专利名称：人源化抗c-met 拮抗剂的制作方法
技术领域：
一般而言，本发明涉及分子生物学和生长因子调控领域。更具体的说，本发明涉及HGF/c-met信号途径的调节物，及所述调节物的用途。·
背景HGF是间充质衍生的多效因子，对许多不同细胞类型具有促有丝分裂、促运动和促形态发生活性。HGF作用是通过特定的酪氨酸激酶c-met介导的，而且在多种肿瘤中经常观察到异常HGF和c-met表达。参见例如Maulik et al. , Cytokine&GrowthFactor Reviews (2002), 13:41-59;Danilkovitch-Miagkova&Zbar, J. Cl in. Invest.(2002)，109(7) : 863-867。在肿瘤进展和转移中牵涉HGF/c_Met信号途径的调控。参见例如 Trusolino&Comoglio, Nature Rev. (2002)，2:289-300。HGF结合Met受体酪氨酸激酶(RTK)的胞外域并调控不同生物学过程，诸如细胞分散、增殖和存活。HGF-Met信号传导对于正常胚胎发育是至关重要的，尤其是在肌肉祖细胞迁移及肝和神经系统发育中(Bladt et al. , 1995;Hamanoue et al. , 1996;Mainaet al. , 1996; Schmidt et al. , 1995; Uehara et al.，1995)。Met 和 HGF 敲除小鼠的发育表型非常相似，表明HGF是Met受体的关联配体(Schmidt et al. , 1995;Uehara etal.，1995)。HGF-Met还在肝再生、血管发生和伤口愈合中发挥作用(Bussolino etal. , 1992;Matsumoto and Nakamura, 1993;Nusrat et al. , 1994)。Met 受体前体经蛋白水解切割成由二硫键连接的胞外α亚基和跨膜β亚基(Tempest et al.，1988)。β亚基包含胞质激酶结构域，而且在C末端包含多底物停靠位点，衔接物蛋白质在此结合并起动信号传导(Bardelli et al. , 1997;Nguyen et al. , 1997;Pelicci et al. , 1995;Ponzettoet al. , 1994;Weidner et al. , 1996)。HGF 结合后，Met 活化分别经由 Gabl 和 Grb2/Sos介导的PI3激酶和Ras/MAPK活化而导致酪氨酸磷酸化和下游信号传导，它驱动细胞运动和增殖(Furge et al. , 2000; Hartmann et al. , 1994; Ponzetto et al. , 1996; Royal andPark, 1995)。Met据显示在经致癌原处理的骨肉瘤细胞系中正在转化(Cooper etal. , 1984;Park et al.，1986)。已在多种人癌症中观察到Met过表达或基因扩增。例如，Met蛋白在结肠直肠癌中过表达至少5倍，且据报道在肝转移中有基因扩增(DiRenzo et al. , 1995;Liu et al.，1992)。Met蛋白据报道还在口腔鳞状细胞癌、肝细胞癌、肾细胞癌、乳癌和肺癌中过表达(Jin et al. , 1997;Morello et al.，2001;Natali etal. , 1996; Olivero et al. , 1996; Suzuki et al.，1994)。此外，已在肝细胞癌、胃癌和结肠直肠癌中观察到 mRNA 过表达(Boix et al. , 1994;Kuniyasu et al. , 1993;Liu etal.，1992) ο已在肾乳头状癌中发现Met激酶结构域中的许多突变，它们导致组成性受体活化(Olivero et al. , 1999; Schmidt et al. , 1997; Schmidt et al.，1999)。这些活化突变造成组成性Met酪氨酸磷酸化，并导致MAPK激活、病灶形成和肿瘤发生(Jeffers etal. , 1997) ο此外，这些突变增强细胞运动和侵入(Giordano et al. , 2000; Lorenzato etal.，2002)。转化细胞中HGF依赖性Met活化介导运动、分散和迁移增加，最终导致侵入性肿瘤生长和转移(Jeffers et al. , 1996;Meiners et al.，1998)。Met已显示与驱动受体活化、转化和侵入的其它蛋白质相互作用。在肿瘤细胞中，Met据报道与K 6κ 4整联蛋白相互作用以促进HGF依赖性侵入性生长，κ6κ4整联蛋白是胞外基质(ECM)组分诸如层粘连蛋白的受体(Trusolino et al.，2001)。此外，Met胞外域已显示与脑信号蛋白家族的成员丛蛋白BI相互作用，且增强侵入性生长(Giordano et al.，2002)。而且，已知牵涉肿瘤发生和转移的⑶44v6据报道也与Met和HGF形成复合物并导致 Met 受体活化(Orian-Rousseau et al. , 2002)。Met是包括Ron和Sea在内的RTK亚家族的成员(Maulik et al.，2002)。Met胞外域的结构预测表明它与脑信号蛋白和丛蛋白共享同源性。Met的N末端包含约500个氨基酸的Sema结构域，它在所有脑信号蛋白和丛蛋白中是保守的。脑信号蛋白和丛蛋白属于首先因其在神经发育中的作用而描述的一个分泌和膜结合蛋白质大家族(Van Vactor andLorenz, 1999)。不过，新近将脑信号蛋白过表达与肿瘤侵入和转移关联起来。在丛蛋白、脑信号蛋白和整联蛋白中发现的富含半胱氨酸PSI结构域(也称为Met相关序列结构域)邻近Sema结构域，随后是4个IPT重复片段，它们是在丛蛋白和转录因子中发现的免疫球蛋白样区。最近的研究表明Met Sema结构域足以使HGF和肝素结合(Gherardi et al.，2003)。此外，Kong-Beltran 等人(Cancer Cell (2004)，6:61-73)报道了 Met 的 Sema 结构域是受体二聚化和活化所必需的。已报道了靶向HGF/c-met途径的许多分子。这些分子包括抗体，诸如那些美国专利5，686，292中所描述的。c_met胞外域的一部分据显示还具有针对HGF/c-met途径的拮抗作用。不过，考虑到该途径在各种病理状态的病因学中所发挥的重要作用，显然继续需要具有最适于开发成治疗剂的临床特性的药剂。本文描述的发明满足这一需求并提供了其它好处。完整收入本文引用的所有文献,包括专利申请和出版物,作为参考。发明公开本发明部分基于HGF/c-met生物学途径的多种拮抗剂的鉴定，该途径是呈现为重要且有利治疗靶的生物学/细胞过程。本发明提供了以干扰HGF/c-met活化为基础的组合物和方法，包括但不限于干扰HGF与c-met胞外部分结合及受体多聚化。如本文所述，本发明的拮抗剂为靶向与异常或不想要的HGF/c-met途径信号传导有关的病理状况提供了重要的治疗剂和诊断剂。因此，本发明提供了与调节HGF/c-met途径有关的方法、组合物、试剂盒和制品，包括调节c-met配体结合、c-met 二聚化、活化及其它与HGF/c-met信号传导有关的生物学/生理学活动。一方面，本发明提供了适于治疗用途且能实现HGF/c-met信号途径不同程度破坏的抗HGF/c-met治疗剂。例如，在一个实施方案中，本发明提供了人源化抗c_met抗体，其中所述抗体对人c-met的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对人c_met的亲和力)与包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID N0:9和10)、由其组成或基本上由其组成的鼠抗体的单价亲和力(例如Fab片段形式的鼠抗体对人c-met的亲和力)基本上相同。在另一个实施方案中，本发明提供了人源化抗c-met抗体,其中所述抗体对人c-met的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对人c-met的亲和力)低于包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9和10)、由其组成或基本上由其组成的鼠抗体的单价亲和力(例如Fab片段形式的鼠抗体对人c-met的亲和力)，例如至少低3、5、7或10倍。在另一个实施方案中，本发明提供了抗c-met人源化抗体,其中所述抗体对人c-met的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对人c-met的亲和力)高于包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9和10)、由其组成或基本上由其组成的鼠抗体的单价亲和力(例如Fab片段形式的鼠抗体对人c-met的亲和力)，例如至少高3、5、7、10或13倍。在一个实施方案中，鼠抗体对人c-met的单价亲和力与下述Fab片段的结合亲和力基本上相同，所述Fab片段包含于1995年5月23日以美国典型培养物保藏中心登记号ATCC HB-11894 (杂交瘤1A3. 3. 13)或HB-11895(杂交瘤5D5. 11. 6)保藏的杂交瘤细胞系所生成的抗体的可变区序列。正如本领域完全确立的，配体对其受体的结合亲和力可使用多种测定法中的任一种来测定，并以各种定量数值形式表示。因此，在一个实施方案中，结合亲和力以Kd值表示，反映内在结合亲和力(例如具有最小化的亲合力效应)。普遍且优选的是，结合亲和力在体外测量，无论是无细胞设置或细胞相关设置。正如本文更为详细描述的，结合亲和力的倍数差异可量化成人源化抗体的单价结合亲和力数值(例如Fab形式)与参照/比照抗体(例如具有供体高变区序列的鼠抗体)的单价结合亲和力数值(例如Fab形式)的比率，其中结合亲和力数值是在相似测定条件下测定的。因此，在一个实施方案中，结合亲和力的倍数差异确定为Fab形式的人源化抗体与所述参照/比照Fab抗体的Kd值比率。例如，在一个实施方案中，如果本发明的抗 体㈧具有比参照抗体(M) “低3倍”的亲和力，那么若A的Kd值是3x，则M的Kd值将是lx，且A的Kd与M的Kd的比率将是3:1。