人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAb18及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAb18及其应用。具体而言是在获得抗人CD147单克隆抗体的杂交瘤细胞及其抗体HAb18基因的基础上，制备了抗CD147人鼠嵌合抗体，它的轻链可变区具有SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列，它的重链可变区具有SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列，在特定宿主细胞中岩藻糖不结合于抗体Fc段糖链还原端中的N‐乙酰氨基葡萄糖，糖型为甘露糖型(MAN5)，该抗体具有抗体介导的细胞依赖的细胞毒作用(ADCC)。本发明还包括所述的抗CD147嵌合抗体的表达载体、工程细胞株及其作为癌症治疗药物的应用。
【专利说明】人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAbl 8及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物【技术领域】。具体地说，本发明涉及一种新的人源化修饰型抗⑶147 单克隆嵌合抗体，该抗体能够抑制肿瘤生长和转移，并且还涉及氨基酸序列和编码抗体的 核苷酸序列。本发明还包括该抗体作为用于癌症治疗的药物的用途。
[0002] 发明背景
[0003] ⑶147分子是一种广泛表达的细胞跨膜糖蛋白，在人类中，⑶147共有269个氨基 酸组成，可分为胞外区、跨膜区及胞内区。N端起始翻译后前21个残基为信号肽，22?205 构成胞外区，206?229为跨膜区，具有典型的亮氨酸拉链结构，C端230?269为胞内区。
[0004] CD147 属免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily，IgSF)成员，胞外 4个 半胱氨酸形成2个二硫键，构成两个Ig样结构域。X射线晶体衍射分析表明，该分子胞外区 晶体结构由两个Ig样结构域，其中N末端的结构域为IgC2 -set，而靠近胞膜的C端结构域 属于 Igl - set。
[0005] CD147也是一种糖蛋白，在Asp44、Aspl52、Aspl863个位点能发生N-糖基化修饰， 使其分子量由去糖基化状态下的30kDa上升至35?60kDa。
[0006] CD147的糖基化对其功能成熟十分重要，与肿瘤的进展、侵袭、转移有关。
[0007] 国内外研究均表明，⑶147分子在上皮来源的恶性肿瘤组织中特异性高表达，如肺 癌、乳腺癌、食道癌、肝癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤基底细胞癌、口腔鳞状细胞 寺。
[0008] 申请人:研发的"⑶147检测试剂盒（免疫组化法）"（专利号：ZL200910022400. 1) 在3045例临床组织标本中的免疫组化染色结果显示CD147分子在肺癌、肝癌、胃癌、食管 癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌等肿瘤组织中显著高表达（总阳性率85. 30%，1694/1986)， 而在正常组织及良性病变组织中低表达（总阳性率7. 27%，77/1059)，尤其在肺癌中显示 较高的灵敏度（95. 36% )与特异度（97. 96% )。
[0009] 既往研究表明，CD147分子是肿瘤发展过程重要的功能性膜蛋白，参与多种与癌症 有关的现象，如：
[0010] ①⑶147介导肿瘤细胞的粘附和运动：肿瘤细胞表面表达的⑶147与vinclin 相互作用，促进肿瘤细胞伪足形成，铺展及粘附；与膜联蛋白annxin II相互作用，促进肿 瘤细胞MMP-2分泌，增强肿瘤细胞运动能力和侵袭潜能；通过刺激肿瘤细胞自身及其周围 的成纤维细胞，分泌多种基质金属蛋白酶（extracellular matrix metalloproteinase， MMP)，包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-11以及MT1-MMP和MT2-MMP等，从而加快肿瘤周围基 质的降解，促进了肿瘤的转移。在肿瘤的异源移植小鼠模型中，抑制肿瘤细胞CD147的表达 或功能，在显著下调瘤组织中MMPs表达的同时，还可以抑制肿瘤细胞在小鼠体内的转移。 CD147促进MMPs分泌的机制，可能是通过活化胞内信号蛋白ERK1/2、MAPK和FAK，以及促进 胞内Ca2+内流实现的。
