专利名称：：测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的方法
技术领域：
：本发明涉及诊断测定法(diagnosticassay)领域，具体而言涉及测定血液样品中血小板功能活性以研究抗血小板组合物的效果，以及更具体而言涉及血小板激活剂(例如凝血酶受体激活肽(TRAP))用于测量灵敏度提高的凝血酶受体抑制齐'J(包括E5555(Eisai)和SCH530348(Schering-Plough))的血小板功能的用途。
背景技术：
：血小板在哺乳动物生理学中起的作用非常多样化，但是其主要作用是促进止血。在许多情况下，希望评价血液凝固的能力，其是常常由血小板粘附和/或聚集的能力控制的参数。因此，令人感兴趣的是对血小板粘附功能的评估。例如，令人感兴趣的问题包括施用药物是否能阻断或促进血块形成，或者是否在手术操作前检测血小板功能的不足。令人感兴趣的还有评估作为正在测试的新药或者被批准正在患者中用于临床治疗的血小板抑制剂的功效。已知血小板在多种条件下和多种不同的反应物存在下聚集。血小板聚集是用来描述血小板彼此结合的术语。体外的血小板凝集依赖于血小板在受到聚集诱导剂(如凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)或胶原)激活后将纤维蛋白原结合到血小板表面的能力。血小板在维持正常止血中起着关键的作用。当暴露于损伤的血管时，血小板将粘附在暴露的内皮下基质上。最初的粘附之后，在损伤的部位释放或产生的各种因子(如凝血酶、ADP或胶原)激活血小板。一旦血小板被激活，血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受体发生构象改变，使得其结合纤维蛋白原和/或冯维勒布兰德因子(vonWillebrandfactor)。正是这种在邻近的血小板上通过GPIIb/IIIa受体结合多价纤维蛋白原和/或冯维勒布兰德因子分子导致额外的血小板补充到损伤部位并聚集形成止血栓子或血栓。体外的血小板聚集仪法(plateletaggregometry)是用来评估体内血小板形成导致初级止血栓子的聚集的能力的方法。在这种技术中，将聚集剂(例如ADP或胶原)加入到全血或富含血小板的血浆中，并监测血小板的聚集。血小板聚集仪法是可以帮助患者诊断和选择疗法的诊断手段。目前测量血小板聚集的测定法昂贵、耗时、繁瑣，并且一般不适合临床环境。已经开发出快速的测定血小板功能测定法并在美国专利第5,763,199号(Coller)中进行了描述，其在此全部引入作为参考。该测定法测定全血中的糖蛋白GPIIb/IIIa受体阻滞(receptorblockade)。当用GPIIb/IIIa配体例如纤维蛋白原包覆的小聚合物珠(smallpolymericbeads)与含有具有未被阻滞的、激活的GPIIb/IIIa受体的血小板接触时导致所述小聚合物珠的凝集。没有凝集说明GPIIb/IIIa受体没有激活和/或者GPIIb/IIIa受体^皮阻滞。在优选的实施方式中，凝血酶受体激活剂的加入导致产生足以在床边进行的快速和方便的测定法，并且如果所述GPIIb/IIIa受体未受阻滞，那么所述测定法致使小聚合物珠在方便的、已知的时间段内凝集。所述测定法包括将要测试的血液在不打开收集容器的情况下从收集容器转移至测定装置(assaydevice)的能力。这种血小板聚集测定法可以与激活凝血时间(ACT)同时进行，测量ACT是用来评估肝素化的充分程度。血小板聚集在血栓形成和急性冠状动脉疾病中起关键作用。一种用于治疗血栓形成的方法涉及抑制凝血酶的酶活性，且用于这种目的的化合物包括了肝素、低分子量肝素、水蛭素、阿加曲班、水蛭肽等。所有的这些化合物抑制凝血酶的酶活性，并且通过在不特异性抑制凝血酶对细胞作用的情况下抑制纤维蛋白血块的形成而发挥作用。因而，流血倾向是临床上遇到的常见的副作用。血栓形成中的凝血酶的作用并不限于血液凝固活性。除了其在止血和伤口愈合中的主要作用外，凝血酶通过结合到两种细胞表面G蛋白酶偶联的蛋白酶激活受体PAR-1和PAR-4(也称作凝血酶受体)来激活人的血小板。(参见Kahn,等，A^we1998,394:690—694;Kahn等.，C//"./"veW,1999,103:879-887)。凝血酶对PAR-1的亲和力高于对PAR-4的亲和力，因此认为通过低剂量的凝血酶激活血小板主要是由PAR-1介导(mediated)的。已经有人提出PAR-4通过高剂量的凝血酶维持延长的血小板激活。(参见Covic,等，肠c/2醒'勿2000,39:5458—5467;Covic，等，7Tz薩6.版ma^,2002,87:722-727)。PAR-1和PAR-4受体的激活引起细胞内的钙释放，其激活PKC,从而调节糖蛋白IIMIIa,并使得整联蛋白配体结合位点促进血小板聚集。凝血酶诱导的细胞内4丐释放也激活了磷脂酶A2，释放花生四烯酸，即前列腺素和血栓素生物合成的第一步。PAR-1和PAR-4都已经被克隆，(参见Vu等，CW/1991,64:1057-1068;Xu等人，尸rac.Ato/.5W.1998,95:6642—6646;Maryanoff等，Cwr.MedC7zem.Orafcvwc.i/emato/.^ge"As2003,1(1):13-36)，这开启了通向开发輩巴向细胞凝血酶受体的物质的重要之门。这些凝血酶受体的氨基酸序列的精确检查已经显示PAR-1和PAR-4都在细胞外结构域中的特定位置由凝血酶切割以暴露与受体主体结合的新的N-末端序列，并引起跨膜信号传导。(参见Vu,等，胸,1991,353:674-677;Coughlin,S.R,，iVoc.淑/.^cadS.A1999,96:11023-11027)。用来复制激活的凝血酶受体的新N-末端序列的特异性肽(通常称作"凝血酶受体激活肽"或"TRAP")是未水解PAR-1和PAR-4的有效和选择性的激活剂，并且已经显示出触发由凝血酶引起的所有的血小板应答。(参见Kahn,等，JC7/"./"ve比1999,103:879—887;Hung等，J！历o/.CTzem.1992，267:20831-20834)。