相反，在一个实施方案中，如果本发明的抗体(C)具有比参照抗体(R) “高3倍”的亲和力，那么若C的Kd值是lx，则R的Kd值将是3x，且C的Kd与R的Kd的比率将是1:3。本领域已知的许多测定法中的任一种，包括那些本文所描述的，都可用于获取结合亲和力的测量值，包括例如Biacore、放射免疫测定法(RIA)和ELISA。—方面,本发明的HGF/c-met拮抗剂包含抗c-met抗体,它包含(a)至少一种、两种、三种、四种或五种选自下组的高变区(HVR)序列(i)包含序列 A1-A17 的 HVR-Ll，其中 A1-A17 是KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO:I)(ii)包含序列 Bl-B7 的 HVR-L2，其中 Bl-B7 是 WASTRES (SEQ ID NO: 2)(iii)包含序列 C1-C9 的 HVR-L3，其中 C1-C9 是 QQYYAYPWT(SEQ ID NO:3)(iv)包含序列 Dl-DlO 的 HVR-H1，其中 D1-D10 是 GYTFTSYWLH(SEQ ID NO:4)(V)包含序列 EI-E18 的 HVR-H2，其中 E1-E18 是GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO:5)，及(vi)包含序列 Fl-Fll 的 HVR-H3，其中 Fl-Fll 是 XYGSYVSPLDY (SEQ ID NO: 6)且X不是R;及(b)至少一种变体HVR，其中所述变体HVR序列包含SEQ ID NO: 1、2、3、4、5或6中所示序列的至少一个残基的修饰。在一个实施方案中,本发明抗体的HVR-Ll包含SEQID N0:1的序列。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L2包含SEQ ID N0:2的序列。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L3包含SEQ ID N0:3的序列。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-Hl包含SEQ ID NO: 4的序列。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H2包含SEQ ID N0:5的序列。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H3包含SEQ ID NO:6的序列。在一个实施方案中，HVR-H3包含TYGSYVSPLDY(SEQ ID N0:7)。在一个实施方案中，HVR-H3包含SYGSYVSPLDY(SEQ ID NO:8)。在一个实施方案中，包含这些序列(本文所述组合)的本发明抗体是人源化的或人源的。一方面，本发明提供了包含一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR的抗体，其中各个HVR包含选自下组的序列、由其组成或基本上由其组成SEQ ID N0:l、2、3、4、5、6、7和 8，其中 SEQ ID NO: I 对应于 HVR-Ll，SEQ ID NO:2 对应于 HVR-L2，SEQ ID N0:3 对应于HVR-L3, SEQ ID NO: 4 对应于 HVR-Hl，SEQ ID NO: 5 对应于 HVR-H2，而 SEQ ID N0:6、7 或 8 对应于HVR-H3。在一个实施方案中，本发明的抗体包含HVR-Ll、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3，其中各个依次包含SEQ ID NO: 1、2、3、4、5和7。在一个实施方案中，本发明的抗体包含HVR-Ll、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3，其中各个依次包含SEQID N0:l、2、3、4、5 和 8。本发明抗体中的变体HVR可在HVR内具有一个或多个残基的修饰。在一个实施方案中，HVR-L2变体包含以下位置任意组合的1-5个(1、2、3、4或5个)替代B I (Μ或L)、B2(P、T、G*S)、B3(N、G、R*T)、B4(I、N*F)、B5(P、I、L*G)、B6 (A、D、T 或 V)、及 B7 (R、I、M或G)。在一个实施方案中，HVR-Hl变体包含以下位置任意组合的1-5个(1、2、3、4或5个)替代:D3(N、P、L、S、A、I)、D5(I、S*Y)、D6(G、D、T、K、R)、D7(F、H、R、S、T*V)、&D9(M或V)。在一个实施方案中，HVR-H2变体包含以下位置任意组合的1-4个(1、2、3或4个)替代E7 (Y)、E9 (I)、ElO (I)、E14 (T 或 Q)、E15 (D、K、S、T 或 V)、E16 (L)、E17 (E、H、N 或 D)、及E18(Y、E或H)。在一个实施方案中，HVR-H3变体包含以下位置任意组合的1_5个(1、2、3、4 或 5 个)替代F1 (T、S)、F3 (R、S、H、Τ、A、K)、F4 (G)、F6 (R、F、Μ、Τ、Ε、K、A、L、ff)、F7 (L、I、Τ、R、K、V)、F8 (S、A)、FlO (Y、N)、及Fll (Q、S、H、F)。各个位置后面括弧内的字母指出了例示替代(即置换)氨基酸；对本领域技术人员显而易见的是，可使用本领域已知的和/或本文描述的技术常规评估其它氨基酸在本文所述背景中作为替代氨基酸的适宜性。在一个实施方案中，HVR-Ll包含SEQ ID NO: I的序列。在一个实施方案中，变体HVR-H3中的Fl是T0在一个实施方案中，变体HVR-H3中的Fl是S。在一个实施方案中，变体HVR-H3中的F3是R。在一个实施方案中，变体HVR-H3中的F3是S。在一个实施方案中，变体HVR-H3中的F7是Τ。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是T或5，？3是尺或S，而F7是Τ。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是T，F3是R，而F7是T0在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是S。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是T，而F3是R。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是S，F3是R，而F7是T。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是T，F3是S，F7是Τ，而F8是S。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H3，其中Fl是T，F3是S，F7是Τ，而F8是Α。在有些实施方案中，所述变体HVR-H3 抗体还包含 HVR-Ll、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl 和 HVR-H2，其中各自依次包含 SEQ IDN0:l、2、3、4和5中所示序列。在有些实施方案中,这些抗体还包含人亚型III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71、73和/或78位的替代。在这些抗体的有些实施方案中，第71位是Α，第73位是Τ，和/或第78位是Α。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体还包含人K I轻链框架共有序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-L2，其中Β6是V。在有些实施方案中，所述变体HVR-L2抗体还包含HVR-Ll、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中各自依次包含SEQ ID N0:l、3、4、5和6中所示序列。在有些实施方案中，所述变体HVR-L2抗体还包含 HVR-Ll、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2 和 HVR-H3，其中各自依次包含 SEQ ID NO: I、3、4、5 和7中所示序列。在有些实施方案中，所述变体HVR-L2抗体还包含HVR-L1、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3，其中各自依次包含SEQ ID NO: 1、3、4、5和8中所示序列。在有些实施方 案中，这些抗体还包含人亚型III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71、73和/或78位的替代。在这些抗体的有些实施方案中，第71位是A，第73位是T，和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体还包含人K I轻链框架共有序列。 在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H2，其中E14是T，E15是K，而E17是E。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体HVR-H2，其中E17是E。在有些实施方案中，所述变体HVR-H2抗体还包含HVR-Ll、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1和HVR-H3，其中各自依次包含SEQ ID N0:l、2、3、4和6中所示序列。在有些实施方案中，所述变体HVR-H2抗体还包含 HVR-LU HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl 和 HVR-H3，其中各自依次包含 SEQ ID NO: 1、2、3、4 和7中所示序列。