SLAMF1拮抗剂及其用途的制作方法

对相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年10月23日提交的美国临时申请no.62/067,638和2015年5月1日提交的美国临时申请no.62/155,810的优先权权益，为了任何目的通过提及将每篇完整收入本文。

发明领域

提供了鉴定和使用slamf1拮抗剂的方法。此类方法包括但不限于治疗癌症的方法。slamf1拮抗剂包括但不限于结合slamf1的抗体。

发明背景

癌症中的遗传改变提供可以介导抗肿瘤免疫的多种多样的抗原组。经由t细胞受体(tcr)的抗原识别引发t细胞应答，其由激活和抑制信号之间的平衡调节。抑制信号或“免疫检查点”通过预防自身免疫在正常组织中起重要作用。免疫检查点蛋白的上调允许癌症逃避抗肿瘤免疫。两种免疫检查点蛋白已成为临床癌症免疫治疗剂、细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4(ctla4)和程序性细胞死亡蛋白1(pd1)的焦点。已经批准抗ctla4抗体用于治疗转移性黑素瘤，并且目前在针对其它癌症的临床试验中。针对pd-1配体的抗pd-1抗体和抗pd-l1抗体目前也在临床开发中。

牵涉t细胞活化和抑制的别的蛋白质的鉴定会有助于进一步了解t细胞应答，并且对药物开发提供许多优点，包括选择治疗有效且安全的治疗剂、用于患者选择和伴随诊断的生物标志、用于联合治疗的靶物、和用于开发癌症免疫治疗剂的新靶物。

发明概述

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括对具有癌症的受试者施用有效量的至少一种slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，提供了抑制对已活化的t细胞的阻抑的方法。在一些实施方案中，方法包括对受试者施用至少一种slamf1拮抗剂。

在一些实施方案中，治疗癌症和/或抑制对已活化的t细胞的阻抑的方法进一步包括对受试者施用有效量的选自化疗剂、抗血管发生剂、生长抑制剂、和抗新生物组合物的治疗剂。在一些实施方案中，抗新生物组合物包含免疫刺激剂。在一些实施方案中，免疫刺激剂选自落入以下类别中一项或多项内的药剂：

a)免疫刺激分子的激动剂，所述免疫刺激分子包括共刺激分子，诸如在t细胞或nk细胞上找到的免疫刺激分子；

b)免疫抑制分子的拮抗剂，所述免疫抑制分子包括共抑制分子，诸如在t细胞或nk细胞上找到的免疫刺激分子；

c)ctla4、lag-3、pd-1、pdl1、pdl2、半乳凝素1、半乳凝素9、ceacam-1、btla、cd25、cd69、tigit、cd113、gpr56、vista、b7-h3、b7-h4、2b4、cd48、garp、pd1h、lair1、tim1、tim3、tim4、ilt4、il-6、il-10、tgfβ、vegf、kir、腺苷a2a受体、pi3kδ、或ido的拮抗剂；

d)b7-1、b7-2、cd28、4-1bb(cd137)、4-1bbl、icos、icos-l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd27、cd40、cd40l、dr3、cd28h、il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、ifnα、sting的激动剂、或toll样受体激动剂，诸如tlr2/4激动剂；

e)结合b7家族膜结合蛋白的成员的药剂，所述b7家族膜结合蛋白的成员诸如b7-1、b7-2、b7-h2(icos-l)、b7-h3、b7-h4、b7-h5(vista)、和b7-h6；

f)结合tnf受体家族的成员的药剂或结合tnf受体家族的成员的共刺激或共抑制分子，所述tnf受体家族的成员诸如cd40、cd40l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd70、cd27l、cd30、cd30l、4-1bbl、cd137(4-1bb)、trail/apo2-l、trailr1/dr4、trailr2/dr5、trailr3、trailr4、opg、rank、rankl、tweakr/fn14、tweak、baffr、edar、xedar、eda1、eda2、taci、april、bcma、ltβr、light、der3、hvem、vegl/tl1a、tramp/dr3、tnfr1、tnfβ、tnfr2、tnfα、1β2、fas、fasl、relt、dr6、troy、或ngfβ；

g)拮抗或抑制抑制t细胞活化的细胞因子的药剂，所述细胞因子诸如il-6、il-10、tgfβ、vegf；

h)刺激t细胞活化的细胞因子的激动剂，所述细胞因子诸如il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、和ifnα；和

i)趋化因子的拮抗剂，所述趋化因子诸如cxcr2、cxcr4、ccr2、或ccr4。

在一些实施方案中，提供了抑制对已活化的t细胞的阻抑的方法，其包括使所述t细胞与至少一种slamf1拮抗剂接触。在一些此类实施方案中，t细胞在体外。

在一些实施方案中，slamf1拮抗剂将对已活化的t细胞的增殖的阻抑降低至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、或至少80％。在一些实施方案中，已活化的t细胞是cd3+t细胞。在一些实施方案中，已活化的t细胞是il-2活化的cd3+t细胞。

在本文中描述的任何实施方案中，slamf1拮抗剂可以是slamf1胞外域(ecd)或slamf1ecd融合分子。在一些实施方案中，slamf1ecd或slamf1ecd融合分子是单体的。在一些实施方案中，slamf1ecd或slamf1ecd融合分子是二聚体的。

在本文中描述的任何实施方案中，slamf1拮抗剂可以是slamf1抗体。在一些实施方案中，抗体选自嵌合抗体、人源化抗体、和人抗体。在一些实施方案中，抗体是双特异性抗体或单链抗体。在一些实施方案中，抗体是抗体片段。在一些实施方案中，抗体片段选自fv、单链fv(scfv)、fab、fab’、和(fab’)2。

在本文中描述的任何实施方案中，slamf1拮抗剂可以是小分子或小肽。

在一些实施方案中，提供了鉴定slamf1拮抗剂的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：

a)使已活化的t细胞与候选分子和slamf1分子接触，其中所述slamf1分子包含slamf1、slamf1ecd、或slamf1ecd融合分子；并

b)检测所述已活化的t细胞的增殖；

其中在所述候选分子存在下对所述已活化的t细胞的增殖的阻抑与在所述候选分子缺失下对所述已活化的t细胞的增殖的阻抑相比的降低指示所述候选分子是slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，在所述候选分子存在下将对已活化的t细胞的增殖的阻抑降低至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、或至少80％。在一些实施方案中，候选分子结合slamf1。在一些实施方案中，候选分子是结合slamf1的抗体。在一些实施方案中，候选分子是小分子。在一些实施方案中，候选分子是小肽。在一些实施方案中，已活化的t细胞是已活化的cd3+t细胞。在一些实施方案中，已活化的t细胞是il-2活化的cd3+t细胞。

在一些实施方案中，提供了测定slamf1抗体是否是slamf1拮抗剂的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：

a)使已活化的t细胞与所述slamf1抗体和slamf1分子接触，其中所述slamf1分子包含slamf1、slamf1ecd、或slamf1ecd融合分子；并

b)检测所述已活化的t细胞的增殖；

其中在所述slamf1抗体存在下对所述已活化的t细胞的增殖的阻抑与在所述slamf1抗体缺失下对所述已活化的t细胞的增殖的阻抑相比的降低指示所述slamf1抗体是slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，在所述slamf1抗体存在下对已活化的t细胞的增殖的阻抑降低至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、或至少80％。在一些实施方案中，已活化的t细胞是已活化的cd3+细胞。在一些实施方案中，已活化的t细胞是il-2活化的cd3+t细胞。

在一些实施方案中，提供了slamf1拮抗剂用于在受试者中治疗癌症的用途。在一些此类实施方案中，slamf1拮抗剂是slamf1抗体。在一些实施方案中，抗体选自嵌合抗体、人源化抗体、和人抗体。在一些实施方案中，抗体是抗体片段。在一些实施方案中，抗体片段选自fv、单链fv(scfv)、fab、fab’、和(fab’)2。在一些实施方案中，抗体是双特异性抗体或单链抗体。在一些实施方案中，slamf1拮抗剂是slamf1胞外域(ecd)或slamf1ecd融合分子。在一些实施方案中，slamf1ecd或slamf1ecd融合分子是单体的。在一些实施方案中，slamf1ecd或slamf1ecd融合分子是二聚体的。在一些实施方案中，slamf1拮抗剂是小分子或小肽。

本文中描述的任何实施方案或其任何组合适用于本文中描述的发明的任何和所有方法。

附图简述

图1。pd-l1阻抑活化的/il-2静息t细胞的增殖。用抗cd3/抗cd28珠将cd3+t细胞活化6天，并且在il-2中再静息4天。在静息后，在板上再刺激t细胞，所述板已经于37℃用抗cd3、抗人igg和滴定剂量的fc蛋白(在100μg/ml开始；1:3稀释)包被3天。用edu脉冲细胞，12-16小时后收获细胞，并且通过已经掺入edu的细胞的数目量化增殖变化，如通过facs测量的。每个小图显示了使用来自不同供体的cd3+t细胞得到的结果。

图2。slamf1-fc阻抑活化的/il-2静息t细胞的增殖。用抗cd3/抗cd28珠将cd3+t细胞活化6天，并且在il-2中再静息4天。在静息后，在板上再刺激t细胞，所述板已经于37℃用抗cd3、抗人igg和滴定剂量的fc蛋白(在100μg/ml开始；1:3稀释)包被3天。用edu脉冲细胞，12-16小时后收获细胞，并且通过已经掺入edu的细胞的数目量化增殖变化，如通过facs测量的。每个小图显示了使用来自不同供体的cd3+t细胞得到的结果。

图3。人组织中slamf1mrna的表达。

图4。slamf1ecd在体外改变e.g7-ova肿瘤的生长。a.诱导c57bl/6小鼠表达slamf1ecd的组成性系统性表达。用e.g7-ova鼠t细胞淋巴瘤细胞接种表达ecd或用盐水作为对照处理的小鼠，并且测量肿瘤体积。在第15天和第18天时，表达slamf1ecd的小鼠中培养的肿瘤显著大于经盐水处理的小鼠中的(*p<0.05)。b.显示了如在第18天评估的个别的e.g7-ova肿瘤体积。经由二尾未配对t检验测定统计学显著性。

图5a-c。认为抗slamf1阻断性抗体在a20apc测定法中缓解t细胞抑制。a.显示了a20人工apc测定法的示意图。b.将slamf1转导入a20细胞中诱导由oca肽刺激的t细胞增殖。c.由slamf1对t细胞增殖的抑制由阻断性抗slamf1抗体逆转。

图6a-d。抗slamf1阻断性抗体刺激自与t2细胞共温育的人cd8+细胞释放干扰素γ(infγ)。a.多克隆抗slamf1抗体刺激干扰素-γ的剂量依赖性释放。b.单克隆抗slamf1抗体也刺激干扰素的释放。c.t2细胞，而非cd8细胞与多克隆抗slamf1抗体的预温育诱导ifnγ释放。d.ifnγ释放的抗slamf1阻断性抗体刺激不被抗cd32抗体阻断。

图7a-c。在肿瘤浸润性t细胞上表达slamf1。a.在cd4+和cd8+t细胞子集中表达slamf1。b.在t调节细胞上表达slamf1。c.在大多数cd4t细胞上表达pd-1和slamf1两者。

发明详述

本发明人已经将slamf1鉴定为活化的t细胞的阻抑物。在活化的cd4+和cd8+t细胞上表达slamf1，并且它属于具有两个胞外免疫球蛋白域的9种蛋白质的家族，其中大多数具有基于酪氨酸的胞内免疫受体转变基序(itsm)。不希望受任何特定理论束缚，slamf1可以与t细胞相互作用，导致在t细胞中诱导无活性状态(例如，无变应性或耐受化状态)的抑制性信号。因此，例如用抑制性抗体或可溶性slamf1抑制slamf1活性可以增强免疫介导的癌细胞杀伤。靶向分子包括结合slamf1和阻断slamf1活性的抗体和slamf1胞外域(ecd)和slamf1ecd融合蛋白，包括单体slamf1ecd和slamf1ecd融合蛋白。提供此类靶向分子作为用于治疗癌症的治疗剂。

通过提及将本文中引用的所有参照文献，包括专利申请和出版物完整收入本文。

本文中使用的部分标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。

定义

除非另有定义，与本发明结合使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，单数术语应该包括多个，并且复数术语应当包括单数。

