用作依赖细胞周期蛋白激酶抑制剂的吡唑并嘧啶的制作方法

专利名称：用作依赖细胞周期蛋白激酶抑制剂的吡唑并嘧啶的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1，5-a]嘧啶类化合物、含有所述化合物的药物组合物以及使用该化合物和组合物治疗诸如癌、炎症、关节炎、病毒性疾病、神经变性疾病(如，阿尔茨海默氏病)、心血管疾病和真菌性疾病的方法。本申请要求于2002年9月4日提交的美国临时专利申请60/407,999的优先权。
背景技术：
依赖细胞周期蛋白激酶(CDKs)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其为细胞周期和细胞增殖的驱动力。在细胞周期过程中，诸如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8等各种CDK发挥不同作用，并可分为G1、S期酶或G2M期酶。失控增殖是癌细胞的特征标志，并且，在许多重要实体瘤中，高频率发生CDK功能调控异常。CDK2和CDK4尤为令人关注，因为它们的活性在各种人类癌症中频繁调控异常。从细胞周期过程的G1期到S期需要CDK2活性，并且CDK2是G1检查点的关键组分之一。检查点用于维持细胞周期事件的正常顺序，并使细胞对损伤或增殖信号作出响应，而癌细胞中正常检查点失控导致肿瘤发生。CDK2通道在肿瘤抑制剂功能(例如，p52、RB和p27)和致癌基因激活(细胞周期蛋白E)水平上影响肿瘤发生。许多报道表明，在乳腺癌、结肠癌、非小细胞细胞肺癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、非何杰金氏淋巴癌、卵巢癌和其它癌症中，辅活化蛋白、细胞周期蛋白E以及CDK2的抑制剂p27分别被过量表达或表达不足。它们的变化表达被证明与增加的CDK2活性水平和不良总存活有关。该观察结果使人们对CDK2及其调控通道强制靶进行了多年研究，文献已报道，许多腺苷5′-三磷酸盐(ATP)竞争性有机小分子和肽被用作CDK抑制剂用于有效治疗癌症。US 6,413,974第1栏23行-第15栏10行对各种CDK及其与各类癌症之间的关系进行了详细说明。
CDK抑制剂是已知的。例如，flavopiridol(式I)是一种非选择性CDK抑制剂，目前正在进行人类临床试验(A.M.Sanderowicz etal，J.Clin.Oncol.(1998)16，2986-2999)。
式I其它已知的CDK抑制剂包括，例如，olomoucine(J.Vesely等人，Eur.J.Biochem.，(1994)224，771-786)和roscovitine(I.Meijer等人，Eur.J.Biochem.，(1997)243，527-536)。US6,107,305描述了用作CDK抑制剂的某些吡唑并[3，4-b]吡啶化合物。′305专利的一个例证化合物具有式II结构 式II在K.S.Kim et al，J.Med.Chem.45(2002)3905-3927和WO02/10162公开了用作CDK抑制剂的某些氨基噻唑化合物。
吡唑并嘧啶类化合物是已知的。例如，在WO92/18504、WO02/50079、WO95/35298、WO02/40485、EP94304104.6、EP0628559(与US5,602,136、5,602,137和5,571,813相同)、US6,383,790、Chem.Pharm.Bull.，(1999)47928，J.Med.Chem.，(1977)20，296，J.Med.Chem.，(1976)19517和Chem.Pharm.Bull.，(1962)10620中公开了许多吡唑并嘧啶类化合物。
现需要用于治疗CDK相关疾病和病症的新化合物、制剂、处理方法和治疗方法。因此，本发明的目的是提供可用于治疗或预防或改善所述疾病和病症的化合物。
发明概述在许多实施方案中，本发明提供了一类新的用作依赖细胞周期蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物、制备所述化合物的方法、含有一种或多种所述化合物的药物组合物、制备含有一种或多种所述化合物的药物制剂的方法以及使用所述化合物或药物组合物治疗、预防、抑制或改善一种或多种CDK相关疾病的方法。
在一个方面中，本申请公开了一种具有通式III结构的化合物或其可药用盐或溶剂化物 式III其中Q是-S(O2)-或-C(O)-；R是芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基可以是未取代的或任选被相同或不同的一个或多个基团独立取代，各取代基团独立地选自卤素、CN、-OR5、SR5、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-NR5R6、-C(O)NR5R6、CF3、烷基、芳基和OCF3；R2选自CN、NR5R6、-C(O2)R6、-C(O)NR5R6、-OR6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；炔基、杂芳基、CF3、杂环基、炔基烷基、环烷基、被1-6个相同或不同的R9基团取代的烷基，并且R9基团独立地选自下列一系列R9， R3选自H、卤素、-NR5R6、-C(O)NR5R6、烷基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基、 和 其中R3定义中所述各烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基以及刚才在上文R3定义中列出的杂环基基团是未被取代的或被相同或不同的一个或多个基团独立取代，各取代基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、CF3、CN、-OCF3、-(CR4R5)nOR5、-OR5、-NR5R6、-(CR4R5)nNR5R6、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R6、-SR6、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；R4是H、卤素或烷基；R5是H或烷基；R6选自H、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，其中所述各烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基可以是未取代的或任选被相同或不同的一个或多个基团取代，各基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、杂环基烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R10、-SO3H、-SR10、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R10；R10选自H、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，其中所述各烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基可以是未取代的或任选被一个或相同或不同的多个基团取代，各基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、杂环基烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR4R5、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)NR4R5、-C(O)R5、-SO3H、-SR5、-S(O2)R7、-S(O2)NR4R5、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR4R5；
或任选(i)基团-NR5R10中的R5和R10，或(ii)基团-NR5R6中的R5和R6可以连接在一起形成环烷基或杂环基，所述各环烷基或杂环基是未取代的或任选独立地被一个或多个R9基团取代；R7选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳基烷基，其中所述各烷基、环烷基、杂芳基烷基、芳基、杂芳基和芳烷基可以是未取代的或任选独立地被一个或多个相同或不同的基团取代，并且各取代基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-CH2OR5、-C(O2)R5、-C(O)NR5R10、-C(O)R5、-SR10、-S(O2)R10、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R10、-N(R5)C(O)R10和-N(R5)C(O)NR5R10；R8选自R6、-C(O)NR5R10、-S(O2)NR5R10、-C(O)R7和-S(O2)R7；R9选自卤素、CN、-NR5R10、-C(O2)R6、-C(O)NR5R10、-OR6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R10；m是0-4；和n是1-4。