[0011] ②⑶147参与肿瘤细胞的无氧代谢：⑶147是单羧酸转运体（monocarboxylate transporter)MCT-l和MCT-4的重要分子伴侣。CD147可以与MCT-1和MCT-4相互结合，辅 助它们在细胞膜上正确定位，并继续调节它们对乳酸代谢产物的转运功能。由于肿瘤细胞 主要依靠无氧代谢产生能量，因此CD147可间接通过影响MCT的表达和功能调节肿瘤细胞 的能量代谢。
[0012] ③CD147促进肿瘤细胞耐药：耐药是恶性肿瘤临床治疗失败的重要原因。多药耐 药（multi-drug resistance，MDR)的肿瘤细胞通过过度表达P-糖蛋白（P-glycoprotein， Ρ-g)将进入肿瘤细胞的化疗药物泵出细胞以逃避化疗药的杀伤。CD147分子在促进MMPs 分泌时，通过共表达调节机制影响MDR基因的转录，促进P-g的表达，从而可诱导肿瘤的多 药耐药。Kanekura等证实⑶147通过P-g导致MDR，所以下调⑶147的表达可能是一个有 效抵制MDR的靶点。Wang等在体外实验研究中发现，沉默胃癌SGC7901细胞系⑶147的表 达，可使其对顺钼的化疗敏感性增加。Zou等在人卵巢癌H0-8910细胞系中证实，通过抑制 ⑶147的表达可增加对紫杉醇的敏感性。Kuang在人口腔上皮鳞癌中同样发现⑶147在耐 药过程中起着重要的作用。Tang证明⑶147促进p-TFII-I细胞核内定位，上调未折叠蛋白 反应（UPR)的关键因子Bip表达，引起肿瘤细胞内质网应激和UPR，从而抑制凋亡及对药物 的不敏感性，抑制CD147分子可促进肝癌细胞凋亡，并可增强肿瘤细胞对现有抗肿瘤药物 的敏感性。
[0013] ④⑶147上调VEGF表达促进肿瘤新生血管形成：VEGF是影响肿瘤形成、生长和转 移的关键因子。⑶147可以上调VEGF的表达促进肿瘤血管的生长；抑制⑶147的表达，能 够显著抑制VEGF的分泌和肿瘤血管的生成。
[0014] ⑤⑶147结合多种分子参与相互作用：⑶147蛋白的跨膜段存在一个在进化上高 度保守的负电荷谷氨酸，是其可以与多种细胞膜蛋白发生相互作用的结构基础，同时也提 示⑶147可以通过与多种蛋白的相互作用，影响细胞的多种生理活动。⑶147可以通过与 0)98、Integrin、caveolin-1、cyclophilins(CyP)等多种蛋白相互作用，从能量代谢、细 胞-基质相互作用、信号传导等多个方面影响肿瘤细胞的生长和转移过程。
[0015] 此外，多项回顾性研究还表明CD147分子在肿瘤组织中的表达强度与肿瘤病人的 预后之间，存在着紧密的相关性。在非小细胞肺癌病人中，CD147表达增高的水平与病人的 预后情况密切相关。
[0016] 因此，CD147分子已成为肿瘤治疗的新靶点，其中抗体药物"利卡汀"的研制成功， 证明了该靶点成药的安全性和有效性。
[0017] 利卡汀（碘[1311]美妥昔单抗注射液（Iodine[mI]Metuximab Injection))，是 以CD147分子为靶点的首个用于原发性肝细胞肝癌的单克隆抗体免疫靶向药物。该药物 通过美妥昔单抗特异性结合肝癌细胞膜上的高表达的CD147抗原，将单抗荷载的放射性碘 [ 1311]输送到肿瘤部位，通过高能β离子的"交叉火力"作用，发挥局部肿瘤杀伤作用。
[0018] 多中心临床试验结果表明：利卡汀对肝癌移植术后复发降低了 21% ;对肝癌射频 消融术后复发降低了 34%。治疗原发性肝癌临床控制率86. 30%，临床有效率27. 40%，中 位生存时间20个月，显示了较好的安全性和有效性。但利卡汀由于荷载有放射性同位素碘 [1311]，因此在临床应用、医护人员防护、废弃物处理等环节存在一定局限。
[0019] 单克隆抗体（McAb)以其高特异性、高亲和力、毒副作用小、免疫原性低、体内作用 时间长、可利用体内自身免疫系统发挥疗效等优点，在许多疾病的诊疗中得到广泛应用，成 为新型药物研制的一条有效途径。
