一种预测血管紧张素ii受体拮抗剂类降压药药物作用的方法及其应用的制作方法

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专利名称:一种预测血管紧张素ii受体拮抗剂类降压药药物作用的方法及其应用的制作方法
技术领域
本发明涉及一种预测血管紧张素II受体拮抗剂类降压药药物作用的方法及其应用,通过测定生物样品特定位点基因型,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的药物作用。
背景技术
高血压病是最常见的慢性疾病之一,是脑卒中、冠心病、糖尿病等的重大危险因素,因此有效控制血压具有重要临床和公共卫生学意义。临床用于治疗高血压的药物有六类,包括血管紧张素II受体(AT1-R)拮抗剂、β-受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙拮抗剂、α肾上腺素受体阻滞剂和利尿剂等。但是至今高血压的控制率较低,我国和美国的资料表明,控制率分别仅为8.1%和34%。这种低控制率不仅与降压药物本身效力有关,而且与临床上缺乏有效的疗效预测指导系统有关。
现有临床用于预测降压药疗效、合理选择降压药物的方法,主要是医生经验性预测和血压监测。这些方法过于粗略,医生难以根据患者个体差异进行药物的选择、配伍和定量,以获得更好疗效、减少毒副作用,间接加重了患者的身心痛苦和经济负担。大量研究表明,药物作用效应的个体差异与环境、遗传因素及其交互作用有关。药物基因组学是从基因组水平探究药效的差异,揭示这些差异的遗传特征的前沿学科和高技术手段。其研究成果可为医生拟定个体化用药方案,精确预测和提高药物疗效,降低药物毒副作用风险,从而降低医疗费用,提高患者生活质量做出重要贡献。
据文献报道,药物基因组研究已经阐明了一些药物靶向的基因多态性与特定药物作用间的关联关系,而这些成果导致的产品已经开始用于临床。例如,已在美国加利福尼亚州批准上市的乳腺癌相关基因检测试剂盒(Oncotype DXTM)。该产品是用于预测患者对化疗药物的反应性和耐药性的试剂盒(Science 2004 3031754-1755)。由于该试剂盒的特异性和灵敏性较好,其检测项目已列为转移性乳腺癌化疗前必检项目,从而估计乳腺癌的复发率。
原发性高血压相关基因至今已经发现超过70个,降压药物与基因多态性研究多数集中在两者的交互效应对心血管事件发生的影响上[Drugs,2004;64(16)1801-1816]。例如已有报道,携带α-adducin基因460W等位子的高血压患者,采用利尿剂治疗比采用其他降压治疗,更有助于降低患者心肌梗死和中风的发生几率。再如ACE插入/缺失的多态性与血管紧张素酶原抑制剂(ACEI)存在交互作用,表现为不同基因型在血管紧张素受体蛋白(AT1)的mRNA表达、左心室肥大、动脉硬化等方面的差异。
但是,与降压作用相关基因的研究十分有限[Drugs,2004;64(16)1801-1816]。仅有的报道包括,一氧化氮合酶(NOE)基因多态性与利尿剂、α-adducin基因多态性与利尿剂、G蛋白α-亚型基因多态性与β肾上腺素受体阻滞剂、以及ACE基因多态性与血管紧张素II受体(AT1-R)拮抗剂等存在基因多态性与降压药疗效的关联关系。
血管紧张素II受体1(AT1-R)拮抗剂(沙坦类药物)是临床最常用的一线降压药。该类药物的作用机理是选择性地与AT1-R结合,抑制血管紧张素II的缩血管作用而使血压下降。沙坦类药物除了用于高血压病的治疗,还因其保钾利钠作用特别适用于高血压伴随充血性心力衰竭和肾功能衰竭患者的治疗。临床上常用的AT1-R类药物主要包括洛沙坦(Losartan)、缬沙坦(Valsartan)、依贝沙坦(Irbesartan)、康得沙坦(Candesartan)、依普沙坦(Eprosartan)、他索沙坦(Tasosartan)和替米沙坦(Telmisartan)等。
尽管沙坦类药物作为临床较新推出的一线降压药物产品,虽然降压疗效可靠和副作用较少,但也难以克服许多不足,如仍有部分患者对此类药物不敏感,表现为降压起效慢、疗效差;少数病人出现了药物副作用,包括咳嗽及血管性水肿(与血管紧张素转化酶抑制剂类药物相似,但发生率相对较低)、肝毒性和高血糖及贫血反应等。例如Reeves等对2955名成年高血压患者依贝沙坦降压治疗的研究发现,约44%的患者未达到满意的临床降压疗效(Hypertension.1998;31(6)1311-6)。Guthrie R等的研究也表明,连续12周、150-300mg/d的依贝沙坦治疗疗程后,仅有约53%的患者降压疗效显著。