式III化合物可以用作蛋白激酶抑制剂并可用于治疗和预防增生性疾病，例如，癌、炎症和关节炎。它们还可以用于治疗神经变性疾病(如阿尔茨海默氏病)、心血管疾病、病毒性疾病和真菌性疾病。
发明详述在一个实施方案中，本发明公开了结构式III所示的吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物、或其可药用盐或溶剂化物，其中各基团的定义如上所述。
在另一个实施方案中，R选自苯基、萘基、2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基、嘧啶-5-基、吡嗪-3-基和哒嗪-3-基。
在另一个实施方案中，R2是CF3、CN、环烷基、-OR6、-C(O)OR4、-CH2OR6、芳基或杂芳基。
在另一个实施方案中，R3是H、烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基、被选自卤素、CN、-OR5、CF3、-OCF3、低级烷基和环烷基的一个或多个基团取代的芳基、杂环基、被选自卤素、CN、-OR5、CF3、-OCF3、烷基和环烷基的一个或多个基团取代的杂芳基、
和 在另一个实施方案中，R4是H或低级烷基。
在另一个实施方案中，R5是H或低级烷基。
在另一个实施方案中，m是0-2。
在另一个实施方案中，n是1或2。
在又一个实施方案中，R选自苯基、2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基和嘧啶-5-基。
在又一个实施方案中，R2是CF3、CN或环烷基。
在又一个实施方案中，R3是H、低级烷基、环烷基、C(O)OR4或芳基，其中所述烷基和芳基是未取代的或任选独立地被一个或多个相同或不同的基团取代，各基团独立地选自F、Cl、Br、CF3、低级烷基、甲氧基和CN，或是 或 在又一个实施方案中，R4是H。
在又一个实施方案中，R5是H。
在又一个实施方案中，m是0。
在又一个实施方案中，R是2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、4-吡啶基的N-氧化物或3-吡啶基的N-氧化物。
在又一个实施方案中，R2是环丙基、环丁基或环戊基。
在又一个实施方案中，R3是甲基、乙基、异丙基、叔丁基、杂芳基、Cl、未取代的苯基、被选自F、Br、Cl、OMe、CH3和CF3的一个或多个基团取代的苯基、
或 在又一个实施方案中，R3是 或 在又一个实施方案中，R8是(CH2)nOH或(CH2)nOCH3，其中n是1或2。
在又一个实施方案中，R3是呋喃基。
一组创造性的化合物如表1所示。
表1

在整个说明书中，除非另有说明，如上文所使用的下列术语应当理解为具有下列含义“患者”包括人类和动物。
“哺乳动物”是指人类和其它哺乳类动物。
“烷基”是指链中具有约1-20个碳原子的直链或支链脂族烃基。优选的烷基在链中含有约1-12个碳原子。更优选的烷基在链中含有约1-6个碳原子。支链是指一个或多个诸如甲基、乙基或丙基的低级烷基连接到直链烷基链上。“低级烷基”是指链中具有约1-6个碳原子的直链或支链基团。术语“取代的烷基”是指可以被一个或多个相同或不同的取代基取代的烷基，各取代基独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。
“炔基”是指含有至少一个碳-碳三键且链中含有约2-15个碳原子的直链或支链脂族烃基。优选的炔基链中具有约2-12个碳原子；更优选链中具有约2-4个碳原子。支链是指一个或多个诸如甲基、乙基或丙基的低级烷基连接到直链炔基链上。“低级炔基”是指链中具有约2-6个碳原子并可以是直链或支链。合适的非限制性炔基实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。术语“取代的炔基”是指可以被一个或多个相同或不同的取代基取代的炔基，各取代基独立地选自烷基、芳基和环烷基。
“芳基”是指具有约6-14个碳原子，优选具有约6-10个碳原子的芳香单环或多环体系。芳基可以任选被本发明定义的一个或多个相同或不同的“环系取代基”取代。合适的非限制性芳基实例包括苯基和萘基。
“杂芳基”是指具有约5-14个碳原子，优选具有约5-10个碳原子的芳香单环或多环体系，其中一个或多个环原子为除碳之外的元素，例如，为氮、氧和/或硫，单独或联合。优选的杂芳基含有约5-6个环原子。“杂芳基”可以任选被本发明定义的一个或多个相同或不同的“环系取代基”取代。杂芳基命名前的前缀氮杂、氧杂或硫杂是指至少分别存在氮、氧或硫原子作为环原子。杂芳基的氮原子可以任选被氧化为相应的N-氧化物。合适的非限制性杂芳基实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基，噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、2，3-二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等等。
“芳烷基”或“芳基烷基”是指芳基-烷基基团，其中芳基和烷基定义如上。优选的芳烷基含有低级烷基。合适的非限制性芳烷基实例包括苄基、2-苯乙基和萘甲基。与母体部分的连接是通过烷基。
“烷基芳基”是指烷基-芳基基团，其中烷基和芳基定义如上。优选的烷基芳基含有低级烷基。合适的非限制性烷基芳基实例包括甲苯基。与母体部分的连接是通过芳基。
“环烷基”是指含有约3-10个碳原子，优选含有5-10个碳原子的非芳族单环或多环体系。优选的环烷基环含有约5-7个环原子。环烷基可以任选被本发明定义的一个或多个相同或不同的“环系取代基”取代。合适的非限制性单环环烷基实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。合适的非限制性多环环烷基实例包括1-萘烷基、降冰片烷基、金刚烷基等。
“卤素”是指氟、氯、溴或碘。优选氟、氯和溴。
“环系取代基”是指与芳族或非芳族环系相连的取代基，例如，该取代基替代环系上的有效氢。环系取代基可以相同或不同，各自独立地选自芳基、杂芳基、芳烷基、烷基芳基、杂芳烷基、烷基杂芳基、羟基、羟基烷基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、酰基、芳酰基、卤素、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳基烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基，芳基烷硫基、杂芳基烷硫基、环烷基、杂环基、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-和Y1Y2NSO2-，其中Y1Y2可以相同或不同，且独立地选自氢、烷基、芳基和芳烷基。
“杂环基”是指含有约3-10个环原子，优选含约5-10个环原子的非芳族饱和单环或多环体系，其中环系中的一个或多个原子为除碳以外的元素，如氮、氧和/或硫。在环系中，不存在相邻氧和/或硫原子。优选的杂环基含有约5-6个环原子。杂环基命名前的前缀氮杂、氧杂或硫咱是指至少分别存在氮、氧或硫原子作为环原子。杂环基中的任何-NH可以被保护的形式存在，例如，以-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)等基团形式存在；这种被保护的基团也被认为是本发明的一部分。杂环基可以任选被本发明定义的一个或多个相同或不同的“环系取代基”取代。杂环基的氮或硫原子可以任选被氧化为相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。合适的非限制性杂环基实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1，4-二氧六环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基等等。
应该注意的是，在本发明含杂原子的环系中，在与N、O或S相邻的碳原子上不存在羟基，并且，在与另一个杂原子相邻的碳原子上不存在N或S基团。因此，例如，在下列环中，没有-OH与标号为2和5的碳原子直接相连。
“炔基烷基”是指炔基-烷基基团，其中炔基和烷基定义如上。优选的炔基烷基含有低级炔基和低级烷基。与母体部分的连接是通过烷基。合适的非限制性炔基烷基实例包括炔丙基甲基。
“杂芳烷基”是指杂芳基-烷基基团，其中杂芳基和烷基定义如上。优选的杂芳烷基含有低级烷基。合适的非限制性杂芳烷基实例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。与母体部分的连接是通过烷基。
“羟烷基”是指HO-烷基基团，其中烷基定义如上。优选的羟烷基含有低级烷基。合适的非限制性羟烷基实例包括羟基甲基和2-羟基乙基。