与重组dna、寡核苷酸合成、组织培养和转化(例如电穿孔，脂转染)、酶促反应和纯化技术结合使用的例示性技术是本领域中已知的。许多此类技术和规程记载于例如sambrooketal.molecularcloning:alaboratorymanual(3rded.,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(2001))，等等。另外，用于化学合成、化学分析、药物制备、配制剂、和递送以及患者治疗的例示性技术也是本领域中已知的。

在本申请中，除非另有说明，使用“或”表示“和/或”。在多项从属权利要求的上下文中，“或”的使用在仅备选方案中回头引用了超过一项前述独立或从属权利要求。除非另有指示，术语“包括”与“包括但不限于”具有相同的含义。类似地，术语“诸如”具有与术语“诸如但不限于”具有相同的含义。还有，术语诸如“要素”或“组分”涵盖包含一个单元的要素和组分以及包含超过一个亚单元的要素和组分两者，除非另有明确叙述。

如依照本公开利用的，除非另有指示，以下术语应当理解为具有以下含义：

术语“核酸分子”和“多核苷酸”可以互换使用，并且指核苷酸的聚合物。核苷酸的此类聚合物可以含有天然和/或非天然核苷酸，并且包括但不限于dna、rna和pna。“核酸序列”指包含核酸分子或多核苷酸的核苷酸的线性序列。

术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。氨基酸残基的此类聚合物可以含有天然或非天然氨基酸残基，并且包括但不限于肽、寡肽、氨基酸残基的二聚体、三聚体和多聚体。全长蛋白质及其片段两者都由所述定义涵盖。术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。此外，为了本发明的目的，“多肽”指包括对天然序列的修饰，诸如删除、添加和替代(通常实际上保守)的蛋白质，只要蛋白质维持期望的活性。这些修饰可以是有意的，如经由定点诱变，或者可以是偶然的，诸如经由生成蛋白质的宿主的突变或由于pcr扩增所致的错误。“小肽”指具有50个或更少的氨基酸的肽。在一些实施方案中，小肽具有40个或更少、或35个或更少、或30个或更少、或25个或更少的氨基酸。在一些实施方案中，小肽具有10至50个氨基酸或15至30个氨基酸。

“天然序列”多肽包含与自然界中找到的多肽具有相同的氨基酸序列的多肽。如此，天然序列多肽可以具有来自任何哺乳动物的天然存在的多肽的氨基酸序列。此类天然序列多肽可以自自然界分离或者可以通过重组或合成手段生成。术语“天然序列”多肽明确涵盖多肽的天然存在的截短或分泌形式(例如，胞外域序列)、多肽的天然存在变体形式(例如，可变剪接形式)和天然存在等位变体。

多肽“变体”指在比对序列并且在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，并且不考虑任何保守替代作为序列同一性的部分，与天然序列多肽具有至少约80％氨基酸序列同一性的生物活性多肽。此类变体包括例如在多肽的n或c端添加或删除一个或多个氨基酸残基的多肽。在一些实施方案中，变体会具有至少约80％的氨基酸序列同一性。在一些实施方式中，变体会具有至少约90％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，变体会与天然序列多肽具有至少约95％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，变体会与天然序列多肽具有至少约97％的氨基酸序列同一性。

如本文中使用的，“百分比(％)氨基酸序列同一性”和“同源性”就肽、多肽或抗体序列而言定义为在比对序列并且在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，并且不考虑任何保守替代作为序列同一性的部分，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。可以以本领域技术范围内的各种方式，例如使用诸如blast、blast-2、align或megaligntm(dnastar)软件的公众可用的计算机软件实现为了测定百分比氨基酸序列同一性的比对。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适参数，包括在所比较的序列的全长里实现最大比对需要的任何算法。

术语“信号传导淋巴细胞激活分子”和“slamf1”可互换使用，并且包括来自任何脊椎动物来源的任何天然slamf1，包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠)，除非另有指示。术语包括全长、未加工的slamf1以及源自细胞中的加工的slamf1的任何形式或其任何片段，其保留活性(例如阻抑活化的cd3+t细胞)。术语还涵盖slamf1的天然存在的变体，例如剪接变体或等位变体。在一些实施方案中，slamf1是具有seqidno:1的氨基酸序列(前体，具有信号肽)或seqidno:2的氨基酸序列(成熟的，没有信号肽)的人slamf1。

术语“slamf1”还包括全长slamf1、slamf1片段和slamf1变体。如本文中使用的，术语“全长slamf1”指全长、未加工的slamf1以及源自细胞中的加工的slamf1的任何形式或其任何片段，其保留活性(例如阻抑活化的cd3+t细胞)。在一些实施方案中，全长人slamf1具有seqidno:1(前体，具有信号肽)或seqidno:2(成熟的，没有信号肽)的氨基酸序列。如本文中使用的，术语“slamf1片段”指自全长slamf1的n和/或c端删除一个或多个残基并且保留活性的slamf1。如本文中使用的，术语“slamf1变体”指含有氨基酸添加、删除和替代并且保留活性的slamf1。此类变体与亲本slamf1可以是至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％相同的。可以通过相似性得分测量两种多肽的％同一性，所述相似性得分通过在用于测定相似性的缺省设置的情况中使用bestfit程序比较两种多肽的氨基酸序列测定。bestfit使用smithandwaterman,advancesinappliedmathematics2:482-489(1981)的局部同源性算法寻找两种序列间的最佳相似性区段。

术语“拮抗剂”以最广义使用，并且包括部分或完全抑制或中和多肽，诸如slamf1的生物活性，或部分或完全抑制编码多肽的核酸的转录或翻译的任何分子。例示性拮抗剂分子包括但不限于拮抗剂抗体、slamf1胞外域(ecd)蛋白和融合分子、小肽、寡肽、有机分子(包括小分子)、适体和反义核酸。在一些实施方案中，拮抗剂药剂可以称为阻断剂(诸如阻断性抗体)。

术语“slamf1拮抗剂”指与slamf1相互作用并抑制slamf1介导的信号传导或活性(此类活性包括但不限于阻抑活化的cd3+t细胞)的分子。例示性slamf1拮抗剂包括结合slamf1的抗体、可溶性slamf1胞外域(ecd)蛋白、和slamf1ecd融合分子。在一些实施方案中，slamf1ecd和slamf1ecd融合分子是单体的。在一些实施方案中，slamf1ecd和slamf1ecd融合分子是二聚体的。

当slamf1拮抗剂将slamf1介导的对已活化的t细胞的阻抑降低至少50％时，认为slamf1拮抗剂“抑制slamf1活性”。在一些实施方案中，使用实施例3中所述的测定法，slamf1拮抗剂将slamf1介导的对活化的t细胞的阻抑降低至少50％。在一些实施方案中，slamf1拮抗剂将slamf1介导的对活化的t细胞的阻抑降低至少60％、至少70％、至少80％、或至少90％。

术语“抑制”指任何表型特征的降低或停止或所述特征的发生、程度或可能性的降低或停止。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”指引起20％或更大的降低的能力。在另一个实施方案中，“降低”或“抑制”指引起50％或更大的降低的能力。在又一个实施方案中，“降低”或“抑制”指引起75％、85％、90％、95％或更大的总体降低的能力。

如本文中使用的，术语“slamf1抗体”或“结合slamf1的抗体”指结合slamf1的抗体。在一些实施方案中，slamf1抗体抑制slamf1介导的信号传导或活性。在一些实施方案中，slamf1抗体指能够以足够的亲和力结合slamf1的抗体，使得此类抗体可用作靶向slamf1中的诊断和/或治疗剂。在一些实施方案中，slamf1抗体与无关的非slamf1蛋白的结合程度小于抗体与slamf1的结合的约10％，如例如通过放射免疫测定法(ria)测量的。在一些实施方案中，slamf1抗体结合来自不同物种的slamf1间保守的slamf1的表位。在一些实施方案中，slamf1抗体与结合人slamf1的人或人源化slamf1抗体结合相同的表位。

本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、单链抗体(例如骆驼(camelid)抗体)、纤连蛋白iii型支架抗体(例如adnectins^tm；见例如lipovsek,2011,prot.eng.des.sel.24:3-9)和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。如本文中使用的，术语“抗体”还指包含重链的互补决定区(cdr)1、cdr2和cdr3和轻链的cdr1、cdr2和cdr3的分子，其中该分子能够结合抗原。术语抗体包括但不限于能够结合抗原的片段，诸如fv、单链fv(scfv)、fab、fab’、和(fab’)2。术语抗体还包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体和各种物种(诸如小鼠、人、猕猴等)的抗体。

在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含至少一条包含重链可变区和至少部分的重链恒定区的重链，和至少一条包含轻链可变区和至少部分的轻链恒定区的轻链。在一些实施方案中，抗体包含两条重链(其中每条重链包含重链可变区和至少部分的重链恒定区)，和两条轻链(其中每条轻链包含轻链可变区和至少部分的轻链恒定区)。如本文中使用的，认为单链fv(scfv)或包含例如包含所有6个cdr(3个重链cdr和3个轻链cdr)的单一多肽链的任何其它抗体具有重链和轻链。在一些此类实施方案中，重链是抗体中包含3个重链cdr的区域，并且轻链是抗体中包含3个轻链cdr的区域。

如本文中使用的，术语“重链可变区”指包含重链cdr1、框架(fr)2、cdr2、fr3和cdr3的区域。在一些实施方案中，重链可变区还包括fr1的至少部分(其在cdr1的n端)和/或fr4的至少部分(其在cdr3的c端)。

如本文中使用的，术语“重链恒定区”指包含至少三个重链恒定域ch1、ch2和ch3的区域。非限制性例示性重链恒定区包括γ、δ和α。非限制性例示性重链恒定区还包括ε和μ。每个重恒定区对应于抗体同种型。例如，包含γ恒定区的抗体是igg抗体，包含δ恒定区的抗体是igd抗体，并且包含α恒定区的抗体是iga抗体。此外，包含μ恒定区的抗体是igm抗体，并且包含ε恒定区的抗体是ige抗体。某些同种型可以进一步细分为亚类。例如，igg抗体包括但不限于igg1(包含γ1恒定区)、igg2(包含γ2恒定区)、igg3(包含γ3恒定区)和igg4(包含γ4恒定区)抗体；iga抗体包括但不限于iga1(包含α1恒定区)和iga2(包含α2恒定区)抗体；并且igm抗体包括但不限于igm1和igm2。

如本文中使用的，术语“重链”指具有或没有前导序列的至少包含重链可变区的多肽。在一些实施方案中，重链包含重链恒定区的至少部分。如本文中使用的，术语“全长重链”指具有或没有前导序列的包含重链可变区和重链恒定区的多肽。

如本文中使用的，术语“轻链可变区”指包含轻链cdr1、框架(fr)2、cdr2、fr3和cdr3的区域。在一些实施方案中，轻链可变区还包含fr1和/或fr4。

如本文中使用的，术语“轻链恒定区”指包含轻链恒定域cl的区域。非限制性例示性的轻链恒定区包括λ和κ。

如本文中使用的，术语“轻链”指具有或没有前导序列的至少包含轻链可变区的多肽。在一些实施方案中，轻链包含轻链恒定区的至少部分。如本文中使用的，术语“全长轻链”指具有或没有前导序列的包含轻链可变区和轻链恒定区的多肽。

与参照抗体“结合相同表位的抗体”指在竞争测定法中将参照抗体对其抗原的结合阻断50％或更多的抗体，并且相反地，参照抗体在竞争测定法中将抗体对其抗原的结合阻断50％或更多。术语“竞争”在竞争相同表位的抗体的情况中使用时意指通过测试的抗体组织或抑制参照抗体对共同抗原(例如，slamf1)的特异性结合的测定法测定抗体之间的竞争。可以使用许多类型的竞争性结合测定法，例如：固相直接或间接放射免疫测定法(ria)、固相直接或间接酶免疫测定法(eia)、三明治式竞争测定法(见例如stahlietal.,1983,methodsinenzymology9:242-253)；固相直接生物素-亲合素eia(见例如kirklandetal.,1986,j.immunol.137:3614-3619)固相直接标记测定法、固相直接标记的三明治式测定法(见例如harlowandlane,1988,antibodies,alaboratorymanual,coldspringharborpress)；使用1-125标记物的固相直接标记物ria(见例如moreletal.,1988,molec.immunol.25:7-15)；固相直接生物素-亲合素eia(见例如cheung,etal.,1990,virology176:546-552)；和直接标记的ria(moldenhaueretal.,1990,scand.j.immunol.32:77-82)。通常，此类测定法牵涉使用与固体表面结合的纯化抗原或携带这些中任一种(即未标记的测试抗原结合蛋白和经标记的参照抗体)的细胞。通过测定在存在测试抗体的情况中与固体表面或细胞结合的标记物的量测量竞争性抑制。通常，测试抗体过量存在。通过竞争测定法(竞争性抗体)鉴定的抗体包括与参照抗体结合相同表位的抗体和结合相邻表位的抗体，所述相邻表位充分接近由参照抗体结合的表位，从而发生空间位阻。在一些实施方案中，当竞争性抗体过量存在时，它会将参照抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况中，将结合抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更多。

