[0087] 以上菌种各一株，均为标准菌种，其中糠秕马拉色氏菌购于广东省微生物菌种保 藏中心，其余均购于广东环凯微生物技术有限公司。
[0088] 1. 3仪器设备
[0089] 分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司，型号BSA2335);超净工作台（上海力 申科学仪器有限公司，型号Hfsafe-1200);恒温培养摇床（上海一恒科技有限公司，型号 THZ-300C);恒温生化箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂，型号SPX-150B-Z);高压灭菌 锅（ZEALWAY公司，型号G154DWS);分光光度计（AmershanBiosiences公司，型号 5418R)。
[0090] 2?实验方法
[0091] 2.1制备培养基
[0092] 细菌：用肉汤培养基，质量分数为牛肉膏0.5%、蛋白胨1%、NaCl0.5%、琼脂2% (液体培养基不添加），121°C，20min高压灭菌。
[0093] 糠秕马拉色菌：⑴复苏使用菜籽油培养基，质量分数为蛋白胨1%、葡萄糖4%、 酵母浸膏〇.〇1%、单硬脂酸甘油醋〇.25%、菜子油4%、吐温-801%。121 <€，2〇111；[11高压灭 菌，冷却至50°C时加入放射菌酮0. 05%、氯霉素0. 005%，混匀。（2)纸片扩散法使用加琼 脂2%的菜籽油培养基平板。（3)改良琼脂稀释法使用含有10个倍比稀释的菜籽油培养基 平板，药液浓度为 100、50、25、12. 5、6. 25、3. 13、1、56、0. 78、0. 39、0. 20mg/ml，121°C，20min 高压灭菌。（4)微量稀释法使用麦芽浸膏培养基，质量分数为麦芽浸膏2%、蛋白胨2%、葡 萄糖2 %、酵母浸膏0. 02 %、吐温-801 %、菜籽油2 %，121 °C，20min高压灭菌。
[0094]白色念珠菌：⑴复苏时使用沙氏培养基（SDA)，质量分数为蛋白胨1%、葡萄糖 4%，121°C，20min高压灭菌冷后却至50°C加入氯霉素0. 02%，混匀。（2)纸片扩散法使用含 20g/L葡萄糖和0. 5yg/ml美蓝的M-H琼脂，即在1000mlM-H琼脂中加入50yl1%美蓝 溶液和20g葡萄糖。（3)改良琼脂稀释法使用含有10个倍比稀释的美蓝M-H琼脂平板，药 液浓度为 100、50、25、12. 5、6. 25、3. 13、1、56、0. 78、0. 39、0. 20mg/ml，121 °C，20min高压灭 菌。（4)微量稀释法使用RPMI1640培养基（含谷氨酰胺及酚红指示剂，不含碳酸氢钠）， 以0. 165mol/L吗啉丙烷磺酸（MOPS)为缓冲剂，调pH至7. 0。
[0095] 2. 2制备本发明凝胶基质取卡波姆2%，羟丙基甲基纤维素1. 5%，丙二醇15%， 丙三醇20%，加水适量，搅匀，浸泡4h，使充分溶胀，另取无水硫酸钠0. 2%，氢氧化钠2%， 尼泊金乙酯0. 1 %，加水至全量l〇〇ml，搅拌均匀，即得，常温保存，备用。
[0096] 2. 3制备本发明凝胶药敏纸片用6mm单孔打孔器在滤纸上打出空白药敏纸片，高 压灭菌干燥后，滴入已用无菌蒸馏水稀释为20mg/ml的凝胶药液100y1，置37°C恒温生化 箱4-5h即可干燥，使药片含药200yg/片，置-20 °C冰箱保存，备用。
[0097] 2. 4检测本发明凝胶是否滋生细菌取肉汤琼脂平板2个，新开本发明凝胶2支， 13mmX100mm试管2支。各取凝胶适量置于试管内，加适量无菌蒸馏水反复吹打至凝胶溶解 成悬液，取悬液100U1均匀涂布于肉汤琼脂平板，置37°C恒温生化箱，培养5d，观察是否有 菌落生成。
[0098] 2. 5打孔加药法测定本发明凝胶对5种细菌的抑菌实验
[0099] 2. 5. 1活化菌株使用营养肉汤培养基，培养温度为37°C，培养2d。
[0100] 2. 5. 2平板传代用平板划线分离法将菌种接种到肉汤平板培养基内。用接种环 以无菌操作从液体培养基内取菌种悬液一环，在平板培养基的一边，做第一次平行划线2-3 条。转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种环，通过第一次划线部分，做第二次平行划线。 用同法通过第二次平行划线做第三次平行划线。
[0101] 2. 5. 3制作菌悬液挑取芝麻粒大单菌落，溶于灭菌蒸馏水1ml，充分混合均匀，调 节菌悬液浊度至（0. 5-0. 7)麦氏浊度，相当于（1. 5-2. 1)Xl(T6CFU/mL。
