用于检测微生物的干扰肽和方法
【专利摘要】本发明涉及新的干扰肽，其具有长度为7至12个氨基酸的肽序列S，所述肽序列S来源于微生物M的抗原蛋白的肽序列，所述序列S与长度为7至12个氨基酸的肽序列S’匹配，所述肽序列S’来源于不同于微生物M的微生物M’的靶蛋白的肽序列，条件是：在它们7至12个氨基酸的长度上序列S和S’具有至少50％的相同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在所述序列的一端和/或另一端有1或2个氨基酸的差异。本发明还涉及所述干扰肽在基于免疫测定法的体外检测生物学样品中微生物M’或M的存在的方法中的使用，以改进特异性。
【专利说明】用于检测微生物的干扰肽和方法
[0001] 本发明涉及诊断领域。特别地，本发明涉及新的肽，其对于消除在基于免疫学分析 体外检测生物学样品中微生物的存在时的干扰问题特别有用，所述干扰问题跟所测试的样 品有关。
[0002] 基于免疫学分析的检测方法广泛用于诊断领域。这些方法可以检测包括蛋白质 (抗原/抗体）、肽和半抗原（例如，类固醇或维生素）形式的分析物。免疫学分析，也称为 免疫测定法法或免疫酶测试，是本领域技术人员熟知的方法，涉及待测分析物和一种或多 种与该分析物结合的伴侣之间的免疫学反应。举例来说，可能提及的这样的免疫测定法方 法包括可按照"三明治"的原理或者按照"竞争"原理进行操作的方法，诸如ELISA、ELFA、 CLIA、ECLIA、IRMA和RIA，以及免疫检测方法，例如免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧 光、Western印迹和点印迹。
[0003] 这些免疫学分析的结果，接下来由实验室提供给医生，医生会解释这些结果以诊 断病理状态，随后给病人提供适当的治疗。因此，对于这些分析尤其重要的是：高度敏感性， 在这个意义上，它们不产生假阴性结果；以及高度特异性，在这个意义上，它们不产生假阳 性结果。
[0004] 一个损害这些分析的灵敏度以及尤其是特异性的原因是与所测试的样品相关 的干扰的存在。每次待测试样品产生改变测试信号的反应时发生干扰，从而改变结果的 正确值，例如通过提供不能与所述分析物区分开的信号，从而产生假阳性，或通过使信 号减弱，从而当信号低于所用的试剂盒的检测阈值时，可能产生假阴性结果，（Tate and Ward, 2004) 〇
[0005] 在免疫学分析时，假阳性反应经常与非特异性抗原抗体反应相关，所述非特异性 抗原抗体反应是由于测试样品中存在一些干扰分析的物质，诸如与用于所述分析的结合伴 侣结合的抗体。例如，某些病人的血清中含有针对动物蛋白的人抗体，例如是在接种疫苗后 产生的，所述抗体能够与作为所用的分析试剂盒的成分的动物免疫球蛋白反应，从而可以 产生异常的分析结果。内源性的干扰物质既可能存在于获得自健康个体的样品，也可能存 在于获得自具有病理性状况的或具有感染的个体的样品。这种干扰现象不依赖于患者的临 床状态。
[0006] 已对各种用于减少与所测试的样品相关的干扰反应的方法进行了描述。比如， 已知的实践使用碳水化合物、蛋白质化合物、蛋白质混合物或水解产物（EP 0 260 903, US 4 931 385)。还描述了使用修饰的蛋白质，尤其是琥珀酰化和乙酰化的蛋白质（EP 0 525 916)，或者具有相对于天然序列进行了必要修饰的氨基酸序列的肽，比如基本上由D-氨基 酸组成的肽（US 6153 393)。然而，这些办法都不能完全的消除所述分析中的假阳性的存 在，并且加入这些物质有时甚至导致其它的干扰，降低检测的敏感性。
[0007] 其他假阳性可能不是因为所测试的样品，而是因为测试所用的结合伴侣本身，t匕 如要检测同一样品里的抗原和抗体时，如专利申请W02008/027942中描述的那样。然而，这 些结合伴侣相关的干扰与所分析的样品相关的干扰不同，并且用来降低这类干扰的方法与 用来降低所分析的样品相关的干扰的方法不同。
[0008] 因为并非所有的干扰都被消除，实验室有时不得不进行替代分析或额外的测量， 以验证他们的诊断测试的结果。因此，减少，甚或是消除实验中的干扰特别重要，特别是当 存在假阳性的问题时，因为患者会接受他们并不需要的药物治疗。