“酰基”是指H-C(O)-，烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-，其中各基团的定义如上。与母体部分的连接是通过羰基。优选的酰基含有低级烷基。合适的非限制性的酰基实例包括甲酰基、乙酰基和丙酰基。
“芳酰基”是指芳基-C(O)-基团，其中芳基定义如上。与母体部分的连接是通过羰基。合适的非限制性实例包括苯甲酰基和1-萘甲酰基。
“烷氧基”是指烷基-O-基团，其中烷基定义如上。合适的非限制性的烷氧基实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和正丁氧基。与母体部分的连接是通过醚氧。
“芳氧基’是指芳基-O-基团，其中芳基定义如上。合适的非限制性的芳氧基实例包括苯氧基和萘氧基。与母体部分的连接是通过醚氧。
“芳烷基氧基”是指芳烷基-O-基团，其中芳烷基定义同上。合适的非限制性的芳烷基氧基实例包括苄氧基和1-或2-萘甲氧基。与母体部分的连接是通过醚氧。
“烷硫基”是指烷基-S-基团，其中烷基定义同上。合适的非限制性的烷硫基实例包括甲硫基和乙硫基。与母体部分的连接是通过硫。
“芳硫基”是指芳基-S-基团，其中芳基定义同上。合适的非限制性的芳硫基实例包括苯硫基和萘硫基。与母体部分的连接是通过硫。
“芳烷基硫基”是指芳烷基-S-基团，其中芳烷基定义同上。合适的非限制性的芳烷基硫基实例包括苄硫基。与母体部分的连接是通过硫。
“烷氧基羰基”是指烷基-O-CO-基团。合适的非限制性的烷氧基羰基实例包括甲氧羰基和乙氧羰基。与母体部分的连接是通过羰基。
“芳氧基羰基”是指芳基-O-C(O)-基团。合适的非限制性的芳氧基羰基实例包括苯氧基羰基和萘氧基羰基。与母体部分的连接是通过羰基。
“芳烷氧基羰基″是指芳烷基-O-C(O)-基团。合适的非限制性的芳烷氧基羰基实例包括苄氧基羰基。与母体部分的连接是通过羰基。
“烷基磺酰基”是指烷基-S(O2)-基团。优选的基团是其中烷基为低级烷基的基团。与母体部分的连接是通过磺酰基。
“芳基磺酰基”是指芳基-S(O2)-基团。与母体部分的连接是通过磺酰基。
术语“被取代的”是指在指定原子上的一个或多个氢被所指出的基团代替，前提条件是，不超出指定原子在当前情况下的正常价态，并且通过取代得到稳定的化合物。可以将取代基和/或可变取代基组合，唯一的条件是这种组合应得到稳定的化合物。“稳定的化合物”或“稳定的结构”是指化合物足够稳定，从而能够经受从反应混合物中分离得到有效纯度化合物，并能配制成有效治疗试剂。
术语“任选被取代的”是指用特定的基、根或基团任选取代。
还应当注意的是，在本发明说明书、实施方案、实施例和表格中，假设任何化合价不饱和的杂原子由氢原子来满足化合价。
如果化合物中的官能团被称作是“被保护的”，这意味着该官能团为改良型，从而在化合物进行反应时，避免了在被保护部位发生不需要的副反应。本领域普通技术人员能够确认合适的保护基，并可以参照标准教科书，例如，T.W.Greene et al，Protective Groups inorganic Synthesis(1991)，Wiley，New York。
在任一组分或式III中，如果任何基团(例如，芳基、杂环基、R2等)出现一次以上，那么，其在各种情况下的定义与在所有其它情况下的定义无关。
规定本发明使用的术语“组合物”包括产物，该产物中含有特定量特定组分，该术语还包括由特定量特定组分的混合而直接或间接得到的任何产物。
本发明化合物的前药和溶剂化物也包括在本发明范围内。本发明中使用的术语“前药”是指一种化合物，该化合物是药物前体，在对患者给药后，该化合物通过代谢或化学过程发生化学转化，得到式III化合物或其盐和/或溶剂化物。关于前药的讨论可参见T.Higuchi andV.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)14of theA.C.S.Symposium Series以及Bioreversible Carriers in DrugDesign，(1987)Edward B.Roche，ed.，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，它们均在本发明中引作参考。
“溶剂化物”是指本发明化合物与一种或多种溶剂分子之间的物理缔合作用。该物理缔合作用涉及改变离子和共价键键合度，包括氢键键合度。在某些情况下，例如，当结晶固体的晶格中掺入一种或多种溶剂分子时，可以对溶剂化物进行分离。“溶剂化物”包括溶液-相和可分离的溶剂化物。合适的非限制性的溶剂化物实例包括乙醇化物、甲醇化物等。“水合物”是溶剂分子为H2O的溶剂化物。
“有效量”或“治疗有效量”是指能有效抑制CDK从而能产生所需的治疗、缓解、抑制或预防效果的本发明化合物或组合物的量。
式III化合物可以形成盐，其也包括在本发明范围内。除非另有说明，本发明中提及式III化合物时显然应包括其盐。本发明中使用的术语“盐”表示与无机和/或有机酸形成的酸性盐以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。此外，当式III化合物同时含有碱性基团(例如，但不限于，吡啶或咪唑)和酸性基团(例如，但不限于，羧酸)时，可以形成两性离子(“内盐”)，其包括在本发明使用的术语“盐”的范围内。优选可药用盐(即，无毒的、生理上可接受的)，当然，其它盐也是有效的。例如，通过在介质中，例如，在能够沉淀出盐的介质中或在含水介质中，使式III化合物与一定量的酸或碱(例如，1当量)反应，可以形成式III化合物的盐，如果使用含水介质，则随后进行冷冻干燥。
可列举的酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐等。此外，例如，在S.Berge et al，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33201-217；Anderson et al，The Practice of MedicinalChemistry(1996)，Academic Press，New York中以及在The OrangeBook(Food & Drug Administration，Washington，D.C.on theirwebsite)中讨论了酸，这些酸通常被认为适用于由可药用碱性化合物形成药学上有效的盐。这些公开内容在本发明中引作参考。
可列举的碱性盐包括铵盐、碱金属盐(如钠、锂和钾盐)、碱土金属盐(如钙和镁盐)、与有机碱(例如，有机胺，如二环己基胺、叔丁基胺)形成的盐、与氨基酸(如精氨酸、赖氨酸)形成的盐等。碱性含氮基团可以用诸如下列试剂季铵化低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如，硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基和十八烷酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤(例如，苄基溴和苯乙基溴)以及其它等等。
所有上述酸性盐和碱性盐被规定属于本发明范围内的可药用盐，并且，对本发明来说，所有酸性盐和碱性盐被认为与游离形式的相应化合物等效。
式III化合物及其盐、溶剂化物和前药可以其互变异构体的形式存在(例如，以酰胺或亚氨醚的形式存在)。所有这些互变异构体都包括在本发明中作为本发明的一部分。
同位置异构体(例如，4-吡啶基和3-吡啶基)一样，本发明化合物(包括化合物的盐、溶剂化物和前药以及前药的盐和溶剂化物)的所有立体异构体(例如，几何异构体、旋光异构体等)，例如，由于各取代基上存在不对称碳而导致可能存在的立体异构体，均包括在本发明范围内，包括对映异构体(即使没有不对称碳，也可能存在对映异构体)、旋转异构体、阻转异构体和非对映异构体。本发明化合物的各立体异构体可以，例如，基本上不含其它异构体，或者可以混合形成外消旋体，或与所有其它立体异构体混合或与其它选择的立体异构体混合。本发明手性中心可以具有如IUPAC 1974 Recommendations中定义的S或R构型。规定“盐”、“溶剂化物”、“前药”等术语的使用同样适用于本发明化合物的对映体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋体或前药的盐、溶剂化物和前药。
本发明化合物具有药理学特性，特别是，式III化合物能够抑制蛋白激酶，如依赖细胞周期蛋白激酶(CDK)，例如，CDC2(CDK1)、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7和CDK8。预期式III新化合物可以用于治疗增生性疾病，例如，癌、自身免疫性疾病、病毒性疾病、真菌性疾病、神经病学疾病/神经变性疾病、关节炎、炎症、抗-增生性疾病(例如，眼视网膜病)、神经元性疾病、脱发和心血管疾病。这其中的许多疾病和病症列于上文引用的US6413974中，其内容在本发明中引作参考。