在有些实施方案中，所述变体HVR-H2抗体还包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl和HVR-H3，其中各自依次包含SEQ ID NO: 1、2、3、4和8中所示序列。在有些实施方案中，这些抗体还包含人亚型III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71、73和/或78位的替代。在这些抗体的有些实施方案中，第71位是A，第73位是T，和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体还包含人K I轻链框架共有序列。一方面，本发明提供了包含图2、3和/或4 (SEQ ID NO:56-163)中所示一种、两种、三种、四种、五种或所有HVR序列的抗体。用于宿主受试者的治疗剂优选在所述受试者中引起很弱的针对所述药剂的免疫应答或不引起针对所述药剂的免疫应答。在一个实施方案中，本发明提供了这样的药剂。例如，在一个实施方案中，本发明提供了与包含SEQID NO:9和10的序列的抗体相比，在宿主受试者中以实质性降低的水平引起和/或预期引起人抗小鼠抗体应答(HAMA)的人源化抗体。在另一个实施例中，本发明提供了引起和/或预期引起最低限度的人抗小鼠抗体应答(HAMA)或不引起人抗小鼠抗体应答(HAMA)的人源化抗体。在一个实施例中，本发明的抗体以处于或低于临床可接受水平引起抗小鼠抗体应答。本发明的人源化抗体可在其重链和/或轻链可变区中包含一个或多个人的和/或人共有的非高变区(例如框架)序列。在有些实施方案中，在人的和/或人共有的非高变区序列中存在一个或多个另外的修饰。在一个实施方案中，本发明抗体的重链可变区包含人共有框架序列，它在一个实施方案中是亚型III共有框架序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含在至少一个氨基酸位置处有修饰的变体亚型III共有框架序列。例如，在一个实施方案中，变体亚型III共有框架序列可在第71、73和/或78位的一个或多个位置包含替代。在一个实施方案中，所述替代是R71A、N73T和/或N78A的任意组合。正如本领域已知的及下文更为详细描述的，根据背景和本领域已知的多种定义(正如下文所描述的)，界定抗体高变区的氨基酸位置/边界可有所变化。可变区内的有些位点可视为杂合高变位置，因为这些位置根据一套标准可认为是在高变区内，但根据一套不同的标准则认为是在高变区外。在延伸的高变区(如下文进一步定义的)内也可找到一个或多个这些位置。本发明提供了在这些杂合的高变位置包含修饰的抗体。在一个实施方案中，这些杂合高变位置包括重链可变区中第26-30、33-35B、47-49、57-65、93、94和102位中的一个或多个位置。在一个实施方案中，这些杂合高变位置包括轻链可变区中第24-29、35_36、46_49、56和97位中的一个或多个位置。在一个实施方案中，本发明的抗体包含在一个或多个杂合高变位置有修饰的变体人亚型共有框架序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述重链可变区，所述重链可变区包含在第27-28、30、33-35、49、57-65、94和·102位中的一个或多个位置有修饰的变体人亚型III共有框架序列。在一个实施方案中，所述抗体包含F27Y替代。在一个实施方案中，所述抗体包含T28N、P、L、S、A或I替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S301、T或Y替代。在一个实施方案中，所述抗体包含A33W替代。在一个实施方案中，所述抗体包含M34L或M34V替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S35H替代。在一个实施方案中，所述抗体包含T57I替代。在一个实施方案中，所述抗体包含Y58R替代。在一个实施方案中，所述抗体包含Y59F替代。在一个实施方案中，所述抗体包含A60N替代。在一个实施方案中，所述抗体包含D61P、T或Q替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S62N、D、K、T或V替代。在一个实施方案中，所述抗体包含V63F或V63L替代。在一个实施方案中，所述抗体包含K64E、H、N、D或Q替代。在一个实施方案中，所述抗体包含G65D、Y、E或H替代。在一个实施方案中，所述抗体包含R94T或R94S替代。在一个实施方案中，所述抗体包含Y102Q、S、H或F替代。在一个实施方案中，包含所述R94T或R94S修饰的本发明抗体还在第96和/或100位包含一个或多个修饰。在一个实施方案中，所述修饰包括G96R和/或S 100T替代(即在HVR-H3中)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述轻链可变区，所述轻链可变区包含在第24、25、29和56位中的一个或多个位置有修饰的变体人K亚型I共有框架序列。在一个实施方案中，所述抗体包含R24K替代。在一个实施方案中，所述抗体包含A25S替代。在一个实施方案中，所述抗体包含I29Q替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S56R、I、M或G替代。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述重链可变区，所述重链可变区包含在第 27-28、30、33-35、49、57-65、94 和 102 位中的 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17个或所有位置有修饰的变体人亚型III共有框架序列。在一个实施方案中，修饰选自 F27Y、T28 (N、P、L、S、A 或 I)、S30 (I、T 或 Y)、A33W、M34 (L、V)、S35H、T57I、Y58R、Y59F、A60N、D61 (P、T、Q)、S62 (N、D、K、T、V)、V63 (F、L)、K64 (E、H、N、D、Q)、G65 (D、Y、E、H)、R94 (T、S)、及Y102 (Q、S、H、F)。在一个实施方案中，包含所述R94T或R94S修饰的本发明抗体还在第96和/或100位包含一个或多个修饰。在一个实施方案中，所述修饰包括G96R和/或SlOOT替代(即在HVR-H3中)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述轻链可变区，所述轻链可变区包含在第24、25、29和56位中的1、2、3个或所有位置有修饰的变体人κ亚型I共有框架序列。在一个实施方案中，修饰选自R24K、A25S、I29Q、及S56 (R、I、M、G)。本发明的抗体可包含任何合适的人的或人共有的轻链框架序列，只要该抗体呈现所需生物学特性(例如想要的结合亲和力)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含人K轻链框架序列的至少一部分(或整个)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含人K亚型I框架共有序列的至少一部分(或整个)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述重链和/或轻链可变区，所述重链和/或轻链可变区包含SEQ ID NO: 13和/或16 (图I)中所示框架序列，只要重链中的第94位不是R (且优选但非必需是S或T)。—方面,本发明的抗体是人源化抗c-met抗体,它比包括嵌合抗c_met抗体的参照·抗体更好的抑制人肝细胞生长因子与其受体的结合，所述嵌合抗c-met抗体包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID N0:9和10)。例如，在一个实施方案中，本发明的抗体抑制HGF结合且IC50值小于所述嵌合抗体该数值的约一半。在一个实施方案中，本发明抗体的IC50值是所述嵌合抗体该数值的约O. 1,0. 2、0. 3或O. 4。对抑制HGF与其受体结合的能力的比较可依照本领域已知的多种方法进行，包括下文实施例中所描述的。在一个实施方案中，IC50值是跨越约O. OlnM至IOOOnM左右的抗体浓度范围测定的。—方面,本发明的抗体是人源化抗c-met抗体,它比包括嵌合抗c_met抗体的参照抗体更好的抑制人肝细胞生长因子(HGF)受体的活化，所述嵌合抗c-met抗体包含图7中所示轻链和重链可变序列(SEQ ID N0:9和10)。例如，在一个实施方案中，本发明的抗体抑制受体活化且IC50值小于所述嵌合抗体该数值的约一半。在一个实施方案中，本发明抗体的IC50值是所述嵌合抗体该数值的约O. 1,0. 2,0. 3或O. 4。对抑制HGF受体活化的能力的比较可依照本领域已知的多种方法进行，包括下文实施例中所描述的。在一个实施方案中，IC50值是跨越约O. InM至约IOOnM的抗体浓度范围测定的。一方面，本发明的抗体是人源化抗c-met抗体，它比包括嵌合抗c_met抗体的参照抗体更好的抑制c-met依赖性细胞增殖,所述嵌合抗c-met抗体包含图7中所示轻链和重链可变序列(SEQ ID N0:9和10)。例如，在一个实施方案中，本发明的抗体抑制细胞增殖且IC50值小于所述嵌合抗体该数值的约一半。在一个实施方案中，本发明抗体的IC50值是所述嵌合抗体该数值的约O. 1,0. 2,0. 3或O. 4。对抑制细胞增殖的能力的比较可依照本领域已知的多种方法进行，包括下文实施例中所描述的。在一个实施方案中，IC50值是跨越约O. OlnM至约IOOnM的抗体浓度范围测定的。在一个实施方案中，人源化抗体和嵌合抗体都是单价的。在一个实施方案中，人源化抗体和嵌合抗体都包含与Fe区连接的单一 Fab区。在一个实施方案中，参照嵌合抗体包含与人Fe区连接的图7中所示可变区序列(SEQ ID N0:9和10)。在一个实施方案中，人Fe区是IgG (例如IgGl、2、3或4)的Fe区。—方面，本发明提供了包含下述重链可变区的抗体，所述重链可变区包含