[0102] 2. 5. 4制作含菌平板以无菌棉签蘸取菌悬液并在管壁挤去过多液体后，将菌悬液 均匀涂布于实验用平板表面。
[0103] 2. 5. 5打孔加药涂板lOmin后，以直径8mm打孔器在涂菌后的培养基上打孔，将孔 内琼脂挑去后挤入新打开的本发明凝胶，使凝胶与孔边缘平齐并充分接触，勿使凝胶沾染 孔外琼脂平面。置37°C恒温生化箱，培养2d。
[0104] 2. 5. 6敏感菌种的筛选分别于培养后24h、48h，以游标卡尺测量各凝胶孔周围抑 菌圈大小并记录其直径mm值。抑菌圈直径取最大径和最小径的均数（也可用最大和最小 半径的均数乘2代表直径）。每株菌同时做3个平板，取抑菌圈直径平均值。以上实验重复 20次，按照"药物敏感实验判定标准"（表1)来确定本凝剂的敏感菌种及敏感度。
[0105] 表1药物敏感实验判定标准
【主权项】
1. 一种治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂，由活性药物成分和凝胶基质组成，其 特征在于：所述的活性药物成分由以下重量份数的中药制成：黄柏65-95份、蛇床子90-110 份、苦参145-175份、地肤子65-95份、椿根皮65-95份、广藿香45-70份、大叶桉100-130 份。
2. 根据权利要求1所述的治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂，其特征在于：所述 的活性药物成分由以下重量份数的中药制成：黄柏78. 2份、蛇床子104. 5份、苦参157. 3份 地肤子78. 2份、椿根皮78. 2份、广藿香55. 5份、大叶桉111. 8份。
3. 根据权利要求1或2所述的治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂，其特征在于： 所述的凝胶基质成分由以下重量份数的组分组成：卡波姆-94010-30份、羟丙基甲基纤维 素钠10-30份、丙二醇130-170份、甘油180-220份、无水硫酸钠1-3份、氢氧化钠1-3份、 尼泊金乙酯0. 5-2份、蒸馏水适量。
4. 权利要求1-3所述治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂的制备方法，其特征在 于：所述活性药物成分的制备步骤包括：（1)取苦参、地肤子、椿根皮加8-15倍量水，浸泡 15-45min，提取1-3次，每次1. 5-3. 0小时，滤过，合并滤液，浓缩到相对密度为1 : 0. 8-1. 2 的水提液，备用；（2)取黄柏、蛇床子加6-10倍量60-90%乙醇，提取1-3次，每次提取l-3h， 回收乙醇，滤过，合并滤液，浓缩到相对密度为1 : 0.8-1. 2的醇提液，备用；（3)取广藿香、 大叶桉加10-15倍量水，浸泡0. 5-2h，提取4-6小时，得挥发油；将上述水提液、醇提液、挥 发油，混匀得合并药液备用。
5. 根据权利要求4所述治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂的制备方法，其特征在 于：所述凝胶基质的制备步骤为：取羟丙基甲基纤维素钠、卡波姆-940、甘油、丙二醇，加水 适量，搅匀，浸泡3-6小时，使充分溶胀，得凝胶基质。
6. 根据权利要求5所述治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂的制备方法，其特征在 于：制得凝胶基质后，在活性药物成分药液中加入无水硫酸钠、氢氧化钠，再将该药液加入 所制备的凝胶基质中，加水至全量，搅拌均匀，即得外用凝胶剂。
【专利摘要】本发明公开了一种治疗热带地区易发皮肤病的外用凝胶剂及其制备方法，由活性药物成分和凝胶基质组成，其活性药物成分由以下重量份数的中药制成：黄柏65-95份、蛇床子90-110份、苦参145-175份、地肤子65-95份、椿根皮65-95份、广藿香45-70份、大叶桉100-130份。本发明采用黄柏、蛇床子、苦参、地肤子、椿根皮、广藿香、大叶桉七味中药作为主要药效物质基础，结合凝胶基质得到的凝胶剂，主要用于针对热带地区易发皮肤病如阴囊炎、皮炎等，药理研究表明，本发明制备的凝胶剂具有优良的抑菌、抗炎、止痒、祛疹作用。
【IPC分类】A61P29-00, A61P17-00, A61K36-756, A61K9-06, A61P17-04, A61P15-00, A61P31-04
【公开号】CN104523941
【申请号】CN201410804018
【发明人】吕志平, 刘强
【申请人】南方医科大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月18日