特异性激活PAR-1的PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)为具有如下的氨基酸序列的七肽SFLLRNP(NHrSer-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-COOH)。相反地，特异性激活PAR-4的PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)为六肽GYPGQV(NH2-Gly-Tyr-Pro-Gly-Gln-Val-COOH)。值得注意的是，TRAP画4的更有效的变体(在文献中或者称作TRAP-4或TRAP-4A)被报道具有氨基酸序列AYPGKF(NH2-Ala-Tyr-Pro-Gly-Lys-Phe-COOH)。(参见，例如，Soslau,等，J編.Oz亂2001，276(24):21173-21183)。对TRAP-1的结构活性关系的研究显示截短的TRAP-1五肽Phe-Leu-Leu-Arg-Asn对于由凝血酶或TRAP-1激活的血小板凝血酶受体均为弱拮抗剂。(参见Vassallo等人,/1992,267:6081-6085)。迄今为止已经探索了凝血酶受体拮抗作用的不同途径。其中一种途径是制备针对凝血酶受体的凝血酶结合域的抗体。这类抗体特异性且有效地抑制凝血酶激活血小板，而因此起到凝血酶受体拮抗剂的作用。(参见Hung等，J/"ve"1992，89:1350-1353)。另一种途径是开发TRAP的肽衍生物。(参见Bernatowicz等，MedC7zem.1996，39:4879-4887;Hoekstra等，S/oorg.MedC/zem.丄e".1998,8:1649-1654;McComsey等，5z.owg.MedCTzem.丄e".1999，9:255-260)。又一种途径是使用多种高通量的筛选试验寻找小分子凝血酶受体拮抗剂。(参见Ahn，等，Aoorg.MedOzew.丄机1999,9:2073-2078)。在美国专利第6,063,847号、第6,326,380号、第6,645,987号、第6,894,065号和第7,037,920号中已经披露了取代的三环凝血酶受体拮抗剂。因为凝血酶是人血d、板的最有效的激活剂，凝血酶受体拮抗剂很有可能在富含血小板的动脉血栓形成中发挥有效的抗血栓形成作用。因为凝血酶受体拮抗剂不会抑制凝血酶产生纤维蛋白的能力，所以这种作用剂引起的出血很可能比常规抗凝血剂少。预期对凝血酶受体具有拮抗作用的化合物对与凝血酶有关的疾病展现优异的治疗或预防效果，因此为有效治疗和预防，例如，血栓形成、血管再狭窄、深静脉血栓形成、肺栓塞、脑梗塞、心脏病、弥散性血管内凝血、高血压、炎性疾病、风湿病、哮喘、肾小球肾炎、骨质疏松症、神经障碍和恶性肿瘤提供了广阔的前景。E5555(Eisai有限公司(EisaiCo.,Ltd.),参见美国专利第7,244,730号和第7,304，083号)为通过拮抗蛋白酶激活的PAR-1凝血酶受体抑制血小板聚集的2-亚氨基吡咯烷衍生物。E5555在豚鼠血栓形成模型中已经显示了具有抗凝血效果，并且显示了在大鼠球嚢损伤模型中对新内膜增生的抑制效果和在兔蛛网膜下出血模型中对凝血酶诱导的收缩反应的抑制效果。(参见Kogushi等，TTzramZ).//aemoW.2007,5(Supp.l):P-M-059;Kay等，2007,38(12):3259-65)。在人细胞中，E5555已经显示了对凝血酶诱导的炎性标志物(如IL-6、CD40配体和P-选择蛋白)的释放和表达具有抑制作用，已经将这种抑制作用与急性冠状动脉综合征(ACS)患者中的高危事件相关联。(参见Kogushi等)。E5555目前正在美国进行用于冠状动脉疾病和急性冠状动脉综合征的临床试验。SCH530348(Schering-Plough公司，参见美国专利第6,063,847号、第6,326,380号、第6,645,987号、第6,894,065号和第7,037,920号)，取代的喜巴辛(himbacine)(源于澳大利亚木兰树皮的天然化合物)的三环类似物，是另一种新型的正在研究的抗血小板剂，其已经证明为PAR-1凝血酶受体的有效抑制剂。II期的临床研究表明用SCH530348处理的患者的出血时间没有增加，凝血时间也没有延长。(参见，例如O，Donnell等，"AntiplateletTherapyforSecondaryPreventionofNoncardioembolicIschemicStroke—ACriticalReview,"5VraA:e,publishedonlinebeforeprintMarch27,2008)。相关的药物代谢动力学和药效学分析表明SCH530348在来自经历非紧急经皮冠状动脉介入(PCI)的患者的血液样品中显示出持续的、剂量依赖性的、由特异性激动剂诱导的对血小板聚集的抑制。该化合物目前正在进行用于急性冠状动脉综合征和预防动脉血栓形成局部缺血性事件(atherothromboticischemicevents)的III期临床试验。由于凝血酶受体拮抗剂(例如E5555和SCH530348)预期应用于大量患有心血管和其它疾病的患者，用于检测对凝血酶受体拮抗剂的抗性和评估凝血酶受体拮抗剂处理的效果的方法将是有益的。因此，需要开发将会提供给定患者中有关凝血酶受体拮抗剂敏感性信息和处理效果的测定法。