[0009] 申请人:证明，对于所有预期，即在用免疫学分析体外检测微生物的存在时，可以用 来源自这个微生物特异性的肽，和来源自与所检测微生物不同的微生物显示与所述肽至少 50%相同性的其它肽，以消除所测试的样品中的假阳性检测而不降低该测试的敏感性，所 述假阳性检测是因为与这些所测试的样品相关的干扰。
[0010] 事实上， 申请人:已经证明假阳性和针对于微生物Ml的抗体的存在相关，所述微生 物Ml不同于待测微生物M2,所述微生物Ml是造成干扰以及想要中和的检测的原因，其某一 种肽显示出与微生物M2的肽在有限长度上的相同性，并且添加相应的特定的属于微生物 Ml或M2的肽，可以消除假阳性而不损害测试的敏感性。
[0011] 因此，本发明涉及干扰肽，其特征在于，它们的序列选自：
[0012] (i)长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于微生物Ml抗原蛋白，和
[0013] (ii)长度为7至12个氨基酸的肽序列S2,其来源于与Ml不同的微生物M2的靶 蛋白的肽序列，
[0014] 其中所述序列S1和S2相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上，它们显示至少50% 的相同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序 列一端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异。
[0015] 一个主题涉及基于免疫测定法体外检测生物学样品中微生物M2存在的方法，所 述方法通过检测至少一种针对待测微生物M2的靶蛋白的抗体Ab K而进行，其特征在于包括 以下步骤：
[0016] a)提供免疫测定法所需的、至少一种待测抗体AbM2的至少一种结合伴侣，所述至 少一种结合伴侣来源于靶蛋白或者是靶蛋白本身，所述抗体针对所述靶蛋白，
[0017] b)提供至少一种干扰肽，其具有选自如下的序列：
[0018] -(i)长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于与所述微生物M2不同的微生 物Ml的抗原蛋白的肽序列，以及
[0019] -(ii)长度为7至12的氨基酸的肽序列S2,其来源于所述微生物M2的靶蛋白的 肽序列，而且包含在所述至少一种结合伴侣的肽序列中，
[0020] -其中所述序列S1和S2相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上显示至少50%的 相同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列 的一端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异，
[0021] c)在所述至少一种干扰肽存在的条件下实施免疫测定法，以及
[0022] d)通过测量抗体A、和结合伴侣之间形成的复合物检测微生物M2的存在。
[0023] 另一主题涉及基于免疫测定法体外检测生物学样品中微生物M2的方法，所述方 法通过检测待测微生物M2的至少一种靶蛋白而进行，其特征在于包括以下步骤：
[0024] a)提供免疫测定法所需的、至少一种待测抗体AbM2的至少一种结合伴侣，
[0025] b)提供至少一种具有选自如下的序列的干扰肽：
[0026] _(i)长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于与所述微生物M2不同的微生 物Ml的抗原蛋白的肽序列，以及
[0027] _(ii)长度为7至12的氨基酸的肽序列S2,其来源于上述微生物M2的靶蛋白中 的肽序列，而且包含在所述至少一种靶蛋白的肽序列中，
[0028] -其中所述序列S1和S2相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上显示50%的相同 性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列一端 和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异。
[0029] c)在所述至少一种干扰肽存在的条件下实施免疫测定法，以及
[0030] d)通过测量靶蛋白和结合伴侣之间形成的复合物检测微生物M2的存在。
