专利名称：一种环脂肽化合物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物合成环脂肽化合物的方法，具体地说，涉及一种生物发酵，制备式I化合物的方法。
背景技术：
真菌感染已经成为免疫缺陷病人发病率和死亡率居高不下的主要原因。在过去的20年里，霉菌感染的发病率显著增加。真菌感染的高危人群包括重症病人，外科病人以及那些患有HIV感染，血癌和其它肿瘤疾病的病人。那些经过器官移植的病人同样是真菌感染的闻危人群。棘球白素作为一类新的抗真菌药物，在治疗由念珠菌或曲霉引起的感染方面效果良好。这类药物又以卡泊芬净和米卡芬净为代表。棘球白素类药物通过抑制I，3-β糖苷键的形成来抑制真菌，从而更好地减小了对人体的伤害，在高效的同时尽可能的降低了副作用，因此它们在使用过程中比传统抗真菌药更安全。FK463(米卡芬净)是如式III所示的化合物，它是以式I化合物FR901379为前体通过酶解除掉侧链后得到式II化合物FR179642，然后经过化学修饰得到的。可见，要得到米卡芬净，式I化合物的发酵产量是关键。但长期以来式I化合物的发酵一直停留在一个很低的水平，尽管人们都在为寻找一个廉价，高产的培养基而努力，但收效甚微。这就使得式I化合物的制备难度加大，成本提高，从而间接使FK463长期处于一个较高的价位。因此人们迫切需要一种廉价高效合成式I化合物的方法。日本滕泽藤泽药业品工业株式会社在Improvement of FR901379productionby mutant selection and medium optimization(Journal ofBioscience andBioengineering, VOL 107No. 5，530-534，2009)中以可溶性淀粉代替玉米淀粉降低灭菌后培养基的黏度，并加入硫酸盐和磷酸盐控制发酵过程中PH，得到了 A-3培养基。之后此公司又在 Scale-up fermentation ofechinocandin type antibiotic FR901379 (Journal ofBioscience andBioengineering, VOL 109 No. 2，138-144，2010)中对 A_3 培养基进行了进一步改进，在A-3培养基中加入了较高浓度的硫酸铵进一步降低黏度，并以玉米浆代替棉籽粉从而得到了一种使得式I化合物产量相对更高的培养基A-4。但式I化合物产量还需更进一步的提高，且上述培养基的黏度依旧很高，而且发酵过程中菌体生长呈球状，不利于发酵过程中的溶氧控制及后续过滤操作。
本发明的作者通过创造性的思考和大量的试验，逐渐探索出了一种可以使式I化合物高产的培养基，而且用此培养基发酵时黏度低，溶氧容易控制，菌丝体不呈球状生长。
权利要求
1.一种制备如式I所示化合物或其盐的方法，其特征在于，在含有氨基酸或其盐、难溶性有机氮源、糖醇作碳源的培养基中培养菌株Coleophomaempetri F-11899 (FERM BP2635)或及其诱变菌株，获得式I化合物或其盐；
2.如权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述氨基酸为谷氨酸、脯氨酸、鸟氨酸、苏氨酸或其盐中的ー种或ー种以上的混合物。
3.如权利要求I或2所述的制备方法，其特征在干，以培养基的总重量计，所述氨基酸或其盐的浓度在O. 5-5. Owt%。
4.如权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述难溶性有机氮源为豆柏、大豆分离蛋白、花生粉、棉籽饼粉、黄豆饼粉中的ー种或ー种以上的的混合物。
5.如权利要求I或4所述的制备方法，其特征在干，以培养基的总重量计，所述难溶性有机氮源的浓度在O. 5-3. Owt %。
6.如权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述的糖醇为丙三醇(甘油)、赤藓糖醇、木糖醇、核糖醇、阿拉伯糖醇、山梨醇、甘露醇和半乳糖醇中的ー种或ー种以上的混合物。
7.如权利要求I或2所述的制备方法，其特征在干，以培养基的总重量计，所述糖醇的浓度在 I. 0-10. Owt % O
8.如权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述菌株的培养是在20°C至30°C，pH5. 5至6. 5下进行。
9.如权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述的菌株培养过程中可以补加糖醇和氨基酸或其盐。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述补加糖醇和氨基酸或其盐的时间是在培养40-80小时左右。
11.如权利要求9或10所述的制备方法，其特征在干，所述补加糖醇的量为每天O.5% _3%，补加氨基酸或其盐的量为每天O. 1% _1%，以初始培养液的体积计。
全文摘要
本发明公开一种发酵培养基，该培养基中含有氨基酸或其衍生物0.5％-5.0％、难溶性有机氮源0.5-3.0％、碳源1.0％-10.0％。使用本发明培养基进行式I化合物的生物发酵，可以使发酵水平稳定地达到0.5g/L以上，最高可达到1.0g/l。采用Coleophoma empetri F-11899(FERM BP2635)的诱变后菌株，更是可达到1.5g/L。由于发酵水平高，在后处理过程中有机溶剂的用量相对减少，从而降低了生产成本，具有很高的经济价值，更符合工业化生产的需要。
文档编号C12P21/02GK102618604SQ20111003424
公开日2012年8月1日 申请日期2011年1月31日 优先权日2011年1月31日
发明者刘石东, 周亮亮, 季晓铭, 张兆利, 王修胜, 陈懿 申请人:上海天伟生物制药有限公司