一种血散薯的组织培养繁殖方法_4

文档序号:9458433阅读:来源:国知局
其套设在所述连接杆1上,并与所述环形凸起12和所述圆盘14相抵;
[0094] 盖帽,其包括较接的第一板体10和第二板体9,所述第一板体10和所述第二板体 9的夹角为90~160°,所述第一板体10与所述壳体3平行,所述第一板体10的朝向所述 壳体3的第一表面上设有第二凸块15,所述第一板体10的背离所述壳体3的第二表面上设 有第=凸块11,所述第二凸块15连接有两个相对的与所述壳体3轴线平行的条状的第二弹 性片16,所述第二弹性片16的自由端设有第四凸块17,所述第四凸块17可在所述银齿状 滑槽18中移动和定位,从而通过所述第二凸块15带动所述第一板体10的移动,所述盖帽 的第二板体9为与所述壳体3的第二端端面尺寸一致的圆盘14形结构,所述壳体3的第二 端上为无菌铁质材料,所述盖帽的第二板体9上设有无菌吸铁石,使得所述第二板体9朝着 所述壳体3的第二端移动时,在所述吸铁石的吸力下,所述第二板体9将所述壳体3的第二 端封闭;
[0095] 在所述试管苗繁殖培养、试管苗生根培养和无菌试管苗的获取中的接种过程是通 过所述接种装置操作所述接种环4实现的,具体为:朝着靠近所述壳体3的第一端的方向移 动所述第=凸块11,待所述第二板体9脱离所述壳体3的第二端后,按动所述按钮2将所 述第一凸块6从所述第一开口8移动至所述第二开口 7,使得所述接种环4伸出所述壳体3 的第二端,用所述接种环4取待接种物;
[0096] 朝向所述壳体3内部按动所述第一凸块6使得所述第一凸块6在所述弹黃13的弹 性恢复力下从所述第二开口 7移动至第一开口8,待所述接种环4缩回所述壳体3内部后, 朝着靠近所述壳体3的第二端的方向移动所述第=凸块11,使得所述第二板体9将所得壳 体3的第二端封闭,移动所述接种装置至培养基上方,打开所述壳体3的第二端,推出所述 接种环4,将待接种物接种至培养基上。
[0097] 其中,所述接种环4上和所述无菌试管内壁均涂有质量比为1 : 10 : 5的纳米银、 神山麦饭石和电气石混合形成的远红外材料。
[009引 < 实施例6〉
[0099] -种血散馨的组织培养繁殖方法,包括W下步骤:
[0100] 一、无菌外植体的获取:取血散馨顶芽作为外植体,用质量百分数为0.05%洗洁 精水溶液浸泡5min,再经流水冲洗15min;移置于超净工作台上,用添加了 2. 5滴吐溫-20 的质量百分数为0. 1 %升隶消毒9min,然后用无菌水冲洗4次,再用无菌吸水纸吸干表面 水分,切成0.6cm带一个顶芽的茎段,获得无菌外植体;所述无菌水为经高压灭菌后的蒸馈 水;
[0101] 二、无菌试管苗的获取:用所述接种环4取所述无菌外植体,将其接种至诱导培养 基中,在培养溫度为25°C,光照强度15001UX,光照时间为llh/d的条件下培养25~35山 诱导不定芽萌发,得到无菌试管苗;所述诱导培养基抑值为5. 8,其包含MS、30g/L的薦糖, 4. 5g/L的琼脂,1.Omg/L的6-苄基腺嚷岭、0. 5mg/L的激动素和0. 5mg/L的糞乙酸;
[0102]=、试管苗繁殖培养:用接种环4取培育得到的无菌试管苗,接种至增殖培养基 中,在培养溫度为25°C,光照强度15001UX,光照时间为llh/d的条件下培养30d,得到大量 不定芽;其中,所述增殖培养基的抑值为5. 8,其包含:MS、30g/L的薦糖、4. 5g/L的琼脂、 1.Og/L的活性炭、1. 5mg/L的6-苄基腺嚷岭、1.Omg/L的激动素和0. 4mg/L的吗I噪下酸;
[0103] 四、试管苗生根培养:将所述试管苗繁殖培养中得到的不定芽切成带顶芽或蔽 芽的茎段,用所述接种环4取茎段将其接种至生根培养基中,在培养溫度为25°C,光照强 度15001UX,光照时间为llh/d的条件下培养30山得到完整的带根苗;所述生根培养基的 抑值为5. 8,其包含:l/2MS、30g/L薦糖、4. 5g/L琼脂、1.Og/L活性炭、0. 5mg/L的生根粉、 0.2mg/L的吗I噪下酸和1. 5mg/L的糞乙酸;
[0104] 其中,所述诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中均添加有0.Img/L的生物素 和lOmg/L的植物提取剂;
[0105] 其中,所述植物提取剂为体积比为10 : 5 :8: 1 : 4的西红柿提取液、芦苔提 取液、巧樣提取液和迷迭香提取液的混合溶液;
[0106] 五、试管苗炼苗移栽:将所述试管苗生根培养中获得的完整的带根苗,在室溫为 24°C的室内散射光照射3d,打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水淹没培养基,炼苗4d,待试管 苗表面角质形成后,用綴子取出试管苗,洗净根部培养基,移栽到质量比为3 : 1的泥炭± 和细河沙混合的基质中生长40d,再移栽至大田;
[0107] 其中,在所述试管苗移栽之前,所述基质表面铺设有两层聚乙締缓释膜,所述两层 聚乙締缓释膜之间注入有质量配比为10:1:10:2的泛酸、有机馨合肤、棚砂和屯水硫 酸亚铁。