[0020] 然而，众多的研究表明，鼠源性单克隆抗体具有相对较短的半衰期，并且用于 人类时，缺乏一些免疫球蛋白的基本功能特性，如补体依赖R细胞毒作用（Complement Dependent Cytotoxicity, Q)C)和抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（Antibody Dependent Cell mediated Cytotoxicity, ADCC)〇
[0021] 另外，鼠源McAb重复注入人体内会引起患者诱发人抗鼠抗体（human anti mouse antibody，HAMA)反应，出现全身过敏毒性反应并阻断抗体功效的发挥。
[0022] 因此，为了降低鼠源McAb在人体内的免疫原性，尽可能地避免患者出现HAMA反 应，从而可以给患者重复应用McAb实施治疗，同时提高抗体的效应功能，加强对肿瘤靶细 胞的杀伤作用，成为目前抗体生物药物研发的热点。
[0023] 通过将鼠源性抗体的V区基因与人抗体的C区基因拼接为嵌合基因，然后插入载 体，转入工程细胞，获得的嵌合抗体，因其减少了鼠源基因成分，从而可心降低鼠源性抗体 引起的不良反应，另一方面，保留鼠源性抗体上的抗原抗体互补决定簇，维持人源化改造抗 体识别抗原的特异性；第三，人源化抗体的效应区能够更好地与人免疫系统的其它部分相 互作用，通过ADCC或CDC作用更加有效的杀伤靶细胞。
[0024] 尽管在人体中免疫球蛋白有多种类型及其亚类，当前单抗药物主要是IgGl，因为 它们在血清中有更长的半衰期以及更强的效应功能。
[0025] 肿瘤治疗性抗体在体内发挥作用的主要途径包括:ADCC、CDC、抗体直接诱导细胞 凋亡以及维持抗体浓度的补救途径等。ADCC效应是抗体杀伤肿瘤的最主要途径。
[0026] ADCC是抗体识别靶细胞表面抗原后，抗体Fc结合NK细胞表面激活型 Fc γ Rs (Fc γ RI、Fc γ R II a和Fc γ R III a)受体，其中Fc γ R III a是主要受体，这种结合触 发了细胞内部信号传导，并致使NK细胞释放穿孔素/颗粒酶复合物裂解靶细胞。一个IgG 分子在其Fc段有两个N -连接的寡聚糖位点，是在重链的297位天冬酰胺（Asn297)上。该 糖基化位点的结构异质性与抗体的效应功能相关。既往研究表明去除岩藻糖后可增强抗体 Fc对Fc γ Rllla的结合能力，从而提高抗体的ADCC作用。
【发明内容】
[0027] 针对现有技术的缺陷或不足，本发明目的之一是提供一种人源化修饰型抗CD147 嵌合抗体。
[0028] 为此，本发明提供的人源化修饰型抗⑶147嵌合抗体HcHAbl8特异性结合人⑶147 分子，该抗体包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于：轻链可变区具有SEQ ID N0:1的 氨基酸序列，重链可变区具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
[0029] 本发明提供的人源化修饰型抗⑶147嵌合抗体HcHAblS特征还在于重链及轻链恒 定区序列对应于人同种型IgGl。
[0030] 本发明提供的人源化修饰型抗⑶147嵌合抗体HcHAbl8特征还在于其包括含有 SEQ ID N0:3的轻链氨基酸序列，和包括含有SEQ ID N0:4的重链氨基酸序列。
[0031] 本发明提供的人源化修饰型抗⑶147嵌合抗体HcHAbl8特征还在于抗体具有 N-糖苷-连接的复合糖链的Fc区，其中岩藻糖或木糖不与所述糖链还原端中的N-乙酰氨 基葡萄糖结合。
[0032] 本发明另一目的是提供了编码上述抗体的DNA分子。该DNA分子含有SEQ ID N0:5 所示的编码所述单抗轻链可变区的核苷酸序列，以及SEQ ID N0:6所示的编码所述单抗重 链可变区的核苷酸序列。SEQ ID N0:7所示的编码轻链核苷酸序列，SEQ ID N0:8所示的编 码重链核苷酸序列。
[0033] 本发明的目的之三是提供了一种表达载体。该表达载体为pQD-Hyg-GSeu-CHAbl8， 该表达载体含有上述DNA序列以及与该序列操作性相连的表达调控序列。
[0034] 本发明的目的之四是提供一种宿主细胞。该宿主细胞被上述表达载体转化，优选 的，该宿主细胞来源于CH0-K1细胞。
