比分别给 予式II化合物、替格瑞洛。分别于给药前及给药后0.133(8min)、0.25(15min)、0.5(30min)、 1、2、4、8、12和24h各米集全血200iiL，肝素抗凝。于4 °C，3200rpm/min离心1 Omin分离血衆，检 测其中式n化合物和替格瑞洛的浓度。
[0230] 各组主要药动学参数如下：
[0234] 该试验结果表明：
[0235] (1 )、式n化合物或替格瑞洛经口给予大鼠后，均存在性别差异，与替格瑞洛原研 资料中大鼠口服替格瑞洛后的情况一致。
[0236] (2 )、式n化合物组中检测到大量的替格瑞洛，表明式n化合物在体内可以顺利的 代谢为替格瑞洛。
[0237] (3)、式n化合物组或替格瑞洛组等摩尔给药，但式n化合物组替格瑞洛的AUC、 Cmax明显高于替格瑞洛组，由于式n化合物本身也具有与替格瑞洛类似的药效活性，因此， 若按药效活性物计，式n化合物组的药效活性物暴露量将更明显高于替格瑞洛组。这表明 式n化合物及其性代谢物的生物利用度高于替格瑞洛。
[0238] (4)、式n化合物组替格瑞洛的Tmax比替格瑞洛的有所延迟，有利于延长药效时 间。
[0239] 实施例15对局部脑缺血大鼠脑梗塞体积的影响
[0240] (1)、试验材料和方法
[0241] Wistar大鼠，体重250-280g。手术前后单独饲养，室温保持23-25°C，自有进食和进 水。按照1〇1^等的方法制备七100模型。大鼠用10%水合氯醛麻醉(35〇11^/1^，;[4.)，体温 维持在37±0.5°C，仰卧位固定于手术台上。沿颈正中线切开皮肤，仔细分离右侧颈总动脉 (CCA)，颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA)。将ECA结扎剪断，拉直与ICA成一直线。在ECA上剪一 小口，将一根长4.0cm，直径0.26mm的圆头硅化尼龙绳（用0.1 %多聚赖氨酸包被）由此开口 插入ICA约1.85-2.00cm，指大鼠大脑前动脉起始处，阻断大脑中动脉的血流供应。缺血2小 时后小心抽出尼龙线，结扎ECA开口并缝合手术切口，动物放回笼中再灌24小时。
[0242] (2)、试验分组及给药
[0243] 大鼠随机分组：模型对照组，注射用水（10 0m 1 / k g)，式II化合物给药组（2 5、5 0、 100mg/kg)，MCA阻断造成缺血后10分钟时口服给药。
[0244] (3 )、脑梗塞体积的测定
[0245] 大鼠再灌注损伤24小时后，即刻断头取脑，去除嗅束、小脑和低位脑干，将其冠状 切成6片（第一至第五片21111]1/片，第六片41]11]1)，迅速置于51]11含有1.51]114%1'1'〇及 0.1mllMK 2HP〇4的溶液中染色(37°C，避光)20-30分钟，其间每隔5分钟翻动一次。经TTC染色 后，正常组织深染呈红色，梗死组织呈白色。将每组脑片排列整齐，拍照保存。求算每片的梗 死面积，并最终叠加换算成梗塞体积。梗塞体积以所占大脑半球的百分率来表示，以消除脑 水肿的影响。
[0246] 脑梗塞体积（％ )=(手术对侧半球体积-手术侧半球未梗塞部分的体积)/手术对 侧半球的体积*1〇〇 %
[0247] (4)、试验结果
[0248] 缺血2小时再灌注24小时后，溶剂对照组的脑梗塞体积（％)为33.8%。假手术组没 有任何脑梗塞出现。其他组脑梗塞体积结果如下：
[0249]
[0250] 该试验结果表明：与溶剂对照组比，式n化合物口服给药均可以显著缩小脑梗塞 体积，即式n化合物具有良好的改善脑缺血症状的作用。
[0251 ]实施例16对大鼠睡眠作用的影响
[0252] (1)、试验材料
[0253] 动物来源:昆明种小白鼠，18-22克，雄性。试验动物饲养室温度22±2°C，相对湿度 50-70%，动物饲养料。
[0254] 本试验设式II化合物给药剂量为25mg/kg，另设蒸馏水对照组。
[0255] 样品处理:各取样品25mg分别加蒸馏水至20ml，使成均匀悬液，供试。
[0256] (2)、戊巴比妥钠阈上剂量催眠试验
[0257] 小鼠随机分为对照组和式II化合物给药组，连续灌胃给样30天，于第30天样品灌 胃15分钟后，给各组动物50mg/kg.b.w的戊巴比妥钠腹腔注射，注射量为0.2ml/20g.b.w， 以小鼠翻正反射消失达1分钟以上作为入睡判断标准，观察给戊巴比妥钠60分钟内各组动 物的入睡时间和睡眠时间。
[0258] 式n化合物对动物体重的影响如下：
[0260] 该试验结果表明：式n化合物组动物体重与对照组相比，均无显著性差异。
[0261] 阈上剂量的戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响如下：
[0263] *P〈0 ? 05与对照组相比（经方差分析）