发明内容因此，本发明的目的是提供测定已经受凝血酶受体拮抗剂影响的(affected)血液样品的方法和试剂盒，其中通过使用凝血酶受体激活剂(例如凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受体激活(TRAP-4》作为血小板激活剂进行测量。本发明的此项目的和其他目的在通过凝血酶受体拮抗剂测量对血小板聚集的抑制的方法中实现。首先，从用凝血酶受体拮抗剂处理的个体中得到包含血小板的血液样品。接着，在适合于在所述含有血小板的血液样品中激活血小板聚集的条件下使该血液样品与凝血酶受体激活剂接触。最后，评估在含有血小板的血液样品中由血小板介导的凝集以测定在个体中凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度。血小板没有聚集或血小板聚集的减少表明个体形成血小板血栓的能力响应于凝血酶受体拮抗剂处理而降低。在本发明的另一实施方式中，提供了测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的可选方法。首先，从用凝血酶受体拮抗剂处理的个体中得到包含血小板的血液样品。接着，在适合在所述含有血小板的血液样品中激活血小板聚集的条件下使该血液样品与凝血酶受体激活剂和包含固定在其上的GPIIa/IIIa受体配体的颗粒接触。最后，在含有血小板的血液样品中评估血小板介导的凝集以测定在个体中凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度。血小板没有聚集或血小板聚集的减少表明个体形成血小板血栓的能力响应于凝血酶受体拮抗剂处理而降低。在本发明的又一实施方式中，提供了测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的试剂盒，其包括凝血酶受体激活剂和固定在颗粒上的GPIIb/IIIa受体配体。在优选的实施方式中，还提供了抗凝血剂和使抗凝血的pH和盐浓度保持在适合血小板聚集的范围内的緩沖剂。图1为显示来自四个不同供体的含有血小板的血液样品对四种不同浓度的E5555的剂量依赖性响应。具体实施例方式除非另有说明，在这里使用的全部技术和科学术语具有与本发明所属的
技术领域：
一个普通技术人员通常所理解的意义相同。这里所参考的所有专利、专利申请(公开或未公开的)和其他出版物在此整体引入作为参考。如果在这节提出的定义与在此引入作为参考的专利、专利申请、公开的专利申请和其它出版物中提出的定义相反或不一致，则以在此节提出的定义^7准，而不以在此引入作为参考的定义为准。引用出版物或文件并非意欲承认任何这些出版物或文件为相关的现有技术，也不构成承认任何这些出版物或文件的内容或日期的承认。如在此使用，"一种(个)"指的是"至少一种(个)"或"一种(个)或多种(个)"。如在此使用，术语"个体"并不限于特定的物种或样品类型。例如，术语"个体，，可以指的是患者，并且常常为人类患者。然而，该术语并不限于人，因此也包括许多种哺乳动物物种。如在此使用，"治疗"指的是其中使状况(condition)、病症或疾病的症状改善或者产生有益变化的任何方式。治疗也包括在此所述的组合物的任何药物用途。如在此使用，"疾病或病症"指的是由例如感染或遗传缺陷引起的并且由可识别的症状表征的生物体中的病理状态。如在此使用，术语"凝血酶"指的是将可溶的纤维蛋白原转化为不可溶的血纤蛋白链，并催化多个其它凝固相关的反应的丝氨酸蛋白酶。除非另有指明，该术语不是物种特异性的(notspecies-specific)。所述术语包括a-凝血酶禾口y-;疑血酶，a-凝血酶为)疑血酶的天然形式(nativeform),y-凝血酶是从a-凝血酶产生的非凝固衍生物，其保留了大部分的血小板激活能力。由于Y-凝血酶对于纤维蛋白原无酶活性，其浓度通常不是以a-凝血酶的单位/ml(U/ml)表达的。然而，在文献中报道10-20nmi凝血酶等同于0.05-0.1U/mla-凝血酶。(参见,例如Soslau等，/5zo/.CTzem.2001,276(24):21173-21183)。如在此使用，术语"凝血酶受体，，指的是凝血酶激活的G蛋白偶联受体的蛋白酶激活受体(PAR)家族成员中的任何成员。除非另有指明，该术语不是物种特异性的。迄今为止，已经表征出PAR家族的四个成员PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。(参见MacFarlane等，"ProteinaseActivatedReceptors,"尸/zarmaco/.2001,53:245-282的综述)。在这四个受体中，PAR-1、PAR-3和PAR-4被凝血酶激活，而PAR-2^皮胰蛋白酶激活。因此，在此使用的术语"凝血酶受体，，泛指PAR-1、PAR-3和PAR-4。然而，由于在人血小板中已经检测到没有PAR-3表达，所以目前已知的蛋白酶激活受体中，仅有PAR-1和PAR-4与本发明相关。如在此所使用，术语"凝血酶受体激活剂，，指的是能够激活胞内信号传导事件的任意分子，所述事件包括由PAR-1和/或PAR-4凝血酶受体介导的胞内4丐释放。一些凝血酶受体激活剂，例如凝血酶，可以通过蛋白水解性裂解激活PAR-1和/或PAR-4;其它的，例如TRAP-1和TRAP-4可以分别激活未水解的PAR-1和PAR-4。因此，应该理解的是在此使用的术语"凝血酶受体激活剂"并不限于凝血酶受体激活作用的特定模式。如在此使用，术语"TRAP-l"指的是特异性激活PAR-1的七肽SFLLRNP(NH2-Ser-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-COOH),以及模拟肽(peptidomimetics)和其功能性的衍生物。在此使用的术语"TRAP-4，，指的是天然的六肽GYPGQV(NH2-Gly-Tyr-Pro-Gly-Gln-Val-COOH)和优化的六肽AYPGKF(NH2-Ala-Tyr-Pro-Gly-Lys-Phe-COOH,有时称作TRAP-4A),以及模拟肽和其功能性的衍生物，其中天然的六肽和优化的六肽都特异性地激活PAR-4。在本发明的多个实施方式中，在血液样品中，在测量凝血酶受体拮抗剂(例如E5555和SCH530348)对血小板聚集的抑制时使用凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)作为凝血酶受体激活剂。因此，例如，为了测定涉及用2-亚氨基吡咯烷衍生物(例如E5555)或取代的三环喜巴辛衍生物(例如SCH530348)对患者进行治疗的抗血小板疗法的效果，可以使用前述的组合物。上述组合物可以与用GPIIb/IIIa受体配体包覆的颗粒和进行凝血酶受体拮抗剂的效果测定所必须的任何其它反应物一起使用。可以使用包含上述激活剂组合物和颗粒的冻干试剂组合物。在一种途径中，将定容的(meteredvolume)待测量样品(例如全血)与冻干试剂机械地混合。