图13中所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。在一个实施方案中，所述可变区包含图13中所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图13中所示CHl和/或Fe序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述重链可变区，所述重链可变区包含图13中所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述重链可变区，所述重链可变区包含图13中所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列，及CHl和/或Fe序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含下述重链可变区，所述重链可变区包含图13中所示 HVR1-HC、HVR2-HC 和 / 或 HVR3-HC 序列，及 FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC 和 / 或 FR4-HC 序列，及图13中所示CHl和/或Fe序列。在一个实施方案中，本发明抗体的Fe区包含两种多肽之间的复合物，一种多肽包含图13中的Fe序列，另一种多肽包含图14中的Fe序列。一方面，本发明提供了包含下述轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含图13中所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。在一个实施方案中，所述可变区包含图13中所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图13中所示CLl序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含前两段中描述的轻链和重链可变区。在一 个实施方案中，所述抗体是单价的且包含Fe区。在一个实施方案中，Fe区包含至少一个突起(protuberance)(隆起(knob))和至少一个腔(cavity)(穴(hole)),其中突起和腔的存在增强了包含突起的Fe多肽和包含腔的Fe多肽之间复合物的形成，例如WO 2005/063816中所述。在一个实施方案中，本发明抗体的Fe区包含第一和第二 Fe多肽，其中第一和第二多肽各自包含相对于野生型人Fe的一个或多个突变。在一个实施方案中，腔突变是T366S、L368A和/或Y407V。在一个实施方案中，突起突变是T366W。在一个实施方案中，第一多肽包含图13中所示Fe序列，而第二多肽包含图14中所示Fe序列。本发明的拮抗剂可用于调节HGF/c-met相关作用的一个或多个方面，包括但不限于c-met活化、下游分子信号传导(例如促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化)、细胞增殖、细胞迁移、细胞存活、细胞形态发生和血管发生。这些作用可通过任何生物学相关机制来调节，包括破坏结合c-met的配体(例如HGF)、c-met磷酸化和/或c-met多聚化。因此,在一个实施方案中，本发明提供了抑制HGF与c-met结合的c_met拮抗性抗体。在一个实施方案中，本发明的c-met拮抗性抗体破坏c-met多聚化(例如二聚化)。在一个实施方案中，本发明的c-met拮抗性抗体破坏c-met Sema结构域的二聚化。在一个实施例中，c_met拮抗性抗体干扰c-met Sema结构域实现c-met 二聚化的能力。干扰可以是直接的或间接的。例如，c-met拮抗性抗体可结合c-met Sema结构域内的序列，从而抑制所述结合结构域与其结合配偶(诸如另一 c-met分子)的相互作用。在另一实施例中，c-met拮抗性抗体可结合不在c-met Sema结构域内的序列,但其中所述结合导致c-met Sema结构域与其结合配偶(诸如另一 c-met分子)相互作用的能力遭到破坏。在一个实施方案中，本发明的拮抗性抗体结合c-met (例如胞外域),使得c-met 二聚化遭到破坏。在一个实施方案中，本发明的拮抗性抗体结合c-met,使得c-met Sema结构域实现c_met 二聚化的能力遭到破坏。例如,在一个实施方案中，本发明提供了在结合c-met分子后抑制所述分子二聚化的拮抗性抗体。在一个实施方案中，本发明的c-met拮抗性抗体特异结合c-met Sema结构域中的序列。在一个实施方案中，本发明的拮抗性抗体破坏包括同型二聚化在内的c-met 二聚化。在一个实施方案中，本发明的拮抗性抗体破坏包括异型二聚化(即c-met与非c-met分子的二聚化)在内的c-met 二聚化。
在有些情况中，c-met拮抗性抗体不干扰配体(诸如HGF)与c_met结合可能是有利的。因此，在一个实施方案中，本发明提供了不结合c-met上HGF结合位点的抗体。在另一实施方案中，本发明的抗体没有实质性抑制HGF与c-met的结合。在一个实施方案中，本发明的抗体没有实质性与HGF竞争与c-met的结合。在一个实施例中，本发明的拮抗性抗体可与一种或多种其它拮抗剂联合使用，其中所述拮抗剂靶向HGF/c-met轴内的不同过程和/或功能。因此，在一个实施方案中，本发明的c-met拮抗性抗体结合c-met上不同于另一c-met拮抗剂(诸如以美国典型培养物保藏中心登记号ATCCHB-11894保藏的杂交瘤细胞系(杂交瘤1A3. 3. 13)所生成的单克隆抗体的Fab片段)所结合之表位的表位。在另一实施方案中，本发明的c-met拮抗性抗体不同于(即不是)以美国典型培养物保藏中心登记号ATCCHB-11894保藏的杂交瘤细胞系(杂交瘤1A3. 3. 13)所生成的单克隆抗体的Fab片段。在一个实施方案中，本发明提供了既破坏c-met多聚化又破坏配体结合的c_met拮抗性抗体。例如，抑制c-met多聚化(例如二聚化)的本发明拮抗性抗体还可具有与HGF竞争与c-met结合的能力。
在本发明c-met拮抗性抗体的一个实施方案中，拮抗剂与c_met的结合抑制HGF对c-met的活化。在本发明c-met拮抗性抗体的另一实施方案中，拮抗剂与细胞中c_met的结合抑制细胞的增殖、存活、分散、形态发生和/或运动。在一个实施方案中，本发明的c-met拮抗性抗体特异结合c-met Sema结构域的至少一部分或其变体。在一个实施例中，本发明的拮抗性抗体特异结合至少一种选自下组的序列LDAQT(SEQ ID NO: 15)(例如 c_met 的残基 269-273)、LTEKRKKRS (SEQ ID NO: 16)(例如 c-met 的残基 300-308)、KPDSAEPM(SEQ ID NO: 17)(例如 c-met 的残基 350-357)、及NVRCLQHF(SEQ ID NO: 18)(例如c_met的残基381-388)。在一个实施方案中，本发明的拮抗性抗体特异结合由至少一种选自下组的序列的部分或整个形成的构象表位LDAQT(例如 c-met 的残基 269-273)、LTEKRKKRS (例如 c-met 的残基 300-308)、KPDSAEPM (例如 c_met的残基350-357)、及NVRCLQHF (例如c-met的残基381-388)。在一个实施方案中，本发明的拮抗性抗体特异结合与序列LDAQT、LTEKRKKRS、KPDSAEPM和/或NVRCLQHF具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明的抗体特异结合第一种动物物种的HGF受体，而不特异结合第二种动物物种的HGF受体。在一个实施方案中，第一种动物物种是人类和/或灵长类(例如猕猴)，而第二种动物物种是鼠类(例如小鼠)和/或犬类。在一个实施方案中，第一种动物物种是人。在一个实施方案中，第一种动物物种是灵长类，例如称猴。在一个实施方案中，第二种动物物种是鼠类，例如小鼠。在一个实施方案中，第二种动物物种是犬类。一方面，本发明提供了包含本发明的一种或多种拮抗性抗体及载体的组合物。在一个实施方案中，所述载体是药学可接受的。一方面，本发明提供了编码本发明c-met拮抗性抗体的核酸。一方面，本发明提供了包含本发明核酸的载体。—方面，本发明提供了包含本发明核酸或载体的宿主细胞。载体可以是任何类型的，例如重组载体，诸如表达载体。可使用多种宿主细胞中的任一种。在一个实施方案中，宿主细胞是原核细胞，例如大肠杆菌。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
一方面，本发明提供了制备本发明拮抗剂的方法。例如，本发明提供了制备c-met拮抗性抗体(根据本文定义，包括全长及其片段)的方法，所述方法包括在合适的宿主细胞中表达编码所述抗体(或其片段)的本发明重组载体，并回收所述抗体。一方面，本发明提供了包括容器及该容器内所装有的组合物的制品，其中所述组合物包含本发明的一种或多种c-met拮抗性抗体。在一个实施方案中，所述组合物包含本发明的核酸。在一个实施方案中，包含拮抗性抗体的组合物还包含载体，它在有些实施方案中是药学可接受的。在一个实施方案中，本发明的制品还包括关于对受试者施用所述组合物(例如拮抗性抗体)的说明书。一方面，本发明提供了包括第一容器和第二容器的试剂盒，其中第一容器装有包含本发明一种或多种c-met拮抗性抗体的组合物，而第二容器装有缓冲剂。在一个实施方案中，所述缓冲剂是药学可接受的。在一个实施方案中，包含拮抗性抗体的组合物还包含载体，它在有些实施方案中是药学可接受的。在一个实施方案中，试剂盒还包括关于对受试者施用所述组合物(例如拮抗性抗体)的说明书。 一方面，本发明提供了本发明的c-met拮抗性抗体在药物制备中的用途，所述药物用于疾病的治疗性和/或预防性处理，所述疾病诸如癌症、肿瘤、细胞增殖性紊乱、免疫(诸如自身免疫)紊乱和/或血管发生相关紊乱。一方面，本发明提供了本发明的核酸在药物制备中的用途，所述药物用于疾病的治疗性和/或预防性处理，所述疾病诸如癌症、肿瘤、细胞增殖性紊乱、免疫(诸如自身免疫)紊乱和/或血管发生相关紊乱。一方面，本发明提供了本发明的表达载体在药物制备中的用途，所述药物用于疾病的治疗性和/或预防性处理，所述疾病诸如癌症、肿瘤、细胞增殖性紊乱、免疫(诸如自身免疫)紊乱和/或血管发生相关紊乱。