术语“抗原”指能够由选择性结合剂(诸如抗体或其免疫功能性片段)结合，并且另外能够在哺乳动物中使用以生成能够结合所述抗原的抗体的分子或分子部分。抗原可以拥有能够与抗体相互作用的一种或多种表位。

术语“表位”指由选择性结合剂(诸如抗体或其片段)结合的分子的部分。该术语包括能够特异性结合抗体的任何决定簇。表位可以是连续的或不连续的(例如，在多肽中，在多肽序列中彼此不连续但在分子的背景中被抗原结合蛋白结合的氨基酸残基)。在一些实施方案中，表位可以是模拟的，因为它们包含与用于生成抗体的表位相似的三维结构，但包含无一或仅一些在用于生成抗体的表位中找到的氨基酸残基。表位决定簇可以包含分子的化学活性表面聚集，诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特性。

如本文中使用的，“嵌合抗体”指包含来自第一物种(诸如小鼠、大鼠、猕猴等)的至少一个可变区和来自第二物种(诸如人、猕猴、鸡等)的至少一个恒定区的抗体。在一些实施方案中，嵌合抗体包含至少一个小鼠可变区和至少一个人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体包含至少一种猕猴可变区和至少一种人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体的所有可变区均来自第一物种，并且嵌合抗体的所有恒定区均来自第二物种。

如本文中使用的，“人源化抗体”指在非人可变区(诸如小鼠、大鼠、猕猴、鸡等)的框架区域中的至少一个氨基酸已经用来自人可变区的相应氨基酸替换的抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含至少一个人恒定区或其片段。在一些实施方案中，人源化抗体是fab、scfv、(fab’)2等。

如本文中使用的，“植入有cdr的抗体”指人源化抗体，其中已经将第一(非人)物种的一个或多个互补决定区(cdr)植入第二(人)物种的框架区(fr)上。

如本文中使用的，“人抗体”指在人中产生的抗体、在包含人免疫球蛋白基因的非人动物诸如中产生的抗体、和使用体外方法诸如噬菌体展示选择的抗体，其中抗体全集基于人免疫球蛋白序列。

术语“slamf1胞外域”(“slamf1ecd”)包括全长slamf1ecd、slamf1ecd片段和slamf1ecd变体，并且指缺少胞内和跨膜域的slamf1多肽。在一些实施方案中，slamf1ecd能够在t细胞上结合slamf1的结合配偶体。如本文中使用的，术语“全长slamf1ecd”指延伸至胞外域的最后一个氨基酸的slamf1ecd，并且包括胞外域中的天然剪接变体。全长slamf1ecd可以包含或可以不包含信号肽。在一些实施方案中，全长slamf1ecd具有seqidno:3(具有信号肽)或seqidno:4(没有信号肽)的氨基酸序列。如本文中使用的，术语“slamf1ecd片段”指从全长ecd的n和/或c末端删除一个或多个残基的slamf1ecd。slamf1ecd片段可以包含或可以不包含信号肽。如本文中使用的，术语“slamf1ecd变体”指含有氨基酸添加、删除和替代的slamf1ecd。此类变体可以与亲本slamf1ecd是至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％相同的。可以通过相似性得分测量两种多肽的％同一性，所述相似性得分通过在用于测定相似性的缺省背景中使用bestfit程序比较两种多肽的氨基酸序列测定。bestfit使用smithandwaterman,advancesinappliedmathematics2:482-489(1981)的局部同源性算法以寻找两种序列间相似性的最佳区段。在一些实施方案中，slamf1ecd是单体的。在一些实施方案中，slamf1ecd是二聚体的。

不希望受任何特定理论束缚，认为可溶性slamf1ecd或slamf1ecd融合分子会是slamf1活性的拮抗剂，而基底结合的slamf1ecd或slamf1ecd融合分子(诸如与固体表面结合的slamf1ecd或slamf1ecd融合分子)起slamf1模拟物作用(见例如实施例3)。在某些情况中，可溶性slamf1ecd或slamf1ecd融合分子与基底结合的slamf1ecd或slamf1ecd融合分子之间的区别在于基底结合的slamf1ecd或slamf1ecd融合分子交联t细胞表面上的抑制性受体的能力。

术语“slamf1ecd融合分子”指包含slamf1ecd和一种或多种“融合配偶体”的分子。在一些实施方案中，slamf1ecd融合分子能够结合t细胞上的slamf1结合配偶体。在一些实施方案中，slamf1ecd和融合配偶体是共价连接的(“融合的”)。如果融合配偶体也是多肽(“融合配偶体多肽”)，那么slamf1ecd和融合配偶体多肽可以是连续氨基酸序列的部分，并且融合配偶体多肽可以与slamf1ecd的n或c末端连接。在此类情况中，可以自编码序列以单一多肽翻译slamf1ecd和融合配偶体多肽，所述编码序列编码slamf1ecd和融合配偶体多肽两者(“slamf1ecd融合蛋白”)。在一些实施方案中，经由其它手段，诸如例如除肽键外的化学连接共价连接slamf1ecd和融合配偶体。可以使用许多已知的共价连接多肽与其它分子(例如，融合配偶体)的方法。在其它实施方案中，可以经由“接头”融合slamf1ecd和融合配偶体，所述接头由至少一个氨基酸或化学模块构成。非限制性例示性slamf1ecd融合分子具有seqidno:5的序列。一些实施方案中，slamf1ecd融合分子是单体的。在一些实施方案中，slamf1ecd融合分子是二聚体。在一些实施方案中，将融合配偶体与slamf1ecd的n末端连接。

在一些实施方案中，slamf1多肽和融合配偶体是非共价连接的。在一些此类实施方案中，它们可以是例如使用结合对连接的。例示性结合对包括但不限于生物素和亲合素或链霉亲合素、抗体及其抗原等。

例示性融合配偶体包括但不限于免疫球蛋白fc域、清蛋白和聚乙二醇。在seqidno:6至8中显示了非限制性例示性fc域的氨基酸序列。

在一些实施方案中，slamf1ecd氨基酸序列衍生自非人哺乳动物的序列。在此类实施方案中，可以自哺乳动物衍生slamf1ecd氨基酸序列，所述哺乳动物包括但不限于啮齿类(包括小鼠、大鼠、仓鼠)、兔，猿、猫、犬、马、牛、猪、绵羊、山羊、哺乳动物实验动物、哺乳动物农场动物、哺乳动物运动动物、和哺乳动物宠物。掺入非人slamf1ecd的slamf1ecd融合分子称作“非人slamf1ecd融合分子”。与人slamf1ecd融合分子类似，非人融合分子可以包含融合配偶体、任选的接头、和slamf1ecd。此类非人融合分子也可以包括信号肽。“非人slamf1ecd片段”指自全长ecd的n-/或c末端删除一个或多个残基的非人slamf1ecd。“非人slamf1ecd变体”指含有氨基酸添加、删除和替代的slamf1ecd。

在本文中所述的任何实施方案中，slamf1(包括但不限于全长slamf1、slamf1片段、slamf1变体、slamf1ecd和slamf1ecd融合蛋白)还可以包含标签。非限制性例示性标签包括fitc、his6、生物素和本领域中已知的其它标记物和标签。

术语“信号肽”指促进自哺乳动物细胞分泌多肽的位于多肽n末端的氨基酸残基序列。可以在自哺乳动物细胞输出多肽时切割信号肽，形成成熟蛋白质。信号肽可以是天然的或合成的，并且它们可以与附着它们的蛋白质是异源的或同源的。例示性信号肽包括来自slamf1的信号肽和来自异源蛋白质的信号肽。“信号序列”指编码信号肽的多核苷酸序列。

术语“载体”用于描述可以工程化改造以含有可以在宿主细胞中增殖的一种或多种克隆多核苷酸或多核苷酸的多核苷酸。载体可以包括一种或多种以下元件：复制起点、调节感兴趣多肽表达的一种或多种调节序列(诸如例如启动子和/或增强子)和/或一种或多种选择标志物基因(诸如例如抗生素抗性基因和可以在比色测定法中使用的基因，例如β-半乳糖苷酶)。术语“表达载体”指用于在宿主细胞中表达感兴趣的多肽的载体。

“宿主细胞”指可以是或已经是载体或分离的多核苷酸的接受体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。例示性真核细胞包括哺乳动物细胞，诸如灵长类或非灵长类细胞；真菌细胞，诸如酵母；植物细胞；和昆虫细胞。非限制性例示性哺乳动物细胞包括但不限于nso细胞、细胞(crucell)、和293和cho细胞及其衍生物，诸如293-6e和dg44细胞。

如本文中使用的，术语“分离的”指下述分子，所述分子已经与至少一些通常在自然界中与其一起找到的组分分开或者已经与至少一些通常与其一起生成的组分分开。例如，当将多肽与生成它的细胞的至少一些组分分开时，多肽称为“分离的”。在表达后由细胞分泌多肽的情况中，认为自生成它的细胞物理分开含有多肽的上清液是“分离”多肽。类似地，当多核苷酸不是通常在自然界中找到它的较大多核苷酸(诸如例如在dna多核苷酸的情况中，基因组dna或线粒体dna)的部分，或者在rna多核苷酸的情况中自生成它的细胞的至少一些组分分开时，多核苷酸称为“分离的”。如此，宿主细胞内的载体中含有的dna多核苷酸可以称为“分离的”，只要在自然界中在所述载体中找不到多核苷酸。

术语“受试者”和“患者”在本文中可互换用于指人。在一些实施方案中，还提供了治疗其它哺乳动物的方法，所述哺乳动物包括但不限于啮齿类、猿、猫、犬、马、牛、猪、绵羊、山羊、哺乳动物实验室动物、哺乳动物农场动物、哺乳动物运动动物和哺乳动物宠物。在某些情况中，“受试者”或“患者”指需要治疗疾病或病症的受试者或患者。

如本文中使用的，术语“样品”或“患者样品”指自含有要例如基于物理、生物化学、化学和/或生理特征表征和/或鉴定的细胞和/或其它分子实体的感兴趣受试者获得或衍生的材料。例如，短语“疾病样品”及其变体指自预期或已知包含要表征的细胞和/或分子实体的感兴趣受试者获得的任何样品。“组织或细胞样品”指从受试者或患者的组织获得的相似细胞的集合。组织或细胞样品的来源可以是来自新鲜、冷冻和/或保存的器官或组织样品或活组织检查或抽吸物的固体组织；血液或任何血液成分；体液诸如痰液、脑脊液、羊水、腹膜液或间质液；来自受试者的妊娠或发育中任何时间的细胞。组织样品也可以是原代或培养的细胞或细胞系。任选地，自疾病组织/器官获得组织或细胞样品。组织样品可以含有在自然界中不与组织天然混合的化合物，诸如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养物、抗生素等。

如本文中使用的，“参照样品”、“参照细胞”或“参照组织”指自已知或认为未患有使用本发明的方法和组合物鉴定的疾病或状况的来源获得的样品。在一个实施方案中，自使用本发明的组合物或方法鉴定疾病或状况的同一受试者或患者的身体的健康部分获得参照样品、参照细胞或参照组织。在一个实施方案中，自至少一个不作为受试者或患者的个体的身体的健康部分获得参照样品、参照细胞或参照组织，在所述受试者或患者中使用组合物或方法鉴定疾病或状况。在一些实施方案中，先前在形成疾病或状况前或在疾病或状况的较早阶段时自患者获得参照样品、参照细胞或参照组织。

当已经至少在具有状况的患者子集中，或者在状况的一种或多种动物模型中显示状况的特征时，所述状况“先前已经表征为具有[所述特征]”。在一些实施方案中，不必在要用本发明的一种或多种slamf1拮抗剂治疗的患者中测定状况的此类特征。不需要已经测定要使用本方法和/或组合物治疗的特定患者中的特征的存在，以认为患者具有先前已经表征为具有特征的状况。

