7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法与流程

本发明是关于一种7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，特别关于一种7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，其可以提升7,3’,4’-大豆异黄酮的溶解度。

背景技术：

7,3’,4’-大豆异黄酮(7,3’,4’-trihydroxyisoflavone)的IUPAC命名为3-(3,4-二羟基苯基)-7-羟基苯并吡喃-4-酮(3-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxychromen-4-one)，其结构如图1所示。7,3’,4’-大豆异黄酮为一种植物性雌激素，主要来源为黄豆等植物中，其具有抗氧化、抗发炎及美白等活性，可以添加于化妆品中，以避免氧化压力所造成的皮肤老化及水份丧失。

但是，7,3’,4’-大豆异黄酮的水溶解度差，故而难以为皮肤有效吸收，而影响其生理可用率。因此，有必要提供一种7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，以改善其水溶解度不良的问题。

技术实现要素：

本发明的主要目的是提供一种7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，其可以制备一个7,3’,4’-大豆异黄酮制剂，且该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂相较于7,3’,4’-大豆异黄酮具有较佳的水溶解度。

本发明提供一种7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，包含：提供一个混合物，包含7,3’,4’-大豆异黄酮与一个助溶剂，该助溶剂为一个吡咯烷酮衍生物；及以球磨法研磨该混合物，以制得一个7,3’,4’-大豆异黄酮制剂，该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的粒径介于10～1000nm的范 围。

本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，其中，该助溶剂为聚乙烯基吡咯烷酮。

本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，其中，以行星式球磨机研磨该混合物。

本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，其中，该混合物包含以重量百分比计3.3～10％的7,3’,4’-大豆异黄酮及90～96.7％的该助溶剂。

本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，其中，该混合物包含以重量百分比计3.3％的7,3’,4’-大豆异黄酮及96.7％的该助溶剂。

本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂制备方法，借助使用该吡咯烷酮衍生物做为该助溶剂，可以通过研磨方式制备具有较小粒径的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。借此，本发明所制备的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂是具有良好的水溶性，达到提升7,3’,4’-大豆异黄酮的生体可用率的功效。

附图说明

图1：为7,3’,4’-大豆异黄酮的结构图。

图2：为聚乙烯基吡咯烷酮的结构图。

图3：为第A1～A3组的平均粒径分析结果。

图4a：为第B1～B6组的西方点墨图谱。

图4b：为第B1～B6组的COX-2表现量长条图。

图5a：为第C1～C6组的西方点墨图谱。

图5b：为第C1～C6组的COX-2表现量长条图。

图6：为第D1～D6组的DPPH自由基清除率长条图。

图7：为第D1～D6组的清除DPPH自由基半数有效浓度长条图。

具体实施方式

为让本发明的上述及其他目的、特征及优点能更明显易懂，下文特举本发明的较佳实施例，并配合所附图式，作详细说明如下：

本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，将7,3’,4’-大豆异黄酮与一个助溶剂混合，续以球磨法进行研磨，以制备具有良好水溶性的一个7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。

本发明所述的7,3’,4’-大豆异黄酮可以自大豆等植物中萃取，或者直接购买商业来源的7,3’,4’-大豆异黄酮，但不以此为限。一般市售的7,3’,4’-大豆异黄酮为粉末状，且其平均粒径约为4000～6000nm。

该助溶剂为一个吡咯烷酮衍生物，指包含吡咯烷酮结构的化合物，可以为单体或聚合物等。借助吡咯烷酮的结构，可以包覆7,3’,4’-大豆异黄酮，并维持其稳定性。于本发明的一个实施例中，该助溶剂为聚乙烯基吡咯烷酮(polyethenylpyrrolidinone)，其结构如图2所示。借助聚乙烯基吡咯烷酮的聚合结构，可以更进一步帮助分散7,3’,4’-大豆异黄酮。

详言之，本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法先将7,3’,4’-大豆异黄酮及该助溶剂混合以获得一混合物，续以球磨机研磨该混合物，以制得粒径介于10～1000nm的范围的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。上述球磨机可以为直线式球磨机或行星式球磨机等，本发明不加以限制。于本实施例中，以行星式球磨机进行研磨，其所需时间较短，且研 磨后该混合物的粒径较为均匀。

由于该助溶剂可以包覆7,3’,4’-大豆异黄酮，以稳定该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的结构，其不会在研磨后再度聚集成为粒径较大的分子，因此，本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，可以制备具有较小粒径的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂，以提升该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的溶解度，进而提升其生体可用率。

为证实经由本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法确实可以获得具有较小粒径的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂，且该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂相较于7,3’,4’-大豆异黄酮具有较佳水溶性及生体可用率，遂进行以下实验。