已有针对依贝沙坦的药物基因组学研究报道是一项瑞典的大型临床研究,即SILVHIA试验。该研究陆续发现,肾素-血管紧张素-醛固酮系统通路中有多个基因的单核苷酸多态性位点可能与依贝沙坦的降压疗效或左心室肥厚的改善作用有关联。该研究已报道的基因包括,血管紧张素原基因、血管紧张素转化酶基因、血管紧张素II受体1基因和醛固酮合成酶基因(Am J Hypertens.2004;17(1)8-13.J Hypertens.2001;19(10)1783-7.J Hypertens.2002;20(4)657-63.Am J Hypertens.2002;15(5)389-93.)。此外,与依贝沙坦的药物反应可能有关的一些其他遗传多态性包括,载脂蛋白B基因(APOB)、LDL受体基因(LDL-R)、转移生长因子基因(TGFβ1)、前内皮素原基因(preproendothelin-1)和依贝沙坦的主要代谢酶-细胞色素P450-2C9基因(CYP2C9)〔BMC Cardiovasc Disord.2004 28;4(1)16.Clin Cardiol.2004;27(5)287-90.Clin Cardiol.2004;27(3)169-73.J Hypertens.2002;20(10)2089-93.〕。至今未见缓激肽受体基因与依贝沙坦降压疗效的关联研究,也未见针对依贝沙坦药物基因组学研究导致的试剂盒产品。

发明内容
解决的技术问题由于对药物反应存在个体差异,临床医生在选择药物至今缺少足够的个体化用药依据,难以做到为病人提供“量体裁衣式”的药物配伍和剂量,不能即时、有效地控制血压和毒副作用发生的风险,甚至可能延误治疗时机,造成患者健康和经济地双重损失。
鉴于上述不足,本发明旨在克服临床选择血管紧张素II受体1(AT1-R)拮抗剂或者研制与之组合的新组合物时的盲目性,为个体化用药提供一种预测血管紧张素II受体1(AT1-R)拮抗剂类药物药物作用的方法、试剂盒及其应用,便于指导临床用药。
技术方案为实现上述发明目的,采取以下技术方案一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的药物作用的方法,该方法是通过测定生物样品缓激肽受体基因多态性位点基因型,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的降压作用,其中缓激肽受体基因多态性位点为缓激肽B2受体基因C-58T多态性a)缓激肽受体基因基因型为-58C/T杂合子或-58T/T纯合突变型时,预测血管紧张素II受体1拮抗剂的降压作用好;b)缓激肽受体基因基因型为-58C/C突变型时,预测血管紧张素II受体1拮抗剂的降压作用差。
上述测定缓激肽受体基因多态性位点基因型采用的方法选自PCR、基因芯片、基因测序、基因扫描、Taqman等生物检测方法中的一种。PCR、基因芯片、基因测序、基因扫描基因型检测方法是本领域技术人员常规使用的方法,Taqman技术是一种运用荧光技术实时定量PCR的方法,具体操作过程见本发明实施例1。其中优选的检测方法为PCR或Taqman技术。
上述生物样品为血样、口腔粘膜试子、唾液样本、尿样中的一种。其中,优选的生物样本为外周全血或者血细胞样本。
上述的血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药选自依贝沙坦(Irbesartan)、洛沙坦(Losartan)、缬沙坦(Valsartan)、替米沙坦(Telmisartan/Micardis,泰米沙坦)、坎地沙坦(Candesartan,康得沙坦)、依普沙坦(Eprosartan,依普罗沙坦)、奥美沙坦(OlmesartanMedoxomil,奥美沙坦酯)、他索沙坦(Tasosartan/Verdia)及它们的活性代谢产物、盐类或酯类中的一种。其中优选依贝沙坦或洛沙坦,它们是血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药物中常用的、具有代表性的药物。