[0031] 另一主题涉及干扰肽的使用，所述干扰肽具有选自如下的序列：
[0032] ⑴长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于微生物Ml抗原蛋白，和
[0033] (ii)微生物M2的靶蛋白肽序列的长度为7至12个氨基酸的肽S2,其来源于与所 述微生物Ml不同，
[0034] 其中在基于免疫测定法体外检测生物学样品中代表待测微生物M2的性分析物的 方法中，所述序列S1和S2互相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上显示至少50%的相同 性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列的一 端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异。
[0035] 另一主题涉及改进生物学样品中基于免疫测定法体外检测代表待测微生物M2的 分析物的方法的特异性的方法，其特征在于，在免疫测定法实施过程中，其包括使用至少一 种具有如下序列的干扰肽：
[0036] ⑴长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于与所述微生物M2不同的微生 物Ml的抗原蛋白的肽序列，以及
[0037] (ii)长度为7至12的氨基酸长度的肽序列S2,其来源于所述微生物M2的靶蛋白 中的肽序列，
[0038] 其中所述序列S1和S2相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上显示至少50%的相 同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列的 一端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异。
[0039] 申请人:已经表明，针对所有预期，通过使用特定的肽，在实施用于检测微生物M2 的免疫测定法的过程中可以减少甚至消除与所测试样品相关的假阳性检测，这些肽具有以 下特点：
[0040] -它们具有长度为7至12个氨基酸的肽序列，其来源于与所述微生物M2不同的微 生物Ml的抗原蛋白的肽序列，或者具有长度为7至12的氨基酸的肽序列，其来源于待测微 生物M2的靶蛋白的肽序列，
[0041] -序列S1和S2相匹配，
[0042] -在其7至12个氨基酸的长度上，序列S1和S2显示至少50%的相同性，以及至 少有4个相同的或类似的连续的氨基酸，
[0043] -序列S1和S2具有相同的长度，或者它们在序列的一端和/或另一端显示出1或 2个氨基酸的差异。
[0044] 为了清楚，当需要概括时，用于本发明目的的干扰肽称为涉及具有序列S的肽，所 述肽具有序列S1或S2,因此，所述肽来源于微生物Ml或M2。用于分离具有序列S的肽的 肽称为具有序列S'的肽，已知这种选择是完全任意的，因为这两种肽具有序列S1和S2,因 此S和S'，可以用作并且已经用作根据本发明的干扰肽，并且因此选择将具有序列S1或S2 的肽称为具有S'的肽。
[0045] 换句话说，用于本发明目的的干扰肽是具有长度为7至12个氨基酸序列S的干扰 肽，所述序列S来源于微生物Μ的抗原蛋白的肽序列。所述S与不同的长度为7至12个氨 基酸的肽序列S'匹配，所述肽序列S'来源于与微生物Μ不同的微生物Μ'的靶蛋白的肽序 列。其中在其7至12个氨基酸的长度上，所述序列S和S'显示至少50%的相同性，以及至 少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列的一端和/或另 一端显示出1或2个氨基酸的差异。
[0046] 具有序列S的肽对于中和样品中不想检测到的微生物（M或M'）特别重要，所述微 生物干扰待测微生物产生（分别是M'和M)。所述不想检测到的微生物可以称为干扰微生 物。
[0047] 换句话说，当待测靶微生物是微生物Μ时，来源于所述靶微生物的具有序列S的肽 用于中和干扰微生物Μ'。另一方面，当待测靶微生物是微生物Μ'时，来源于所述干扰微生 物的具有序列S的肽用于中和干扰微生物Μ。
[0048] 为了澄清，将待检测的微生物称为微生物M2,代表微生物Μ'或是Μ，当然，已知这 个名字也是任意的，也可以选择称此微生物为Ml。
