专利名称：一种植物抗病毒相关蛋白及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于基因工程领域，涉及一种植物抗病毒相关蛋白及其编码基因与应用。
背景技术：
寄主对病毒的抗性反应，可以影响病毒的侵染和在寄主体内的复制和移动。其中抗病毒蛋白在应对病毒的抗性反应中起到至关重要的作用，其可以在病毒进入寄主体内的不同阶段(侵染、复制和移动)激活寄主的抗性反应，最终诱导寄主产生系统抗性。同时，植物抗病毒蛋白具有重要的生产利用价值。磺基转移酶(sulfotransferase, SOTs)蛋白，通过催化反应将3’-磷酸腺苷-5’ -磷酰硫酸(3’ -phosphoad enosine-5’ -phosphosulfate)上的硫酸根转移到底物的羟基上，催化底物主要包括一些激素和多肽类物质。研究发现该酶催化的反应产物参与了植物对病原菌的抗性反应，其在植物对病原菌的侵害中发挥了重要的防御作用(BaekD, Pathange P, Chung JS, Jiang JF,Gao LQ, Oikawa A, Hirai MY, Saito K, Pare P, Shi
H.2010, A stress-1nducible sulphotransferase sulphonates salicylic acid andconfers pathogen resistance in Arabidopsis.Plant, Cell and Enviro33:1383 - 1392 ；Lacomme C, Roby D.1996, Molecular cloning of a sulfotransferase in Arabidopsisthaliana and regulation during development and in response to infection withpathogenic bacteria.Plant Mol Biol30:995 - 1008)。但是，目前为止只有极个别的横基转移酶基因得到分离并对其生物学功能进行了研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物抗病毒相关蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的植物抗病毒相关蛋白(OsSOTl),来源于Kasalath水稻(Oryzasativa L.1ndica.cv),是如下(a)或(b)的蛋白质:(a) SEQ ID N0.1 所示的蛋白质；(b)将SEQ ID N0.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病毒相关的由SEQ ID N0.1衍生的蛋白质。(c) SEQ ID N0.1中自氨基末端第63至363位为磺基转移酶的磺基转移功能结构域，将SEQ ID N0.1中具有磺基转移酶的磺基转移功能结构域的氨基酸序列经过几个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有磺基转移酶活性的，且与植物抗病毒相关的，由SEQ IDN0.1中具有横基转移酶的横基转移功能结构域的氣基酸序列衍生的蛋白质。为了使(a)中的OsSOTl便于纯化，可在由SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表I所示的标签。表I标签的序列
权利要求
1.一种蛋白质，其特征在于是如下(a)、(b)或(C)所述的蛋白质: (a)SEQ ID N0.1所示的蛋白质； (b)将SEQID N0.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病毒相关的由SEQ ID N0.1衍生的蛋白质。
(c)SEQ ID N0.1中自氨基末端第63至363位为磺基转移酶的磺基转移功能结构域，将SEQ ID N0.1中具有磺基转移酶的磺基转移功能结构域的氨基酸序列经过几个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有磺基转移酶活性的，且与植物抗病毒相关的，由SEQ IDN0.1中具有横基转移酶的横基转移功能结构域的氣基酸序列衍生的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于:所述基因具有如下I)或2)或3)或4)所述的DNA分子: 1)SEQ ID N0.2所示的DNA分子；2)SEQ ID N0.3所示的DNA分子； 3)在严格条件下与I)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物抗病毒相关蛋白的DNA分子; 4)与I)或2)或3)限定的DNA序列具有80%以上同源性且编码植物抗病毒相关蛋白的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于:所述重组表达载体是在pCUbil390载体的重组位点Kpn I和BamH I之间插入权利要求2或3所述基因得到的重组质粒。
6.扩增权利要求2或3所述基因的全长及其任意片段的引物对。
7.如去啊你俩要求6所述的引物对，其特征在于选自以下任意一组引物对:SEQIDN0.4 所不的 primerl/SEQ ID N0.5 所不的 primer2, SEQ ID N0.6 所不的 primer3/SEQ IDN0.7 所不的 primer4, SEQ ID N0.8 所不的 primer5/SEQ ID N0.9 所不的 primer6。
8.权利要求1所述蛋白，权利要求2或3所述基因，权利要求4或5所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在植物育种中的应用，优选在培育抗病毒水稻品种中的应用；特别优选在培育抗条纹叶枯病毒水稻品种中的应用。
9.一种培育抗病毒转基因植物的方法，是将权利要求2或3所述基因导入感病毒病植物中，得到抗病毒的转基因植物；所述感病毒植物为发病率高于50%的植物；所述抗病毒病的转基因植物为发病率低于30%的转基因植物。
10.如权利要求8所述的方法，其特征在于:权利要求2或3所述基因通过权利要求4或5所述重组表达载体导入所述感病毒病植物中。
全文摘要
本发明属于基因工程领域，公开了一种植物抗病毒相关蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄抗病相关的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。本发明的植物抗病相关蛋白影响植物的抗病性。提高该蛋白编码基因的表达可导致感病植物抗病，从而可以培育植物抗病转基因植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。
文档编号C12N15/63GK103114078SQ20131003728
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月30日 优先权日2013年1月30日
发明者万建民, 王 琦, 刘裕强, 江玲, 胡金龙, 刘艳玲, 何俊, 陈亮明, 刘世家, 刘喜, 王益华, 赵志刚, 张文伟, 陈赛华 申请人:南京农业大学