“病症”或“疾病”是会受益于用本发明的一种或多种slamf1拮抗剂治疗的任何状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物有所讨论的病症的素因的那些病理状况。本文中要治疗的病症的非限制性实例包括癌症。

术语“癌症”在本文中用于指展现出异常高水平的增殖和生长的一组细胞。癌症可能是良性的(也称为良性肿瘤)、恶性前或恶性。癌细胞可以是实体癌细胞或白血病癌细胞。术语“癌症生长”在本文中用于指构成癌症的一种或多种细胞的增殖或生长，其导致癌症的大小或程度的相应增加。

癌症的例子包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体的非限制性例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食管癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管上皮癌、胆囊癌、胃癌、黑素瘤和头和颈癌的各种类型。

“化疗剂”包括在治疗癌症中有用的化学化合物。化疗剂的例子包括但不限于烷化剂类(alkylatingagents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)；磺酸烷基酯类(alkylsulfonates)，诸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)，和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；cc-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成类似物，kw-2189和cb1-tm1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogenmustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlornaphazine)，胆磷酰胺(cholophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)，美法仑(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥胆甾醇(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1i和加利车霉素ωi1(见例如angewchem.intl.ed.engl.33:183-186(1994))；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicina；二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysins)，放线菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素(bleomycin)，放线菌素c(cactinomycin)，carabicin，洋红霉素(caminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycinis)，放线菌素d(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-l-正亮氨酸，多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星，氰基吗啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素(mitomycin)诸如丝裂霉素c，霉酚酸(mycophenolicacid)，诺拉霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(porfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链佐星(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(fluorouracil)(5-fu)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，双脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)，丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)，表硫雄醇(epitiostanol)，美雄烷(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinicacid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptiniumacetate)；epothilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamnol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(jhsnaturalproducts,eugene,or)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是t-2毒素，疣孢菌素(verracurin)a，杆孢菌素(roridin)a和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“ara-c”)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如帕利他赛(paclitaxel)(bristol-myerssquibboncology,princeton,n.j.)，无克列莫佛(cremophor)的，帕利他赛的清蛋白改造的纳米颗粒剂型(americanpharmaceuticalpartners,schaumberg,illinois)和泰索帝多西他赛(doxetaxel)(poulencrorer,antony,france)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；xeloda；伊本膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)(camptosar,cpt-11)(包括伊立替康与5-fu和甲酰四氢叶酸的治疗方案)；拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；类视黄酸(retinoids)，诸如视黄酸(retinoicacid)；卡培他滨(capecitabine)；考布他汀(combretastatin)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)(lv)；奥沙利铂，包括奥沙利铂治疗方案(folfox)；诱导细胞增殖的pkc-α、raf、h-ras、egfr(例如厄洛替尼(erlotinib))和vegf-a抑制剂及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物。

进一步的非限制性例示性化疗剂包括起调节或抑制激素对癌症作用的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类(serm)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，ly117018，奥那司酮(onapristone)，和托瑞米芬(toremifine)；抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)，依西美坦(exemestane)；福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，伏罗唑(vorozole)，来曲唑(letrozole)；阿那曲唑(anastrozole)和抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，比卡米特(bicalutamide)，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号传导途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如pkc-α，ralf和h-ras；核酶，诸如vegf表达抑制剂(例如核酶)和her2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如疫苗，疫苗，和疫苗；ril-2；拓扑异构酶1抑制剂，rmrh；和及任何上述药剂的药学可接受盐，酸或衍生物。

“抗血管发生剂”或“血管发生抑制剂”指或直接或间接抑制血管发生(angiogenesis)、血管生成(vasculogenesis)、或不想要的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸(包括例如抑制性rna(rnai或sirna))、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体、或其偶联物或融合蛋白。应当理解，抗血管发生剂包括那些结合并阻断血管发生因子或其受体的血管发生活性的药剂。例如，抗血管发生剂是血管发生剂的抗体或其它拮抗剂，例如vegf-a的抗体(例如贝伐单抗)、vegf-a受体(例如kdr受体或flt-1受体)的抗体、抗pdgfr抑制剂诸如(imatinibmesylate)、阻断vegf受体信号传导的小分子(例如ptk787/zk2284、su6668、(sunitinibmalate)、amg706、或那些记载于例如国际专利申请wo2004/113304的)。抗血管发生剂还包括天然血管发生抑制剂，例如血管他丁(angiostatin)、内皮他丁(endostatin)等。参见例如klagsbrunandd’amore(1991)annu.rev.physiol.53:217-39；streitanddetmar(2003)oncogene22:3172-3179(例如列举恶性黑素瘤中抗血管发生疗法的表3)；ferrara&alitalo(1999)naturemedicine5(12):1359-1364；tonini等(2003)oncogene22:6549-6556(例如列举已知抗血管发生因子的表2)；sato(2003)int.j.clin.oncol.8:200-206(例如列举临床试验中所使用的抗血管发生剂的表1)。

如本文中使用的，“细胞抑制剂”指在体外或在体内抑制细胞(诸如表达vegf的细胞)生长的化合物或组合物。如此，细胞抑制剂可以是显著降低处于s期的细胞(诸如表达vegf的细胞)百分比的药剂。细胞抑制剂的例子包括但不限于阻断细胞周期进展(处于除了s期外的位置)的药剂，诸如诱导g1停滞和m期停滞的药剂。经典的m期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、紫杉烷类(taxanes)、和拓扑异构酶ii抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。某些阻滞g1的药剂也溢出进入s期停滞，例如dna烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼松(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、顺铂(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-c。更多信息可参见mendelsohn和israel编，《themolecularbasisofcancer》，第1章，题为“cellcycleregulation,oncogenes,andantieioplasticdrugs”，murakaini等，w.b.saunders，philadelphia，1995，例如第13页。紫杉烷类(帕利他塞(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(rhone-poulencrorer)是帕利他塞(bristol-myerssquibb)的半合成类似物。帕利他塞和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。

术语“抗新生物组合物”指包含至少一种活性治疗剂的可用于治疗癌症的组合物。治疗剂的例子包括但不限于例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、放射疗法中所使用的药剂、抗血管发生剂、癌症免疫治疗剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和其它用于治疗癌症的药剂诸如抗her-2抗体、抗cd20抗体、表皮生长因子受体(egfr)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)、her1/egfr抑制剂(例如厄洛替尼(erlotinib)血小板衍生生长因子抑制剂(例如(imatinibmesylate))、cox-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib))、干扰素、ctla4抑制剂(例如抗ctla抗体ipilimumab)、pd-1抑制剂(例如抗pd1抗体，bms-936558)、pdl1抑制剂(例如抗pdl1抗体，mpdl3280a)、pdl2抑制剂(例如抗pdl2抗体)、tim3抑制剂(例如抗tim3抗体)、细胞因子、结合下列一种或多种靶物的拮抗剂(例如中和性抗体)：erbb2、erbb3、erbb4、pdgfr-beta、blys、april、bcma、pd-1、pdl1、pdl2、ctla4、tim3、或vegf受体、trail/apo2、和其它生物活性和有机化学剂等。本发明中还包括其组合。在一些实施方案中，抗新生物组合物包含至少一种免疫治疗剂，其包含至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含免疫刺激分子(包括共刺激分子)的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含免疫抑制分子，包括共抑制分子的拮抗剂。下文讨论了牵涉免疫刺激剂的别的实施方案。

如本文中使用的，“治疗/处理”涵盖在哺乳动物(包括人)中针对疾病(在本文中也称为“病症”或“状况”)的治疗剂的任何施用或应用，并且包括抑制疾病或疾病的进展、抑制或减缓疾病或其进展、阻滞其形成、部分或完全缓解疾病、部分或完全缓解疾病的一种或多种症状、或恢复或修复丧失、缺少、或缺陷的功能；或刺激无效的过程。

术语“有效量”或“治疗有效量”指有效治疗受试者中的疾病或病症的药物量。在一些实施方案中，有效量指在必需的剂量和时间上有效实现期望的治疗或预防结果的量。本发明的slamf1拮抗剂的治疗有效量可以随诸如个体的疾病状态、年龄、性别、和重量、和拮抗剂在个体中引发期望的响应的能力等因素而变化。治疗有效量涵盖治疗有益效果超过slamf1拮抗剂的任何毒性或不利效果的量。

“预防有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的预防效果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病发作之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量低于治疗有效量。

“药学可接受载体”指与治疗剂一起使用的本领域中常规的无毒性固体、半固体、或液体填充剂、稀释剂、包囊材料、配制辅助剂、或载体，其一起构成对受试者施用的“药物组合物”。药学可接受的载体在采用的剂量和浓度对接受体是无毒的，并且与配制剂的其它成分是相容的。药学可接受载体适合于采用的配制剂。例如，若要口服施用治疗剂，则载体可以是凝胶胶囊。若要皮下施用治疗剂，则理想地，载体对皮肤不是过敏的，并且不引起注射部位反应。

“制品”是包含至少一种试剂，例如用于治疗疾病或病症的药物，或用于特异性检测本文中描述的生物标志物的探针的任何制品(例如包装或容器)或试剂盒。在一些实施方案中，以用于实施本文中描述的方法的单元宣传、分配或出售制品或试剂盒。

治疗性组合物和方法

治疗疾病的方法

提供了slamf1拮抗剂以在治疗人和其它哺乳动物的方法中使用。提供了治疗疾病的方法，其包括对人和其它哺乳动物施用slamf1拮抗剂。

治疗癌症的方法

在一些实施方案中，提供了用于治疗或预防癌症的方法，其包括对需要此类治疗的受试者施用有效量的slamf1拮抗剂。

本发明人已经将slamf1鉴定为活化的t细胞的阻抑物。slamf1是活化的cd4+和cd8+t细胞上表达的，并且它属于具有两个胞外免疫球蛋白域的9种蛋白质的家族，其中大多数具有基于酪氨酸的胞内免疫受体转变基序(itsm)。不希望受任何特定理论束缚，slamf1可以与t细胞相互作用，导致在t细胞中诱导无活性状态(例如，无变应性或耐受化状态)的抑制性信号。因此，例如用抑制性抗体或可溶性slamf1抑制slamf1活性可以增强免疫介导的癌细胞杀伤。靶向分子包括结合slamf1和阻断slamf1活性的抗体和slamf1胞外域(ecd)和slamf1ecd融合蛋白，包括单体slamf1ecd和slamf1ecd融合蛋白。

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其中所述方法包括对具有癌症的受试者施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，提供了slamf1拮抗剂用于治疗癌症的用途。本文提供了可以用slamf1拮抗剂治疗的非限制性示例性癌症，包括癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体的非限制性例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食管癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管上皮癌、胆囊癌、胃癌、黑素瘤和头和颈癌的各种类型。在一些实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌或肺鳞状细胞癌。在一些实施方案中，白血病是急性髓样白血病或慢性淋巴细胞性白血病。在一些实施方案中，乳腺癌是侵入性乳腺癌。在一些实施方案中，卵巢癌是重度卵巢囊腺癌。在一些实施方案中，肾癌是肾的肾透明细胞癌。在一些实施方案中，结肠癌是结肠腺癌。在一些实施方案中，膀胱癌是膀胱的膀胱上皮癌。

在一些实施方案中，slamf1拮抗剂是slamf1抗体。

抑制对活化的t细胞阻抑的方法

在一些实施方案中，提供了抑制对活化的t细胞的阻抑的方法，其包括使包含活化的t细胞的组织与slamf1拮抗剂接触。在一些此类实施方案中，提供了抑制对活化的t细胞的阻抑的方法，其中活性的t细胞由slamf1阻抑。

本发明人已经将slamf1鉴定为活化的t细胞的阻抑物。slamf1是活化的cd4+和cd8+t细胞上表达的，并且它属于具有两个胞外免疫球蛋白域的9种蛋白质的家族，其中大多数具有基于酪氨酸的胞内免疫受体转变基序(itsm)。不希望受任何特定理论束缚，slamf1可以与t细胞相互作用，导致在t细胞中诱导无活性状态(例如，无变应性或耐受化状态)的抑制性信号。因此，例如用抑制性抗体或可溶性slamf1抑制slamf1活性可以增强免疫介导的癌细胞杀伤。靶向分子包括结合slamf1和阻断slamf1活性的抗体和slamf1胞外域(ecd)和slamf1ecd融合蛋白，包括单体slamf1ecd和slamf1ecd融合蛋白。