一方面，本发明提供了本发明的宿主细胞在药物制备中的用途，所述药物用于疾病的治疗性和/或预防性处理，所述疾病诸如癌症、肿瘤、细胞增殖性紊乱、免疫(诸如自身免疫)紊乱和/或血管发生相关紊乱。一方面，本发明提供了本发明的制品在药物制备中的用途，所述药物用于疾病的治疗性和/或预防性处理，所述疾病诸如癌症、肿瘤、细胞增殖性紊乱、免疫(诸如自身免疫)紊乱和/或血管发生相关紊乱。一方面，本方面提供了本发明的试剂盒在药物制备中的用途，所述药物用于疾病的治疗性和/或预防性处理，所述疾病诸如癌症、肿瘤、细胞增殖性紊乱、免疫(诸如自身免疫)紊乱和/或血管发生相关紊乱。本发明提供了可用于调节与HGF/c-met信号轴调控异常有关的疾病状态的组合物。HGF/c-met信号途径牵涉多种生物学和生理学功能，包括例如细胞增殖和血管发生。因此，一方面，本发明提供了包括对受试者施用本发明抗体在内的方法。一方面，本发明提供了抑制c-met激活的细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞或组织接触有效量的本发明抗体，由此与c-met活化作用相关的细胞增殖受到抑制。一方面，本发明提供了治疗受试者中与c-met活化作用调控异常有关的病理状态的方法，所述方法包括对受试者施用有效量的本发明抗体，由此所述疾病得到治疗。一方面，本发明提供了抑制表达c-met或肝细胞生长因子或二者的细胞生长的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明抗体，由此引起所述细胞的生长抑制。在一个实施方案中，所述细胞接触由不同细胞表达的HGF (例如通过旁分泌作用)。一方面，本发明提供了治疗性处理患癌性肿瘤的哺乳动物的方法，所述肿瘤包含表达c-met或肝细胞生长因子或二者的细胞,所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述哺乳动物。在一个实施方案中，所述细胞接触由不同细胞表达的HGF (例如通过旁分泌作用)。—方面，本发明提供了用于治疗或预防与c-met或肝细胞生长因子或二者的表达或活性增加有关的细胞增殖性紊乱的方法，所述方法包括对需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明抗体，由此有效治疗或预防所述细胞增殖性紊乱。在一个实施方案中，所述增殖性紊乱是癌症。—方面，本发明提供了用于抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分 依赖于c-met或肝细胞生长因子或二者的生长增效作用，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此抑制所述细胞的生长。在一个实施方案中，所述细胞接触由不同细胞表达的HGF (例如通过旁分泌作用)。治疗性处理哺乳动物中肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖于c-met或肝细胞生长因子或二者的生长增效作用，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述肿瘤。在一个实施方案中，所述细胞接触由不同细胞表达的HGF(例如通过旁分泌作用)。本发明的方法可用于影响任何合适的病理状态，例如与HGF/c-met信号途径调控异常有关的细胞和/或组织。在一个实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是癌细胞。例如，癌细胞可选自乳癌细胞、结肠直肠癌细胞、肺癌细胞、乳头状癌细胞(例如甲状腺的)、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、中枢神经系统癌细胞、骨源性肉瘤细胞、肾癌细胞、肝细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、头和颈鳞状癌细胞、黑素瘤细胞和白血病细胞。在一个实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是过度增殖的和/或过度增生的细胞。在一个实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是发育异常的细胞。在另一实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是转移的细胞。本发明的方法还可包括另外的处理步骤。例如，在一个实施方案中，该方法还包括其中将靶细胞和/或组织(例如癌细胞)暴露于放射处理或化疗剂的步骤。如本文所述，c-met的活化作用是重要的生物学过程，它的调控异常导致许多病理状态。因此，在本发明方法的一个实施方案中，所靶向的细胞(例如癌细胞)是其中c-met的活化作用与相同组织起源的正常细胞相比增强的细胞。在一个实施方案中，本发明的方法引起靶细胞的死亡。例如，与本发明拮抗剂的接触可导致细胞不能通过c-met途径发信号，这导致细胞死亡。c-met活化作用(及由此信号传导)的调控异常可源自许多细胞变化，包括例如HGF(c-met的关联配体)和/或c-met自身的过表达。因此，在有些实施方案中，本发明的方法包括靶向这样的细胞，其中与相同组织起源的正常细胞相比，由所述细胞(例如癌细胞)表达的c-met或肝细胞生长因子或二者更丰富。表达c-met的细胞可受到来自多种来源的HGF调控，即以自分泌或旁分泌的方式。例如，在本发明方法的一个实施方案中，使靶细胞受到不同细胞所表达的肝细胞生长因子的接触/结合(例如通过旁分泌作用)。所述不同细胞可以是相同或不同组织起源的。在一个实施方案中，使靶细胞受到靶细胞自身所表达的HGF的接触/结合(例如通过自分泌作用/环)。C-met活化和/或信号传导也可不依赖配体而发生。因此，在本发明方法的一个实施方案中，靶细胞中的c-met活化不依赖配体而发生。附图简述图I描绘了以下轻链和重链可变区的序列比对轻链人亚型I共有序列、重链人亚型III共有序列、鼠5D5抗C-met抗体和5D5移植型“人源化”抗体。图2描绘了从具有各自随机化HVR的文库中选择的亲和成熟抗体的各种HVR序列。图3描绘了从包括6个文库组合的文库集合中选择的亲和成熟抗体的HVR-H3序列，所述6个文库组合涵盖所有6个HVR，其中各个文库在单一 HVR中随机化。图4描绘了所选抗c-met抗体的Biacore分析结果。
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图5A、5B和6A、6B描绘了用于实践本发明的例示性受体人共有框架序列，序列标识符如下重链可夺区(VH)共有框架(图5A、B)人VH 亚型 I 共有框架减去 Kabat CDR(SEQ ID NO: 19)人VH亚型I共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO:20-22)人VH 亚型 II 共有框架减去 Kabat CDR(SEQ ID NO: 23)人VH亚型II共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO:24-26)人VH 亚型 III 共有框架减去 Kabat CDR(SEQ ID NO: 27)人VH亚型III共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO:28-30)人VH 受体框架减去 Kabat CDR(SEQ ID N0:31)人VH受体框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO:32-33)人VH 受体 2 框架减去 Kabat CDR(SEQ ID NO: 34)人VH受体2框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO:35-37)轻链可变区(VL)共有框架(图6A、B)人VL K 亚型 I 共有框架(SEQ ID NO: 38)人VL K 亚型 II 共有框架(SEQ ID NO: 39)人VL K 亚型 III 共有框架(SEQ ID NO:40)人VL K 亚型 IV 共有框架(SEQ ID N0:41)图7描绘了供体(鼠抗体OT5)轻链(LC)和重链(HC)可变区序列。图8描绘了本发明抗体阻断HGF与其受体结合的绘图数据。图9描绘了本发明抗体抑制HGF受体活化的绘图数据。图10描绘了本发明抗体抑制细胞增殖的绘图数据。“rCh0A 5 HGF”指嵌合单臂5D5 抗体加 HGF ;“rhu0A5D5v2HGF” 指 0A5D5. v2 加 HGF ;“rhu0A5D5vl HGF” 指 0A5D5. vl 力口HGF。“rch0A5D5对照”指嵌合单臂5D5抗体但没有HGF ；<<rhu0A5D5v2对照”指0A5D5. v2但没有 HGF ;“rhu0A 5vl 对照”指 0AOT5. vl 但没有 HGF。图IlAUlB描绘了在存在本发明抗体时抑制受体磷酸化的数据。图IlA描绘了H358细胞的受体磷酸化。图IlB描绘了经HGF转染的H358细胞的受体磷酸化。图12描绘了显示本发明抗体体内功效的绘图数据。“TI”指肿瘤发生率。TI=8/10指一组10只小鼠中有8只小鼠患肿瘤。TI=2/8指一组8只小鼠中有2只小鼠患肿瘤。图13描绘了本发明抗体一个实施方案(5D5. ν2)的框架(FR)、高变区(HVR)、第一恒定区(CL或CHl)和Fe区(Fe)的氨基酸序列。所描绘的Fe序列包含“穴”(腔)突变T366S、L368A 和 Y407V,如 WO 2005/063816 中所述。图14描绘了包含“隆起”(突起)突变T366W的Fe多肽的序列，如WO 2005/063816中所述。在一个实施方案中，包含此序列的Fe多肽与含图13的Fe序列的Fe多肽形成复合物以生成本发明抗体的Fe区。实行本发明的模式本发明提供了用于鉴定和/或利用HGF/c-met信号途径之抑制剂的方法、组合物、试剂盒和制品。本文提供了这些方法、组合物、试剂盒和制品的细节。·通用技术除非另有说明，本发明的实行将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。