[0035] 本发明的目的之五是提供上述的抗体在制备用于治疗癌症的药物中的应用，所述 癌症是选自肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌、血液病或胃癌。
[0036] 为克服鼠源性抗体HAbl8(专利号：ZL02114471. 0)在临床应用中的局限性，本发 明通过RT-PCR的方法从杂交瘤细胞中克隆其轻、重链可变区基因，分别与人的恒定区基因 相连，构建了抗CD147的嵌合抗体基因，并构建了相应的表达载体，通过转染化学诱导的岩 藻糖缺陷型CH0-K1细胞（MAGE1. 5) (Eureka Therapeutics)，获得了 ADCC效应增强型的抗 CD147嵌合抗体一HcHAbl8,该抗体在特定宿主细胞中岩藻糖不结合于抗体Fc段糖链还原 端中的N-乙酰氨基葡萄糖末端，抗体Fc段糖型为甘露糖型（MAN5)。体外实验表明，此嵌 合抗体保留了与鼠源性亲本抗体相似的亲和力和特异性，并能诱发ADCC效应，同时具有抑 制肿瘤细胞侵袭迁移的能力；体内实验表明，该嵌合抗体具有抑制肿瘤的生长能力。
【专利附图】
【附图说明】
[0037] 图1为质类pQD-Hyg-GSeu_cHAbl8载体示意图；
[0038] 图2为HcHAbl8抗体糖谱分析
[0039] 图3为HcHAbl8抗体与靶抗原⑶147分子亲和力测定，图中A图为HcHAbl8测定 结果；B图为鼠源性亲本抗体HAbl8测定结果；
[0040] 图4为HcHAb 18单抗在组织中的免疫组化染色结果；
[0041] 图5为HcHAbl8对肺癌细胞系ADCC体外杀伤试验；
[0042] 图6为HcHAb 18对肺癌细胞运动能力的影响；
[0043] 图7为HcHAb 18抑制肺癌细胞侵袭能力；
[0044] 图8为HcHAbl8抑制NCI-H520荷瘤小鼠体内肿瘤生长。
【具体实施方式】
[0045] 下面将结合实施例进一步详细地描述本发明。然而以下实施例、实验例仅对本发 明进行进一步说明，而不是用来限制本发明。
[0046] 实施例1 :鼠源抗CD147单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和测序
[0047] 按Trizol Reagent试剂盒（Invitrogen公司）说明书提取2X 106分泌抗人⑶147 单克隆抗体HAbl8的杂交瘤细胞（专利号：02114471. 0)的总RNA。经1 %琼脂糖电泳鉴定 总RNA质量后，用PrimeScript? RT reagent Kit(TaKaRa)反转录试剂盒进行反转录，获得 总RNA的cDNA。根据专利"抗人肝癌单克隆抗体HAbl8轻、重链可变区基因及其应用"（专 利号：02114471. 0)所公布的HAbl8单抗轻、重链可变区基因序列信息，设计合成相应引物 扩增HAbl8单抗轻、重链可变区基因。引物由上海生工生物工程公司合成，序列如下：
[0048] VL-5' ：5' -GGGGATATCCACCATGAACTTCGGGCTGAGCTGG-3' ；VL-3' ：5' -GGATACAGTTGG TGGTGCAGTCGACTTACGTTT (GT)GTTTCA (AG)CTT-3 ' ；VH-5 ' ： 5 ' -GGGGATATCCACCATGGACTCACAT ACTCAGGTC-3 ' ；VH-3 ' ： 5 ' -GAC (ACT)CATGGGG (CG)TGT (TC)GTGCTAGCTG(AD)(AG)GAGAC(AGT) GTGA-3，。
[0049] 反应条件：94 °C，lmin ;55 °C，lmin ;72 °C，lmin ;40 个循环，最后 72 °C 延伸， lOmin。PCR反应结束后，利用1%琼脂糖凝胶电泳纯化回收PCR产物并连入pMD18-T载体 (TaKaRa)，筛选阳性克隆测序验证，结果证明该序列与专利（专利号：02114471.0)所公布 序列一致。将测序正确的结果分别命名为PMD18T-VL或pMD18T-VH。
[0050] 实施例2 :VL和VH基因的优化和嵌合抗体构建