在一些实施方案中，使包含活化的t细胞的组织与slamf1拮抗剂接触。在一些实施方案中，使活化的t细胞自身与slamf1拮抗剂接触。在一些实施方案中，活化的t细胞在活化的t细胞受到slamf1阻抑的受试者中。

在一些实施方案中，slamf1拮抗剂是slamf1抗体。

施用路径和载体

在多个实施方案中，可以皮下或静脉内施用slamf拮抗剂。在一些实施方案中，可以通过各种路径在体内施用slamf1拮抗剂，所述路径包括但不限于口服、动脉内、胃肠外、鼻内、肌内、心内、心室内、气管内、含服、直肠、腹膜内、通过吸入、皮内、表面、透皮和鞘内，或以其它方式，例如通过植入。可以将主题组合物配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂；包括但不限于片剂、胶囊、粉末、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、灌肠剂、注射剂、吸入剂和气溶胶。在一些实施方案中，使用基因疗法递送slamf1拮抗剂。作为非限制性例子，可以将编码slamf拮抗剂的核酸分子包被至金微粒上，并且通过颗粒轰击装置或“基因枪”皮内递送，例如如文献(见例如tangetal.,nature356:152-154(1992))中所述。

在多个实施方案中，在具有极其多种药学可接受载体的配制剂中提供包含slamf拮抗剂的组合物(参见例如gennaro,remington:thescienceandpracticeofpharmacywithfactsandcomparisons:drugfactsplus,20thed.(2003)；anseletal.,pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems,7^thed.,lippencottwilliamsandwilkins(2004)；kibbeetal.,handbookofpharmaceuticalexcipients,3^rded.,pharmaceuticalpress(2000))。各种药学可接受的载体(其包括媒介物、佐剂和稀释剂)是可用的。此外，各种药学可接受的辅助物质，诸如ph调节和缓冲剂、张力调节剂、稳定剂、润湿剂等也是可用的。非限制性示例性载体包括盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其组合。

在多个实施方案中，可以配制包含slamf拮抗剂的组合物以用于注射(包括皮下施用)，其通过在水性或非水性溶剂，诸如植物油或其它油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸酯或丙二醇中溶解、悬浮或乳化它们；如果需要的话，以及常规添加剂，诸如增溶剂、等张剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂进行。在多个实施方案中，可以配制组合物以用于吸入，例如使用加压的可接受的推进剂，诸如二氯二氟甲烷、丙烷，氮气等。在多个实施方案中，也可以将组合物配制成持续释放微胶囊，诸如具有可生物降解的或不可生物降解的聚合物。非限制性例示性可生物降解配制剂包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。非限制性例示性的不可生物降解的配制剂包括聚甘油脂肪酸酯。生成此类配制剂的某些方法记载于例如ep1125584a1中。

还提供包含一个或多个容器的药物剂量包，每个容器含有一剂或多剂slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，提供了单位剂量，其中单位剂量含有预定量的包含slamf拮抗剂的组合物，其具有或没有一种或多种另外的药剂。在一些实施方案中，在一次性预填充注射用注射器中供应此类单位剂量。在多个实施方案中，单位剂量中含有的组合物可以包含盐水、蔗糖等；缓冲剂，诸如磷酸盐等；和/或在稳定且有效的ph范围内配制。或者，在一些实施方案中，可以以冻干粉末提供组合物，所述冻干粉末可以在添加合适的液体，例如无菌水时重建。在一些实施方案中，组合物包含一种或多种抑制蛋白质聚集的物质，包括但不限于蔗糖和精氨酸。在一些实施方案中，本发明的组合物包含肝素和/或蛋白聚糖。

以有效治疗或预防具体适应症的量施用药物组合物。治疗有效量通常取决于受治疗的受试者的体重、他或她的身体或健康状况、要治疗的状况的广泛性、或治疗的受试者的年龄。在一些实施方案中，可以以在每剂约50μg/kg体重至约50mg/kg体重的范围中的量施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，可以以每剂约100μg/kg体重至约50mg/kg体重的范围中的量施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，可以以在每剂约100μg/kg体重至约20mg/kg体重的范围中的量施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，可以以在约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重的范围中的量施用slamf1拮抗剂。

在一些实施方案中，可以以每剂约10mg至约1,000mg的范围中的量施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，可以以在每剂约20mg至约500mg的范围中的量施用slamf1。在一些实施方案中，可以以在每剂约20mg至约300mg的范围中的量施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，可以以在每剂约20mg至约200mg的范围中的量施用slamf1拮抗剂。

可以根据需要对受试者施用slamf1拮抗剂组合物。在一些实施方案中，对受试者施用有效剂量的slamf1拮抗剂一次或多次。在多个实施方案中，每月一次、每月少于一次，诸如例如每两个月、每三个月、每六个月对受试者施用有效剂量的slamf拮抗剂。在其它实施方案中，每月超过一次，诸如例如每两周、每周、每周两次、每周三次、每天或每天多次施用有效剂量的slamf拮抗剂。至少一次对受试者施用有效剂量的slamf拮抗剂。在一些实施方案中，可以多次施用有效剂量的slamf拮抗剂，包括持续至少一个月、至少六个月、或至少一年的时段。在一些实施方案中，根据需要对受试者施用slamf1拮抗剂以缓解状况的一种或多种症状。

联合疗法

可以与其它生物活性物质或用于治疗疾病的其它治疗规程组合对有此需要的受试者施用依照本发明的slamf1拮抗剂，包括其任何功能性片段。例如，可以单独施用或与其它治疗模式一起施用slamf1拮抗剂。它们可以在其它治疗模式(诸如放射疗法)之前、基本上同时进行或之后提供。

为了治疗癌症，可以与一种或多种抗癌剂，诸如化疗剂、生长抑制剂、抗血管发生剂或抗新生物组合物联合施用slamf1拮抗剂。本文中在“定义”下提供了可以与本发明的一种或多种slamf1拮抗剂组合使用的化疗剂、生长抑制剂、抗血管发生剂或抗新生物组合物的非限制性实例。

在一些实施方案中，与一种或多种免疫刺激剂结合施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含免疫刺激分子(包括共刺激分子)的激动剂，而在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含免疫抑制分子(包含共抑制分子)的拮抗剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含免疫细胞(诸如t细胞)上找到的免疫刺激分子(包括共刺激分子)的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含免疫细胞(诸如t细胞)上找到的免疫抑制分子(包括共抑制分子)的拮抗剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含牵涉先天性免疫的细胞(诸如nk细胞)上找到的免疫刺激分子(包括共刺激分子)的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含牵涉先天性免疫的细胞(诸如nk细胞)上找到的免疫抑制分子(包括共抑制分子)的拮抗剂。在一些实施方案中，组合增强治疗的受试者中的抗原特异性t细胞应答和/或增强受试者中的先天性免疫应答。在一些实施方案中，与仅施用slamf1拮抗剂或免疫刺激剂相比，组合导致动物癌症模型，诸如异种移植物模型中改善的抗肿瘤响应。在一些实施方案中，与仅施用slamf1拮抗剂或免疫刺激剂相比，组合导致动物癌症模型，诸如异种移植物模型中的协同响应。

在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含t细胞活化抑制剂的拮抗剂，而在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含t细胞活化刺激物的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含以下各项的拮抗剂：ctla4、pd-1、pdl1、pdl2、lag-3、半乳凝素1、半乳凝素9、ceacam-1、btla、cd25、cd69、tigit、cd113、gpr56、vista、b7-h3、b7-h4、2b4、cd48、garp、pd1h、lair1、tim1、tim3、tim4、ilt4、il-6、il-10、tgfβ、vegf、kir、腺苷a2a受体、pi3kδ、或ido。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含以下各项的激动剂：b7-1、b7-2、cd28、4-1bb(cd137)、4-1bbl、icos、icos-l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd27、cd40、cd40l、dr3、cd28h、il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、ifnα、sting或toll样受体激动剂，诸如tlr2/4激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含结合b7膜结合蛋白家族成员，诸如b7-1、b7-2、b7-h2(icos-l)、b7-h3、b7-h4、b7-h5(vista)、andb7-h6的药剂.在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含结合tnf受体家族成员的药剂或或结合tnf受体家族成员诸如cd40、cd40l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd70、cd27l、cd30、cd30l、4-1bbl、cd137(4-1bb)、trail/apo2-l、trailr1/dr4、trailr2/dr5、trailr3、trailr4、opg、rank、rankl、tweakr/fn14、tweak、baffr、edar、xedar、eda1、eda2、taci、april、bcma、ltβr、light、der3、hvem、vegl/tl1a、tramp/dr3、tnfr1、tnfβ、tnfr2、tnfα、1β2、fas、fasl、relt、dr6、troy、或ngfβ的共刺激或共抑制分子。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含结合或抑制抑制t细胞活化的细胞因子诸如il-6、il-10、tgfβ、vegf的药剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含趋化因子，诸如cxcr2、cxcr4、ccr2、或ccr4的拮抗剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含刺激t细胞活化的细胞因子，诸如il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、和ifnα的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含抗体。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂可以包含疫苗，诸如间皮蛋白(mesothelin)靶向性疫苗或减弱的李斯特氏菌(listeria)癌症疫苗诸如crs-207。可以将上述拮抗剂、激动剂、和结合剂之任一种或多种与本文中描述的任一种或多种抗slamf1抗体组合。

在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含cd40激动剂，任选地与如上文列出的至少一种其它免疫刺激剂组合。在一些实施方案中，cd40激动剂是抗体。在一些实施方案中，cd40激动剂是抗cd40抗体。在一些实施方案中，抗cd40抗体包含选自下组的抗体的cdr：cp-870,893；达西珠单抗(dacetuzumab)；sea-cd40；adc-1013；ro7009789；和chilob7/4。在一些实施方案中，抗cd40抗体包含选自下组的抗体的重链和轻链可变区：cp-870,893；达西珠单抗；sea-cd40；adc-1013；ro7009789；和chilob7/4。在一些实施方案中，抗cd40抗体是选自下组的抗体：cp-870,893；达西珠单抗；sea-cd40；adc-1013；ro7009789；和chilob7/4。在一些实施方案中，cd40激动剂是重组cd40l。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含cd40激动剂和来自上文描述的任何免疫刺激剂的至少一种别的免疫刺激剂。例如，可以组合任一种或多种上述免疫刺激剂与本文中描述的任一种或多种slamf1拮抗剂以及与cd40激动剂，诸如cd40激动剂抗体或重组cd40l，诸如上文描述的任一种抗cd40抗体。

在一些实施方案中，同时或序贯施用slamf1拮抗剂和至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，同时施用slamf1拮抗剂和至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，在施用slamf1拮抗剂前施用一剂或多剂至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，受试者在施用slamf1拮抗剂前接受用至少一种免疫刺激剂的疗法的完整过程。在一些实施方案中，在用至少一种免疫刺激剂的治疗的第二过程期间施用slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，受试者在施用slamf1拮抗剂前接受至少一剂、至少两剂、至少三剂、或至少四剂至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，与slamf1拮抗剂同时施用至少一剂至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，在施用至少一种免疫刺激剂前施用一剂或多剂slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，受试者在施用至少一种免疫刺激剂前接受至少两剂、至少三剂、或至少四剂slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，与至少一种免疫刺激剂同时施用至少一剂slamf1拮抗剂。

在一些实施方案中，提供了组合物，其包含slamf1拮抗剂和至少一种免疫刺激剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含t细胞活化抑制剂的拮抗剂，而在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含t细胞活化刺激物的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含以下各项的拮抗剂：ctla4、pd-1、pdl1、pdl2、lag-3、半乳凝素1、半乳凝素9、ceacam-1、btla、cd25、cd69、tigit、cd113、gpr56、vista、b7-h3、b7-h4、2b4、cd48、garp、pd1h、lair1、tim1、tim3、tim4、ilt4、il-6、il-10、tgfβ、vegf、kir、腺苷a2a受体、pi3kδ、或ido。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含以下各项的激动剂：b7-1、b7-2、cd28、4-1bb(cd137)、4-1bbl、icos、icos-l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd27、cd40、cd40l、dr3、cd28h、il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、ifnα、sting或toll样受体激动剂，诸如tlr2/4激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含结合b7膜结合蛋白家族成员，诸如b7-1、b7-2、b7-h2(icos-l)、b7-h3、b7-h4、b7-h5(vista)、andb7-h6的药剂.在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含结合tnf受体家族成员的药剂或或结合tnf受体家族成员诸如cd40、cd40l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd70、cd27l、cd30、cd30l、4-1bbl、cd137(4-1bb)、trail/apo2-l、trailr1/dr4、trailr2/dr5、trailr3、trailr4、opg、rank、rankl、tweakr/fn14、tweak、baffr、edar、xedar、eda1、eda2、taci、april、bcma、ltβr、light、der3、hvem、vegl/tl1a、tramp/dr3、tnfr1、tnfβ、tnfr2、tnfα、1β2、fas、fasl、relt、dr6、troy、或ngfβ的共刺激或共抑制分子。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含结合或抑制抑制t细胞活化的细胞因子诸如il-6、il-10、tgfβ、vegf的药剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含刺激t细胞活化的细胞因子，诸如il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、和ifnα的激动剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含趋化因子，诸如cxcr2、cxcr4、ccr2、或ccr4的拮抗剂。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂包含抗体。在一些实施方案中，至少一种免疫刺激剂可以包含疫苗，诸如间皮蛋白靶向性疫苗或减弱的李斯特氏菌癌症疫苗诸如crs-207。

