一种解淀粉芽孢杆菌及其在防治植物果腐病中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus?amyloliquefaciens）JSNL1312，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC?No.7740，保藏日期为2013年6月13日。本发明还公开了上述解淀粉芽孢杆菌在防治无花果、铁皮石斛等植物果腐病中的应用。本发明解淀粉芽孢杆菌JSNL1312对无花果果实、铁皮石斛果实上的多种病原真菌具有抑制作用；且能够人工培养，繁殖速度快，便于进行规模化生产，具有良好的开发应用前景。
【专利说明】一种解淀粉芽孢杆菌及其在防治植物果腐病中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物【技术领域】，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其在防治植物果腐病的应用。
【背景技术】
[0002]无花果(Ficuscarica Linn)属桑科(Moraceae)无花果属(Ficus L.)植物,原产于亚洲西南部和地中海东部地区，是古老的浆果树种，肉质松软，风味甘甜，现在广泛种植于地中海的大多数国家和加利福尼亚，具有很高的营养价值和药用价值。近年来，江苏省的无花果产品市场发展很快，尤其苏南地区，无花果果脯、果茶、果酒等产品供不应求，无花果产业面临难得的市场机遇。但是无花果果实病害已成为限制无花果采后贮藏期和货架期长短的重要因素，主要包括黑粉病、黑斑病、无花果内腐病和酸腐病等，不仅影响无花果果实的质量，而且严重影响无花果采后的贮藏和销售。其中，疫霉引起的无花果内腐病危害较为严重。
[0003]铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为多年生附生草本,是一种集栽培和观赏于一体的植物，为珍稀名贵的中药材，一直与灵芝、人参、冬虫夏草等被列为上品中药，被誉为“中华九大仙草”之首。铁皮石斛具有滋阴清热、养胃生津、润肺止咳等功效，其所含的多糖成分具有增强人体免疫功能，现代医学证明，铁皮石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力和有效减轻肝损伤等作用。由于铁皮石斛喜湿度大的环境，荚果腐烂病的发生较为严重，对其繁殖后代产生较大影响。
[0004]因此，寻找一种经济、安全、有效的防治措施是当务之急，生物防治不失为重要的辅助手段，其中生防细菌在植物病害生物防治中起到非常重要的作用，具有危害小、使用安全等优点，可以用于防治各种植物病害，其主要优势在于:
[0005](I)种类和数量众多，在植物体内外大量存在；
[0006](2)对病原菌的作用方式多样化，包括竞争、拮抗、寄生、诱导植物抗性产生等；
[0007](3)繁殖速度快；
[0008](4)大多细菌在植物体内外定殖力强；
[0009](5)能够人工培养，易于操作，便于生产应用；
[0010](6)有些细菌菌株不仅能够防治病害而且可以促进植物的生长，增加作物的产量。
[0011]目前对各种植物病害的防治尚无非常理想的生防药剂，如果能使用生物农药或尽量少的使用农药对植物病害进行有效防治，将在一定程度上降低农药残留，大大提高其食用安全性。从保护生态环境和食品安全的角度出发，铁皮石斛、无花果果实均为可食性植物，其生产过程需要低毒、低污染，以达到安全食用的目的，这也符合农业的可持续发展战略。尤其是进入21世纪以来，各国政府和民众更加重视生物农药的开发和应用，生物农药产业被认为是未来经济中具有发展潜力的新增长点之一。
【发明内容】
[0012]本发明所要解决的技术问题是提供一种对铁皮石斛、无花果果腐病具有生物防治作用的解淀粉芽孢杆菌。
[0013]本发明还要解决的技术问题是提供上述解淀粉芽孢杆菌在防治铁皮石斛、无花果果腐病中的应用。
[0014]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下:
[0015]高效防治铁皮石斛、无花果果腐病的解淀粉芽孢杆菌，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312,是2011年10月在江苏省句容市无花果栽植区内感病植株上分离获得的，该菌株对铁皮石斛、无花果果腐病具有显著的拮抗作用，目前该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCN0.7740，保藏日期为2013年6月13日。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
[0016]解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312的生理活性特征如下:
[0017]解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落较小，淡黄色，直径一般3~5mm，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，产淡黄色色素，菌体杆状，大小为0.8X (I~2) ym，顶生一根或三根鞭毛。革兰氏染色表现为阴性；葡萄糖氧化发酵反应(0/F反应)结果为氧化产酸、好氧；氧化酶反应为弱阳性。其16sRNA序列如SEQ ID No:1所示。
[0018]上述解淀粉芽孢杆菌在防治植物果腐中的应用，所述的植物为铁皮石斛或无花果。
[0019]将解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312接种于发酵培养基中，在28°C _35°C下发酵培养48-60小时，得到的发酵液作为防治铁皮石斛、无花果果腐病的菌剂。
[0020]本发明中所述发酵培养基的配方为:1000mL蒸馏水，牛肉膏2_5g，蛋白胨5-10g，氯化钠 4-5g，pH6.5-8.0。
[0021]有益效果:与现有技术相比，本发明的优点是:
[0022](I)解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312 对多种植物病原菌具有抑制作用，在拮抗细菌对植物病害生物防治中起到非常重要的作用，便于生产应用，尤其是对真菌引起的铁皮石斛、无花果果腐病的防治具有重要意义，也是保证食用安全的重要手段。
[0023](2)解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312 培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312对无花果果腐病病原菌木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)的室内平板对峙效果。其中A是解淀粉芽孢杆菌对病原菌的室内平板对峙图病原菌单接种图片(CK)，以下同。
[0025]图2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312对铁皮石斛果腐病病原菌龙眼焦腐病菌(Lasiodiplodia theobromae)的室内平板对峙效果。【具体实施方式】
[0026]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0027]实施例1:
[0028]解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JSNL1312对铁皮石斛、无花果果腐病病原菌的平板抑菌作用。
[0029]将用LB 斜面活化的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312菌株对称接种于PDA平板的两侧，再将铁皮石斛、无花果果腐病病原菌的PDA平板培养物用直径5mm的打孔器打取同质同量的菌饼，接种于平板中央。27±1°C培养10天观察抑菌效果，并拍照记录，实验效果如图1-图2、表1所示。结果表明，解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens JSNL1312对2种病原菌均有明显的拮抗作用。用单接病原菌的PDA平板作为对照。
[0030]表1JSNL1312对2种病原菌的抑制效果
【权利要求】
1.一种解淀粉芽孢杆菌，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens) JSNL1312,现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC N0.7740，保藏日期为2013年6月13日。
2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在防治植物果腐病中的应用，所述的植物为铁皮石斛或无花果。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，将解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)JSNL1312接种于发酵培养基中，在28°C_35°C下发酵培养48-60小时，得到的发酵液作为防治铁皮石斛、无花果果腐病的菌剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的发酵培养基的配方为:1000mL蒸馏水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g，氯化钠4-5g，pH6.5-8.0。
【文档编号】C12N1/20GK103602606SQ201310253591
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年6月24日 优先权日:2013年6月24日
【发明者】徐超, 白玉梅, 席刚俊, 张红岩, 杨鹤同 申请人:江苏农林职业技术学院