[0049] 换句话说，如上定义的本发明的具有序列S的干扰肽用于检测微生物Μ或是Μ'。
[0050] 想要检测其存在的微生物M2 (Μ'或Μ)是任何一种引起病理性状况的微生物，并且 有必要对所述微生物进行可靠诊断以实施治疗或随访，或限制其繁殖。所述微生物可能是 本领域的技术人员熟知的病毒、细菌或是酵母。
[0051] 病毒的非限制性实例可以包括肝炎病毒类（如甲、乙、丙、戊和庚型肝炎病毒）、人 类免疫缺陷病毒（如HIV-ι和HIV-2)、Epstein-Barr病毒（EBV)、流感病毒（如Η1Ν1和 H5N1) \巨细胞病毒（CMV)、麻疹病毒、JC病毒等。
[0052] 细菌的非限制性实例可以包括葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus))、链球菌类（如肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae))和芽抱杆菌。
[0053] 酵母的非限制性实例可以包括假丝酵母。
[0054] 术语"微生物M2的靶蛋白"是指所述微生物基因组编码的在所述微生物感染的 过程中产生的蛋白质，其可以通过免疫测定法方法进行检测，或是其在所感染的宿主的部 分中产生抗体应答，所述抗体应答也可以通过免疫测定法方法进行检测。因此，比如说，在 丙型肝炎病毒（HCV)的情况下，所述靶蛋白可以是，例如，核心、NS3、NS4和NS5蛋白。至 于HIV-1病毒，所述祀蛋白可以包括，例如，Env(gpl60、gpl20、gp41)、Gag(P55及其成熟 加工形式：p24衣壳、pl7基质等）、Pol (逆转录酶和整合酶）、Tat、Nef和Rev蛋白。另 一个例子，所述靶蛋白可以包括金黄色葡萄球菌的Emp(细胞外基质蛋白结合蛋白）或 PVL(Panton_Valentine leukocydin)蛋白，或核糖体小亚基甲基转移酶H、延伸因子P或肺 炎链球菌DnaK伴侣蛋白。当然，本领域技术人员完全知道他们希望检测的微生物的各种靶 蛋白。
[0055] 表述"与待检测的微生物M2 (分别为M'或M)不同的微生物Ml (M或M'）"是指非 微生物M2本身的任何微生物。微生物Ml和M2可以是性质相同的微生物（病毒、细菌、酵 母），属于同一科（例如，待测微生物M2可以是HCV病毒而另一种微生物是HBV病毒），或 属于不同科（例如，待测病毒是HCV病毒而另一种微生物是HIV-1病毒）。微生物Ml和M2 可能是不同性质的微生物（病毒/细菌、病毒/酵母、细菌/酵母）。这些微生物是每个患 者可能遇到的微生物，并且所述患者会针对所述微生物产生抗体应答。
[0056] 根据一个实施方案，所述微生物M2是病毒或细菌。根据另一个实施方案，所述微 生物M2是病毒而所述微生物Ml是细菌，或者所述微生物M2是细菌而所述微生物Ml是病 毒。
[0057] 根据一个实施方案，所述病毒是丙型肝炎病毒，HCV，而不同于该病毒的微生物 是细菌，尤其是选自金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、 Pseudomonas entomophila和恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida) (GB-1 菌株）中选择的。
[0058] 根据另一个实施方案，所述病毒是人类免疫缺陷病毒，HIV-1，并且与该病毒不同 的微生物是肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae)。
[0059] 表述"与待测微生物M2不同的微生物Ml (或干扰微生物）的抗原蛋白"是指所述 微生物Ml的蛋白质，其诱导所感染的宿主部分中的抗体应答，所述宿主是从其获取生物学 样品的病人。再一次，本领域技术人员知道待测的对应于上述靶蛋白的所述微生物Ml的抗 原蛋白，并且他们能够容易地区分微生物的抗原蛋白或称为靶蛋白和非抗原蛋白或称为非 靶蛋白。
[0060] 如前面所指出的，本领域技术人员还知道，表述"抗原蛋白"与表述"靶蛋白"仅需 要参照检测方法中的微生物来进行区分，即是关于哪个是想要检测的（称为靶蛋白）或哪 个是想要中和的（称为抗原蛋白）。因此，这两个术语不区别使用并且被理解为在不考虑其 用途的情况下，对于具有序列S的干扰肽是相同的。