更具体地讲，式III化合物可用于治疗各种癌症，包括(但不限于)以下癌症癌，包括膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括扁平细胞癌)；淋巴血统造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、多毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤；脊髓血统造血肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、脊髓发育不良综合征和前髓细胞性白血病；间充质来源肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和周围神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、xenoderomapigmentosum、角化棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤泡肿瘤和卡波济氏肉瘤。
由于CDK在大多数细胞增殖调节中起重要作用，因此，抑制剂可以用作可逆细胞抑制剂，其可以用于治疗以异常细胞增殖为特征的任何疾病过程，例如，良性前列腺增生、家族性腺上皮增生息肉病、神经纤维瘤病、动脉粥样硬化、肺纤维化、关节炎、牛皮癣、肾小球性肾炎、血管成形术或血管手术后的再狭窄、肥厚性瘢痕形成、炎性肠病、移植排斥、内毒素性休克和真菌感染。
最近发现CDK5涉及tau蛋白的磷酸化作用(J.Biochem，(1995)117，741-749)，这意味着，式III化合物还可以用于治疗阿耳茨海默氏疾病。
式III化合物可诱导或抑制细胞凋亡。在各种人类疾病中，细胞凋亡应答异常。用作细胞凋亡调节剂的式III化合物可用于治疗癌症(包括但不限于上述癌症类型)、病毒性(包括但不限于疱疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒、新培斯病毒和腺病毒)感染、预防HIV-感染个体的爱滋病发展、自身免疫病(包括但不限于系统性红斑狼疮、自身免疫介导的肾小球性肾炎、风湿性关节炎、牛皮癣、炎性肠病、和自身免疫糖尿病)、神经变性疾病(包括但不限于阿耳茨海默氏病、AIDS-相关性痴呆、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、色素性视网膜炎、脊髓性肌萎缩和小脑变性)、脊髓发育异常综合征、再生障碍性贫血、与心肌梗死、中风和再灌注损伤有关的局部缺血性损伤、心律失常、动脉粥样硬化、毒素导致的或与酒精有关的肝疾病、血液病(包括但不限于慢性贫血和再生障碍性贫血)、肌与骨骼系统的变性疾病(包括但不限于骨质疏松和关节炎)、阿斯匹林敏感性鼻窦炎、囊性纤维化、多发性硬化、肾疾病和癌痛。
作为CDK抑制剂的式III化合物能够调节细胞RNA和DNA合成水平。因此，这些试剂可用于治疗病毒性感染(包括但不限于HIV、人类乳头瘤病毒、疱疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒、新培斯病毒和腺病毒)。
式III化合物也可用于化学预防癌症。化学预防的定义是通过阻断起始诱变事件或通过阻断已损伤癌前期细胞的发育或抑制肿瘤复发来抑制侵袭性癌症发展。
式III化合物也可用于抑制肿瘤血管生成和转移。
式III化合物还可用作其它蛋白激酶(例如，蛋白激酶C、her2、raf1、MEK1、MAP激酶、EGF受体、PDGF受体、IGF受体、PI3激酶、wee1激酶、Src和AbI)抑制剂，因此，式III化合物可有效治疗与其它蛋白激酶有关的疾病。
本发明另一方面涉及一种治疗哺乳动物(例如，人类)所患CDK相关疾病或病症的方法，该方法是通过对哺乳动物施用治疗有效量的至少一种式III化合物或其可药用盐或溶剂化物。
式III化合物的优选剂量为约0.001-500mg/kg体重/天。式III化合物或其可药用盐或溶剂化物特别优选的剂量为约0.01-25mg/kg体重/天。
本发明化合物还可与一种或多种抗癌疗法(如放射疗法)和/或一种或多种下述抗癌剂联用(一同给药或循序给药)细胞抑制剂、细胞毒素剂(例如，但不限于，DNA交互剂(例如，顺铂或阿霉素))；紫杉碱类(例如，泰素帝和紫杉醇)；交连异构酶II抑制剂(例如，依托泊甙)；交连异构酶I抑制剂(例如，irinotecan(或CPT-11)、camptostar或topotecan)；微管蛋白交互剂(例如，紫杉醇、docetaxel或epothilones)；激素药(例如，他莫昔芬)；胸苷酸合酶抑制剂(例如，5-氟尿嘧啶)；抗代谢物(例如，氨甲蝶呤)；烷基化剂(例如，替莫唑胺(购自Schering-Plough Corporation，Kenilworth，New Jersey，商品名为TEMODARTM)、环磷酰胺)；法尼基蛋白转移酶抑制剂(例如，SARASARTM(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5H-苯并[5，6]环庚[1，2-b]吡啶-11-基-]-1-哌啶基]-2-氧代乙基]-1-哌啶甲酰胺或从Schering-Plough Corporation，Kenilworth，New Jersey购得的SCH66336)、tipifarnib(从Janssen Pharmaceuticals购得的Zarnestra或R115777)、L778，123(购自Merck & Company，Whitehouse Station，New Jersey的法尼基蛋白转移酶抑制剂)、BMS214662(购自Bristol-Myers Squibb Pharmaceuticals，Princeton，New Jersey的法尼基蛋白转移酶抑制剂)；信号转导抑制剂(例如，Iressa(购自Astra Zeneca Pharmaceuticals，England)、Tarceva(EGFR激酶抑制剂)、EGFR抗体(例如，C225)、GLEEVECTM(购自Novartis Pharmaceuticals，East Hanover，New Jersey的C-abl激酶抑制剂)；干扰素，例如，内含子(购自Schering-PloughCorporation)、Peg-内含子(购自Schering-Plough Corporation)；激素疗法联用；芳香酶联用；阿糖胞嘧啶、阿霉素、环磷酰胺和gemcitabine。
其它抗癌(也称作抗肿瘤)剂包括但不限于尿嘧啶氮芥、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、噻替派、白消安、卡莫司汀、环己亚硝脲、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、奥沙利铂、亚叶酸(leucovirin)、奥沙利铂(购自Sanofi-Synthelabo Pharmaeuticals，France，商品名为ELOXATINTM)、喷司它丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博莱霉素、放线菌素、柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、伊达比星、普卡霉素、脱氧考福酶素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊甙、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾丸素、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、乙酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、乙酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、顺铂、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、Navelbene、Anastrazole、letrazole、Capecitabine、Reloxafine、屈洛昔芬或六甲蜜胺。
如果配制成混合剂量，上述组合产品可以采用在本发明所述剂量范围内的本发明化合物和在其剂量范围内的其它药用活性剂或治疗。例如，现已发现，在诱导细胞凋亡中，CDC2抑制剂Olomucine与已知的细胞毒素剂起协同作用(J.Cell Sci.，(1995)108，2897)。当组合配制不适当时，式III化合物也可以与已知的抗癌剂或细胞毒素剂一起按序给药。本发明对给药顺序没有限制；可以在施用已知抗癌剂或细胞毒素剂之前或之后施用式III化合物。例如，依赖细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol的细胞毒素活性受施用抗癌剂顺序的影响。Cancer Research，(1997)，57，3375。该技术是本领域技术人员和主治医师熟知的。
因此，一方面，本发明包括组合物，其含有一定量的至少一种式III化合物或其可药用盐或溶剂化物以及一定量的一种或多种上述抗癌疗法和抗癌药，其中，化合物/疗法的量能达到所需的治疗效果。
