鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品中的应用。所述鹅不食草提取物为鹅不食草的醇提物或其醇提物经石油醚、环己烷、氯仿或苯萃取得到的萃取物。鹅不食草提取物具有很好的抗流感病毒作用，具有与阳性对照药利巴韦林相当的活性作用，尤其是所述萃取物，其抗病毒作用强于阳性对照药利巴韦林。本发明为开发鹅不食草的植物资源提供了有力的技术基础。
【专利说明】鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品
中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，更具体地，涉及一种鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品中的应用。
【背景技术】
[0002]流感病毒是人类健康的一大威胁。由流感病毒所引起的呼吸道疾病被称为流行性感冒(流感)，具有流行面广、传染性强、发病率高等特点。根据统计，全球每年的流感病例为6~12亿，其中重症流感为300~500万例，死亡25~50万人，重症流感的病死率可达10%。流感作为一种病毒性传染病不仅严重威胁着人民群众的健康，而且给国家和社会带来了沉重的负担，如何有效预防和治疗流感尤其是高致病性流感已成为一项摆在世界各国医药工作者面前亟待研究和解决的重要课题。由于流感病毒抗原变异，常规疫苗目前尚不能有效预防流感的暴发与流行，因此抗流感病毒药物的研究在流感治疗中具有重要的意义。
[0003]鹅不食草为菊科植物石胡荽(L.) A.Br.et.Aschers,其入药部位为菊科植物石胡(L.) A.Br.et.Aschers的带花全草,其入药始载于南唐《食性本草》，而在《本草纲目》中亦有记载。在我国，鹅不食草主要产于浙江、江苏、广东、湖北等地，在广西、河南、江西、福建、安徽等地亦有分布。该草药分别被2000版和2005版《中国药典》收载，可以“通鼻窍，止咳”，用于“风寒头痛，咳嗽痰多，鼻塞不通，鼻渊流涕”等。鹅不食草的化学成分主要有挥发油类、萜类、黄酮类和留醇类化合物。《鹅不食草的资源、提取工艺及药理研究》(《黑龙江医药》，2009年12月6卷6期)中研究总结了鹅不食草提取物中的黄酮类化合物具有抗过敏性活性，《鹅不食草醇提取物抑菌作用研究》(《中国民族民间医药》2013年第14期，李吉华)总结了的乙醇提取物的抗菌活性，《鹅不食草化学成分及抗肿瘤活性研究》(2012年5月30日，朱艳平)系统地总结了乙醇提取物的活性，包括抗过敏、抗肿瘤、抗炎、抗菌等活性作用，有关研究提出了鹅不食草的乙醇提取物具有止咳平喘的作用。但诸多的研究成果中，均没有涉及鹅不食草提取物是否具有抗流感病毒的作用相关研究成果报道。鹅不食草的药用植物资源有待进一步开发研究。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是克服现有抗流感病毒药物的不足，提供一种鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品中的应用。
[0005]本发明要解决的另一个技术问题是提供所述鹅不食草提取物的制备方法。
[0006]本发明的目的通过以下技术方案予以实现:
提供鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品中的应用。 [0007]为了进一步发挥祖国中医药在抗流感病毒方面的作用，本发明人尝试从多种中药中提取有效成分，但应用效果结果不佳，唯有从未见报道具有抗流感病毒的鹅不食草的醇提取物显示出抗流感病毒活性，获得了以鹅不食草为原料制备得到的抗流感病毒活性物，更进一步，发明人经过大量的试验摸索，总结得到在醇提基础上再经适当的萃取获得的鹅不食草萃取物比其他规方法制备得到的相关活性物的抗流感病毒效果要更为显著，优于对照药利巴韦林。
[0008]更为针对性地，本发明所述鹅不食草提取物或萃取物具有优良的抗禽流感病毒活性。
[0009]更优选地，本发明所述鹅不食草提取物或萃取物为制备抗H1N1、H5N1或H9N2型流感病毒提供了很好的解决方案和技术基础，基于天然的中医药解决困扰现今医学界的技术难题。
[0010]作为一种优选方案,所述鹅不食草为菊科植物石胡荽(L.) A.Br.et.Aschers。
[0011]作为一种最优选方案，所述鹅不食草为菊科植物石胡荽minima (L.)A.Br.et.Aschers 的带花全草。
[0012]作为一种优选方案，所述鹅不食草提取物为鹅不食草的醇提物。
[0013]所述醇提物是指将鹅不食草的全草用醇经常规的提取方法提取得到。
[0014]进一步优选地，所述鹅不食草醇提物为鹅不食草的乙醇或甲醇提取物。
[0015]作为一种最优选方案，所述乙醇或甲醇的体积百分比浓度50~100%。
[0016]进一步优选地，所述鹅不食草提取物是指将鹅不食草的醇提物进一步用石油醚、环己烷、氯仿或苯萃取而得的萃取物。所述的萃取方法可参照现有常规的萃取方式。
[0017]作为一种优选方案，本发明提供一种所述鹅不食草提取物的制备方法，包括如下步骤:
51.将鹅不食草用乙醇或甲醇提取，将提取液浓缩得到鹅不食草乙醇或甲醇提取物；
52.将SI所得鹅不食草乙醇或甲醇提取物用石油醚、环己烷、氯仿或苯萃取即得。
[0018]优选地，SI所述浓缩是将提取液浓缩至无醇味，浓缩可以采用真空旋转蒸发的方法。