在一些实施方案中，组合物包含与本文中描述的任一种或多种slamf1拮抗剂组合的上述拮抗剂、激动剂和结合剂之任一种或多种。组合物可以包含在分开的容器或区室中的每种治疗剂，或者备选可以包含混合在一起的两种或更多种治疗剂。

slamf1抗体

在一些实施方案中，提供了抑制slamf1活性的抗体。在一些实施方案中，slamf1活性是slamf1介导的对活化的t细胞的阻抑。在一些此类实施方案中，抗体是slamf1抗体。在一些实施方案中，slamf1抗体结合slamf1胞外域(ecd)。在一些实施方案中，slamf1抗体抑制slamf1介导的信号传导。

在一些实施方案中，slamf1抗体对slamf1具有≤1μm、≤100nm、≤10nm、≤1nm、≤0.1nm、≤0.01nm、或≤0.001nm(例如10^-8m或更小，例如10^-8m至10^-13m，例如10^-9m至10^-13m)的解离常数(kd)。

在一些实施方案中，抗体结合来自多种物种的slamf1。例如，在一些实施方案中，抗体结合人slamf1，并且还结合来自选自小鼠、大鼠、犬、豚鼠和猴的至少一种哺乳动物的slamf1。

在一些实施方案中，提供了多特异性抗体。在一些实施方案中，提供了双特异性抗体。非限制性例示性双特异性抗体包括包含第一臂和第二臂的抗体，所述第一臂包含结合第一抗原的重链/轻链组合，所述第二臂包含结合第二抗原的重链/轻链组合。进一步非限制性例示性多特异性抗体是双重可变域抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体包含抑制slamf1活性的第一臂和刺激t细胞的第二臂。在一些实施方案中，第二臂结合pd-1或pd-l1。在一些实施方案中，第一臂结合slamf1。

在一些实施方案中，提供了抑制slamf1活性的单链抗体，诸如骆驼抗体。

在一些实施方案中，提供了抑制slamf1活性的纤连蛋白iii型域抗体，例如adnectins^tm。

人源化抗体

在一些实施方案中，slamf1抗体是人源化抗体。人源化抗体可用作治疗分子，因为人源化抗体降低或消除对非人抗体的人免疫应答(诸如人抗小鼠抗体(hama)应答)，其可以导致对抗体治疗剂的免疫应答，和治疗剂的降低的效率。

可以通过任何方法使抗体人源化。非限制性例示性的人源化方法包括记载于例如美国专利no.5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；6,180,370；jonesetal.,nature321:522-525(1986)；riechmannetal.,nature332:323-27(1988)；verhoeyenetal.,science239:1534-36(1988)；以及美国公开文本no.us2009/0136500的方法。

如上文记录的，人源化抗体是下述抗体，其中非人可变区的框架区中的至少一个氨基酸已经用来自人框架区中相应位置的氨基酸替换。在一些实施方案中，用来自一个或多个人框架区中的一个或多个相应位置的氨基酸替换非人可变区的框架区中的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少15个，或至少20个氨基酸。

在一些实施方案中，用于替代的一些相应的人氨基酸来自不同人免疫球蛋白基因的框架区。也就是说，在一些此类实施方案中，一个或多个非人氨基酸可以用来自第一人抗体的人框架区的相应氨基酸替换或由第一人免疫球蛋白基因编码，一个或多个非人氨基酸可以用来自第二人抗体的人框架区的相应氨基酸替换或由第二人免疫球蛋白基因编码，一个或多个非人氨基酸可以用来自第三人抗体的人框架区的相应氨基酸替换或由第三人免疫球蛋白基因编码，等等。此外，在一些实施方案中，用于在单一框架区(例如fr2)中的替代的所有相应的人氨基酸不需要来自相同的人框架。然而，在一些实施方案中，用于替代的所有相应的人氨基酸来自相同的人抗体或由相同的人免疫球蛋白基因编码。

在一些实施方案中，通过用相应的人框架区替换一个或多个整个框架区域来将抗体人源化。在一些实施方案中，选择与替换的非人框架区域具有最高同源性水平的人框架区。在一些实施方案中，此类人源化抗体是植入有cdr的抗体。

在一些实施方案中，在cdr植入后，将一个或多个框架氨基酸变回小鼠框架区中相应的氨基酸。在一些实施方案中，做出此类“回复突变”以保留一个或多个小鼠框架氨基酸，其表现出对一个或多个cdr的结构有贡献和/或可以牵涉抗原接触和/或表现出牵涉抗体的整体结构完整性。在一些实施方案中，在cdr植入后对抗体的框架区做出10个或更少、9个或更少、9个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少，1个或0个回复突变。

在一些实施方案中，人源化抗体还包含人重链恒定区和/或人轻链恒定区。

嵌合抗体

在一些实施方案中，slamf1抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，slamf1抗体包含至少一种非人可变区和至少一种人恒定区。在一些此类实施方案中，slamf1抗体的所有可变区都是非人可变区，并且slamf1抗体的所有恒定区都是人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体的一个或多个可变区是小鼠可变区。嵌合抗体的人恒定区不需要与它替换的非人恒定区(如果有的话)是相同同种型的。在美国专利no.4,816,567；及morrisonetal.proc.natl.acad.sci.usa81:6851-55(1984)中讨论了嵌合抗体。

人抗体

在一些实施方案中，slamf1抗体是人抗体。可以通过任何合适的方法制备人抗体。非限制性例示性方法包括在包含人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中生成人抗体。见例如jakobovitsetal.,proc.natl.acad.sci.usa90:2551-55(1993)；jakobovitsetal.,nature362:255-8(1993)；lonbergetal.,nature368:856-9(1994)；及美国专利no.5,545,807；6,713,610；6,673,986；6,162,963；5,545,807；6,300,129；6,255,458；5,877,397；5,874,299；和5,545,806。

非限制性例示性方法还包括使用噬菌体展示文库生成人抗体。参见例如hoogenboometal.,j.mol.biol.227:381-8(1992)；marksetal.,j.mol.biol.222:581-97(1991)；及pct公开文本no.wo99/10494。

人抗体恒定区

在一些实施方案中，本文中所述的人源化、嵌合或人抗体包含一个或多个人恒定区。在一些实施方案中，人重链恒定区是选自iga、igg和igd的同种型的人重链恒定区。在一些实施方案中，人轻链恒定区是选自κ和λ的同种型的人轻链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗体包含人igg恒定区，例如人igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方案中，抗体或fc融合配偶体包含c237s突变，例如在igg1恒定区中。见例如seqidno:6。在一些实施方案中，本文中所述的抗体包含人igg2重链恒定区。在一些此类实施方案中，igg2恒定区包含p331s突变，如美国专利no.6,900,292中描述。在一些实施方案中，本文中所述的抗体包含人igg4重链恒定区。在一些此类实施方案中，本文中所述的抗体包含人igg4恒定区中的s241p突变。见例如angaletal.mol.immunol.30(1):105-108(1993)。在一些实施方案中，本文中所述的抗体包含人igg4恒定区和人κ轻链。

重链恒定区的选择可以决定抗体是否会在体内具有效应器功能。在一些实施方案中，此类效应器功能包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)，并且可以导致与抗体结合的细胞的杀伤。通常，包含人igg1或igg3重链的抗体具有效应器功能。

在一些实施方案中，效应器功能是不期望的。例如，在一些实施方案中，效应器功能在炎性状况和/或自身免疫性性疾病的治疗中可以是不想要的。在一些此类实施方案中，选择或工程化改造人igg4或igg2重链恒定区。在一些实施方案中，igg4恒定区包含s241p突变。

抗体的例示性性质

slamf1抗体的例示性性质

在一些实施方案中，slamf1抗体结合slamf1并抑制slamf1介导的信号传导。在一些实施方案中，slamf1抗体抑制slamf1介导的对活化的t细胞的阻抑。在一些实施方案中，slamf1抗体抑制slamf1介导的对活化的cd3+t细胞的阻抑。在一些实施方案中，slamf1抗体抑制slamf1介导的对il-2活化的cd3+t细胞的阻抑。在一些实施方案中，slamf1抗体以小于50nm、小于20nm、小于10nm或小于1nm的结合亲和力(kd)结合slamf1。在一些实施方案中，slamf1抗体与无关的非slamf1蛋白的结合程度小于抗体与slamf1的结合的约10％，如通过放射免疫测定法(ria)测量的。在一些实施方案中，slamf1抗体结合在来自不同物种的slamf1间保守的slamf1表位。在一些实施方案中，slamf1抗体结合与结合人slamf1的人或人源化的slamf1抗体结合相同的表位。

抗体缀合物

在一些实施方案中，slamf1是与标记物缀合的。如本文中使用的，标记物是促进抗体检测和/或促进与抗体结合的分子的检测的模块。非限制性例示性标记物包括但不限于放射性同位素、荧光基团、酶促基团、化学发光基团、生物素、表位标签、金属结合标签等。本领域技术人员可以根据预期应用选择合适的标记物。

在一些实施方案中，使用体外化学方法将标记物与抗体缀合。缀合的非限制性例示性化学方法是本领域中已知的，并且包括可购自例如thermoscientificlifescienceresearchproduces(formerlypierce；rockford,il)、prozyme(hayward,ca)、sacriantibodyservices(calgary,canada)、abdserotec(raleigh,nc)等的服务、方法和/或试剂。在一些实施方案中，当标记物是多肽时，可以与至少一个抗体链自相同表达载体表达标记物，以产生包括与抗体链融合的标记物的多肽。

信号肽

为了使一些分泌性蛋白质大量表达和分泌，来自异源蛋白质的信号肽可以是期望的。采用异源信号肽可以是有利的，原因在于随着在分泌过程期间在er中除去信号肽，得到的成熟多肽可以保持不变。可以需要添加异源信号肽来表达和分泌一些蛋白质。

非限制性例示性信号肽序列记载于于例如由新加坡国立大学生物化学系维护的在线信号肽数据库。见chooetal.,bmcbioinformatics,6:249(2005)；及pct公开文本no.wo2006/081430。

共翻译和翻译后修饰

在一些实施方案中，例如通过糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割或与抗体分子或其它细胞配体的连接在翻译期间或之后差异修饰多肽诸如slamf1。可以通过已知技术实施许多化学修饰之任一种，所述技术包括但不限于通过溴化氰、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、v8蛋白酶的特异性化学裂解；nabh4；乙酰化；甲酰化；氧化；还原；和/或在存在衣霉素的情况中的代谢合成。

本发明涵盖的额外的翻译后修饰包括例如n-连接或o-连接的碳水化合物链；加工n端或c端末端；将化学模块与氨基酸主链连接；n-连接或o-连接的碳水化合物链的化学修饰；以及由于原核宿主细胞表达所致的n端甲硫氨酸残基的添加或缺失。

编码slamf1拮抗剂的核酸分子

提供了核酸分子，其中核酸分子包含编码本文中所述的抗体，诸如slamf1的一条或多条链的多核苷酸。在一些实施方案中，核酸分子包含编码本文中所述的抗体的重链或轻链的多核苷酸。在一些实施方案中，核酸分子包含编码本文中所述的抗体的重链的多核苷酸和编码轻链的多核苷酸两者。在一些实施方案中，第一核酸分子包含编码重链的第一多核苷酸，并且第二核酸分子包含编码轻链的第二多核苷酸。