本发明化合物的药理学性质可通过许多药理学试验证实。使用本发明化合物和其盐进行下文描述的例示药理学试验。
本发明还涉及一种药物组合物，其含有至少一种式III化合物或其可药用盐或溶剂化物和至少一种可药用载体。
对于由本发明化合物制备药物组合物，惰性可药用载体可以是固体或液体。固体制剂包括粉剂、片剂、可分散粒剂、胶囊、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可以由大约5-95％活性组份组成。合适的固体载体是本领域已知的，例如，碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可以用作适合于口服给药的固体剂型。可药用载体的实例以及各种组合物的制备方法可参见A.Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。可列举的实例是水或水-丙二醇溶液(用于肠胃外注射)或添加了甜料和遮光剂用于口服溶液、悬浮液和乳剂。液体制剂还可包括鼻内给药溶液。
适于吸入给药的气雾剂可以包括溶液和固体粉末，其可以与可药用载体(例如，惰性压缩气体，如氮气)混合。
还包括固体制剂，其在使用之前不久转化成用于口服或肠胃外给药的液体制剂。所述液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。
本发明化合物还可以经皮递送。经皮组合物可以是乳膏、洗剂、气雾剂和/或乳剂，并且，如同本领域常规实际应用的那样，其能包含在基质型或贮库型经皮贴剂中。
本发明化合物还可以经皮下递送。
优选将化合物用于口服给药。
优选，药物制剂为单位剂型。在这种剂型中，制剂再细分成含有适量(例如，达到所需效果的有效量)活性组分的适当规模的单位剂量。
根据本申请，在单位剂量制剂中，活性化合物的量可以在大约1-100mg，优选约1-50mg，更优选约1-25mg范围内变化或调整。
实际使用剂量可以根据患者需求和所治疗疾病的严重程度变化。本领域技术人员能够确定具体情况下的合适剂量方案。为方便起见，在一天中，可以根据需要，将总日剂量均分和分次给药。
本发明化合物和/或其可药用盐的给药量和给药频率由主治临床医师根据诸如患者年龄、病情和体重以及所治疗症状的严重程度等因素进行判断调整。一般建议的口服日剂量可以为约1-500mg/天，优选为1-200mg/天，采用2-4个均分剂量。
本发明另一方面涉及一种试剂盒，该试剂盒包含治疗有效量的至少一种式III化合物或其可药用盐或溶剂化物和可药用载体、赋形剂或稀释剂。
本发明另一方面还涉及一种试剂盒，其包含一定量的至少一种式III化合物或其可药用盐或溶剂化物和一定量的至少一种上述抗癌疗法和/或抗癌药，其中，两种或多种组分的量能达到所需的治疗效果。
通过下述制备例和实施例来举例说明本发明，但其不限制本发明的公开范围。其它机械途径和类似结构对本领域技术人员而言是显而易见的。
如果存在NMR数据，则1H波谱在Varian VXR-200(200MHz，1H)、Varian Gemini-300(300MHz)或XL-400(400MHz)上获得，并以位于Me4Si低场的ppm形式报道，并在括号内指出质子数、多重态和以赫兹表示的偶合常数。当存在LC/MS数据时，用Applied BiosystemsAPI-100质谱仪和Shimadzu SCL-10ALC柱进行分析Altech铂C18、3微米、33mm×7mm ID；梯度流0min-10％CH3CN，5min-95％CH3CN，7min-95％CH3CN，7.5min-10％CH3CN，9min-停止。得到保留时间和观测到的母离子。
下述溶剂和试剂可用圆括号中的缩写来表示薄层色谱法TLC二氯甲烷CH2Cl2乙酸乙酯AcOEt或EtOAc甲醇MeOH三氟乙酸酯TFA三乙胺Et3N或TEA丁氧基羰基n-Boc或Boc核磁共振波谱NMR液相色谱质谱LCMS高分辨质谱HRMS毫升ml毫摩尔mmol微升μl克g毫克mg室温或rt(环境温度)约25℃N-溴代琥珀酰亚胺NBSN-氯代琥珀酰亚胺NCS实施例一般，本发明化合物可通过下述一般途径制得。用叔丁醇钾和甲酸乙酯处理原料腈(反应图解1)，得到中间体烯醇2，紧接着用肼处理该烯醇，得到所需的取代的3-氨基吡唑。如反应图解3所示，将式3化合物与适当官能化的的式5酮酸酯缩合，制得式6吡啶酮。在上述一般途径中使用的酮酸酯是市售产品或可以根据反应图解2制得。
反应图解1 用POCl3处理吡啶酮6，可制得式7氯化物。当R2是H时，通过亲电卤化、酰化和其它各种亲电芳香取代，可以在式9化合物的上述位置上进行取代。
反应图解2 通过用氨替代式9化合物的氯，可以引入N7-氨基官能团(反应图解3)。用适当取代的酰氯或磺酰氯进行酰化，制得所需的式10化合物。
反应图解3 在式6化合物中R3＝OEt时，用反应图解4的方法能容易地制得式12二氯化物。对7-氯化物进行选择性取代，制得式13化合物，该化合物能容易地转化成式14产物或相应的磺酰亚胺(sulfonimides)。
反应图解4 制备例1 步骤A 采用DE 19834047A1，p19中的方法。向KOtBu(6.17g，0.055mol)的无水THF(40ml)溶液中滴加环丙基乙腈(2.0g，0.025mol)和甲酸乙酯(4.07g，0.055mol)的无水THF(4ml)溶液。立即形成沉淀。搅拌该混合物12小时。真空浓缩并用Et2O(50ml)搅拌残余物。将得到的残余物倾析，用Et2O(2×50ml)洗涤并在真空下从残余物中除去Et2O。将残余物溶解在冷H2O(20ml)中，用12N HCl调节其pH至4-5。用CH2Cl2(2×50ml)萃取混合物。合并有机层，用MgSO4干燥并真空浓缩，得到黄褐色液体醛。
步骤B
将制备例1步骤A的产物(2.12g，0.0195mol)、NH2NH2·H2O(1.95g，0.039mol)和1.8g(0.029mol)冰醋酸(1.8g，0.029mol)溶解在EtOH(10ml)中。回流该混合物6小时并真空浓缩。使残余物在CH2Cl2(150ml)中形成浆料并用1N NaOH调节其pH。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥并真空浓缩，得到蜡状橙色固体产物。
制备例2-3使用与制备例1基本相同的方法，不过替代使用表2第2栏中的腈代替，制得表2第3栏中的化合物表2 制备例4 根据Olsen，K.O.J.Org.Chem.，(1987)52，4531-4536中描述的方法进行反应。因此，在-65--70℃下，向二异丙基氨基化锂的THF搅拌溶液中滴加新近蒸馏的乙酸乙酯。将所得溶液搅拌30分钟，并加入酰基氯的THF溶液。在-65--70℃搅拌反应混合物30分钟，然后加入1N HCl溶液终止反应。使得到的两相混合物升至室温。所得混合物用EtOAc(100ml)稀释，并收集有机层。水层用EtOAc(100ml)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到用于下一步缩合反应的β-酮酸酯粗产物。
制备例5-10按照与制备例4基本相同的方法，不过替代使用表3第2栏中的酰基氯，制得表3第3栏中的β-酮酸酯表3 制备例11 向酸的THF溶液中加入Et3N，然后在-20--30℃加入氯甲酸异丁酯。在-20--30℃搅拌混合物30分钟后，在氩气气氛下滤出盐酸三乙胺，并在-65-70℃下，将滤液加入LDA-EtOAc反应混合物(按方法A制得)中。加入1N HCl后，按常规处理反应混合物并蒸发溶剂，分离出β-酮酸酯粗产物，该粗产物用于随后的缩合反应中。
制备例12-14根据与制备例11基本相同的方法，不过替代使用表4第2栏中的羧酸，制得表4第3栏中的化合物表4 制备例15 将3-氨基吡唑(2.0g，24.07mmol)和苯甲酰乙酸乙酯(4.58ml，1.1eq.)的AcOH(15ml)溶液加热回流3小时。冷却反应混合物至室温，并真空浓缩。用EtOAc稀释所得的固体，过滤得到白色固体(2.04g，40％收率)。
制备例16-37根据与制备例15基本相同的方法，不过替代使用表5第2栏中的氨基吡唑和表5第3栏中的酯，制得表5第4栏中的化合物
表5


制备例38 将苯甲酰乙酸乙酯(1.76ml，1.1eq.)和3-氨基-4-氰基吡唑(1.0g，9.25mmol)的AcOH(5.0ml)溶液和H2O(10ml)加热回流72小时。
所得溶液冷却至室温，真空浓缩，并用EtOAc稀释。滤出所得的沉淀，用EtOAc洗涤并真空干燥(0.47g，21％收率)。
制备例39 采用US 3,907,799中公开的方法。将钠(2.3g，2eq.)分批加入EtOH(150ml)中。当钠完全溶解后，加入3-氨基吡唑(4.2g，0.05mol)和丙二酸二乙酯(8.7g，1.1eq.)，并将所得溶液加热回流3小时。冷却得到的悬浮液至室温并过滤。将滤饼溶解在H2O中，用浓HCl调节pH至1-2，滤出得到的固体，用H2O(100ml)洗涤，真空干燥，得到白色固体(4.75g，收率63％)。