[0061] 根据本发明，具有序列S和S'，并因此具有序列S1或S2的肽具有7-12个氨基酸， 所述肽对应抗体的抗体决定簇识别的氨基酸长度。根据一个实施方案，序列S1和S2具有 8至10个氨基酸。
[0062] 根据另一个实施方案，所述干扰肽具有序列S，所述序列S选自：
[0063] -具有序列SEQ ID NO: 1的Y7E-1，具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID N0:2的 肽 V7E，
[0064] -具有序列SEQ ID N0:2的V7E，具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID NO: 1的肽 Y7E-1,
[0065] -具有序列SEQ ID NO: 3的A8E，具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID NO: 4的肽 E8E,
[0066] -具有序列SEQ ID NO: 5的Y7E-2,具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID NO: 4的 肽E8E，具有序列SEQ ID NO: 6的D8E，具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID NO: 4的肽E8E，
[0067] -具有序列SEQ ID NO: 4的E8E，具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID NO: 3的肽 A8E，或具有序列SEQ ID N0:5的Y7E-2,或具有序列SEQ ID N0:6的D8E，
[0068] -具有序列SEQ ID N0:7的E8L-1，具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID N0:8的 肽E8L-2,和
[0069] -具有序列SEQ ID N0:8的E8L-2,具有序列S'的肽是具有序列SEQ ID N0:7的 肽E8L-1。
[0070] 在这些各种各样的肽中，具有序列SEQ ID N0: 2的HCV肽V7E已经在专利申请EP 0582243 A中描述过。但是，此肽还没有被描述为免疫原。它从未被描述为用于消除与所测 试样品相关的假阳性的干扰肽。其他的肽是新的，并构成了本发明的一个主题。
[0071] 因此，本发明中涉及具有选自如下的序列的干扰肽：
[0072] (i)长度为7至12个氨基酸的肽序列S1，其来源于微生物Ml抗原蛋白，和
[0073] (ii)长度为7至12个氨基酸的肽序列S2,其来源于与微生物Ml不同的微生物M2 的靶蛋白，
[0074] 其中所述序列S1和S2相匹配，在其7至12个氨基酸的长度上显示至少50%的 相同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列 的一端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差异，但不包括具有序列SEQ ID N0:2的肽 V7E。
[0075] 换句话说，本发明涉及具有7至12个氨基酸的序列S的干扰肽，所述序列S来源 于微生物Μ的抗原蛋白的肽序列，所述序列S可以与7至12个氨基酸的肽序列S'匹配，所 述序列S'来源于与所述微生物Μ不同的微生物M'的靶蛋白。其中所述序列S和S'相匹 配，在其7至12个氨基酸的长度上显示至少50%的相同性，以及至少4个相同的或类似的 连续氨基酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列的一端和/或另一端显示出1或2个氨 基酸的差异，但不包括具有序列SEQ ID N0:2的肽V7E。
[0076] 在一个具体的实施方案中，本发明涉及以下的肽：具有序列SEQ ID N0:1的 Y7E-1、具有序列SEQ ID NO: 3的A8E、具有序列SEQ ID NO: 4的E8E、具有序列SEQ ID NO: 5 的Y7E-2、具有序列SEQ ID N0:6的D8E、具有序列SEQ ID N0:7的E8L-1以及具有序列SEQ ID N0:8 的 E8L-2。