在一些此类实施方案中，自一个核酸分子或者自两个分开的核酸分子以两个分开的多肽表达重链和轻链。在一些实施方案中，诸如当抗体是scfv时，单一多核苷酸编码包含连接在一起的重链和轻链两者的单一多肽。

在一些实施方案中，编码本文中所述的抗体的重链或轻链的多核苷酸包含编码前导序列的核苷酸序列，所述前导序列在翻译时位于重链或轻链的n末端。如上文讨论的，前导序列可以是天然重链或轻链前导序列，或者可以是另一种异源前导序列。

可以使用本领域中常规的重组dna技术构建核酸分子。在一些实施方案中，核酸分子是适合于在选择的宿主细胞中表达的表达载体。

多肽表达和生成

载体

提供了包含编码本文中所述的抗体的重链和/或轻链的多核苷酸的载体。此类载体包括但不限于dna载体、噬菌体载体、病毒载体、逆转录病毒载体等。在一些实施方案中，载体包含编码重链的第一多核苷酸序列和编码轻链的第二多核苷酸序列。在一些实施方案中，自载体以两个分开的多肽表达重链和轻链。在一些实施方案中，以单一多肽的部分(诸如例如当抗体是scfv时)重链和轻链。

在一些实施方案中，第一载体包含编码重链的多核苷酸，并且第二载体包含编码轻链的多核苷酸。在一些实施方案中，将第一载体和第二载体以相似的量(诸如相似的摩尔量或相似的质量)转染入宿主细胞中。在一些实施方案中，将5:1和1:5之间的摩尔比率或质量比率的第一载体和第二载体转染入宿主细胞中。在一些实施方案中，使用编码重链的载体和编码轻链的载体的1:1和1:5之间的质量比率。在一些实施方案中，使用编码重链的载体和编码轻链的载体的1:2的的质量比率。

在一些实施方案中，选择针对在cho或cho衍生的细胞或nso细胞中表达多肽而优化的载体。例示性的此类载体记载于例如runningdeeretal.,biotechnol.prog.20:880-889(2004)。

在一些实施方案中，选择载体用于在包括人在内的动物中体内表达slamf1拮抗剂。在一些此类实施方案中，一种或多种多肽的表达在以组织特异性方式发挥功能的一种或多种启动子的控制下。例如，肝特异性启动子记载于于例如pct公开文本no.wo2006/076288中。

宿主细胞

在多个实施方案中，可以在原核细胞，诸如细菌细胞中；或在真核细胞，诸如真菌细胞(诸如酵母)、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达本文中所述的抗体的重链和/或轻链。可以例如根据本领域中已知的规程进行此类表达。可用于表达多肽的例示性真核细胞包括但不限于cos细胞，包括cos7细胞；293细胞，包括293-6e细胞；cho细胞，包括cho-s和dg44细胞；细胞(crucell)；和nso细胞。在一些实施方案中，可以在酵母中表达本文中所述的抗体的重链和/或轻链。见例如美国公开文本no.us2006/0270045a1。在一些实施方案中，特定的真核宿主细胞基于其对slamf1抗体的重链和/或轻链做出期望的翻译后修饰的能力来选择。例如，在一些实施方案中，cho细胞生成比在293细胞中生成的相同多肽具有更高的唾液酸化水平的多肽。

可以通过任何方法完成将一种或多种核酸导入期望的宿主细胞中，所述方法包括但不限于磷酸钙转染、deae-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染等。非限制性例示性方法记载于例如sambrooketal.,molecularcloning,alaboratorymanual,3^rded.coldspringharborlaboratorypress(2001)。可以根据任何合适的方法在期望的宿主细胞中瞬时或稳定转染核酸。

在一些实施方案中，根据任何合适的方法，可以在已经用一种或多种编码多肽的核酸分子工程化改造或转染的动物中在体内生成一种或多种多肽。

多肽的纯化

可以通过任何合适的方法纯化本文中所述的抗体。此类方法包括但不限于使用亲和基质或疏水相互作用层析。合适的亲和配体包括抗原和/或与抗体结合的表位，以及结合抗体恒定区的配体。例如，可以使用蛋白a、蛋白g、蛋白a/g或抗体亲和柱结合恒定区并纯化抗体。

在一些实施方案中，也使用疏水性相互作用层析，例如丁基或苯基柱纯化一些多肽。许多纯化多肽的方法是本领域中已知的。

多肽的无细胞生成

在一些实施方案中，在无细胞系统中生成本文中所述的抗体。非限制性的例示性无细胞系统记载于例如sitaramanetal.,methodsmol.biol.498:229-44(2009)；spirin,trendsbiotechnol.22:538-45(2004)；endoetal.,biotechnol.adv.21:695-713(2003)。

鉴定slamf1拮抗剂的方法

在一些实施方案中，提供了鉴定slamf1拮抗剂的方法。在一些实施方案中，方法包括使候选分子与slamf1、slamf1ecd或slamf1ecd融合分子(统称为“slamf1分子”)接触。在一些实施方案中，方法还包括使il-2活化的cd3+t细胞与候选分子/slamf1分子混合物接触，并测定对t细胞活化的影响。在一些实施方案中，方法包括使il-2活化的cd3+t细胞与候选分子接触，然后使混合物与slamf1分子接触，并测定对t细胞活化的影响。在一些实施方案中，基本上如本文中的实施例3所述的那样，但是在候选分子存在下实施测定法。在一些实施方案中，若相对于在仅存在slamf1分子的情况中对t细胞活化的阻抑，对t细胞活化的阻抑在候选分子存在下降低，则候选分子是slamf1拮抗剂。在一些实施方案中，候选分子将对t细胞活化的阻抑降低至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、或至少90％。在一些实施方案中，候选分子是抗slamf1抗体。本领域技术人员会认可使组分彼此接触的次序可以随测定法设计而变化。

在一些实施方案中，slamf1分子是全长slamf1，例如，在细胞表面上表达的slamf1。在一些实施方案中，slamf1分子是可溶性slamf1，诸如slamf1ecd或slamf1ecd融合分子。

候选分子的例示性类别包括但不限于抗体、肽、小分子和适体。在一些实施方案中，候选分子是已知结合slamf1的抗体(即slamf1抗体)。制品

在一些实施方案中，提供了含有可用于检测生物标志物(例如slamf1)或治疗、预防和/或诊断上文所述紊乱的物质的制品或试剂盒。制品包括容器和贴在所述容器上或与其相连的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小管、注射器等。容器可用各种材料制成，诸如玻璃或塑料。在一些实施方案中，容器装有其自身或联合其它组合物有效治疗、预防和/或诊断疾患的组合物，而且可具有无菌存取口(例如容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小管)。标签或包装插页指示该组合物用于治疗选择的疾患。在一些实施方案中，制品可包括(a)其中装有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的slamf1拮抗剂；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中所述组合物包含别的治疗剂。所述制品还可包括指示该组合物可用于治疗特定疾患的包装插页。或者/另外，所述制品还可包括第二(或第三)容器，其中装有制药学可接受的缓冲剂，诸如注射用抑菌水(bwfi)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏(ringer)溶液和右旋糖溶液。它还可包括商业和用户立场上所需的其它物质，包括其它缓冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。

在一些实施方案中，本发明的分子可单独地或与其它治疗性化合物组合地包装成试剂盒。在一个实施方案中，治疗性化合物是抗癌剂。在另一个实施方案中，治疗化合物是免疫抑制剂。所述试剂盒可包括帮助对患者施用单位剂量的任选成分，诸如用于重建粉剂形式的管形瓶、用于注射的注射器、定制iv投递系统、吸入器、等。另外，单位剂量试剂盒可含有关于制备和施用组合物的使用说明。试剂盒可制造成用于一名患者的一次使用单位剂量、用于一名特定患者的多次使用(以恒定的剂量或其中各种化合物的效力可随治疗进展而变化)；或者，所述试剂盒可含有适合于对多名患者施用的多剂(“大量包装”)。试剂盒成分可在纸盒、泡罩包、瓶、管等等中装配。

实施例

下文讨论的实施例意图仅仅是本发明例示性的，并且不应认为以任何方式限制本发明。实施例不意图代表下文的实验是实施的所有或唯一的实验。已经努力确保就使用的数字(例如量，温度等)而言的准确性，但应考虑到一些实验误差和偏差。除非另有指示，份数是重量份，分子量是平均分子量，温度以摄氏度计，并且压力处于或接近大气压。

实施例1：材料和方法

细胞/血液。所有血沉棕黄层均获自斯坦福血液中心(stanfordbloodcenter)。

cd3+t细胞富集。使用ficoll梯度自血沉棕黄层富集pbmc。使用来自stemcelltechnologies的easysep^tm人t细胞富集试剂盒基于制造商的用法说明负富集总cd3⁺t细胞。

cd3⁺t细胞活化和il-2静息。用抗cd3/抗cd28dynabeads(lifetechnologies)以1:1细胞与珠比率和2x10⁵个细胞/ml浓度在37℃将富集的cd3⁺t细胞活化6天。使用dynal磁体(lifetechnologies)自细胞除去珠，并在存在10u/mlil-2(r&dsystems)的情况中以1x10⁶个细胞/ml的细胞浓度在37℃再培养4天。彻底清洗细胞以除去il-2，并用于增殖测定法

增殖测定法。于4℃用1.35μg/ml抗人cd3(克隆okt3,ebioscience)和20μg/ml抗人igg(jacksonimmunoresearch)包被96孔组织培养处理板过夜。用1xpbs彻底清洗板以除去游离蛋白质，并用滴定剂量的fc-蛋白质(以100μg/ml开始，在1xpbs中以1:3稀释)于37℃再包被4小时。人igg1和人pd-l1-higg1阴性和阳性对照购自r&dsystems，而人slamf1-higg1是在fiveprimetherapeutics生成的。在fc-蛋白的再包被后，用1xpbs彻底清洗板以除去游离蛋白，并以1x10⁶个细胞/ml浓度将活化的/il-2静息的cd3⁺t细胞添加至平板。于37℃在板上温育细胞72小时。收获前12-16小时，用5μmedu(lifetechnologies)对细胞进行脉冲，并于37℃温育。使用click-itplusedu流式细胞术测定试剂盒(lifetechnologies)依照制造商的用法说明，通过在lsrii(bdbiosciences)上的流式细胞术测量百分比增殖细胞。使用flowjo软件分析数据。

实施例2：pd-l1阻抑活化的/il-2静息的cd3+t细胞的增殖

为了探索此固定化的fc-蛋白测定法形式是否能够鉴定能够阻抑t细胞增殖的蛋白质，将先前已经活化并且在il-2中静息的cd3⁺t细胞添加至已经用抗cd3、抗人igg和来自r&dsystems的higg1和pd-l1或在fiveprimetherapeutics生成的pd-l1包被的板。在存在这些fc-蛋白的情况中活化的/il-2静息的t细胞的72小时再刺激表明仅在存在pd-l1的情况中，增殖受到阻抑(图1)。虽然在存在任一种pd-l1蛋白的情况中观察到剂量依赖性阻抑，但是在存在higg1的情况中未观察到剂量依赖性阻抑。在测试的最高浓度的higg1(即100μg/ml)时有一些阻抑，提示浓度≥100μg/ml可以产生一些非特异性阻抑。此数据证明了此测定系统能够鉴定能够阻抑t细胞增殖的fc-蛋白质。

实施例3：slamf1-fc阻抑活化的/il-2静息的cd3+t细胞的增殖

为了探索slamf1ecd-fc在此纯化的t细胞测定形式中是否会阻抑t细胞的增殖，再次将先前已经活化并在il-2中静息的cd3⁺t细胞添加至已经用抗cd3、抗人igg和slamf1-fc(在fiveprimetherapeutics生成)包被的板。在存在slamf1-fc的情况中活化的/il-2静息的t细胞的72小时再刺激表明slamf1-fc以剂量依赖的方式阻抑增殖(图2)。slamf1-fc在3名测试供体中表明接近完全抑制，并在3名测试供体中表明部分抑制。这些数据提示slamf1-fc阻抑t细胞的增殖。