制备例40-41根据与制备例39基本相同的方法，不过替代使用表6第2栏中的化合物，制得表6第3栏中的化合物
表6 制备例42 在室温下，将制备例15制得的化合物(1.0g，4.73mmol)在POCl3(5ml)和吡啶(0.25ml)中的溶液搅拌3天。用Et2O稀释所得的淤浆，过滤，固体残余物用Et2O洗涤。将合并的Et2O洗液冷却至0℃，并用冰处理。当剧烈反应停止时，将得到的混合物用H2O稀释，分离，且水层用Et2O萃取。合并的有机物用H2O和饱和NaCl洗涤，Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到浅黄色固体(0.86g，收率79％)。LCMSMH+＝230。
制备例43-65根据与制备例42基本相同的方法，不过替代使用表7第2栏中的化合物，制得表7第3栏中的化合物
表7


制备例66 将POCl3(1.24ml，3.05eq.)加入到制备例42制得的化合物(1.0g，4.35mmol)的DMF(6ml)溶液中，将得到的混合物在室温搅拌过夜。冷却反应混合物至0℃，加入冰淬灭过量POCl3。用1N NaOH中和所得溶液，用H2O稀释，并用CH2Cl2萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。用5％MeOH的CH2Cl2溶液作为洗脱液，将粗产物用快速色谱法提纯(0.95g，收率85％)。LCMSMH+＝258。
制备例67 在0℃，将制备例168制得的化合物(1.0g，3.88mmol)加入到PPh3(4.07g，4.0eq.)和CBr4(2.57g，2.0eq.)的CH2Cl2(75ml)溶液中。在0℃搅拌所得溶液1小时，并减压浓缩。残余物用快速色谱法提纯，用20％EtOAc的己烷溶液作为洗脱液(1.07g，收率67％)。
制备例68
在氮气气氛下，将POCl3(62ml)冷却至5℃，加入二甲基苯胺(11.4g，2.8eq.)和制备例39制得的化合物(4.75g，0.032mol)。使反应混合物升至60℃并搅拌过夜。冷却反应混合物至30℃，减压蒸馏除去POCl3。将残余物溶解在CH2Cl2(300ml)中并倾泻到冰上。搅拌15分钟后，用固体NaHCO3调节混合物pH至7-8。分层，有机层用H2O(3×200ml)洗涤，MgSO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物用快速色谱法提纯，使用50∶50的CH2Cl2∶己烷溶液作为洗脱液来洗脱二甲基苯胺。然后，将洗脱液换成75∶25的CH2Cl2∶己烷溶液，洗脱目标产物(4.58g，收率77％)。MSMH+＝188。
制备例69-70根据与制备例68基本相同的方法，不过替代使用表8第2栏中的化合物，制得表8第3栏中的化合物表8 制备例71
用NBS(0.085g，1.1eq.)处理制备例42制得的化合物(0.10g，0.435mmol)的CH3CN(3ml)溶液。在室温搅拌反应混合物1小时并减压浓缩。粗产物用快速色谱法提纯，用20％的EtOAc的己烷溶液作为洗脱液(0.13g，收率100％)。LCMSMH+＝308。
制备例72-90根据与制备例71基本相同的方法，使用NBS或NIS，并替代使用表9第2栏中的化合物，制得表9第3栏中的化合物
表9

制备例91 在密闭压力容器中，在50℃下，将制备例71制得的化合物(3.08g，10.0mmol)、2.0M NH3的2-丙醇(50ml，100.0mmol)溶液和37％氨水(10.0ml)搅拌1天。蒸发溶剂，粗产物用快速色谱法提纯，使用3∶1的CH2Cl2∶EtOAc溶液作为洗脱液。得到浅黄色固体(2.30g，收率80％)。LCMSM+＝289。
制备例92-101根据与制备例91基本相同的方法，不过替代使用表10第2栏中的化合物，制得表10第3栏中的化合物表10

制备例102 在N2气氛下，将制备例95制得的化合物(0.50mmol)与DMAP(0.66mmol)的无水二氧六环(10ml)溶液的混合物在25℃下搅拌，然后加入Boc2O(1.20mmol)，并在25℃搅拌混合物20小时。将反应混合物倾入到饱和NaHCO3水溶液(100ml)中，用CH2Cl2(3×30ml)萃取。合并的萃取液用Na2SO4干燥，过滤并蒸发溶剂。残余物用快速色谱法提纯，得到目标产物。
制备例103-106根据与制备例102基本相同的方法，不过替代使用表11第2栏中的化合物，制得表11第3栏中的化合物
表11 制备例107 在密闭压力容器中，将制备例102制得的化合物(1.00mmol)、三乙基(三氟甲基)硅烷(3.60mmol)、氟化钾(3.60mmol)与CuI(4.46mmol)的无水DMF(4ml)溶液的混合物在80℃搅拌72小时。加入CH2Cl2(80ml)，将混合物用硅藻土过滤。蒸发溶剂，残余物用快速色谱法提纯，得到目标产物。
制备例108-109根据与制备例107基本相同的方法，不过替代使用表12第2栏中的化合物，制得表12第3栏中的化合物
表12 制备例110 在-78℃，将n-BuLi(2.16M己烷溶液，5.0eq.)加入到制备例106制得的化合物(0.21mmol)的THF(4.0ml)溶液中。将反应混合物在-78℃搅拌2小时，用H2O淬灭，升至室温并用EtOAc萃取。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗产物用制备TLC提纯，得到目标产物。
制备例111 在0℃和N2气氛下，将TFA加入到制备例107制得的化合物的无水CH2Cl2搅拌溶液中。在0℃搅拌混合物10分钟，然后在25℃搅拌2小时。将混合物倾入到10％Na2CO3水溶液(50ml)中，用CH2Cl2(3×15ml)萃取，Na2SO4干燥并过滤。蒸发溶剂，将残余物用快速色谱法提纯，得到目标产物。
制备例112-114根据与实施例基本相同的方法，不过替代使用表13第2栏中的化合物，制得表13第3栏中的化合物表13 实施例1 将制备例92的产物(1.0eq.)、盐酸异烟酰氯(1.1eq.)和吡啶(2.5eq.)在CH2Cl2中搅拌24小时。用饱和NaHCO3稀释反应混合物，并用CH2Cl2萃取。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物用快速色谱法提纯。
实施例2-11根据与实施例1基本相同的方法，不过替代使用表14第2栏中的化合物，制得表14第3栏中的化合物
表14

实施例12 将制备例107的产物(1.0eq.)、盐酸4-吡啶基磺酰氯(1.1eq.)和吡啶(2.5eq.)在CH2Cl2中搅拌24小时。将反应混合物用饱和NaHCO3稀释，用CH2Cl2萃取。合并有机物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物用快速色谱法提纯。
实施例13-22根据与实施例12基本相同的方法，不过替代使用表15第2栏中的化合物，制得表15第3栏中的化合物表15

实施例23 步骤A在室温下，向实施例6制得的化合物的二氧六环/DIPEA(2.5/1.0)溶液中滴加环戊基胺(1.2eq.)。将所得溶液回流搅拌16小时，冷却至室温并减压浓缩。粗产物用制备薄层色谱法(8×1000μM)提纯。
步骤B在室温下，向实施例23步骤A制得的化合物的CH2Cl2溶液中滴加TFA(5eq.)。得到的溶液在室温下搅拌18小时，并减压浓缩。将粗产物再溶解在CH2Cl2中，有机层依次用饱和NaHCO3水溶液(2×2ml)和盐水(1×2ml)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。粗产物用制备薄层色谱法(8×1000μM)提纯。
实施例24-33根据与实施例23基本相同的方法，不过替代使用表16第2栏中的氯化物，制得表16第3栏中的化合物表16

实施例34 在室温下，向实施例10制得的化合物的无水乙腈溶液中滴加TMSI(4eq.)。10分钟后真空除去乙腈。所得的黄色泡沫用2N HCl溶液(7ml)处理，然后立即用Et2O(5X)洗涤。用50％NaOH(水溶液)调节水溶液pH至10，通过用NaCl(固体)饱和溶液来分离产物，然后用CH2Cl2(5X)萃取得到目标产物。
实施例35-37根据与实施例34基本相同的方法，不过替代使用表17第2栏中的化合物，制得表17第3栏中的化合物表17 试验可以对本发明化合物进行试验如下。
杆状病毒构建在氨基末端增加5个组氨酸残基，使其能在镍树脂上提纯，通过PCR将细胞周期蛋白E克隆到pVL1393(Pharmingen，La Jolla，California)中。该表达蛋白为大约45kDa。在羧基末端(YDVPDYAS)增加血细胞凝集素附加表位，通过PCR将CDK2克隆到pVL1393中。该表达蛋白长短约为34kDa。