监测透光率的变化并计算得到血小板的活性指数(indexofplateletactivity)。在一个方面，在小杯(cuvette)或整体式药筒(unitizedcartridge)中将全血样品与前述的冻干试剂混合。可以使用仪器来进行该测定。该仪器包括用来接收样品的孔，其中所述孔包含冻干试剂和用于进行测定的其它试剂。其它试剂可以为多种緩沖剂和/或冻干稳定剂。在本发明的一个实施方式中，提供测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的方法。首先，从用凝血酶受体拮抗剂处理的个体得到含有血小板的血液样品。接着，使该血液样品在适合于在所述含有血小板的血液样品中激活血小板聚集的条件下与凝血酶受体激活剂接触。最后，评估在所述含有血小板的血液样品中血小板介导的凝集以测定所述个体中凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度。没有血小板的聚集或血小板的聚集的减少说明所述个体形成血小板血栓的能力响应于凝血酶受体拮抗剂处理而降低。在本发明的另一实施方式中，提供了测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的可选方法。首先，从用凝血酶受体拮抗剂处理的个体得到含有血小板的血液样品。接着，使血液样品在适合于在所述含有血小板的血液样品中激活血小板聚集的条件下与凝血酶受体激活剂和包含固定在其上的GPIIa/IIIa受体配体的颗粒接触。最后，评估在所述含有血小板的血液样品中血小板介导的凝集以测定在所述个体中凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制是否存在和/或者抑制的程度。没有血小板聚集或血小板聚集的减少说明所述个体形成血小板血栓的能力响应凝血酶受体拮抗剂处理而降低。在一个方面，评估的凝血酶受体为PAR-1或PAR-4。因此，在另一方面，所述凝血酶受体激活剂可以包含选自下组的物质凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)和PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)。凝血酶的终浓度通常为大约0.01单位/ml(U/ml)至大约0.5U/ml,优选地，大约0.05U/ml至大约0.1U/ml。TRAP-1的终浓度通常为大约0.5pM至大约10/aM,优选地，大约1pM至大约5nM。TRAP-4的终浓度通常为大约50pM至大约lmM,优选地，大约O.lmM至大约0.5mM。重要的是，已知TRAP-4A变体(AYPGKF)比野生型(wildtype)TRAP-4(GYPGQV)更有效，由此例如使用0.5mMTRAP-4和0.1mMTRAP-4A可以得到相似水平的血小板聚集。在一个方面，本发明设计对全血样品进行血小板功能活性测定的方法。在另一方面，对血浆样品可以进行血小板功能活性测定。在又一方面，对富含血小板的血浆(PRP)样品可以进行血小板功能活性的测定。在一个实施方式中，所述样品是已经受凝血酶受体拮抗剂影响的样品。例如，所述样品可以来自使用凝血酶受体拮抗剂(例如PAR-1或PAR-4拮抗剂)进行处理的患者。在一个方面，所述凝血酶受体拮抗剂包括针对凝血酶受体的凝血酶结合域的抗体。在另一方面，所述凝血酶受体拮抗剂包括TRAP肽(包括TRAP-1或TRAP-4)的肽衍生物或模拟肽。在另一实施方式中，所述凝血酶受体拮抗剂包括2-亚氨基吡咯烷衍生物，例如，E5555(Eisai公司，参见美国专利第7,244,730号和第7,304,083号)或取代的三环喜巴辛衍生物，例如SCH530348(Schering-Plough公司，参见美国专利第6,063,847号、第6,326,380号、第6,645,987号、第6,894,065号和第7，037，920号)。同样在本发明的方法中也使用这样的试剂，其包含用能导致血小板特异性凝集的化合物包覆的颗粒，即通过血小板上的受体与颗粒上的化合物之间的特异性相互作用导致的血小板凝集。这样的化合物包括血小板受体和GPnb/IIIa受体配体的抗体(其可以为小有机分子)、多肽、蛋白质、单克隆抗体或者核酸，它们与血小板表面的GPIIb/nia受体结合、络合或者相互作用(这些仅用来说明而非限制)。当血小板表面的GPIIb/IIIa受体与颗粒上的GPIIb/IIIa受体配体结合、络合或者相互作用时产生血小板介导的颗粒聚集。GPIIb/IIIa配体通常包含纤维蛋白原、单克隆抗体10E5(Coller等,JC〃",/"ve"1983,72:325)、单克隆抗体c7E3(TheEPICInvestigators,JMed1994,330:956)、冯维勒布兰德因子、纤连蛋白、玻连蛋白和具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的其他配体或模拟这种序列的其它肽或者模拟肽(Cook，等，Dragso/Ae1994,19:135)。其它值得关注的化合物包括低分子量肝素等。附着所述化合物的颗粒至少为大约0.1微米，并且不大于大约20微米。在一个实施方式中，所述颗粒为大约0.1微米至大约IO微米。在另一实施方式中，所述颗粒为至少大约l微米，并且小于大约8微米。所述颗粒可以实际上为任何形状，但是通常为具有均一直径的球状。所述颗粒可以具有任意的密度，但是优选为接近于水的密度，一般为大约0.7至大约1.5g/ml。所述颗粒在表面上可以带电或者不带电，或者带正电或者带负电，优选为带负电。所述颗粒是经官能化的或者是可官能化的，从而在它们的表面直接或间接地被动结合或附着这些成分(member)。所述颗粒可以为固体(例如，由有机和无机聚合物或胶乳组成)、油滴(例如，烃、氟碳化合物、硅油)或小嚢泡(例如，合成的(如磷脂)或天然的(细胞核细胞器))。所述固体颗粒一般为聚合物，或者是加聚物或者是缩聚物，其可以容易地分散到液体介质中。可悬浮的颗粒的实例为聚合物材料，例如胶乳、脂双层、油滴、细胞和水凝胶。