实施例4：人组织中的slamf1表达

最初通过rt-pcr将slamf1鉴定为仅在淋巴样细胞中表达。参见cocksetal.,1995,nature376:260-263。对一组人组织rna(clontech)和人免疫细胞rna(allcells,llc)(其遵循制造商的方案(qiagen)逆转录成cdna)实施rt-pcr。将cdna稀释并分配至平行孔，用于使用slamf1的基因特异性引物或gusb(qiagen)和sybrgreen试剂(qiagen)的定量pcr。遵循制造商推荐的95℃15秒，55℃持续30秒、和72℃持续30秒的总共40个循环的方案实施qpcr。使用δδct方法相对于gusb的相对表达标准化每种组织内的表达。发现在胸腺中，以及在cd4+t细胞(幼稚和记忆细胞两者，在记忆t细胞上表达较高)、cd8+细胞毒性t细胞、t调节细胞、b细胞和单核细胞衍生的树突状细胞上表达slamf1mrna。见图3。此rt-pcr数据与发表的蛋白质表达数据一致。见例如aversaetal.,1997,jimmunol158:4036-4044；punnonenetal.,1997,jexpmed185:993-1004；bleharskietal.,2001,jimmunol167:3174-3181。这些数据显示slamf1的表达在活化的t细胞、b细胞和树突细胞上富集-与其它免疫检查点(包括pd-1和tim3)一致的模式。

实施例5：slamf1在体内增加肿瘤生长

11周龄雌性c57bl/6小鼠购自charlesriverlaboratories(hollister,ca)，并且在研究开始前驯化9天。使用编码slamf1ecdfc的核酸的尾静脉转染，处理小鼠以诱导slamf1ecdfc的组成性系统性表达。用盐水处理对照动物以模拟基因表达的诱导。接下来，以1x10⁶个细胞/100μl/小鼠将鼠t细胞淋巴瘤细胞系e.g7-ova皮下植入小鼠的右体侧。e.g7-ova细胞系购自atcc(manassas,va；cat.no.crl-2113)。在接种前，在rpmi1640培养基中将细胞培养三代，所述rpmi1640培养基补充有10％热灭活胎牛血清(fbs)、2mml-谷氨酰胺、1.5g/l碳酸氢钠、4.5g/l葡萄糖、10mmhepes、1.0mm丙酮酸钠、0.05mm2-巯基乙醇、0.4mg/mlg418、和抗生素-抗真菌溶液。于37℃在具有5％co2的湿润气氛中培养细胞。在达到80-85％汇合时，收获细胞，并且以每毫升1x10⁷个细胞在含有50％基质胶的冷的无ca²⁺和mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(pbs)中重悬。

在细胞植入后每周两次对小鼠监测肿瘤生长。在第5天开始，使用测径器测量每个肿瘤的长度和宽度，并依照下式计算体积：肿瘤体积(mm³)＝(宽度(mm)x长度(mm))²/2。继续每周至少两次测量肿瘤，直到肿瘤体积超过动物体重的10％，或约2000mm³。自研究除去所有动物时自它们收集血浆，并通过elisa确认slamf1ecdfc的表达。

图4中显示了所述实验的结果。通过相对于用e.g7-ova细胞接种动物的日期绘制均值肿瘤体积显示肿瘤大小的变化。如果p<0.05，那么由于用slamf1ecdfc或盐水作为对照治疗的肿瘤体积的比较确定为统计学显著的。使用对测量肿瘤的每日计算的肿瘤体积的未配对双尾t检验分析计算p值。与盐水对照相比表达slamf1ecdfc的小鼠中增加的肿瘤体积在第15天(p＝0.0305)和第18天(p＝0.0277)是统计学显著的。见图4a和4b。

实施例6：抗slamf1抗体缓解人工apc测定法中t细胞的抑制

用含有编码全长小鼠slamf1(genecopoeiaex-mm06571-lv105)的dna或空载体对照的慢病毒感染小鼠a20细胞(atcctib-208)。通过流式细胞术(biolegend克隆tc15-12f12.2)确认a20细胞上小鼠slamf1的稳定表达。

使用小鼠cd4+t细胞macs分离试剂盒(miltenyi130-104-454)自d011小鼠(jackson原种号003303)的淋巴结分离小鼠cd4+t细胞。用cfse染料(lifetechnologiesc34554)标记t细胞，然后清洗并计数。用丝裂霉素c(sigma-aldrich)以100μg/ml于37℃将表达小鼠slamf1的a20细胞或载体对照细胞处理1小时，然后清洗并计数。

对于测定法设置，将100,000个经cfse标记的cd4+t细胞与rpmi1640培养基中的20,000个经丝裂霉素-c处理的a20细胞和5ng/mlova323-339肽(anaspec27024)混合，所述rpmi1640培养基补充有10％热灭活胎牛血清(fbs)、2mml-谷氨酰胺、1x青霉素/链霉素、1x非必需氨基酸和0.05mm2-巯基乙醇。在一些孔中，以各种浓度添加大鼠抗小鼠slamf1抗体：克隆tc15-12f12.2(biolegend)、克隆9d1(affymetrix)或相关同种型对照(图5a)。在96孔圆底板中设置测定法，并在37℃和5％co2温育3天，然后通过流式细胞术读取cfse荧光。通过flowjo以相对于没有ova肽的对照孔具有降低的cfse荧光的t细胞百分比(％分裂细胞)分析t细胞增殖。

图5b-c中显示了实验结果。相对于载体对照a20细胞，将小鼠slamf1转导入a20细胞中降低由5ng/mlova肽刺激的t细胞增殖量(图5b)。通过阻断性抗slamf1单克隆抗体逆转抑制(vandrieletal.,2012gastroenterology143:1544-1554)，而同种型对照抗体没有影响(图5c)。此外，当添加至与载体对照a20细胞混合的t细胞中时，抗slamf1抗体没有影响。结果证明了抗slamf1阻断抗体逆转由slamf1对t细胞活化的共抑制。

实施例7：可以通过阻断性抗体缓解人工apc测定法中由人slamf1的t细胞抑制

使用自gerdemannetal.,2012moleculartherapy20:1622-32改编的方案对来自cellulartechnologyltd的hla-a*02-阳性外周血单个核细胞(pbmc)扩充出cmv-反应性cd8+t细胞。简言之，于37℃对pbmc加载10μg/mlcmvpp65495-503(anaspec28328)2小时，然后在补充有2ng/ml重组il-2(sigma-aldrich)和10ng/ml重组il-7(r&dsystems)的ctl培养基(补充有10％热灭活人ab血清(sigma-aldrich)、2mml-谷氨酰胺、1x青霉素/链霉素和0.05mm2-巯基乙醇的rpmi1640培养基)中铺板。在11天后，加载有10μg/mlcmv肽的经丝裂霉素-c处理的自体pha母细胞(如在实施例6中)再刺激细胞。允许细胞再扩充10天，然后用miltenyi人cd8+t细胞分离试剂盒(130-096-495)分离cd8+t细胞，并且冷冻保存。

通过流式细胞术(biolegend#306308)发现人t2细胞(atcccrl-1992)天然表达人slamf1。在测定法前一天，融化cmv反应性cd8+t细胞的管形瓶，并在ctl培养基中铺板。测定法当天，于37℃在旋转的情况中对t2细胞加载ctl培养基中的1μg/mlcmv肽，持续1小时。然后，用ctl培养基将细胞清洗3次并计数。在96孔圆底板中的ctl培养基中将100,000个加载有cmv的t2细胞与100,000个cmv反应性cd8+t细胞混合。将多种抗人slamf1抗体添加至反应：绵羊多克隆(r&dsystems#af164)、小鼠克隆a12(biolegend#306310)、小鼠克隆ipo-3(thermo#ma17626)、小鼠克隆542301(r&dsystems#mab1642)或对于每种的合适的同种型对照。于37℃和5％co2将板温育48小时，然后收集上清液，并通过人ifnγhtrf测定法(cisbio#62ifnpeb)测量干扰素-γ(ifnγ)水平。

图6中显示了这些实验的结果。抗slamf1多克隆(图6a)和单克隆抗体(图6b)刺激由cd8+t细胞的ifnγ产生的剂量依赖性增加。为了测定抗体通过哪种细胞类型起作用，将多克隆抗体与加载有cmv的t2细胞或与cd8+t细胞预温育，然后在设定测定法前洗去。已经发现了抗体与t2细胞的预温育贯穿测定法重复抗体纳入的活性，而抗体与cd8+t细胞的预温育具有最小的效果(图6c)。抗slamf1抗体为何增强通过t2细胞的cd8+t细胞活化的一种可能的解释是抗体的fc基团经由fc受体交联cd8+和t2细胞，并通过此诱导的接近性增加活化。为了排除这点，通过针对fc受体的存在的流式细胞术染色t2和cd8+t细胞。发现t2细胞表达一种fc受体cd32b。为了排除cd32b介导的交联对测定法的影响，在每剂抗slamf1抗体，与无一添加相比，用5μg/ml阻断性抗cd32抗体(ebioscience#16-0329-85)或同种型对照的添加设立抗slamf1克隆542301的滴定。发现既不是cd32阻断性抗体又不是同种型对照抗体的添加对ifnγ释放的抗slamf1刺激具有任何影响(图6d)。

总之，这些数据指示抗slamf1抗体结合slamf1并且缓解其对cmv肽刺激的cd8+t细胞活化的抑制。此活性似乎主要是由于在t2细胞而不是cd8+细胞上的slamf1阻断所致。此活性也不是由fc受体介导的交联所致。这些结果与在本文中的小鼠测定法中观察到的slamf1的t细胞共抑制活性一致。

实施例8：在肿瘤浸润性t细胞上表达slamf1

balb/c小鼠购自charlesriverlaboratories，并且在驯化后，以1x10⁶个细胞/200μl/小鼠在右体侧上皮下接种鼠结肠癌细胞系ct26(atcccrl-2638)。在接种前，在补充有10％胎牛血清(fbs)的rpmi1640培养基中将细胞培养不超过三代。于37℃在具有5％co2的湿润气氛中培养细胞。在达到80-85％汇合时，收获细胞，并且以每毫升5x10⁶个细胞在含有50％基质胶的冷rpmi1640中重悬。

在植入后约1-3周，收获肿瘤组织并称重。用剃刀刀片切碎肿瘤，并且于37℃在摇动的情况中用在rpmi1640培养基中的5ml200u/ml胶原酶i型(worthingtonbio,cat#ls004196)消化30分钟。将细胞悬浮液通过40μm滤器，清洗，并计数。于室温用10μgdna酶i(stemcelltechnologies,cat#07900)将来自每个肿瘤的10⁶个细胞处理15分钟。将表3中的50μl抗体混合物添加至细胞，并在4℃温育30分钟。染色后，用冷pbs清洗细胞两次，然后添加100μl1:1000aqua活/死亡染料(lifetechnologiesl34957)，并且于4℃温育15-20分钟。此后，用补充有0.5％bsa和2mmedta的冷pbs再清洗细胞3次，然后通过流式细胞术分析。

表3：小鼠肿瘤淋巴细胞抗体染色板

对于特异性染色调节性t细胞(treg)，如上文，但是用表3中的抗体亚组：epha2–apc、cd45–fitc、cd3e–percp-cy5.5、cd4–bv711、cd25–bv605、slamf1–bv421和fc区块染色肿瘤细胞悬浮液。然后，清洗细胞，并用biolegendfoxp3固定/透化缓冲液(产品目录编号421403)固定，然后用抗小鼠foxp3-pe克隆fjk-16s(ebioscience12-5773-82)或合适的同种型对照于室温染色30分钟。此后，用补充有0.5％bsa和2mmedta的冷pbs再清洗细胞3次，然后通过流式细胞术分析。

在初始门控单一活细胞的情况中在flowjowith中实施对流式细胞术数据的分析。分别使用epha2和cd45抗体鉴定ct26肿瘤细胞和肿瘤浸润性白细胞。使用cd11b分开肿瘤浸润性白细胞中的髓样细胞，并且使用剩余的抗体区分各种淋巴样细胞类型。发现slamf1在大多数肿瘤浸润性cd4+t细胞以及cd8+t细胞和nkt细胞的亚群中表达(图7a)。在nk细胞中观察不到slamf1表达，其在图7中作为阴性染色对照包括。发现几乎所有的treg细胞表达slamf1(图7b)。另外，发现肿瘤中大多数cd4t细胞共表达slamf1和pd-1，证实了这两种标志物确实具有在很大程度上重叠的表达概况(图7c，包括nk细胞作为阴性染色对照)。总之，这些数据指示slamf1在ct26肿瘤中的大多数cd4+t细胞上表达，包括在活化的t细胞和treg上。

当染色在c57bl/6小鼠(charlesriver)中培养的mc38鼠结肠癌肿瘤时，获得了类似的结果。

序列的表格