一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用的方法,该方法通过测定生物样品缓激肽受体基因多态性,预测原发性高血压患者的靶器官功能状态,其中缓激肽受体基因多态性位点为缓激肽B2受体基因C-58T多态性,靶器官功能状态为血脂状态a)缓激肽受体基因基因型为-58C/T杂合子或-58T/T纯合突变型时,预测原发性高血压患者,其血浆甘油三酯(TG)水平高;b)缓激肽受体基因基因型为-58C/C突变型时,预测原发性高血压患者,其血浆甘油三酯(TG)水平低。
上述测定缓激肽受体基因多态性位点基因型所采用的方法选自PCR、基因芯片、基因测序、基因扫描、Taqman等生物检测方法中的一种。PCR、基因芯片、基因测序、基因扫描基因型检测方法是本领域技术人员常规使用的方法,Taqman技术是一种运用荧光技术实时定量PCR的方法,具体操作过程见本发明实施例1。其中优选的检测方法为PCR或Taqman技术。
上述生物样品为血样、口腔粘膜试子、唾液样本、尿样中的一种。其中,优选的生物样本为外周全血或者血细胞样本。
上述的血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药选自依贝沙坦(Irbesartan)、洛沙坦(Losartan)、缬沙坦(Valsartan)、替米沙坦(Telmisartan/Micardis,泰米沙坦)、坎地沙坦(Candesartan,康得沙坦)、依普沙坦(Eprosartan,依普罗沙坦)、奥美沙坦(OlmesartanMedoxomil,奥美沙坦酯)、他索沙坦(Tasosartan/Verdia)及它们的活性代谢产物、盐类或酯类中的一种。其中优选依贝沙坦或洛沙坦,它们是血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药物中常用的、具有代表性的药物。
一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用的试剂盒,包括测定生物样品的核酸模板的缓激肽受体基因多态性位点基因型的试剂,其中有PCR反应试剂、限制性内切酶酶切反应试剂或Taqman反应试剂、特异性探针。
其中特异性探针为检测缓激肽受体基因多态性位点的野生型探针和突变型探针。
其中生物样品中核酸模板的试剂,PCR反应试剂,限制性内切酶酶切反应试剂或Taqman反应试剂中未特别指明的试剂是本领域技术人员常规使用的试剂。
其中所检测的生物样品种类为血样、口腔粘膜试子、唾液样本、尿样中的一种或几种。其中所述检测的血样本为外周全血或者血细胞样本。
上述的血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药选自依贝沙坦、洛沙坦、缬沙坦、替米沙坦、坎地沙坦、依普沙坦、奥美沙坦、他索沙坦及它们的活性代谢产物、盐类或酯类中的一种。
上述预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用,为预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药降压作用或/和预测原发性高血压患者的血脂状态。
本发明提供的试剂盒预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用,其过程包括(a)从取自受检外周微量血样品中提取核酸模板;(b)用PCR方法扩增PRCP基因上的特异片断;(c)用限制性内切酶对PCR产物进行酶切;(d)同时用阳性对照模板进行(b)(c)步骤;(e)电泳分离酶切产物,根据阳性模板的带型特点鉴定并且判断结果。
本发明提供的试剂盒预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用,其过程包括(a)从取自受检外周微量血样品中提取核酸模板;(b)用Taqman方法扩增PRCP基因上的特异片断;(c)鉴定并判断结果。
一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的药物作用的方法,该方法是通过测定生物样品缓激肽受体基因多态性位点基因型,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的降压作用。本发明的方法还可在药物研发中的应用。
