专利名称：一种产酯酶b1的海洋枯草芽孢杆菌c5及其酯酶b1的制作方法
技术领域：
本发明属于海洋微生物领域，特别涉及一种产酯酶BI的海洋枯草芽孢杆菌C5及其所产酯酶BI。
背景技术：
海洋是地球上最大的生态系统，海洋中分布的微生物数量巨大，总类繁多。海洋微生物具有种群多样性、生理生化类群多样性、生态功能多样性和遗传特征多样性，拥有不同于其他环境微生物来源的遗传资源。近年来，随着海洋生物技术的发展和人们对开发海洋资源意识的增强，国内外对海洋微生物及其酶的研究进展很快，寻找具有全新性质的酶已成为国际酶制剂研究的热 点。海洋微生物为适应海洋低温、高压、高盐这一生命极限环境，海洋微生物酶表现了比陆源微生物酶更为独特的生理功能与酶学特性，其开发应用潜力巨大，愈来愈引起世界各国的重视与开发，海洋微生物酯酶就是其中之一。酯酶(Esterase，EC3. I. I )，是一类能够对酯键作用的水解酶，可以催化不同底物的水解和合成反应，并可应用于食品、医药、化工、环保等行业。从海洋微生物中开发、寻找、筛选，采用各种遗传变异手段，开发出新的产酶菌株，正是当今世界各国开发海洋微生物酯酶的重要方向。
发明内容
本发明的目在于从海洋微生物中开发、寻找、筛选出繁殖快，发酵周期短，培养简便，能通过控制培养条件大幅提高酯酶产量的新的产酯酶菌株，从而开发提供一种产酯酶BI的海洋枯草芽孢杆菌株C5及其所产酯酶BI。本发明提供的产酯酶BI的海洋枯草芽孢杆菌株C5(简称菌株C5)是从渤海底泥样品中筛选分离出一株产酯酶BI的海洋枯草芽孢杆菌株C5(为Bacillus subtilis)，该海洋枯草芽孢杆菌株C5的16S rDNA基因序列长1462bp，其16S rDNA基因序列如图I所示，该海洋枯草芽孢杆菌株C5保藏在中国武汉典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2012306。菌落形态特征菌株C5在牛肉膏蛋白胨培养基上呈大而扁平的白色菌落，斜面置4°C保存下一段时间，菌落变成黑色，能够产生黑色素。革兰氏染色反应呈阳性；杆状，单个或短链排列；芽孢中生或偏中生，使菌体明显膨大。菌株C5生理生化特征对菌株C5进行了生理生化鉴定实验，结果见表I。根据《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)所述，该菌株C5的各项生理生化特征与Bacillus subtilis基本相同。表I菌株C5和模式菌株的特征比较
权利要求
1.由渤海底泥筛选获得的海洋枯草芽孢杆菌C5，其特征在于该产酯酶BI的海洋枯草芽孢杆菌C5在牛肉膏、蛋白胨培养基上呈大而扁平的白色菌落，斜面置4°C保存下一段时间，菌落变成黑色，能够产生黑色素，革兰氏染色反应呈阳性，杆状，单个或短链排列，芽孢中生或偏中生，使菌体明显膨大；海洋枯草芽孢杆菌C5(为Bacillu subtilis)的16S rDNA基因序列长1462bp,其16S rDNA基因序列如图I所示，该海洋枯草芽孢杆菌C5保藏在中国武汉典型培养物保藏中心， 保藏号为 CCTCCM2012306。
2.一种权利要求I的产酯酶BI的海洋枯草芽孢杆菌C5产的酯酶BI。
3.根椐权利要求2的酯酶BI，其特征在于该酯酶BI的酶学性质为酯酶BI是由蛋白亚基构成，分子量为83. 8KDa,酯酶BI的最适作用温度为45°C，最适pH为8. O, pH7. O 10. O之间较稳定，ρΗ7· 0—8. O之间，酶活能保持80%以上，该酯酶BI在7. 0—10. O的pH 范围内孵育2h，酶活仍能保持在80%以上；金属离子Na+、Mn2+、Ca2+、Sr2+、Li+、Co2+、Mg2+、K+、 Fe2+对酶活没有影响，Al3+、Cu2+、Zn2+能够一定程度的抑制酯酶BI的酶活，Ag+、Hg+、Fe3+是酯酶BI活性的抑制剂，Ba2+离子能够提高酯酶BI的活性，EDTA对活性有抑制作用，说明该酯酶BI是金属依赖酶；非离子型表面活性剂TritonX-IOO及阴离子表面活性剂Tween 40 对酯酶BI活性有一定的激活作用，均能促使酯酶BI活性提高I. 5倍以上，其它表面活性剂PCMB、十二烷基硫酸钠、CTAB、苯甲基硫酰氟、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、直链烷基苯磺酸钠、椰油烷基酰胺对酯酶BI活性具有抑制作用。
全文摘要
本发明涉及一种产酯酶B1的海洋枯草芽孢杆菌C5及产酯酶B1,该海洋枯草芽孢杆菌C5基因序列长1462bp,16S rDNA基因序列如
图1所示,该酯酶B1最适温度为45℃，最适pH为8.0，温度稳定范围为0～30℃，pH稳定范围为7.0～10.0,其分子量为83.8kDa,金属离子中Na+、Mn2+、Ca2+、Sr2+、Li+、Co2+、Mg2+、K+、Fe2+对酶活没有影响,Al3+、Cu2+、Zn2+能够一定程度的抑制酯酶B1的酶活,Ag+、Hg+、Fe3+对酯酶B1活性抑制,Ba2+离子能够提高酯酶B1的活性，EDTA对酯酶B1活性有抑制作用。该酯酶B1可广泛应用于食品、医药、化工、降解农药及环保等行业。
文档编号C12R1/125GK102925381SQ20121033460
公开日2013年2月13日 申请日期2012年9月11日 优先权日2012年9月11日
发明者孙谧, 郝建华, 刘均忠, 徐甲坤 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所