其它颗粒组合物包括聚合物，例如硝基纤维素、乙酸纤维素、聚(氯乙烯)、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-曱基丁烯)、聚苯乙烯、聚曱基丙烯酸酯、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)、尼龙、聚(正丁酸乙烯酯)(poly(vinylbutyrate))、多糖例如葡聚糖和改性的葡聚糖等；或者单独使用或者与其它材料组合使用。所述固体颗粒可以由聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、丙烯酸酯和曱基丙烯酸酯的衍生物的均聚物和共聚物，特别是酯和酰胺、有机硅(silicone)等组成。如上所述，将所述化合物包覆在颗粒上。一般而言，所述化合物是被动地结合到颗粒上。可以通过通常可以在文献中找到的已知的技术实现这种被动附着。(参见，i"列嗦口"ImmobilizedEnzymes,"IchiroChibata,HalstedPress,NewYork(1978);Cuatrecasas,/編.C7z亂1970，245:3059)。筒而言之，如上所述，所述颗粒的表面可以是多官能的或者能够被多官能化。有多种官能团可用或者可以结合多种官能团。官能团包括羧酸基、醛基、氨基、氰基、乙烯基、羟基、巯基等。将多种化合物连接到表面的方式是已知的，并且在文献中有详细的说明(参见上述)。可以通过键直接地或者通过中间的连接基团间接地附着侧端成分(sidemember)。连接基团的长度根据颗粒和侧端成分的性质可以广泛地变^i。在化合物分子附着到颗粒的过程中，控制化合物的分子与颗粒的比率。在一种方法中，颗粒表面上官能化位点的数目可以通过调节引入到颗粒表面的这些位点的数目来控制。可供选择地，或者结合上述方法，通过调节在用上述教导(teaching),还可以由本领域的技术人员提出其它方法。在本发明中使用的颗粒试剂可以用足够量的材料处理以阻断颗粒上的吸附区域。这样的材料将不影响颗粒发挥功能用于它们在本发明中的预期目的。阻断材料包括蛋白质，例如牛血清白蛋白、牛血清丙种球蛋白等；多糖，例如葡聚糖等。在另一可以与上述结合使用的方法中，使用了其中用于附着的官能化位点数使颗粒表面的吸附面积大大减少的颗粒。所述颗粒通常包含附着在其上或者包含在其中的标记(label)。所述标记可以为可用于检测目的的任意部分。所述标记通常是信号产生系统的成员。所述标记能够被直接或间接检测到。所述标记可以为同位素或非同位素，通常是非同位素，并且可以为染料、荧光分子、化学发光分子、催化剂(例如酶)、编码催化剂的多核苷酸、启动子、辅酶、酶底物、放射基团(radioactivegroup)、小有机分子、可扩增的多核苷酸序列等。在本发明的一个具体的实施方式中，所述颗粒包含一种或多种在红外进行吸收的染料。这样的染料包括菌绿素(bacteriochlorin)、bacteriochlorophytin、部聚曱炔染料(meropolymethinedyes)、苯并轮蜂(benzoannulenes)、插烯H、啉(vinylogousporphyrins)、菁染料(cyanine)和份菁染料(merocyanines)。感兴趣的特别的染料为铜(II)-四-叔丁基-四(二曱基氨基)-29H-31H-酞菁(copper(II)-tetra-tert-butyl-tetrakis(dimethylamino)-29H-31H-phthalocyanine)和氧钒基-四-叔丁基-四(二曱基氨基)_29H-31H-酞菁(vanadyl-tetra-tert-butyl-tetrakis(dimethylamincO-29H-31H-phthalocyanine)。选择的特定染料具有便利性、可用性、稳定性、与颗粒的相容性等。这些染料可以通过聚合或被动吸附直接并入颗粒本身。可以将所述染料单独加入(即，依次加入)或组合加入(即，同时加入)。或者，所述染料可以与连接组件组合连接到珠上，使得它们不会从表面滤出。不管使用何种加入方法，所述条件为颗粒表面不受在适当条件下的凝集能力的影响。所述染料吸收约750nm至约900nm的红外范围中的光，特别是在大约750850nm的范围中。对具有高水平红细胞的样品而言，所述光在大约800±10nm,其是氧合血红蛋白和还原血红蛋白的等吸光点。颗粒使用染料的量根据在目标的光范围内染料的消光系数、所需的测定敏感度、颗粒的尺寸、染料与颗粒的结合方式、染料与颗粒基质的相容性等变化。一4i而言，掺入的染料的量在大约120重量％,更通常为515重量％的范围内。在本发明中发现的特殊用途的染料为酞菁。不含金属的酞菁吸收在大约700nm(e二162,000)的光。金属络合物的吸收偏移至更短或者更长的波长处，大部分金属使吸收偏移至更短波长，但是一些，例如铅的吸收波长比不含金属的酞菁长很多。过渡金属与酞菁之间形成的络合物(金属酞菁和金属萘酞菁)对光和热的化学稳定性非常好。它们是在适当的金属存在下通过与邻苯二腈(opthalodinitrile)缩合形成的。在金属酞菁形成中使用的一些金属除了铜(Cu)和钒(V)之外，还有镁(Mg)、锌(Zn)和钴(Co)。在本发明的一个特定实施方式中，采用了具有平坦的最大吸收(flatabsorptionmaximum)的羧化微粒。这些微粒是通过摻入多种具有接近805nm的显著的最大吸收的染料来制备的。这导致跨越780~820nm的较宽范围的平坦的最大吸收光谱。所述样品可以为需要分析的任意合成的或天然的溶液，其中所述样品已经受到凝血酶受体拮抗剂，特别是E5555或SCH530348的作用。术语样品包括生物组织，其包括宿主的体液等。通常，可以对样品直接进行检测或可以进行预处理。本发明具有对含有血小板的样品的特殊应用，这些样品包括体液，例如，全血、富含血小板的血液组分如血浆等。在一个实施方式中本发明对全血样品具有特殊应用。样品的量取决于样品的性质。对于液体样品，例如抗凝全血(wholeanticoagulatedblood)，样品的量通常为大约30|il~5ml,优选地，大约100300|_il。术语"样品"包括直接来自患者的未处理的样品或已经在任何合适的液体介质(通常为水性介质(例如柠檬酸钠))中经预处理并制备的样品。