[0051] 在获得VL和VH测序结果后。首先，采用仓鼠的密码子偏性对轻、重链基因进行改 造，以解决在翻译过程中因 CHO细胞中稀有密码子产生的蛋白质表达量较低，其原理是基 于解决氨基酸合成过程中转运氨基酸的tRNA偏性，即采用所对应tRNA含量较多的密码子， 加快蛋白质的合成。根据仓鼠的密码子利用度表，对实施例一中获得的VL和VH核苷酸序 列中的密码子偏性进行优化，获得如SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:8所示的单克隆抗体的轻、 重链可变区氨基酸序列及其核苷酸编码序列。
[0052] 其次，人工合成抗体轻、重链基因的寡核苷酸片段，并在重链基因的两端分别合成 Nhel和BamHl酶切位点，在轻链基因的两端分别合成Hindlll和Xbal酶切位点。用Nhel 和BamHl、HindIII和Xbal分别对人工合成的抗体重链和轻链可变区DNA序列进行酶切，经 1%琼脂糖电泳分离后，用Gel Extraction Kit(0mega bio-tek)纯化酶切片段。
[0053] 然后，将纯化获得的酶切片段与同酶切的质粒pcDNA3. 1 (Invitrogen)用T4DNA 连接酶（TaKaRa公司）进行连接，构建成含抗体重链和轻链全长基因的真核表达载体 pQD-Hyg-GSeu-cHAbl8,如图 1 所示。
[0054] 实施例3 :CH0细胞的转染与重组克隆的筛选
[0055] 用上述构建的含有人源化抗体基因的表达载体pQD-Hyg-GSeu-CHAbl8转化大肠 杆菌DH-5a菌株，接种于100ml LB培养基上进行扩增。
[0056] 用超纯质粒DNA纯化试剂盒（Qiagen)，按试剂盒说明书要求提取表达载体 pQD-Hyg-GSeu_cHAbl8 质粒 DNA。
[0057] 采用电穿孔法将pQD-Hyg-GSeu-CHAbl8质粒DNA转染到岩藻糖转移酶缺陷的CH0 细胞（MAGE1. 5 细胞）（专利：2〇〇98〇145664· 9)中。
[0058] 采用终浓度为500ug/ml潮霉素 B (Invitrogen，简称HyB)对转染的MAGE1. 5细胞 进行压力筛选，后采用终浓度为25uM的L-甲硫氨酸亚研J安（L-Methionine Sulfoximine， MSX) (Sigma)继续进行细胞筛选培养；并采用ClonePix FL(Genentix，Inc)，对MSX压力筛 选后仍存活的细胞进行多次克隆化筛选。通过上述操作获得了人源化抗体细胞株HcHlS-M。
[0059] 在CD OptiCHO(Invitrogen)培养基上培养筛选出的单克隆细胞株HcH18-M，用 Protein A亲和层析从培养上清中分离纯化抗体HcHAbl8 (即人源化修饰型抗⑶147嵌合抗 体）。
[0060] 实施例4 :HcHAbl8抗体的N-连接寡糖谱分析
[0061] 取2mg纯化的嵌合抗体HcHAb 18经脱盐处理后，放入薄壁长试管中，经真空干燥仪 45°C干燥，加入经2M三氟乙酸（TFA) 4mL，10(TC条件下水解2h，再次干燥后重悬于Mi 11 i-Q 级水中。样品经再次脱盐处理后，加入PNGase F，37°C反应过夜，切下连接在抗体上的N-连 接型糖链，滤膜过滤，获得供试品N-连接寡糖进行分析。
[0062] N-连接寡糖通过高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD)方法进行分 析。色谱条件如下：色谱柱Shimpack CLC-ODS column(60X 150mm;Japan),色谱柱经淋洗 液A(10mM磷酸钠溶液（pH3.8))平衡，流速1.0ml/min，55°C ;加入N-连接寡糖样品25μ 1 后，用淋洗液B(10mM磷酸钠溶液（ρΗ3. 8)含0. 5%正丁醇）和淋洗液Α进行梯度洗脱，淋洗 液B和淋洗液A的比率在80min内线性增加至60:40。用荧光（激发光波长320nm，发射光 波长400nm)检测流出液。检测得到的寡糖峰通过PA标记的寡糖标准品（TaKaRa)进行比 对分析。
[0063] 结果如图2所示，与表达于野生型CH0细胞的对照样品cHAblS相比，表达于 MAGE1. 5细胞的HcHAbl8只有单一寡糖峰，进一步进行单糖分析表明，HcHAbl8抗体的糖型 为高甘露糖（Man5)，未检测到岩藻糖或木糖。
[0064] 实施例5 :重组人源化修饰型嵌合抗体的生物学功能
[0065] (1)抗体亲和力测定