[0264] 该试验结果表明：式n化合物组动物在阈上剂量戊巴比妥钠诱导下的睡眠时间与 对照组相比，有显著性差异。
[0265] (3)、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验
[0266] 小鼠随机分为对照组和式II化合物给药组，连续灌胃给样28天，于第28天样品灌 胃15分钟后，给各组动物30mg/kg. b. w的戊巴比妥钠腹腔注射，注射量为0.2ml/20g. b. w，以 小鼠翻正反射消失达1分钟以上作为入睡判断标准，观察给戊巴比妥钠25分钟内各组动物 发生睡眠的动物数。
[0267]阈下剂量的戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率的影响如下：
[0269] *P〈0 ? 05与对照组相比（经卡方检验）
[0270] 该试验结果表明：式n化合物组在阈下剂量戊巴比妥钠诱导下的入睡动物数和睡 眠发生率与对照组相比，均有显著性差。
[0271] 上述试验结果表明：式n化合物具有良好的改善睡眠的作用。
【主权项】
1. 一种式π所示的Ξ挫并喀晚衍生物或其可药用盐、共晶、水合物或溶剂合物，2. -种式Π 所示的Ξ挫并喀晚衍生物或其可药用盐、共晶、水合物或溶剂合物的制备 方法，该方法包括： (1)、将式m化合物与式IV化合物或其酸加成物反应生成式V化合物，式虹中，Ri为F、C1、Br、I、0H或0A，其中A为径基活化基； (2 )、将式V化合物脱保护得到式Π 化合物，(3)、可选的，根据需要将式Π 化合物制成盐、制成共晶、制成水合物或制成溶剂合物。3. 用于制备式Π 化合物的中间体化合物，选自：式m化合物、式m-1化合物、式m-2化 合物、式V化合物、式VI化合物、式Μ化合物、式Μ-1化合物、式VDI-2化合物、式Μ化合物、式 Μ-1化合物或式Μ-2化合物。4. 结晶态的式Π 化合物。5. 根据权利要求4所述的结晶态式Π 化合物，其晶型为晶型A，该晶型的粉末X-射线衍 射图谱在 2 目值为 4.4° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、 20.7° ±0.2°、21.1° ±0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ±0.2°、27.5° ±0.2° 的位置有特征衍射 峰。6. 根据权利要求5所述的式Π 化合物晶型A，其粉末X-射线衍射图谱中在2Θ值为4.4° ± 0.2°、10.3° ±0.2°、15.4° ±0.2°、15.7° ±0.2°、17.3° ±0.2°、18.8° ±0.2°、20.0° ±0.2°、 20.7° ±0.2°、21.1° ±0.2°、21.7° ±0.2°、26.2° ±0.2°、26.6° ±0.2°、27.5° ±0.2°、28.2° ±0.2°的位置有特征衍射峰。7. 根据权利要求6所述的式Π 化合物晶型A，其粉末X-射线衍射图谱基本如图1所示。8. -种式Π 化合物晶型A的制备方法，该方法包括： (1 )、将式Π 化合物溶于醋类溶剂中； (2) 、析出固体； (3) 、分离析出的固体； (4) 、可选的，将所分离的固体进行干燥。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其中，步骤（1)中醋类溶剂选自乙酸乙醋、乙酸甲 醋、乙酸异丙醋、乙酸正丙醋、乙酸正下醋或它们的混合溶剂，优选乙酸乙醋、乙酸异丙醋、 乙酸正丙醋或它们的混合物;步骤(2)中析出固体的方式选自冷却析出固体、加入反溶剂析 出固体、浓缩出部分溶剂后析出固体或加入晶种析出固体。10. -种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1所述的式Π 化合物或其可药用 盐、共晶、水合物或溶剂合物，或治疗有效量的权利要求4所述的结晶态式Π 化合物，或治疗 有效量的权利要求5~7任一项所述的式Π 化合物晶型A，W及药用辅料。11. 权利要求1所述的式Π 化合物或其可药用盐、共晶、水合物或溶剂合物，或权利要求 4所述的结晶态式Π 化合物，或权利要求5~7任一项所述的式Π 化合物晶型A在制备抗凝血、 抗血栓、治疗或预防脑缺血性疾病或改善睡眠的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/519GK105968113SQ201610122570
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年3月4日
【发明人】袁道义, 赵雄, 陈真, 李学超, 彭丹, 欧兴蓉, 程鹤, 罗杰, 严庞科, 宫爱申, 向志祥, 王明霞, 刘国强, 王庚禹
【申请人】四川海思科制药有限公司, 广州诺威生物技术有限公司