(A)7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的粒径测试

以聚乙烯基吡咯烷酮做为该助溶剂，分别以不同比例混合市售的7,3’,4’-大豆异黄酮(平均粒径约为4850nm)，以制备第A1～A3组的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂，各组的添加比例如下第1表所示。本实验是以RetschGmbh Type:PM100的行星式球磨机进行研磨，设定转速每分钟400转，研磨时间20分钟。

第1表：第A1～A3组7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的组成

本实验中，以粒径分析仪zetasizer 3000Has(Malvern Instruments)。 分别针对第A1～A3组进行三次测量后，取其平均粒径记录如图3。由上述结果可以得知，本发明借助添加该吡咯烷酮衍生物作为该助溶剂，可以经由研磨有效降低该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的粒径，以生成粒径大小介于10～1000nm之7,3’,4’-大豆异黄酮。

(B)7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的溶解度测试

精秤1mg未经处理的7,3’,4’-大豆异黄酮(第A0组)，及包含等量7,3’,4’-大豆异黄酮的上述第A1～A3组该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂，分别溶解于1ml的纯水溶液中，震荡10分钟。续以孔径为0.45μm的滤膜过滤，并以HPLC分析其7,3’,4’-大豆异黄酮含量，以测试第A0～A4组的溶解度，记录结果如下第2表所示。

第2表：第A0～A3组的水溶解度

由上述实验结果可以得知，本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的制备方法，确实可以透过该助溶剂之添加，以研磨方式制备具有较小粒径的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。借此，本发明制备的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂具有良好的水溶性。

(C)7,3’,4’-大豆异黄酮制剂的抗发炎活性测试

本实验选用人类HaCaT角质细胞株，以该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂对该HaCaT细胞株进行前处理1小时，续加入50μg/cm²的PM2.5空气悬浮粒子以诱发该HaCaT细胞株的COX-2发炎蛋白表现，测试该 7,3’,4’-大豆异黄酮制剂对于COX-2发炎蛋白表现的抑制能力。其中，第B1～B6组是以未经制程的7,3’,4’-大豆异黄酮作为对照，而第C1～C6组使用本发明所制备的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。各组的空气悬浮粒子及7,3’,4’-大豆异黄酮添加情形如下第3、4表所示。

第3表：第B1～B6组的添加情形

第4表：第C1～C6组的添加情形

本实验是以西方点墨法检测前述各组的COX-2发炎蛋白表现情形，并以GAPDH作为内控制组，其结果分别如图4a(第B1～B6组)及图5a(第C1～C6组)所示，另分别以第B1组及第C1组的COX-2发炎蛋白表现量作为1，各组的COX-2发炎蛋白相对表现量则分别如图4b(第B1～B6组)及图5b(第C1～C6组)所示。由实验结果可以得知，PM2.5空气悬浮粒子的添加可以诱发该HaCaT细胞株表现 COX-2发炎蛋白，而前处理本发明所制备的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂则能够有效预防COX-2发炎蛋白的表现，且具有剂量依赖性。

(D)7,3’,4’-大豆异黄酮制剂之DPPH自由基清除率测试

请参照第5表所示，本实验则混合不同比例的7,3’,4’-大豆异黄酮及聚乙烯基吡咯烷酮后，分别以球磨及搅拌的方式制备第D1～D6组的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。

续吸取200μM之DPPH溶液125μl，分别混合不同浓度的第D1～D6组7,3’,4’-大豆异黄酮制剂125μl，于室温下震荡反应30分钟后，以ELISA reader测量各组于波长517nm的吸光值，以换算DPPH自由基清除率，纪录结果如图6。另计算各组的清除DPPH自由基半数有效浓度(SC₅₀)，如图7所示。

第5表：第D1～D6组的组成及混合方式

依据上述实验结果可以得知，本发明所制备的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂(第D1～D3组)，相较于仅以搅拌混合的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂(第D4～D6组)具有较好的DPPH自由基清除能力。此外，特别是以重量百分比计3.3％的7,3’,4’-大豆异黄酮混合96.7％的该助溶剂(第D3组)，其清除DPPH自由基的能力最佳。

综合上述，本发明的7,3’,4’-大豆异黄酮制剂制备方法，借助使用该吡咯烷酮衍生物做为该助溶剂，可以通过研磨方式制备具有较小粒径的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂。借此，本发明所制备的该7,3’,4’-大豆异黄酮制剂具有良好的水溶性，达到提升7,3’,4’-大豆异黄酮的生体可用率的功效。

以上仅为本发明的较佳实施例，不得以此限定本发明实施的保护范围，因此凡参考本发明的说明书内容所作的简单等效变化与修饰，仍属本发明的保护范围。