[0066] 经ProteOn XPR36蛋白质相互作用系统测定HcHAbl8抗体与靶抗原CD147分子的 亲和力，利用朗缪尔动力学（Kinetic -Langmuir)模型分析数据。实验结果表明：HcHAbl8抗 体与抗原⑶147的亲和力KD = 3. 62*10_1°M。与鼠源性抗体HAbl8相比，经改造后的HcHAbl8 抗体与靶抗原的亲和力无显著差异。结果如图3所示。
[0067] (2)抗体特异性测定
[0068] 用免疫组织化学方法，检测HcHAblS单抗与肿瘤组织的特异性结合能力，考察该 抗体的免疫组织交叉反应。具体操作如下：常规二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水、水化组织芯 片；3% H202阻断灭活内源性过氧化物酶；正常羊血清工作液封闭；以HcHAbl8抗体为一抗， 生物素标记的兔抗人Fc抗体为二抗，辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液为三抗， DAB显色，苏木精复染，脱水透明后封片、镜检。结果如图4和表1所示，HcHAblS单抗在肺 癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌和胃癌等多种恶性肿瘤组织中可见特异 性着色（总阳性率84. 66% )着色程度均为"++"或"+++"，其着色部位为癌细胞胞膜；而与 正常组织极少结合（总阳性率13. 70%，22/159)，在肺癌中显示较高的灵敏度88. 24% )与 特异度（91.67% )。
[0069] 表lHcHAbl8单抗与肿瘤组织免疫交叉研究
[0070]
【权利要求】
1. 一种人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAbl8,该抗体特异性结合人肿瘤相关抗原 CD147分子，它包含轻链可变区和重链可变区，其特征在于，所述轻链可变区氨基酸序列如 SEQ ID NO: 1所示，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，恒定区为人抗体恒定 区。
2. 如权利要求1所述的人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAbl8,其特征在于，该抗体 是IgGl人同种型。
3. 如权利要求1所述的人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAbl8,其特征在于，该抗体 包含具有N-糖苷-连接的复合糖链的Fc区，其中岩藻糖或木糖不结合于所述糖链还原端 中的N-乙酰氨基葡萄糖。
4. 如权利要求1所述的人源化修饰型抗CD147嵌合抗体HcHAbl8,其特征在于，轻链的 氨基酸序列如SEQIDN0:3所示，重链氨基酸序列如SEQIDN0 :4所示。
5. -种核苷酸分子，其编码权利要求1所述的抗CD147嵌合抗体HcHAbl8,其特征在 于，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID N0:5所示，编码重链可变区的核苷酸序列如 SEQ ID N0:6 所示。
6. 如权利要求5所述的核苷酸分子，其特征在于，编码轻链核苷酸序列如SEQ ID NO: 7 所示，编码重链核苷酸序列如SEQ ID N0:8所示。
7. -种表达载体，其特征在于，该表达载体含有权利要求5或6所述的核苷酸分子，该 表达载体为 pQD-Hyg-GSeu-cHAbl8。
8. -种宿主细胞，其特征在于，该宿主细胞被权利要求7的表达载体转化。
9. 权利要求8所述的宿主细胞，为CH0-K1细胞。
10. 权利要求1所述的抗体HcHAbl8在制备用于治疗癌症的药物中的应用，所述癌症是 选自肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌、血液病或胃癌。
【文档编号】A61K39/395GK104086654SQ201410320878
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月4日 优先权日:2014年7月4日
【发明者】陈志南, 张征, 张阳, 冯飞, 呼和牧仁, 杨向民 申请人:中国人民解放军第四军医大学