上述应用是指根据缓激肽受体基因多态性基因型对血管紧张素II受体1拮抗剂类药物药物作用的影响,设计出调节缓激肽受体表达水平或其活性可增强血管紧张素II受体1拮抗剂类药物降压作用的复方药,所述复方药包括选择性或非选择性的血管紧张素II受体拮抗剂和缓激肽、缓激肽类似物、缓激肽受体配体或缓激肽功能增强剂,所述缓激肽功能增强剂包括缓激肽受体转录激活因子、多肽功能激活剂、缓激肽代谢通路的代谢酶、辅助因子。
一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用的方法,该方法通过测定生物样品缓激肽受体基因多态性位点基因型,预测原发性高血压患者的靶器官功能状态。本发明的方法还可在药物研发中的应用。
上述应用是指根据缓激肽受体基因多态性基因型对血管紧张素II受体1拮抗剂类药物药物作用的影响,设计出增强靶器官功能有益影响、或降低靶器官功能不良影响的复方药,所述复方药包括选择性或非选择性的血管紧张素II受体拮抗剂和靶器官功能改善剂。
本发明是以多年的药物基因组学研究为基础。通过给高血压患者服用依贝沙坦进行降压治疗,考察遗传因素和药物疗效的关系。依贝沙坦是血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药物中的一种,选择性地与AT1-R结合,抑制Ang II的血管收缩作用从而使血压下降,临床用于降压治疗。依贝沙坦的半衰期较长(约为19小时),因此适宜于每日服药一次,常用剂量为150-300mg/天,临床广泛用于治疗轻、中度高血压病。
本发明中研究的基因多态性是缓激肽B2受体基因多态性。缓激肽是一种重要的生物学活性物质,在血管功能调节、炎症反应等生理、病理过程中起着重要的作用。缓激肽参与激肽释放酶-激肽系统是体内重要的神经体液调节系统,绝大多数效应由缓激肽β2受体介导。缓激肽与缓激肽β2受体结合刺激一氧化氮合成酶合成一氧化氮,拮抗血管紧张素II的作用,使血管舒张,血压下降,起到调节血压的作用。研究表明,静脉使用缓激肽能导致大鼠的动脉血管舒张、外周血管阻力降低以及促经肾脏的水/钠排出等生物学效应(Hypertension 21961-965)。缓激肽释放后主要通过与缓激肽B2受体(BDKRB2)结合而发挥其作用。BDKRB2是一种G蛋白耦联受体,由BDKRB2基因编码,在人体内呈基本型表达。过度表达人类BDKRB2的转基因小鼠的血压值显著低于正常对照组,使用特异性的BDKRB2拮抗剂能使转基因小鼠的血压值恢复正常(Hypertension 29488-493)。研究发现缓激肽β2受体基因三个外显子和一个启动子区存在4种多态性,其中启动子区-58存在T置换为C的点突变(Immunopharma-cology.3332-35;Hypertension.1996,281081-1084.),该突变与日本人群、中国汉族人群中原发性高血压发病(Jpn Circ J.1999;63(10)759-62;Hypertens Res.2001,24299 302.)及ACEI导致的咳嗽副作用相关(Hypertension.2000Jul;36(1)127-31)。研究发现,缓激肽β2受体基因启动子区-58T/C多态性与原发性高血压患者ACEI降压疗效相关,携带T等位基因的原发性高血压患者血压下降幅度较大(陈改玲,等.高血压杂志.2004.12(3)229-232)。
本发明涉及的研究发现高血压病人经血管紧张素II受体1拮抗剂类药物治疗后,在服药后第28天,携带缓激肽B2受体T等位子的原发性高血压患者的降压作用显著差于C/C野生纯合型基因型患者,而原发性高血压患者的血浆甘油三酯水平较高。提示缓激肽B2受体基因的C-58T多态性遗传多态性和血管紧张素II受体1拮抗剂类药物的降压作用及原发性高血压患者的靶器官功能状态有关。
缺乏BDKRB2基因的突变小鼠的基线血压水平较高,在高盐饮食条件下,易患中重度高血压(Circulation 963570-3578)。有实验证据表明,血管紧张素II受体1拮抗剂能增强动脉血管的内皮依赖的血管舒张功能,这一作用部分由缓激肽所介导(Circulation.1993;87931-938)。而BDKRB2基因C-58T多态性的T等位基因与较高的缓激肽B2受体基因转录活性相关联(Immunopharmacology 3332-35),因而T等位基因携带者在接收AT1受体拮抗剂治疗时,经缓激肽-缓激肽B2受体途径的降压作用增强,导致其降压疗效好于C/C纯合野生型患者。