优选地，根据本发明用于进行测定的介质为水性介质。在介质中也可以使用其它极性的共溶剂，通常为含有16个，更普遍为14个碳原子的含氧有机溶剂(oxygenatedorganicsolvent),包括醇、醚等。一般而言，存在的这样的共溶剂低于大约70重量％，更普遍地，低于30重量％。此外，在根据本发明的方法中常常采用多种辅助材料。例如，在测定介质中通常存在緩沖剂，还有用于测定介质和测定组分的稳定剂；表面活性剂，特别是非离子表面活性剂；结合增强子(bindingenhancer),例如聚亚烷基二醇(polyalkyleneglycol);等。介质的pH通常在大约2至大约11,优选地，在大约4至大约9的范围内。可以使用多种緩沖剂以实现期望的pH并在所述方法的过程中保持该pH。示例性的缓冲剂包括HEPES、硼酸盐、磷酸盐、碳酸盐、Tris、巴比妥(barbital)等。所使用的具体的緩冲剂对所述方法不是至关重要，但是在某种情况下一种緩沖剂可以比其它的更优选。在一些情况下，优选HEPES，并且以大约0.001M至大约0.05M的浓度，通常为大约0.01M的浓度存在。测定介质的体积为大约25pl至大约500|Lil，通常为大约75ial至大约250|il。所述测定可以在任何合适的容器中进行。考虑到便利性，容器为与进行测定和测量测定结果的仪器一起使用的小杯或药筒。反应容器通常包含干燥冻干形式的根据本发明的激活引发剂和其它试剂，例如，颗粒试剂等，稳定剂等。在使颗粒凝集的条件下温育样品与颗粒试剂的组合。通常在合适的(moderate)温度下实施所述方法。温度可以恒定不变或者可以变化。通常，在反应步骤中采用恒定的温度。通常采用的温度为大约IO至大约80°C,更通常为大约15至大约45。C，优选地，所述温度应该为至少25°C,更优选在大约30至大约4(TC的范围内，通常为大约37t:。测定颗粒凝集的程度，并且其与样品中的凝血酶受体拮抗剂的存在和/或量有关。凝集的存在可以通过观察颗粒的聚集进行视觉测定，其将表明凝集。优选地，如上所述，可以将颗粒染色以帮助视觉观察凝集或基体的凝聚。凝集的程度可以通过观察介质的光密度的变化速率等以分光光度法、浊度法、比浊测量法等测量。在本发明的一个具体实施方式中，对全血样品进行血小板功能活性的测定，所述全血样品来自正在经历E5555或SCH530348处理的患者。将该样品在合适的容器(例如，反应杯)中与用纤维蛋白原包覆的颗粒、和凝血酶受体激活剂(例如凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4))组合以形成测定介质。颗粒试剂的颗粒具有掺入其中的一种或多种红外染料。对所述组合施以凝集条件。接着，用红外区的光照射介质。测定来自测定混合物的红外光的透光率，其中透光率的水平与血小板功能活性相关。选择吸收峰位于大约800nm处的凝集介质。在800nm处的凝集介质吸光系数与全血吸光系数之间的比率应该优选大于大约4:1。具体测定的吸收率同时为凝集介质的吸光系数和测定样品中凝集介质的浓度的函数。在样品与试剂组合后，理想地，将其加热至室温以上，但是低于干扰测定的溫度，从而确保可以控制温度使其不会不利地影响测定结果。合意地，温度应该为至少25°。，优选在3040"C的范围内，更有选在大约37i:。在合并试剂与样品的过程中和在反应的过程中经常轻轻地搅拌反应介质。充分搅拌使测定样品实现并保持均质。从零时间点(混合时刻)起的总读取时间可以为大约10秒至10分钟，更普遍为大约30秒至8分钟，并且优选地大约30秒至3分钟。可以通过任何合适的方法分析数据，具体而言使用能够相对于校准物和/或控制器来处理数据的算法。凝集的水平为测试样品的血小板功能活性的指示。可以将凝集的程度与具有已知血小板功能活性的标准品比较。通常将结果与校准物比较，校准物可以同时进行或者先前已经进行，或者可以作为标准曲线提供。本发明的方法可以与测定血小板数量的方法(例如在1998年IO月23日提交的美国专利申请序列号第09/177,884号和在1999年10月20日提交的国际专利申请第PCT/US1999/24670号(公开号WO/2000/025140)中所描述)一起使用，相关的公开在此引入作为参考。上述的测定优选在装置中进行，所述装置允许本发明的反应发生并测量反应结果。该仪器应该是基于激活的血小板与纤维蛋白原结合的能力来评估血小板功能的。随着激活的血小板结合并凝集用纤维蛋白原包覆的颗粒，透光率增加。一般而言，测量测定结果的仪器为能够测量凝集的仪器。优选地，该仪器测量由于凝集引起的光信号的变化。合适的仪器包括(仅用于说明而非限制)动力学分光光度计，VERIFYNOWTM系统仪器(可从Accumetrics,Inc.,SanDiego,Calif以商业方法获得，并且用于对正常样品进行快速血小板功能活性测量)等。VERIFYNOW系统仪器是基于浊度分析法的光学检测系统,其将血小板诱导的聚集作为透光率的增加来测量。该系统包括一个分析器，可弃式药筒(disposableCartridge)和控制器。该药筒包括基于微粒凝集技术的试剂。所述质量控制系统包括电子控制器、两个水平的测定的"湿"控制器("wet"controls)(WQC)、药筒内的湿度壽文感器、内部(in-packaging)温度指示器和同时进行两个测定通路的测试器(test)。分析器控制测定次序、建立测定温度、控制试剂样品混合所需要的持续时间、测定血小板功能的程度、显示结果和进行自我诊断。为了在本方法中使用，系统的测试药筒包含含有颗粒、凝血酶受体激活剂和緩沖剂的冻干制剂，所述颗粒具有被动结合的GPIIb/IIIa受体配体。患者样品通常是柠檬酸盐化的全血，其将由分析器自动从血液收集管分配到药筒中，而不需要使用者处理血液。通过颗粒的红外吸收特征检测相互作用。随着颗粒与血小板的相互作用，通过VERIFYNOWTM仪器的光系统测量颗粒的凝集。将凝集作为穿过样品的红外线透光率的增加来检测。在本发明的另一实施方式中为试剂盒，其在包装的组合物中包括冻干制备物，所述制备物包含具有被动结合的纤维蛋白原的颗粒、凝血酶受体激活剂(例如凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4))和緩沖剂。