文献中充分解释了这些技术，诸如 “Molecular Cloning: A Laboratory Manual”，secondedition (Sambrook et al·，1989); “Oligonucleotide Synthesis，，，(M.J. Gait, ed. , 1984) ; “Animal Cell Culture”, (R. I. Freshney, ed. , 1987) ; “Methods inEnzymoIogy^, (Academic Press, Inc. ) \uCurrent Protocols in Molecular Biology，，，(F.M. Ausubel et al. , eds. , 1987, and periodic updates) ; iiPCR: The PolymeraseChain Reaction，，，(Mullis et al. , ed. , 1994) ; “A Practical Guide to MolecularCloning”，(Perbal Bernard V, 1988); “Phage Display:A Laboratory Manual”，(Barbaset al. , 2001)。定义氨基酸残基/位点的“修饰”在用于本文时指一级氨基酸序列与起始氨基酸序列相比的变化，其中所述改变源自牵涉所述氨基酸残基/位点的序列改变。例如，典型的修饰包括用另一种氨基酸替代所述残基(或者在所述位置)(例如保守或非保守替代)、在所述残基/位置插入一个或多个(通常少于5个或3个)氨基酸、及删除所述残基/位置。“氨基酸替代”或其变体指用不同氨基酸残基置换预定的(起初的)氨基酸序列中现有的氨基酸残基。通常且优选的是，修饰导致与包含起始(或“野生型”)氨基酸序列的多肽相比，变体多肽的至少一种物理生化活性发生变更。例如,在抗体的情况中，发生改变的物理生化活性可以是对靶分子的结合亲和力、结合能力和/或结合效应。“分离的”抗体指已经由其天然环境的一种成分鉴别和分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染成分指将会干扰该抗体的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(I)根据Lowry方法的测定，抗体重量超过95%，最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据使用考马斯蓝或优选银染的还原或非还原条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然抗体的天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。
术语“依照Kabat的可变区残基编号”或“依照Kabat的氨基酸位置编号”及其变体指Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. PublicHealth Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)中的抗体编辑用于重链可变区或轻链可变区的编号系统。利用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含较少或另外的氨基酸，对应于可变区FR或CDR的缩短或插入。例如，重链可变区可包括H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat是残基52a)及重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat的残基82a、82b和82c等)。指定抗体的Kabat残基编号可通过将此抗体序列与“标准”Kabat编号序列在同源区进行比对来确定。短语“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文时表示两个数值(通常一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较抗体该数值的函数，所述两个数值之间的差异优选小于约50%，优选小于约40%，优选小于约30%，优选小于约20%,优选小于约 10% ο “结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域已知的普通方法来测量，包括那些本文所描述的。低亲和力抗体通常缓慢结合抗原且趋向于容易解离，而高亲和力抗体通常较快结合抗原且趋向于保持较长时间的结合。本领域知道测量结合亲和力的多种方法，其中任一种都可用于本发明的目的。下文描述了具体的例示性实施方案。在一个实施方案中，依照本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下述测定法所述使用Fab型式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(Chen, etal. , (1999) J Mol Biol 293:865-881)。为了确定测定条件，用溶于 50mM 碳酸钠(pH 9.6)的5 μ g/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用溶于PBS的2%(w/v)牛血清清蛋白在室温(约23°C )封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM[125I]_抗原与连续稀释的目的Fab (例如与Presta et al. , (1997)Cancer Res. 57:4593-4599中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)混合。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温(例如I小时)。然后除去溶液，并用含0. 1% Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后,加入150 μ I/孔闪烁液(MicroScint-20; Packard),然后在Topcount伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在 25°C 使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’ -(3- 二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH 4. 8将抗原稀释至5 μ g/ml (约O. 2 μ M)，然后以5 μ I/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25°C以约25 μ I/分钟的流速注入在含O. 05% Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的 Fab (0·78ηΜ 至 500ηΜ)。使用简单一对一 Langmuir 结合模型(BIAcore EvaluationSoftware version 3. 2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(km)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率koff/kon计算。参见例如Chen, Y.，et al.，(1999) J MolBiol 293:865-881。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过ΙΟΘΜ —1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即在根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(a stop-f low spectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco 分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，存在浓度渐增的抗原的条件下，测量溶于PBS，pH 7. 2的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。依照本发明的“结合速率”(on-rate, rate of association, association rate)或“k。/也可通过上文所述相同的表面等离振子共振技术使用BIACore -2000或BIAcore -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在25°C使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)来测定。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)_碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5, BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH 4. 8将抗原稀释至5 μ g/ml (约O. 2 μ Μ)，然后以5μ I/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25°C以约25 μ I/分钟的流速注入在含O. 05% Tween-20的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (O. 78nM至500nM)。使用简单 一对一 Langmuir 结合模型(BIAcore Evaluation Software version 3. 2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kj和解离速率。