本发明中缓激肽B2受体基因的基因型,可作为预测血管紧张素II受体1拮抗剂类抗高血压药物的指示系统之一,可以指示并定性和定量地预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的药物作用及原发性高血压患者的靶器官功能状态,指导临床医生个体化用药。
缓激肽B2受体的基因型,作为预测血管紧张素II受体1拮抗剂类抗高血压药物的指示系统之一可以指示缓激肽B2受体基因多态性对应的受体活性/功能状态或靶器官功能状态,作为新药的功能靶点,指导复方降压药物的研发;并可以指示结合研制的复方降压药物,更合理选择血管紧张素II受体1拮抗剂类药物的个体最适剂量和最适复合药物的配伍。
有益效果本发明创造性提供了利用功能基因预测血管紧张素II受体1拮抗剂类抗高血压药物疗效的一种方法,可作为血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用的指示系统,通过测定缓激肽B2受体基因多态位点基因型,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的药物作用及原发性高血压患者的靶器官功能状态。根据缓激肽B2受体基因多态性基因型对血管紧张素II受体1拮抗剂类药物药物作用的影响,设计出调节缓激肽受体表达水平或其活性或靶器官功能状态可增强血管紧张素II受体1拮抗剂类药物降压作用的复方药。便于医生在用药时根据个体差异进行选择,提高了临床用药和治疗的效率与安全性,降低了发生毒副作用的风险和经济负担。应用这类功能基因多态性的发明成果,对今后更加经济有效地指导抗高血压药物的临床选药、预测用药疗效和指导新药研制具有产业与服务的应用价值。
具体实施例方式
实施例1测定缓激肽B2受体基因的C-58T多态性位点并预测血管紧张素II受体1拮抗剂类抗高血压药物依贝沙坦的降压作用(一)测定缓激肽B2受体基因的C-58T多态位点基因型(1)提取宿主细胞的基因组DNA(a)在全血中加入30ml红细胞裂解液,缓慢摇匀,室温静置10分钟,期间,摇动数次,彻底裂解红细胞;(b)于4℃、2000转离心/分,10分钟,去上清,将沉淀之白细胞在旋转震荡器上打散,加蛋白酶40ul、RNA酶50ul,摇匀,加白细胞裂解液置15ml,混匀37℃水浴20分钟后取出,置冷水中;(c)加冷的蛋白沉淀液4ml,混匀后放在-20℃冰箱5分钟,取出于4℃、3000转/分离心10分钟。将上清液倒入已加好15ml异丙醇的50ml离心管中缓慢摇动数次,至DNA絮状物析出;(d)将析出的DNA絮状物移至另一1.5ml已装入75%乙醇的滤纸上,使液体挥发干。
(e)加DNA水化液1.5ml,置摇床,摇动过夜,备用;(f)DNA浓度的测定采用紫外分光光度法,分别测定260nm及280nm两个波长下的OD值,以OD260nm×50所得值为DNA浓度。并以OD260nm/OD280nm比值估计DNA纯度;(2)使用Taqman方法检测缓激肽B2受体基因的C-58T多态位点基因型用PCR仪扩增缓激肽B2受体基因的C-58T功能基因多态位点及其侧翼序列,在5ul PCR反应体系中含有基因组DNA 10ng,2.5ul的Taqman 2X Universal PCR MasterMix No AmpErase UNG(组成成份包括AmpliTaq Gold DNA Polymerase,dNTPs withDutp,Passive Reference,已优化的缓冲液),及0.72uM的正向引物,0.72uM的反向引物及两段带荧光报告集团的等位基因特异性探针各0.16uM。
PCR反应条件95℃10min,1个循环;92℃15s,60℃1min,50个循环。
(b)在7900型荧光定量PCR仪上检测荧光信息将完成PCR反应的PCR板放入7900型荧光定量PCR仪上,选用“AllelicDiscrimination”程序,进行扫描与结果的判断发出FAM荧光者的基因型为T/T纯合子;发出VIC荧光者的基因型为C/C纯合子;发出两种荧光者的基因型为T/C杂合子。
(二)预测药物作用基因型为-58C/C纯合野生型时,血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药对原发性高血压患者的收缩降压作用较差;基因型为-58C/T杂合子或-58T/T纯合突变时,血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药对原发性高血压患者的收缩降压作用较好。