所述冻干制备物可以存在于反应容器(例如用于分析仪器中的药筒)中。至于上述的VERIFYNOWTM系统，所述冻干的制备物可以置于分析仪中使用的四孔药筒中的外部孔中。所述试剂盒也可以包括样品收集容器和/或用于实现本方法的装置。可以大范围地改变试剂的相对量以在溶液中提供使测定敏感度在实质上得到优化的试剂浓度。其中，恰当地，可以将所述试剂置于密封的包装中从而保持任意试剂的活性。所述包装可以为，例如由基本不透水的材料制成的包(bag)、袋(pouch)等。这些材料包括塑料、铝箔等(仅用于说明，而非限制)。至于血液样品，所述试剂盒也可以包括用于刺穿人皮肤的物品、消毒剂或灭菌垫(sterilizingpad)等。所述试剂盒还可以包括校准器(calibrator)和标准品。此外，试剂盒还可以包括一种或多种用于进行血小板数测定的试剂。所述试剂盒可以包括进行本发明的测定法所必需的试剂。在一个实施方式中，所述试剂盒包括储血瓶、使要评估的血液样品的pH和盐浓度保持在适合血小板介导的固体表面凝集的范围内的緩沖剂、和包覆有血小板GPIIb/IIIa受体配体的小聚合物珠。所述緩沖剂可以为溶液，或者可以仅仅由緩冲组合物和盐组成，向其中加入已知量的盐以得到所需的緩冲溶液。任选地，所述试剂盒也可以包括抗凝血剂。在一个实施方式中，所述緩冲剂为HEPES;所述抗凝血剂为祌檬酸盐；GPIIb/IIIa受体配体为纤维蛋白原；小聚合物珠为聚丙烯腈或羧化的聚苯乙烯，其中，肽GPIIb/nia受体配体(例如纤维蛋白原)通过所述肽与珠表面的官能团之间的疏水键和/或氢键被动地结合到珠的表面。在又一实施方式中，所述试剂盒还包括凝血酶受体激活剂，例如凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)。下面的实施例和制备是用来说明本发明，而不是用来限制其范围的。除非另有说明，份和百分数都是以重量计算的。实施例使用VERIFYNOWIlb/IIIaAssay(Accumetrics,Inc.,SanDiego,Calif.)并使用PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-1)作为血小板激活剂进行了实验以测定PAR-1拮抗剂E5555(Eisai有限公司)对血小板的剂量依赖性抑制。使用3.7nM的TRAP-1进行了剂量响应测试。使用终浓度为30ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml和1.0ng/ml的E5555。将20的各种原液(stocksolution)加入到2.0ml的全血中(l:100稀释)，并小心地混合以避免溶血。混合之后，在血小板抑制试验之前，将血液样品在37。C条件下保温(incubate)30分钟。将来自四位人类供体的血液样品在基线以及四种E5555浓度中的每种浓度下运行两次。正如所料，在给定的E5555浓度下测量的血小板抑制水平在供体与供体之间存在的差异。基于在提供的各个E5555浓度下的预期的抑制水平，四个供体的实际结果平均稍微低于预期。将各供体相对于其基线值的血小板抑制率总结在图1和下表1中。表1人类供体血液样品中E5555对血小板的剂量依赖性抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>如图1和表1所示，上述试剂和系统成功地检测了来自用不同剂量凝血酶受体(PAR-1)拮抗剂处理的血液样品的血小板聚集程度。因此，从上述结果显而易见的是本发明提供了简单、快速的方法，用于测量因曝露于凝血酶受体拮抗剂而受到影响的血液样品中的血小板聚集。包括上述实施例仅用于说明目的，并非用于限制本发明的范围。可以对上文描述的实施例作出许多改变。因为对于本领域的技术人员而言，对上述的实施例作出修改和改变是显而易见的，所以本方面仅受限于附加的权利要求的范围。权利要求1.用于测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的方法，该方法包括如下步骤a)提供来自用凝血酶受体拮抗剂处理的个体的含有血小板的血液样品；b)在适合在所述含有血小板的血液样品中激活血小板聚集的条件下，使所述的含有血小板的血液样品与凝血酶受体激活剂接触；和c)评估所述含有血小板的血液样品中的血小板聚集以测定在所述个体中凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度，其中，没有所述的血小板聚集或血小板聚集的减少表明所述个体形成血小板聚集的能力响应所述凝血酶受体拮抗剂处理而降低。2.权利要求1的方法，其中所述凝血酶受体为PAR-1或PAR-4。3.权利要求1的方法，其中所述凝血酶受体激活剂包括选自下组的物质凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-l)和PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)。4.权利要求3的方法，其中所述凝血酶的终浓度为大约0.01U/ml至大约0.5U/ml。5.权利要求3的方法，其中所述TRAP-1的终浓度为大约0.5iiM至大约10|iM。6.权利要求3的方法，其中所述TRAP-4的终浓度为大约50)aM至大约1mM。7.权利要求l的方法，其中所述凝血酶受体激活剂包含TRAP-1。8.权利要求l的方法，其中所述含有血小板的血液样品为全血样品。9.权利要求l的方法，其中所述含有血小板的血液样品为血浆样品。10.权利要求9的方法，其中所述血浆样品为富含血小板的血浆(PRP)样品。11.权利要求1的方法，其中所述凝血酶受体拮抗剂包含选自下组的物质凝血酶受体的凝血酶结合域的抗体、TRAP-1的肽衍生物、TRAP-4的肽衍生物、TRAP-1衍生物的模拟肽、TRAP-4衍生物的模拟肽、E5555和SCH530348。12.权利要求ll的方法，其中所述凝血酶受体拮抗剂包含E5555。13.权利要求11的方法，其中所述凝血酶受体拮抗剂包含SCH530348。14.权利要求1的方法，其中所述凝血酶受体激活剂包含在吸收峰位于约800nm的测定介质中。