[010引其中,所述接种环4设置在接种装置中,所述接种还装置包括:
[0109] 连接杆1,其第一端设有按钮2,第二端与所述接种环4的外圆周连接,所述连接杆 1上设有第一弹性片5,所述第一弹性片5的下端固定连接在所述连接杆1的上部,所述第 一弹性片5的背离所述连接杆1的一表面的上部上设有圆台状的第一凸块6,所述第一凸块 6的下底面固定连接在所述第一弹性片5的表面上,所述连接杆1下部设有环形凸起12;
[0110] 壳体3,其为中空的圆柱状结构,所述壳体3套设在所述连接杆1外部,所述按钮2 伸出所述壳体3的第一端,所述壳体3的靠近其第一端的外壁上设有沿所述壳体3轴线方 向相对的可容纳所述第一凸块6的第一开口8和第二开口 7,使得所述第一凸块6可从所述 第一开口8和所述第二开口 7伸出,所述第一开口8和所述第二开口 7的沿所述壳体3轴 线方向的间距为2~3cm,所述壳体3的内壁上沿径向内接有圆盘14,所述圆盘14上开设 有使所述连接杆1穿过的通孔,所述壳体3的靠近其第二端的外壁上设有与其轴线平行的 条状凹槽,所述条状凹槽的沿壳体3轴线方向相对的一对槽壁上均设有银齿状滑槽18 ;
[0111] 弹黃13,其套设在所述连接杆1上,并与所述环形凸起12和所述圆盘14相抵;
[0112] 盖帽,其包括较接的第一板体10和第二板体9,所述第一板体10和所述第二板体 9的夹角为90~160°,所述第一板体10与所述壳体3平行,所述第一板体10的朝向所述 壳体3的第一表面上设有第二凸块15,所述第一板体10的背离所述壳体3的第二表面上设 有第=凸块11,所述第二凸块15连接有两个相对的与所述壳体3轴线平行的条状的第二弹 性片16,所述第二弹性片16的自由端设有第四凸块17,所述第四凸块17可在所述银齿状 滑槽18中移动和定位,从而通过所述第二凸块15带动所述第一板体10的移动,所述盖帽 的第二板体9为与所述壳体3的第二端端面尺寸一致的圆盘14形结构,所述壳体3的第二 端上为无菌铁质材料,所述盖帽的第二板体9上设有无菌吸铁石,使得所述第二板体9朝着 所述壳体3的第二端移动时,在所述吸铁石的吸力下,所述第二板体9将所述壳体3的第二 端封闭;
[0113] 在所述试管苗繁殖培养、试管苗生根培养和无菌试管苗的获取中的接种过程是通 过所述接种装置操作所述接种环4实现的,具体为:朝着靠近所述壳体3的第一端的方向移 动所述第=凸块11,待所述第二板体9脱离所述壳体3的第二端后,按动所述按钮2将所 述第一凸块6从所述第一开口8移动至所述第二开口 7,使得所述接种环4伸出所述壳体3 的第二端,用所述接种环4取待接种物;
[0114] 朝向所述壳体3内部按动所述第一凸块6使得所述第一凸块6在所述弹黃13的弹 性恢复力下从所述第二开口 7移动至第一开口8,待所述接种环4缩回所述壳体3内部后, 朝着靠近所述壳体3的第二端的方向移动所述第=凸块11,使得所述第二板体9将所得壳 体3的第二端封闭,移动所述接种装置至培养基上方,打开所述壳体3的第二端,推出所述 接种环4,将待接种物接种至培养基上。
[0115] 其中,所述接种环4上和所述无菌试管内壁均涂有质量比为1 : 10 : 5的纳米银、 神山麦饭石和电气石混合形成的远红外材料。
[0116] <正交试验1〉
[0117] 在实施例3的血散馨的组织培养繁殖方法的基础上,W步骤(3)中6-苄基腺嚷 岭化-BA)、激动素化T)和吗I噪下酸(IBA)在增殖培养基中各自的浓度为正交表的因素, 并分别拟定S个水平:水平 1(A:1.Omg/l,B:0. 5mg/l,C:0. 3mg/L);水平 2(A:1. 5mg/l,B: 1.Omg/LC:0. 4mg/L);水平 3(A:2.Omg/LB:1. 5mg/LC:0. 5mg/L),建立正交试验,得到的 结果如表1所示。
[0118] 表1不同激素对血散馨组织培养繁殖效果的影响
[0119]
[0120]注:表1中Ki/3为水平1的3次指标值的平均;K2/3为水平2的3次指标值的平均; 而/3为水平3的3次指标值的平均;R表示6-苄基腺嚷岭化-BA)、激动素化T)和吗I噪下酸 (IBA)在各自取值范围内的极差;A表示6-苄基腺嚷岭化-BA),B表示激动素化T),C表示 吗I噪下酸(IBA)。
[012。对表1中的数据进行分析,其中A的极差最大,C次之,B最小,最佳组合为AiBiCi,最终确定6-苄基腺嚷岭化-BA)、激动素化T)和吗I噪下酸(IBA)在增殖培养基中的最佳浓 度分别为1. 0mg/l、0. 5mg/L和0. 3mg/l,此时芽增殖系数高达9. 36。
[0122] <正交试验2〉
[0123] 在实施例3的血散馨的组织培养繁殖方法的基础上,W步骤(4)中生根粉(ABT)、 吗I噪下酸(IBA)和糞乙酸(NAA)在生根培养基中各自的浓度为正交表的因素,并分别拟定 S个水平:水平 1 值:0.Img/L,E:0.Img/L,F:1.Omg/L);水平 2 值:0
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