平衡解离常数(Kd)以比率kf/km 计算。参见例如 Chen, Y.，et al. , (1999) J Mol Biol 293:865-881。然而，如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率优选使用荧光淬灭技术来测定，即在根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量,存在浓度渐增的抗原的条件下，测量溶于PBS，pH 7. 2的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。在一个实施方案中，依照本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下述测定法所述使用Fab型式的抗体和抗原分子进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量 Fab 对抗原的溶液结合亲和力(Chen, et al. , (1999) J Mol Biol 293:865-881)。为了确定测定条件，用溶于50mM碳酸钠(pH9. 6)的5 μ g/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用溶于PBS的2%(w/v)牛血清清蛋白在室温(约23°C )封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM[125I]_抗原与连续稀释的目的 Fab (例如与 Presta et al. , (1997) Cancer Res. 57:4593-4599 中抗 VEGF 抗体，Fab-12的评估一致)混合。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温I小时。然后除去溶液，并用含O. 1% Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔闪烁液(MicroScint-20; Packard),然后在Topcount伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用BIACOTeTM-2000或BIAcore -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在25°C使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)_碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc·)。用 IOmM 乙酸钠 pH 4. 8 将抗原稀释至 5 μ g/ml (约 0.2 μ M)，然后以5 μ I/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25°C以约25 μ I/分钟的流速注入在含O. 05% Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab (O. 78nM至500nM)。使用简单一对一 Langmuir 结合模型(BIAcore Evaluation Software version 3. 2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(km)和解离速率(k。^)。平衡解离常数(Kd)以比率kQff/km 计算。参见例如 Chen, Y.，et al. , (1999) J Mol Biol 293:865-881。如果根据上文 表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即在根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量,存在浓度渐增的抗原的条件下，测量溶于PBS，pH 7. 2的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。在一个实施方案中，依照本发明的“结合速率”(on-rate, rate ofassociation, association rate)或“km”是通过上文所述相同的表面等离振子共振技术使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在 25°C 使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测定的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH 4. 8将抗原稀释至5 μ g/ml (约O. 2 μ Μ)，然后以5 μ I/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25 V以约25 μ I/分钟的流速注入在含O. 05% Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的 Fab (O. 78nM 至 500nM)。使用简单一对一 Langmuir 结合模型(BIAcore EvaluationSoftware version 3. 2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(km)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率koff/kon计算。参见例如Chen, Y.，et al.，(1999) J MolBiol 293:865-881。然而，如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率优选使用荧光淬灭技术来测定，即在根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco 分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，存在浓度渐增的抗原的条件下，测量溶于PBS，pH 7. 2的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm，16nm带通)的升高或降低。短语“实质性降低”或“实质性不同”在用于本文时表示两个数值(通常一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值、HAMA反应)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有统计学显著性。作为参照/比较抗体该数值的函数，所述两个数值之间的差异优选大于约10%，优选大于约20%，优选大于约30%，优选大于约40%，优选大于约50%。关于肽或多肽序列的“百 分比(%)氨基酸序列同一性”定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。可以本领域技术范围内的多种方式进行序列对比以测定百分比氨基酸序列同一性，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定测量对比的适宜参数，包括对所比较的序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本文的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列对比计算机程序ALIGN-2而获得的，其中下文表A中提供了 ALIGN-2程序的全部源代码。ALIGN-2序列对比计算机程序由Genentech，Inc.编写，且下文表A中所示源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(Washington D. C.，20559)，并以美国版权注册号TXU510087注册。公众可通过Genentech, Inc. (South San Francisco, California)得到 ALIGN-2 程序，或者可从下文图8中提供的源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIX V4. OD上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。在采用ALIGN-2用于氨基酸序列比较的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(任选可表述为具有或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算分数X/Y 乘 100其中X是由序列对比程序ALIGN-2在该程序的A和B对比中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。可预料到若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一'I"生。除非另有具体说明，本文所用的所有％氨基酸序列同一性值均是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。表A
I*
牵
*C-C increased from 12 to 15
*Z is average of EQ)
*B is average of ND
*match with stop is _M; stop-stop = 0; J (joker) match = 0
*/
#define_M -8 /* value of a match with a stop */ int _day[26][26] = {
/* 7\ B C D E F G H I J K L M N 0 P Q R S T U V W X Y Z V
/* A ” { 2，0,-2, 0，0，-4，1,-1,-1, 0，-1，-2，-1，1，0，-2, I, I, O5 0，-6，0,-3, 0}，