[0019]优选地，S2所述萃取的次数为I~5次，优选3次。合并多次萃取得到的萃取液，浓缩、干燥即得本发明所述鹅不食草提取物。
[0020]本发明同时提供一种抗流感病毒的药物，所述药物包括治疗有效量的鹅不食草提取物和药学上可接受的载体。
[0021]所述的药物可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、乳膏剂、口服液、喷雾剂或针剂。
[0022]本发明同时提供一种抗流感病毒的食品，所述食品为饮料或保健食品，含有预防流感有效量的鹅不食草提取物和食品可接受的载体。
[0023]本发明的有益效果:
本发明突破现有技术关于鹅不食草的应用限制，将鹅不食草提取物应用于制备抗流感病毒的药物或食品及保健品方面，开发了鹅不食草新的应用价值。
[0024]本发明提供鹅不食草在制备抗流感病毒药物方面的应用，尤其是鹅不食草醇提物再经石油醚、环己烷、氯仿或苯萃取后精制得到的萃取物具有更好的抗流感病毒作用，其抗病毒作用强于阳性对照药利巴韦林，本发明所述提取物或萃取物能针对性解决禽流感病毒特别是H1N1、H5N1或H9N2型流感病毒的带给医学界的治疗技术难题，为祖国中医药学抗流感病毒方面增加了新内容， 为开发鹅不食草的植物资源提供了有力的技术基础。【具体实施方式】
[0025]以下结合具体实施例来进一步说明本发明，除非特别说明，本发明采用的原料试剂为本【技术领域】常规市购的原料试剂，除非特别说明，采用的方法和设备为本【技术领域】常规的方法和设备。
[0026]实施例1
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定，为菊科植物H贺溪Centipeda minima (L.) A.Br.et.Aschers,下述实施例同)的干燥全草或带花全草(下述实施例同)粉碎，用I升体积百分比浓度为100%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食草乙醇(100%，v/v)提取物。
[0027]实施例2
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为50%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食草乙醇(50 %，v/v)提取物。
[0028]实施例3
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为75%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食草乙醇(75 %，v/v)提取物。
[0029]实施例4
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为10%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食草乙醇(10 %，v/v)提取物。
[0030]实施例5
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为40%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食草乙醇(40 %，v/v)提取物。
[0031]实施例6
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为50%的甲醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食草甲醇(50 %，v/v)提取物。
[0032]实施例7
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为100%的甲醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食鹅不食草甲醇(100 %，v/v)提取物。
[0033]实施例8
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升水加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩干燥得鹅不食鹅不食草水提取物。
[0034]实施例9将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为95%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩至无醇味得鹅不食草乙醇(95 %，v/v)提取物。将鹅不食草乙醇(95 %，V/V)提取物加水溶解至1L，然后用IL的环己烷萃取，重复用环己烷萃取3次，合并环己烷萃取液得鹅不食草环己烷萃取物。
[0035]实施例10
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为50%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩至无醇味得鹅不食草乙醇(50 %，v/v)提取物。将鹅不食草乙醇(50 %，V/V)提取物加水溶解至1L，然后用IL的石油醚萃取，重复用石油醚萃取3次，合并石油醚萃取液得鹅不食草石油醚萃取物。
[0036]实施例11