酶的制备在相等感染次数下(MOI＝5)，将表达细胞周期蛋白E和CDK2的重组杆状病毒协同感染到SF9细胞中48小时。在1000RPM下离心10分钟收获细胞，然后，使用沉淀体积5倍的溶胞缓冲液，将沉淀在冰上溶胞30分钟，所述溶胞缓冲液含有50mM Tris pH8.0、150mMNaCl、1％NP40、1mM DTT和蛋白酶抑制剂(Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany)。使溶胞产物在15000RPM下离心10分钟，将保留了5ml镍珠(对于1升SF9细胞)的上清液在溶胞缓冲液(QiagenGmbH，Germany)中洗涤三次。将咪唑加入到杆状病毒上清液中，使最终浓度为20mM，然后在4℃下用镍珠培养45分钟。将蛋白质用含有250mM咪唑的溶胞缓冲液洗脱。将洗脱液在2升激酶缓冲液中透析过夜，所述激酶缓冲液含有50mM Tris pH8.0、1mM DTT、10mM MgCl2、100uM原钒酸钠和20％甘油。将酶在-70℃等分贮藏。
体外激酶试验在低蛋白结合96-孔板(Corning Inc，Corning，New York)中进行细胞周期蛋白E/CDK2激酶试验。在激酶缓冲液中稀释酶至最终浓度为50μg/ml，所述激酶缓冲液含有50mM Tris pH 8.0、10mM MgCl2、1mM DTT和0.1mM原钒酸钠。这些反应中使用的底物是衍生于组蛋白H1(购自Amersham，UK)的生物素化肽。将底物在冰上解冻，并在激酶缓冲液中稀释至2μM。将化合物在10％DMSO中稀释至所需浓度。对于各激酶反应，将20μl 50μg/ml酶溶液(1μg酶)和20μl 2μM底物溶液混合，然后与各孔中10μl稀释试验化合物混合。加入50μl2μM ATP和0.1μCi 33P-ATP(购自Amersham，UK)，开始激酶反应。反应在室温进行1小时。加入200μl终止缓冲液15分钟，使反应终止，所述终止缓冲液含有0.1％Triton X-100、1mM ATP、5mM EDTA和5mg/ml链霉抗生物素包被的SPA珠(购自Amersham，Uk)。然后，使用Filtermate通用捕获器(Packard/Perkin Elmer life Sciences)，将SPA珠捕获至96-孔GF/B滤板(Packard/Perkin Elmer LifeSciences)上。依次用2M NaCl和含1％磷酸的2M NaCl各洗涤珠两次，以消除非特异性信号。使用TopCount 96孔液体闪烁计数器(购自Packard/Perkin Elmer Life Sciences)，测定放射性信号。
IC50测定由8点系列抑制化合物稀释液(各一式两份)产生抑制数据，根据这些数据绘制剂量反应曲线。用化合物浓度对％激酶活性作图，用处理样品的CPM除以未经处理样品的CPM来计算％激酶活性。为了得到IC50值，使剂量反应曲线拟合标准S形曲线，并通过非线性回归分析法获得IC50值。
虽然本发明已连同上述具体实施方案一起进行了描述，但是，许多替换方法、改良方法和其它变更方法对本领域技术人员而言是显而易见的。所有这些替换方法、改良方法和其它变更方法都被认为落入本发明的精神实质和范围内。
权利要求
1.下列结构式所示的化合物 式III其中Q是-S(O2)-或-C(O)-；R是芳基或杂芳基，其中所述芳基或杂芳基可以是未取代的或任选被一个或多个相同或不同的基团独立取代，各取代基团独立地选自卤素、CN、-OR5、SR5、-S(O2)R6、-S(O2)nR5R6、-NR5R6、-C(O)NR5R6、CF3、烷基、芳基和OCF3；R2选自CN、NR5R6、-C(O2)R6、-C(O)NR5R6、-OR6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；炔基、杂芳基、CF3、杂环基、炔基烷基、环烷基、被1-6个相同或不同的R9基团取代的烷基，并且R9基团独立地选自下列一系列R9， 和 R3选自H、卤素、-NR5R6、-C(O)NR5R6、烷基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基、 和 其中R3定义中所述各烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基以及刚才在上文R3定义中列出的杂环基基团是未被取代的或被相同或不同的一个或多个基团独立取代，各取代基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、CF3、CN、-OCF3、-(CR4R5)nOR5、-OR5、-NR5R6、-(CR4R5)nNR5R6、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R6、-SR6、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；R4是H、卤素或烷基；R5是H或烷基；R6选自H、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，其中所述各烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基可以是未取代的或任选被相同或不同的一个或多个基团取代，各基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、杂环基烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R10、-SO3H、-SR10、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R10；R10选自H、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，其中所述各烷基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基和杂芳基烷基可以是未取代的或任选被相同或不同的一个或多个基团取代，各基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、杂环基烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR4R5、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)NR4R5、-C(O)R5、-SO3H、-SR5、-S(O2)R7、-S(O2)NR4R5、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR4R5；或任选(i)基团-NR5R10中的R5和R10，或(ii)基团-NR5R6中的R5和R6可以连接在一起形成环烷基或杂环基，所述各环烷基或杂环基是未取代的或任选独立地被一个或多个R9基团取代；R7选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳基烷基，其中所述各烷基、环烷基、杂芳基烷基、芳基、杂芳基和芳烷基可以是未取代的或任选独立地被一个或多个相同或不同的基团取代，并且各取代基团独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-CH2OR5、-C(O2)R5、-C(O)NR5R10、-C(O)R5、-SR10、-S(O2)R10、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R10、-N(R5)C(O)R10和-N(R5)C(O)NR5R10；R8选自R6、-C(O)NR5R10、-S(O2)nR5R10、-C(O)R7和-S(O2)R7；R9选自卤素、CN、-NR5R10、-C(O2)R6、-C(O)NR5R10、-OR6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R10；m是0-4；和n是1-4。
2.根据权利要求1的化合物，其中R选自苯基、萘基、2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基、嘧啶-5-基、吡嗪-3-基和哒嗪-3-基；R2是CF3、CN、环烷基、-OR6、-CH2OR6或杂芳基；R3是H、未取代的芳基、未取代的杂芳基、被选自卤素、CN、-OR5、CF3、-OCF3、低级烷基和环烷基的一个或多个基团取代的芳基、杂环基、被选自卤素、CN、-OR5、CF3、-OCF3、烷基和环烷基的一个或多个基团取代的杂芳基、 和 R4是H、卤素或低级烷基；R5是H或低级烷基；m是0-2；n是1或2。
3.根据权利要求2的化合物，其中R选自苯基、2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基和嘧啶-5-基。
4.根据权利要求2的化合物，其中R2是CF3、CN、环烷基、-OR6、-CH2OR6或杂芳基。
5.根据权利要求2的化合物，其中R3是H、低级烷基、环烷基、C(O)OR4或芳基，其中所述烷基和芳基是未取代的或任选独立地被一个或多个相同或不同的基团取代，各基团独立地选自F、Cl、Br、CF3、低级烷基、甲氧基和CN，或R3是 或
6.根据权利要求2的化合物，其中R4是H。
7.根据权利要求2的化合物，其中R5是H。
8.根据权利要求2的化合物，其中m是0。