[0077] 术语"至少50%的相同性"是指各序列至少有一半的氨基酸是相同的或类似的，其 中这两个序列至少有4个相同的或类似的连续氨基酸。
[0078] 通常，术语"氨基酸类似物"是指一种氨基酸，当它取代了序列中的天然氨基酸时， 或当它不存在时，不引起任何所述序列抗原反应性的破坏。
[0079] 特别优选的类似物包括性质保守的替代物，即发生在氨基酸家族内的替换。如本 领域技术人员所熟知的，有一些根据家族的氨基酸分类。因此，根据一个分类实例，例如， 氨基酸可以分为4个家族，S卩：（1)酸性氨基酸，如天冬氨酸和谷氨酸；（2)碱性氨基酸，如 赖氨酸、精氨酸和组氨酸；（3)非极性氨基酸，如亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸；以及（4)不 带电荷的极性氨基酸，例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。苯丙氨 酸、色氨酸和酪氨酸有时分类为芳香族氨基酸。例如，可合理地预期，分别进行用异亮氨酸 或是缬氨酸取代亮氨酸，用谷氨酸取代天冬氨酸，用丝氨酸取代苏氨酸，或用另一种具有类 似结构关系的氨基酸保守取代一个氨基酸，不会对生物学活性有重要影响。用于预测氨基 酸替换对于生物学活性影响的另一个例子由Ng和Henikoff，2001进行了描述。
[0080] 序列S和S'（S1和S2)在相同长度或显示分布在所述序列的一个和/或另一个末 端的一两个氨基酸的差异的条件下相匹配。换句话说，通过如前所述的保守替换或是删除， 序列S和S'（S1和S2)具有至少7个氨基酸的共同序列，所述共同序列的氨基酸是相同或 相似的，当它们长度不同时，相对于共同序列的额外的氨基酸在一端（1或2个氨基酸）或 另一端（1或2个氨基酸）或两端（每侧1个或是2个氨基酸均可）。因此，如果X是共同 序列，A n是置于末端的氨基酸差异，η是1到4的整数，本发明中肽的匹配可以如下表示：
[0081]
【权利要求】
1. 一种具有长度为7至12个氨基酸的肽序列S的干扰肽，所述肽序列S来源于微生 物Μ的抗原蛋白的肽序列，所述序列S与长度为7至12个氨基酸的肽序列S'匹配，所述肽 序列S'来源于与微生物Μ不同的微生物M'的靶蛋白的肽序列，其中所述序列S和S'在其 7至12个氨基酸的长度上显示至少50%的相同性，以及至少4个相同的或类似的连续氨基 酸，它们的长度是相同的，或者它们在序列的一端和/或另一端显示出1或2个氨基酸的差 异，但不包括具有序列SEQ ID NO:2的肽V7E。
2. 如权利要求1所述的干扰肽，其特征在于，所述序列S和S'具有8至10个氨基酸。
3. 如权利要求1或2所述的干扰肽，其特征在于，所述微生物M'是病毒或细菌。
4. 如权利要求1至3中任一项所述的干扰肽，其特征在于，所述微生物M'是病毒，而所 述微生物Μ是细菌。
5. 如权利要求1至3中任一项所述的干扰肽，其特征在于，所述微生物Μ'是细菌，而所 述微生物Μ是病毒。
6. 如权利要求3至5中任一项所述的干扰肽，其特征在于，所述病毒是丙型肝炎病毒 (HCV)。
7. 如权利要求6所述的干扰肽，其特征在于，所述与HCV病毒不同的微生物选自金黄 色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae)、枯草芽 抱杆菌（Bacillus subtilis)、Pseudomonas entomophila 和恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida) (GB-1 菌株）。
8. 如权利要求1至3中任一项所述的干扰肽，其特征在于具有序列S的肽选自具有序 列 SEQ ID N0:1 的 Y7E-1、具有序列 SEQ ID N0:3 的 A8E、具有序列 SEQ ID N0:5 的 Y7E-2、 具有序列SEQ ID NO:6的D8E和具有序列SEQ ID NO:4的E8E。
9. 如权利要求3至5中任一项所述的干扰肽，其特征在于，所述病毒是人类免疫缺陷病 毒 HIV-1。
10. 如权利要求9所述的干扰肽，其特征在于，所述与待测病毒不同的微生物是肺炎支 原体（Mycoplasma pneumoniae) 〇
11. 如权利要求10所述的干扰肽，其特征在于，所述具有序列S的肽选自具有序列SEQ ID N0:7 的 E8L-1 和具有序列 SEQ ID N0:8 的 E8L-2。