产 B */ { 0，3,-4, 3, 2,-5, O5 1,-2, 0，0,-3,-2, 2，_M，-1，1，O5 O5 O5 0,-2,-5, 0,-3, 1}5/* C */ {-2,-4,15，-5，-5厂4厂3，-3，-2，0，-5，-6，-5 A_M，-3，-5，-4，0,-2, 0，-2，-8，0，0,-5},
权利要求
1.抗c-met抗体,其包含: (a)至少一种选自下组的HVR序列(i)包含序列A1-A17 的 HVR-L1，其中 A1-A17 是 KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQ ID NO: I)(ii)包含序列B1-B7 的 HVR-L2，其中 B1-B7 是 WASTRES (SEQ ID NO: 2)(iii)包含序列C1-C9 的 HVR-L3，其中 C1-C9 是 QQYYAYPffT(SEQ ID NO:3)(iv)包含序列Dl-DlO 的 HVR-H1，其中 Dl-DlO 是 GYTFTSYffLH(SEQ ID NO:4)(V)包含序列 El-El8 的 HVR-H2，其中 El-El8 是 GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ ID NO: 5) (vi)包含序列 Fl-Fll 的 HVR-H3，其中 Fl-Fll 是 XYGSYVSPLDY(SEQ ID NO:6)且 X 不是R ;及 (b)至少一种变体HVR，其中所述变体HVR包含SEQID NO: 1、2、3、4、5或6中所示序列的至少一个残基的修饰。
2.权利要求I的抗体，其中所述变体HVR-H3中的Fl是T或S，F3是R或S，而F7是T。
3.权利要求I的抗体，其中所述抗体是人源化的。
4.权利要求I的抗体,其中至少一部分框架序列是人共有框架序列。
5.权利要求I的抗体，其中所述修饰是替代、插入或删除。
6.权利要求I的抗体，其中HVR-L2变体包含以下位置任意组合的1-5个(1、2、3、4或5 个)替代B I (Μ 或 L)、Β2 (P、T、G 或 S)、Β3 (N、G、R 或 Τ)、Β4 (I、N 或 F)、Β5 (P、I、L 或 G)、Β6 (A、D、T 或 V)、及 Β7 (R、I、M 或 G)。
7.权利要求I的抗体，其中HVR-Hl变体包含以下位置任意组合的1-5个(1、2、3、4或5 个)替代D3 (N、P、L、S、A、I)、D5 (I、S 或 Y)、D6 (G、D、T、K、R)、D7 (F、H、R、S、T 或 V)、及D9 (M 或 V)。
8.权利要求I的抗体，其中HVR-H2变体包含以下位置任意组合的1-4个(1、2、3或4个)替代E7 (Y)、E9 (I)、ElO (I)、E14 (T 或 Q)、E15 (D、K、S、T 或 V)、E16 (L)、E17 (E、H、N 或D)、&E18(Y、E*H)。
9.权利要求I的抗体，其中HVR-H3变体包含以下位置任意组合的1-5个(1、2、3、4或5 个)替代F1 (T、S)、F3 (R、S、H、T、A、K)、F4 (G)、F6 (R、F、Μ、Τ、E、K、A、L、W)、F7 (L、I、T、R、K、V)、F8 (S、A)、FlO (Y、N)、及 Fll (Q、S、H、F)。
10.权利要求I的抗体，其包含具有SEQID NO: I序列的HVR-Ll。
11.权利要求I的抗体，其包含具有SEQID勵:3序列的狀1 -1^3。
12.权利要求I的抗体，其中变体HVR-H3中的Fl是T。
13.权利要求I的抗体，其中变体HVR-H3中的F3是R或S。
14.权利要求I的抗体，其中变体HVR-H3中的F7是T。
15.人源化抗c-met抗体,其中所述抗体对人c-met的单价亲和力与包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9和10)的鼠抗体的单价亲和力基本上相同。
16.人源化抗c-met抗体,其中所述抗体对人c-met的单价亲和力比包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9和10)的鼠抗体的单价亲和力至少高3倍。
17.权利要求15或16的人源化抗体，其中所述鼠抗体是由以美国典型培养物保藏中心登记号ATCC HB-11894 (杂交瘤1A3. 3. 13)或HB-11895 (杂交瘤5D5. 11. 6)保藏的杂交瘤细胞系生成的。
18.权利要求15-17任一项的抗体，其中结合亲和力以Kd值表示。
19.权利要求15-18任一项的抗体，其中结合亲和力通过Biacore或放射免疫测定法来测量。
20.权利要求I的抗体,其包含人K亚型I共有框架序列。
21.权利要求I的抗体,其包含重链人亚型III共有框架序列。
22.权利要求21的抗体，其中框架序列包含第71、73和/或78位的替代。
23.权利要求22的抗体，其中所述替代是R71A、N73T和/或N78A。
24.人源化抗c-met抗体，其中所述人源化抗体比包括嵌合抗c_met抗体的参照抗体更好的抑制人肝细胞生长因子与其受体的结合，所述嵌合抗c-met抗体包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9和10)。
25.权利要求24的抗体，其中所述人源化抗体抑制结合且IC50值小于所述嵌合抗体该数值的一半。
26.权利要求25的抗体，其中IC50是跨越约O.OlnM至IOOOnM左右的抗体浓度范围测定的。
27.人源化抗c-met抗体,其中所述人源化抗体比包括嵌合抗c-met抗体的参照抗体更好的抑制人肝细胞生长因子(HGF)受体的活化，所述嵌合抗c-met抗体包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9 10)。
28.权利要求27的抗体，其中所述人源化抗体抑制受体活化且IC50值小于所述嵌合抗体该数值的一半。
29.权利要求28的抗体，其中IC50是跨越约O.InM至约IOOnM的抗体浓度范围测定的。
30.人源化抗c-met抗体，其中所述人源化抗体比包括嵌合抗c_met抗体的参照抗体更好的抑制c-met依赖性细胞增殖，所述嵌合抗c-met抗体包含图7中所示轻链和重链可变区序列(SEQ ID NO:9 和 10)。
31.权利要求30的抗体，其中所述人源化抗体抑制细胞增殖且IC50值小于所述嵌合抗体该数值的一半。
32.权利要求31的抗体，其中IC50是跨越约O.OlnM至约IOOnM的抗体浓度范围测定的。
33.前述权利要求的抗体，其中所述人源化抗体和嵌合抗体都是单价的。
34.前述权利要求的抗体，其中所述人源化抗体和嵌合抗体都包含与Fe区连接的单一Fab 区。
35.包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含图13中所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或 HVR3-HC 序列(SEQ ID NO: 191-193)。
36.权利要求35的抗体，其中所述可变区包含图13中所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/ 或 FR4-HC 序列(SEQ ID NO: 187-190)。
37.权利要求35或36的抗体，其中所述抗体包含图13中所示CHl和/或Fe序列(SEQID N0:194 和 / 或 195)。
38.包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含图13中所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或 HVR3-LC 序列(SEQ ID NO: 183-185)。
39.权利要求38的抗体，其中所述可变区包含图13中所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/ 或 FR4-LC 序列(SEQ ID NO: 179-182)。
40.权利要求38或39的抗体，其中所述抗体包含图13中所示CLl序列(SEQIDNO:186)。
41.包含权利要求35-37任一项的重链可变区和权利要求38-40任一项的轻链可变区的抗体。
42.权利要求41的抗体，其中所述抗体是单价的且包含Fe区。
43.权利要求42的抗体，其中Fe区包含第一和第二多肽，其中所述第一和第二多肽各自包含相对于野生型人Fe的一个或多个突变。
44.权利要求43的抗体，其中所述第一多肽包含图13中所示Fe序列(SEQIDNO: 195)，而所述第二多肽包含图14中所示Fe序列(SEQ ID NO: 196)。
45.抑制c-met激活的细胞增殖的方法,所述方法包括使细胞或组织接触有效量的前述权利要求任一项的抗体。
46.调节与HGF/c-met信号轴调控异常有关的疾病的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的前述权利要求任一项的抗体。
47.治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的前述权利要求任一项的抗体。
48.权利要求47的方法，其中所述癌症是肺癌、脑癌、肾癌、胃癌、结肠直肠癌和/或胰腺癌。
49.治疗受试者中增殖紊乱的方法，所述方法包括给受试者施用有效量的前述权利要求任一项的抗体。
50.权利要求49的方法，其中所述增殖性紊乱是癌症。
51.编码权利要求1-44任一项的抗体的核酸。
52.包含权利要求51的核酸的宿主细胞。
53.包含权利要求1-44任一项的抗体的组合物。
54.权利要求53的组合物，其中所述组合物包含载体。
全文摘要
本发明涉及人源化抗C-MET拮抗剂。本发明提供了治疗用抗C-MET抗体，以及含有这些抗体的组合物和使用这些抗体的方法。
文档编号C12N1/15GK102942631SQ20121033698
公开日2013年2月27日 申请日期2005年8月4日 优先权日2004年8月5日
发明者马克.S.丹尼斯, 卡伦.比尔莱西, 朱迪.扬, 郑重 申请人:健泰科生物技术公司