9.根据权利要求2的化合物，其中R是2-吡啶基。
10.根据权利要求2的化合物，其中R是3-吡啶基。
11.根据权利要求2的化合物，其中R是4-吡啶基。
12.化合物2，其中R是4-吡啶基的N-氧化物或3-吡啶基的N-氧化物。
13.根据权利要求4的化合物，其中所述R2是CF3。
14.根据权利要求4的化合物，其中所述R2是CN。
15.根据权利要求4的化合物，其中R2是环烷基。
16.根据权利要求4的化合物，其中R2是-CH2OH或-CH2OCH3。
17.根据权利要求15的化合物，其中R2是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
18.根据权利要求4的化合物，其中R2是杂芳基。
19.根据权利要求2的化合物，其中R3是低级烷基或芳基。
20.根据权利要求19的化合物，其中所述低级烷基是甲基、乙基、异丙基或叔丁基。
21.根据权利要求20的化合物，其中R3是叔丁基。
22.根据权利要求2的化合物，其中R3是Cl、未取代的苯基、被选自F、Br、Cl、OMe、CH3和CF3的一个或多个基团取代的苯基、杂芳基、 或
23.根据权利要求15的化合物，其中R3是 或
24.根据权利要求17的化合物，其中R8是(CH2)nOH或(CH2)nOCH3，其中n是1或2。
25.根据权利要求22的化合物，其中所述杂芳基是呋喃基。
26.一种化合物，选自 或其可药用盐或溶剂化物。
27.下式所示的化合物或其可药用盐或溶剂化物
28.一种或多种依赖细胞周期蛋白激酶的抑制方法，包括对需要这种抑制的患者施用治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物。
29.与依赖细胞周期蛋白激酶有关的一种或多种疾病的治疗方法，包括对需要这种治疗的患者施用治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物。
30.根据权利要求29的方法，其中所述依赖细胞周期蛋白激酶是CDK2。
31.根据权利要求29的方法，其中所述疾病选自膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括扁平细胞癌)；白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、多毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤；急性和慢性骨髓性白血病、脊髓发育不良综合征和前髓细胞性白血病；纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、xenoderoma pigmentosum、角化棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤泡肿瘤和卡波济氏肉瘤。
32.与依赖细胞周期蛋白激酶有关的一种或多种疾病的治疗方法，包括对需要这种治疗的哺乳动物施用一定量第一化合物或其可药用盐或溶剂化物，该化合物是权利要求1的化合物，和一定量至少一种第二化合物，所述第二化合物是抗癌剂；其中第一化合物和所述第二化合物的量能够产生治疗效果。
33.根据权利要求32的方法，还包括放射疗法。
34.根据权利要求32的方法，其中所述抗癌剂选自细胞抑制剂、顺铂、阿霉素、泰素帝、紫杉醇、依托泊甙、CPT-11、irinotecan、camptostar、topotecan、紫杉醇、docetaxel、epothilones、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、氨甲蝶呤、5FU、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH66336、R115777、L778，123、BMS 214662、Iressa、Tarceva、EGFR抗体、Gleevec、内含子、阿糖胞嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、gemcitabine、尿嘧啶氮芥、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、噻替派、白消安、卡莫司汀、环己亚硝脲、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、奥沙利铂、亚叶酸(leucovirin)、ELOXATINTM、喷司它丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博莱霉素、放线菌素、柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、伊达比星、普卡霉素、脱氧考福酶素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊甙、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾丸素、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、乙酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、乙酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、顺铂、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、Navelbene、CPT-11、Anastrazole、letrazole、Capecitabine、Reloxafine、屈洛昔芬或六甲蜜胺。
35.一种药物组合物，含有治疗有效量的至少一种权利要求1化合物和至少一种可药用载体。
36.根据权利要求35的药物组合物，还含有一种或多种抗癌剂，所述抗癌剂选自细胞抑制剂、顺铂、阿霉素、泰素帝、紫杉醇、依托泊甙、CPT-11、irinotecan、camptostar、topotecan、紫杉醇、docetaxel、epothilones、他莫昔芬、5-氟尿嘧啶、氨甲蝶呤、5FU、替莫唑胺、环磷酰胺、SCH66336、R115777、L778，123、BMS 214662、Iressa、Tarceva、EGFR抗体、Gleevec、内含子、阿糖胞嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、gemcitabine、尿嘧啶氮芥、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、曲他胺、噻替派、白消安、卡莫司汀、环己亚硝脲、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司它丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博莱霉素、放线菌素、柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、伊达比星、普卡霉素、脱氧考福酶素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊甙、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾丸素、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、乙酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、乙酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、顺铂、卡铂、羟基脲、安吖啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、Navelbene、CPT-11、Anastrazole、letrazole、Capecitabine、Reloxafine、屈洛昔芬或六甲蜜胺。
37.根据权利要求1的化合物，其为被分离出的精制化合物。
全文摘要
在本发明的许多实施方案中，本发明提供了一类新的用作依赖细胞周期蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1，5－a]嘧啶化合物、所述化合物的制备方法、含有一种或多种所述化合物的药物组合物、含有一种或多种所述化合物的药物制剂的制备方法以及使用所述化合物或药物组合物治疗、预防、抑制或减轻一种或多种CDK相关疾病的方法。
文档编号A61P35/00GK1701074SQ03824779
公开日2005年11月23日 申请日期2003年9月3日 优先权日2002年9月4日
发明者T·J·古兹, K·帕鲁奇, M·P·德怀尔, R·J·多尔, V·M·吉里亚瓦拉布汉, L·W·迪拉德, V·D·特兰, Z·M·何, R·A·詹姆斯, 朴涵宋 申请人:先灵公司, 法马科皮亚药物研发公司