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为10%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩至无醇味得鹅不食草乙醇(10 %，v/v)提取物。将鹅不食草乙醇(10 %，V/V)提取物加水溶解至1L，然后用IL的氯仿萃取，重复用氯仿萃取3次，合并氯仿取液得鹅不食草氯仿萃取物。
[0037]实施例12
将300g鹅不食草(采自广东，由广州市药材公司高级工程师麦振球鉴定)的干燥全草粉碎，用I升体积百分比浓度为95%的乙醇加热回流提取，提取时间为lh，重复提取3次，合并提取液，浓缩至无醇味得鹅不食草乙醇(95 %，v/v)提取物。将鹅不食草乙醇(95 %，V/V)提取物加水溶解至1L，然后用IL的苯萃取，重复用苯萃取3次，合并苯萃取液得鹅不食草苯萃取物。
[0038]实施例13鹅不食草提取物在MDCK细胞内对流感病毒的抑制作用
取MDCK细胞(来源与暨大大学药学院中药及天然药物研究所，并不限定本发明，本领域技术人员也可采用其他来源的所述细胞进行实验)生长至单层的96孔细胞培养板，弃去上清液，用PBS (pH7.2~7.4)洗两遍，每孔分别加入用MEM液体培养基(品牌:美国HyClone，购自:上海慧颖生物科技有限公司，货号SH30024.01B) 二倍稀释的药液与病毒液100 PL，另外设细胞对照组、病毒对照组，置于37°C、饱和湿度、5% CO2培养箱中孵育。72 h后，0.5 mM WST-1(品牌:Roche，购自:北京嘉美纽诺生物科技有限公司，货号:11 644 807001)溶液加入到每孔中(WST-1的浓度为0.25 mM)。4小时后，用酶标仪在450 nm测吸光度。IC5tl计算方式如下:细胞存活率=(细胞对照孔OD值一加药孔OD值)X 100% ；以药物浓度为X轴，细胞存活率为Y轴，在Origin作图，求出50%细胞存活率对应的浓度则为IC5(I。
[0039]将实施例1~12制备得到的提取物或萃取物进行抗流感病毒活性测试，结果见表1所示，鹅不食草乙醇或甲醇(50~100 %，v/v)提取物对A/PR8/34 (HlNl)、A/Duck/Guangdong/99 (H5N1)、A Chicken/Guangdong/96 (H9N2)三种流感病毒的抑制作用虽然只和利巴韦林相当或稍低于利巴韦林，但仍然表现出对流感病毒抑制作用。从下表中的抗病毒活性数据看出，鹅不食草乙醇(〈50 %，v/v)提取物具有抗病毒活性。但不明显，鹅不食草水提物显示的活性很小。鹅不食草经进一步用环己烷、石油醚、氯仿和苯萃取得到鹅不食草环己烷萃取物、鹅不食草石油醚萃取物、鹅不食草氯仿萃取物和鹅不食草苯萃取物，他们的活性比单纯的醇提物要好很多，由下表的活性数据显示他们对A/PR8/34 (H1N1)、A/Duck/Guangdong/99 (H5N1)、A Chicken/Guangdong/96 (H9N2)三种流感病毒的半数抑制浓度(IC50)比抗流感病毒药物利巴韦林要小，说明它们的抗流感病毒作用比利巴韦林更强。CA/PR8/34 (H1N1 )、A/Duck/Guangdong/99 (H5N1)、A /Chicken/Guangdong/96 (H9N2)本发明实施例中采用的三种流感病毒株为实验常用的流感病毒株，来源于华南农业大学兽医学院陈建新研究员，本【技术领域】技术人员也可以采用其他来源的所述流感病毒株)。
[0040]表1鹅不食草醇提物或萃取物抑制流感病毒感染MDCK细胞的IC5tl值
【权利要求】
1.鹅不食草提取物在制备具有抗流感病毒作用的药物或食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，为鹅不食草提取物在制备具有抗禽流感病毒作用的药物或食品中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，为鹅不食草提取物在制备具有抗H1N1、H5N1或H9N2型流感病毒作用的药物或食品中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鹅不食草提取物采用的鹅不食草原料为菊科植物石胡荽 Centipeda minima (L.) A.Br.et.Aschers。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鹅不食草提取物采用的鹅不食草原料为菊科植物石胡荽(L.) A.Br.et.Aschers的带花全草。
6.根据权利要求1至5所述的应用，其特征在于，所述鹅不食草提取物为鹅不食草的乙醇或甲醇提取物。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述乙醇或甲醇的体积百分比浓度为50 ~100%ο
8.根据权利要求至5所述的应用，其特征在于，所述鹅不食草提取物是将鹅不食草的醇提物再用石油醚、环己烷、氯仿或苯萃取而得的萃取物。
9.一种抗流感病毒的药物，其特征在于，所述药物包括治疗有效量的鹅不食草提取物和药学上可接受的载体。
10.一种抗流感病毒的食品，其特征在于，所述食品为饮料或保健食品，含有预防流感有效量的鹅不食草提取物和食品可`接受的载体。
【文档编号】A23L2/38GK103655657SQ201310551627
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】王国才, 李药兰, 李国强, 吴鹏, 张晓丽, 洪艺蕾 申请人:暨南大学