C放置1-2小时；
[0110] 4)加待检样品，并且温育：加入步骤2)中的待检样品、以已知含量的砷-IgM螯合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0111] 5)洗脱：移去待检样品，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，用洗脱液洗脱1-3 小时。
[0112] 6)检测：从ELISA微孔中取样，于原子吸收光谱仪检测螯合于IgM上的砷，并绘制 标准曲线，读出相应数值；
[0113] 该实施例利用ELISA原理的基础上结合原子吸收光谱（AAS)原理，利用原子吸收 光谱仪检测螯合于IgM上的砷，由于溶液中仅含有IgM，且所用试剂中不含任何砷（阴性对 照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳性时，即可证明检 测出IgM上螯合的砷。
[0114] 方法三：酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法（ELISA法+ICP-MS法）检测 砷-IgM螯合物按照如下步骤检测：
[0115] 1)将能够捕获IgM的物质，如人IgM抗体包被于固相载体上：用稀释缓冲液稀释 抗IgMAb至500-4000倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小 时，储存冰箱；
[0116] 2)从循环系统取全血，作待检样品，lOOOrmp离心5-8分钟，离心弃去沉淀；
[0117] 3)封闭：移去稀释缓冲液，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入以1% -5% 牛血清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗涤液进行洗 涤，洗涤完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0118] 4)加待检样品，并且温育：加入步骤2)中的待检样品、以已知含量的砷-IgM螯合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0119] 5)洗脱：移去待检样品，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，用洗脱液洗脱1-3 小时。
[0120] 6)酸化：在步骤5)中的溶液中加入酸化剂对溶液进行酸化，封□过夜，彻底酸 化；
[0121] 7)检测：加入过氧化氢，并且加热赶酸，并从ELISA试剂板中洗脱的溶液中取样， 于电感耦合等离子体质谱仪下检测螯合于IgM的砷，并绘制标准曲线，读出相应数值。
[0122] 该方法在利用ELISA原理的基础上，结合感耦合等离子体质谱（ICP-MS)原理，用 电感耦合等离子体质谱仪检测螯合于IgM上的砷，由于溶液中仅含有IgM，且所用试剂中不 含任何砷（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳 性时，即可证明检测出IgM上螯合的砷。
[0123] 方法四：提纯砷-IgM螯合物与酶联免疫结合法（提纯法+ELISA法）检测砷-IgM 螯合物，按照如下步骤检测：
[0124] 1)从全血中提取IgM:采用聚乙二醇PEG沉淀法、超速离心、分子超滤、凝胶过滤等 方法采用全血提取法将血液的提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶液；
[0125] 2)将抗AsAb包被于固相载体上：用稀释缓冲液稀释抗AsAb至25000-400000 倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0126] 3)封闭：移去稀释缓冲液，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入以1% -5% 牛血清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗涤液进行洗 涤，洗涤完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0127] 4)加待检样品，并且温育：从提取的IgM的复溶液中取样，作待检样品；以已知含 量的砷-IgM螯合物作标准品；用稀释缓冲液稀释相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0128] 5)酶结合物温育：移去IgM的复溶液，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入 用稀释缓冲液稀释的酶标抗体，使稀释的酶标抗体的浓度为2yg/ml，，37°C作用1-2小时， 使其与酶标抗体反应；
[0129] 6)底物温育：移去酶标抗体，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入底物， 37°C避光作用30分钟；
[0130] 7)终止反应：滴加终止液至每一微孔；
[0131] 8)取波长405nm，加完终止液后，将ELISA板置于在酶标仪上分别读取待检样品和 标准品的0D值，通过绘制标准曲线，求得待检样品的含量（也可不使用酶标仪，直接通过染 色情况进行定性检测）。
[0132] 方法五：提纯砷-IgM螯合物与原子吸收光谱结合法（提纯法+AAS法）检测血样 中砷-IgM螯合物，按照如下步骤检测：
[0133] 1)从全血中提取IgM:采用聚乙二醇PEG沉淀法、超速离心、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶液；
[0134] 2)检测：从步骤1)中的复溶液中取样，于原子吸收光谱仪检测螯合于IgM上的 砷，并绘制标准曲线，读出相应数值。