以上方法通过临床验证,将原发性高血压患者按缓激肽B2受体基因型分组(纯合野生型组、杂合子型组+纯合突变型组),分别给予依贝沙坦28天,观察其降压作用,结果如下原发性高血压患者服用依贝沙坦后第28天的收缩压(SBP)降压效果在-58T等位子携带个体中显著高于-58C/C纯合子(P<0.05),提示缓激肽B2受体基因C-58T多态性和依贝沙坦的降压作用有关(见表1)。
表1依贝沙坦的降压作用与缓激肽B2受体基因C-58T多态位点的关系


实施例2测定缓激肽B2受体基因的C-58T多态性位点,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类抗高血压药物依贝沙坦的靶器官影响(一)测定缓激肽B2受体基因的C-58T多态位点基因型(同实施例1)(二)预测发生微量蛋白尿的危险性对原发性高血压患者,基因型-58C/T杂合子或-58T/T纯合突变型个体的血浆甘油三酯水平显著高于基因型为-58C/C纯合野生型的个体。
以上方法通过研究验证,将原发性高血压患者分组;缓激肽B2受体基因型分组(纯合野生型组、杂合子型组+纯合突变型组),观察其出现蛋白尿情况,结果如下在原发性高血压患者中,T等位子携带个体的血浆甘油三酯水平显著高于-58C/C纯合子(P<0.05)(见表2)。
表2缓激肽B2受体基因的C-58T多态性位点与原发性高血压患者的血脂状态的关系

实施例3试剂盒组成(Taqman方法)及应用1、试剂盒组分包括A液Taqman 2X Universal PCR Master Mix No AmpErase UNG(组成成份包括AmpliTaqGold DNA Polymerase,dNTPs with Dutp,Passive Reference,已优化的缓冲液);B液正向引物、反向引物;C液两段带荧光报告集团的等位基因特异性探针,携带VIC荧光报告集团的探针对应于“C”等位基因;携带FAM荧光报告集团的探针对应于“T”等位基因。
2、使用本试剂盒扩增功能基因多态位点及其侧翼序列及检测多态性位点基因型的步骤如下扩增目的基因片段在5ul PCR反应体系中含有基因组DNA 10ng,2.5ul的A液,及0.72uM B液及0.16uM C液,按如下条件进行PCR反应 在7900型荧光定量PCR仪上检测荧光信息将完成PCR反应的PCR板放入7900型荧光定量PCR仪上,选用“AllelicDiscrimination”程序,进行扫描与结果的判断发出FAM荧光者的基因型为T/T纯合子;发出VIC荧光者的基因型为C/C纯合子;发出两种荧光者的基因型为T/C杂合子。
权利要求
1.一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的药物作用的方法,该方法是通过测定生物样品缓激肽受体基因多态性位点基因型,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的降压作用。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,是通过测定生物样品缓激肽B2受体基因C-58T多态性,预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药的降压作用。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述测定缓激肽B2受体基因C-58T多态性位点基因型采用的方法选自PCR、基因芯片、基因测序、基因扫描、Taqman等生物检测方法中的一种。
4.如权利要求1~3中任一所述的方法,其特征在于,所述生物样品为血样、口腔粘膜试子、唾液样本、尿样中的一种。
5.如权利要求1~3中任一所述的方法,其特征在于所述的血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药选自依贝沙坦、洛沙坦、缬沙坦、替米沙坦、坎地沙坦、依普沙坦、奥美沙坦、他索沙坦及它们的活性代谢产物、盐类或酯类中的一种。