15.权利要求1的方法，其是在30。C至4(TC的温度范围下进行的，并且从含有血小板的血液样品与凝血酶受体激活剂接触的时刻起总读取时间为大约IO秒至大约IO分钟。16.权利要求l的方法，其中在一次使用性测定装置中使所述含有血小板的血液样品与所述凝血酶受体激活剂接触。17.用于测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的方法，其包括如下步骤-a)提供来自用凝血酶受体拮抗剂处理的个体的含有血小板的血液样品；b)使所述的含有血小板的血液样品与凝血酶受体激活剂和包含固定在其上的GPIIb/IIIa受体配体的颗粒在适合于所述颗粒通过所述血小板的介导在所述血液中凝集的条件下接触；和c)评估所述凝集以测定在所述个体中所述凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的是否存在和/或抑制的程度，其中，没有所述凝集或所述凝集的减少表明所述个体形成血小板聚集的能力响应所述凝血酶受体拮抗剂处理而降低。18.权利要求17的方法，其中所述凝血酶受体为PAR-1或PAR-4。19.权利要求17的方法，其中所述凝血酶受体激活剂包含选自下组的物质凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-l)和PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)。20.权利要求19的方法，其中所述凝血酶的终浓度为大约0.01U/ml至大约0.5U/ml。21.权利要求19的方法，其中所述TRAP-1的终浓度为大约0.5nM至大约10pM。22.权利要求19的方法，其中所述TRAP-4的终浓度为大约50juM至大约1mM。23.权利要求17的方法，其中所述凝血酶受体激活剂包含TRAP-1。24.权利要求17的方法，其中所述含有血小板的血液样品为全血样品。25.权利要求17的方法，其中所述含有血小板的血液样品为血浆样品。26.权利要求25的方法，其中所述血浆样品为富含血小板的血浆(PRP)样品。27.权利要求17的方法，其中所述凝血酶受体拮抗剂包含选自下组的物质凝血酶受体的凝血酶结合域的抗体、TRAP-1的肽衍生物、TRAP-4的肽衍生物、TRAP-1衍生物的模拟肽、TRAP-4衍生物的模拟肽、E5555和SCH530348。28.权利要求27的方法，其中所述凝血酶受体拮抗剂包含E5555。29.权利要求27的方法，其中所述凝血酶受体拮抗剂包含SCH530348。30.权利要求17的方法，其中所述颗粒包含聚苯乙烯或胶乳。31.权利要求17的方法，其中所述颗粒的直径为大约1微米至大约8微米。32.权利要求17的方法，其中所述颗粒包含红外染料，含有血小板的血液样品与颗粒之间的接触形成测定混合物，通过用红外光谱中的光照射所述测定混合物并评估来自测定混合物的红外光透光率来评估由血小板介导的颗粒的凝集。33.权利要求17的方法，其中所述GPIIb/IIIa受体配体包含选自下组的物质纤维蛋白原、单克隆抗体10E5、单克隆抗体c7E3、冯维勒布兰德因子、纤连蛋白、玻连蛋白、具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的配体和模拟RGD序列的肽或模拟肽。34.权利要求17的方法，其中所述GPIIb/nia受体配体包含纤维蛋白原。35.权利要求17的方法，其中所述颗粒和凝血酶受体激活剂包含在吸收峰位于大约800nm处的测定介质中。36.权利要求17的方法，其是在3(TC至40。C的温度下进行的，并且从含有血小板的血液样品、包含附着的GPIIb/IIIa受体配体的颗粒和凝血酶受37.权利要求17的方法，其中在一次使用性测定装置中使所述含有血小板的血液样品与含有所述GPIIb/IIIa受体配体的所述颗粒和所迷凝血酶受体激活剂接触。38.用于测量凝血酶受体拮抗剂抑制血小板聚集的试剂盒，其包含凝血酶受体激活剂和固定在颗粒上的GPIIb/IIIa受体配体。39.权利要求38的试剂盒，其还包含抗凝血剂和将抗凝血的pH和盐浓度保持在适合于血小板聚集的范围内的緩沖剂。40.权利要求38的试剂盒，其中所述GPIIb/IIIa受体配体包含选自下组的物质纤维蛋白原、单克隆抗体10E5、单克隆抗体c7E3、冯维勒布兰德因子、纤连蛋白、玻连蛋白、具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的配体和模拟RGD序列的肽或模拟肽。41.权利要求38的试剂盒，其中所述GPIIb/IIIa受体配体包含纤维蛋白原。42.权利要求38的试剂盒，其中所述凝血酶受体激活剂包含选自下组的物质凝血酶、PAR-1凝血酶受体激活肽(TRAP-l)和PAR-4凝血酶受体激活肽(TRAP-4)。43.权利要求38的试剂盒，其中所述凝血酶受体激活剂包含TRAP-1。44.权利要求38的试剂盒，其中所述颗粒包含聚苯乙烯或胶乳。45.权利要求38的试剂盒，其中所述颗粒的直径为大约1微米至大约8微米。46.权利要求38的试剂盒，其中所述试剂盒包含一次使用性测定装置。全文摘要本发明提供了用于测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的方法。首先，从用凝血酶受体拮抗剂处理的患者身上得到血液样品。使该血液样品与凝血酶受体激活剂和包含固定的GPIIb/IIIa受体配体的颗粒组合在一起混合。然后在适合于颗粒聚集的条件下温育该组合，并在混合物中评估血小板介导的聚集。没有聚集说明患者响应了凝血酶受体拮抗剂处理而具有降低的形成血小板血栓的能力。本发明也提供了一种用于测量凝血酶受体拮抗剂对血小板聚集的抑制的试剂盒，该试剂盒包含固定在颗粒上的GPIIb/IIIa受体配体、凝血酶受体激活剂、抗凝血剂和缓冲剂以在适合于血小板聚集的条件下保持抗凝血。文档编号G01N33/86GK101675342SQ200880014577公开日2010年3月17日申请日期2008年5月2日优先权日2007年5月3日发明者丹尼斯·德宾申请人:阿库米特里克斯股份有限公司