[0135]方法六：提纯砷-IgM螯合物与电感耦合等离子体质谱结合法（提纯法+ICP-MS 法）检测砷-IgM螯合物，按照如下步骤检测：
[0136] 1)从全血中提取IgM:采用聚乙二醇PEG沉淀法、超速离心、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶液；
[0137]2)酸化：从步骤1)中的复溶液中取样，在溶液中加入酸化剂（如硝酸）对溶液进 行酸化，封口过夜，彻底酸化；
[0138] 3)检测：加入过氧化氢，并且加热赶酸，并从相应溶液中取样，于电感耦合等离子 体质谱仪下检测螯合于IgM上的砷，并绘制标准曲线，读出相应数值。
[0139] 方法七：电泳与酶联免疫法(电泳法-ELISA法）检测砷-IgM螯合物，按照如下步 骤检测：
[0140] 1)从全血中提取IgM:采用聚乙二醇PEG沉淀法、超速离心、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶液；
[0141] 2)制备胶床：根据需要选择琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶或SDS-聚丙烯酰胺凝 胶等作为介质，制备好胶床；
[0142] 3)加样：取步骤1)中的复溶液8yL加入2yL上样缓冲液，混匀，短暂离心；（注 意此处步骤不能煮）
[0143] 4)电泳：连接电泳板，进行电泳分离；
[0144] 5)检测：在胶床上找出含有砷的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带复溶，然 后再利用ELISA原理检测溶于液体中的砷含量。此外，还可以利用此方法检测螯合砷的 IgM的等电点、分子量及含量等。
[0145] 方法八：电泳与原子吸收光谱法(电泳法-AAS法）检测砷-IgM螯合物，按照如下 步骤检测：
[0146] 1)从全血中提取IgM:采用聚乙二醇PEG沉淀法、超速离心、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶液；
[0147] 2)制备胶床：根据需要选择琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶或SDS-聚丙烯酰胺凝 胶等作为介质，制备好胶床；
[0148] 3)加样：从步骤1)中的复溶液中取样，加入上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品 槽中；
[0149] 4)电泳：连接电泳板，进行电泳分离；
[0150] 5)检测：在胶床上找出含有砷的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带复溶，然 后再利用AAS原理检测溶于液体中的砷含量。此外，还可以利用此方法检测螯合砷的IgM 的等电点、分子量及含量等。
[0151] 方法九：电感耦合等离子体质谱结合法(电泳法-ICP-MS法）检测砷-IgM螯合 物，按照如下步骤检测：
[0152] 1)从全血中提取IgM:采用聚乙二醇PEG沉淀法、超速离心、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶液；
[0153] 2)制备胶床：根据需要选择琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶或SDS-聚丙烯酰胺凝 胶等作为介质，制备好胶床；
[0154] 3)加样：从步骤1)中的复溶液中取样，加入上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品 槽中；
[0155] 4)电泳：连接电泳板，进行电泳分离；
[0156] 5)检测：在胶床上找出含有砷的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带复溶，然 后再利用ICP-MS原理检测溶于液体中的砷含量。此外，还可以利用此方法检测螯合砷的 IgM的等电点、分子量及含量等。
[0157] 方法七至九中的IgM可以用多种方法提纯出来（例如超速离心法，高压液相层析 法，凝胶过滤层析法，凝胶电泳法，ELISA方法等），将提纯出来的IgM复溶，得到IgM的复溶 液，取一定量的IgM，利用电荷移动原理，进行电泳（electrophoresis，EP)，在凝胶板（可根 据需要采用不同介质）上可根据分子量、等电点等不同跑出不同的条带，寻找出富含砷的 相应条带，将凝胶中的蛋白质用相应复溶剂复溶于溶液中，即可以在特定波长下检测相关 IgM的含量，也可以利用ELISA、AAS、ICP-MS等原理检测出螯合于IgM上的砷含量，由于溶 液中仅含有IgM，且所用试剂中不含任何砷（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干 扰，因而当所读取的结果显示为阳性时，即可证明检测出IgM上螯合的砷。
[0158] 实施例1:砷-IgM螯合物的制备方法，包括以下步骤：
[0159] A)砷与IgM的螯合反应：在人源的IgM中加入砷离子进行螯合反应，得到反应溶 液；
[0160] 试剂配制：
[0161] 1)硼酸盐缓冲液（0. 01M):称取0. 31g硼酸溶于400ml超纯水中，用0. 1M的NaOH 调节pH至9. 0,定容至500mL。
[0162] 2)IgM溶液：称取4.OmglgM溶于4.OmL0? 01MpH9. 0硼酸盐缓冲液中，充分振荡 溶解，配制成1.0mg/mL的蛋白溶液；
[0163] 3) 5mmol/LEDTA+200mmol/LNaHC03溶液：称取EDTA? 2H20 1. 86g、NaHC0316. 8g溶 于900mL超纯水中，用1.0MNaOH调整pH至8.0定容至1000ml，高压灭菌，室温保存；
[0164] 4)ITCBE(购买自日本同仁化学