6.一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用的方法,该方法通过测定生物样品缓激肽B2受体基因多态性位点基因型,预测原发性高血压患者的靶器官功能状态。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,是通过测定生物样品缓激肽B2受体基因C-58T多态性,预测原发生高血压患者的血脂状态。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述测定缓激肽B2受体基因C-58T多态性位点基因型采用的方法选自PCR、基因芯片、基因测序、基因扫描、Taqman等生物检测方法中的一种。
9.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述生物样品为血样、口腔粘膜试子、唾液样本、尿样中的一种。
10.如权利要求6所述的方法,其特征在于所述的血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药选自依贝沙坦、洛沙坦、缬沙坦、替米沙坦、坎地沙坦、依普沙坦、奥美沙坦、他索沙坦及它们的活性代谢产物、盐类或酯类中的一种。
11.一种预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用的试剂盒,包括测定生物样品的核酸模板的缓激肽受体基因多态性位点基因型的试剂,其中有PCR反应试剂、限制性内切酶酶切反应试剂或Taqman反应试剂、特异性探针。
12.如权利要求11所述的试剂盒,其中特异性探针为检测缓激肽受体基因多态性位点的野生型探针和突变型探针。
13.如权利要求11所述的试剂盒,其中所检测的生物样品种类为血样、口腔粘膜试子、唾液样本、尿样中的一种或几种。
14.如权利要求13所述的试剂盒,其中所述检测的血样本为外周全血或血细胞样本。
15.如权利要求11所述的试剂盒,其特征在于所述的血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药选自依贝沙坦、洛沙坦、缬沙坦、替米沙坦、坎地沙坦、依普沙坦、奥美沙坦、他索沙坦及其活性代谢产物、盐类或酯类中的一种。
16.如权利要求11所述的试剂盒,其特征在于所述预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药药物作用,为预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药降压作用或/和预测原发性高血压患者的靶器官功能状态。
17.权利要求1所述的方法在药物研发中的应用。
18.如权利要求17所述的应用,其特征在于,所述的应用是指根据缓激肽受体基因多态性基因型对血管紧张素II受体1拮抗剂类药物药物作用的影响,设计出调节缓激肽受体表达水平或其活性可增强血管紧张素II受体1拮抗剂类药物降压作用的复方药,所述复方药包括选择性或非选择性的血管紧张素II受体拮抗剂和缓激肽、缓激肽类似物、缓激肽受体配体或缓激肽功能增强剂。
19.如权利要求18所述的应用,其特征在于,所述缓激肽功能增强剂包括缓激肽受体转录激活因子、多肽功能激活剂、缓激肽代谢通路的代谢酶、辅助因子。
20.权利要求6所述的方法在药物研发中的应用。
21.如权利要求20所述的应用,其特征在于,所述的应用是指根据缓激肽受体基因多态性基因型对血管紧张素II受体1拮抗剂类药物药物作用的影响,设计出增强靶器官功能有益影响、或降低靶器官功能不良影响的复方药,所述复方药包括选择性或非选择性的血管紧张素II受体拮抗剂和靶器官功能改善剂。
全文摘要
本发明提供一种预测试剂盒,包括测定受检核酸模板的缓激肽受体基因多态性位点基因型的试剂,利用PCR-RFLP方法或者Taqman方法,检测快速、安全、方便、灵敏、结果可靠,可预测血管紧张素II受体1拮抗剂类降压药降压作用,并预测原发性高血压患者的血脂状态,便于医生在用药时根据个体差异进行选择,提高了临床用药和治疗的效率与安全性,降低了发生毒副作用的风险和经济负担。
文档编号C12Q1/68GK1858243SQ20051001168
公开日2006年11月8日 申请日期2005年4月30日 优先权日2005年4月30日
发明者张善春, 王琳琳, 张岩, 洪秀梅, 毛广运, 蒋善群, 李志平, 刘学, 文育峰, 唐根富, 王滨燕, 徐希平 申请人:安徽省生物医学研究所
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