12. -种基于免疫测定法体外检测生物学样品中微生物Μ的存在的方法，其包括检测 针对待测微生物Μ的靶蛋白的至少一种抗体Ab M或由所述检测组成，所述方法包括以下步 骤或由以下步骤组成： a) 提供至少一种如权利要求1至11中任一项所定义的具有肽序列S的干扰肽， b) 提供所述免疫测定法所需要的、所述至少一种待测抗体AbM的至少一种结合伴侣，所 述至少一种结合伴侣来源于所述抗体所针对的所述靶蛋白，或者就是所述靶蛋白本身，并 且包括肽序列S， c) 在存在所述至少一种具有序列S的干扰肽的条件下实施免疫测定法，和 d) 通过测量所述抗体AbM和所述结合伴侣之间形成的复合物检测所述微生物Μ的存 在。
13. -种基于免疫测定法体外检测生物学样品中微生物Μ'的存在的方法，其包括检测 针对待测微生物Μ'的靶蛋白的至少一种抗体Ab M，或由所述检测组成，所述方法包括以下步 骤或由以下步骤组成： a) 提供至少一种如权利要求1至11中任一项所定义的具有肽序列S的干扰肽， b) 提供所述免疫测定法所需要的、所述至少一种待测抗体AbM，的至少一种结合伴侣， 所述至少一种结合伴侣来源于所述抗体所针对的所述靶蛋白，或者就是所述靶蛋白本身， 并且包括如前面所定义的肽序列S'， c) 在存在所述至少一种具有序列S的干扰肽的条件下实施免疫测定法，和 d) 通过测量所述抗体AbM，和所述结合伴侣之间形成的复合物检测所述微生物的存在。
14. 一种基于免疫测定法体外检测生物学样品中微生物Μ的存在的方法，其包括检测 待测微生物Μ的至少一种靶蛋白或由所述检测组成，所述方法包括以下步骤或由以下步骤 组成： a) 提供所述免疫测定法所需要的、所述微生物Μ的至少一种靶蛋白的至少一种结合伴 侣， b) 提供至少一种如权利要求1至11中任一项所定义的具有序列S的干扰肽，所述至少 一种靶蛋白的肽序列中包括所述序列S， c) 在存在所述至少一种具有序列S的干扰肽的条件下实施免疫测定法，和 d) 通过测量所述靶蛋白和所述结合伴侣之间形成的复合物检测所述微生物Μ的存在。
15. -种基于免疫测定法体外检测生物学样品中微生物Μ'的存在的方法，其包括检测 待测微生物Μ'的至少一种靶蛋白或由所述检测组成，所述方法包括以下步骤或由以下步骤 组成： a) 提供所述免疫测定法所需要的、所述微生物Μ'的至少一种靶蛋白的至少一种结合 伴侣， b) 提供至少一种如权利要求1至11中任一项所定义的具有序列S的干扰肽，其中所述 至少一种靶蛋白的肽序列中包括对应的序列s'， c) 在存在所述至少一种具有序列S的干扰肽的条件下实施免疫测定法，和 d) 通过测量所述靶蛋白和所述结合伴侣之间形成的复合物检测所述微生物M'的存 在。
16. 如权利要求1至11中任一项所定义的具有序列S的干扰肽在基于免疫测定法体外 检测生物学样品中代表待测微生物Μ或M'的分析物的方法中的用途。
17. -种用于提高基于免疫测定法体外检测生物学样品中代表待测微生物Μ或Μ'的分 析物的方法的特异性的方法，其特征在于，其包括在免疫测定法实施过程中，使用至少一种 如权利要求1至11中任一项所定义的具有肽序列S的肽。
18. 如权利要求12至17中任一项所述的方法或用途，其中待测微生物Μ或Μ'是病毒 或细菌。
19. 如权利要求12至17中任一项所述的方法或用途，其特征在于，所述待测微生物Μ 或Μ'是病毒，且相应的微生物Μ'或Μ是细菌。
20. 如权利要求12至17中任一项所述的方法或用途，其特征在于，所述待测微生物Μ 或Μ'是细菌，且相应的微生物Μ'或Μ是病毒。
21. 肽 Υ7Ε-1，其具有序列 SEQ ID ΝΟ:1。
22. 肽Α8Ε，其具有序列SEQ ID ΝΟ:3。
23. 肽E8E，其具有序列SEQ ID N0:4。
24. 肽 Y7E-2,其具有序列 SEQ ID N0:5。
25. 肽D8E，其具有序列SEQ ID N0:6。
26. 肽 E8L-1，其具有序列 SEQ ID NO: 7。
27. 肽 E8L-2,其具有序列 SEQ ID NO:8。
【文档编号】G01N33/543GK104285149SQ201380024636
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年3月11日 优先权日:2012年3月9日
【发明者】F·贝茨沃特, C·波蒂翁, B·塞涅尔 申请人:生物梅里埃公司