Yap抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，特别涉及一种YAP抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应 用。
【背景技术】
[0002] 胶质细胞瘤是人类难治性肿瘤之一，也是中枢神经系统在肿瘤中的常见肿瘤，有 33. 3~58. 6%的原发性脑肿瘤起源于胶质细胞，即胶质瘤。其中原发性恶性脑肿瘤中约有 77%为恶性胶质瘤。目前公认的恶性胶质瘤标准治疗方案为手术切除肿瘤，替莫唑胺化疗 以及放疗，但事实上由于恶性胶质瘤的特殊的病理特点和生长方式，这些临床治疗方法效 果有限，一直不甚理想，恶性胶质瘤患者的中位生存期仅为确诊后的12~18个月，5年生存 率不足10%。对于恶性胶质瘤来说，单纯手术切除后复发率高，因此必须经过放化疗，然而 目前对于胶质细胞瘤属猴放化疗的具体方案意见并不统一，且效果不理想，患者预后不容 乐观。这主要是因为血脑屏障对阻碍化疗药物充分进入肿瘤组织以及恶性胶质刘对细胞毒 性药物固有的和诱导产生的耐药性。因此通过基因治疗的方法将外源性基因转染至患者肿 瘤细胞来干扰肿瘤细胞的增殖或者迀移能力是一种有效的方法。其关键是找到肿瘤特异性 的靶点蛋白，作为治疗的靶点，通过研制该靶点蛋白的抑制剂来达到干预胶质细胞肿瘤的 目标。
[0003] 由于肿瘤的发生发展是一个多基因互相调控的过程，胶质瘤的分子病理学机制研 宄也已从过往的单基因的研宄逐渐转移到多基因的信号通路调控及其信号网络调控的研 宄中。YAP(Yes_associatied protein)为Yes相关蛋白，是Hippo通路的转录共激活因子， 定位于人类染色体llq22,通过增强转录因子的活性促进基因表达。外界信号激活MST1/2， 与调节蛋白SAVl结合后磷酸化LATS1/2、M0B，继而直接磷酸化YAP/TAZ，磷酸化后的YAP/ TAZ停滞在细胞质内，转录抑制。当此信号通路被阻断或失活，未磷酸化的YAP/TAZ由细胞 质转入细胞核，与TEADs、Smad、Runxl/2、p63/p73、ErbB4等转录因子结合促进基因转录。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点与不足，提供一种YAP抑制剂在制 备抗肿瘤药物中的应用。
[0005] 本发明的目的通过下述技术方案实现：YAP抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0006] 所述的YAP抑制剂为降低YAP核酸或蛋白表达的化合物；
[0007] 优选的，所述的YAP抑制剂为ΥΑΡ-i-l或YAP-i-2所示的核酸序列。
[0008] 所述的ΥΑΡ-i-l为针对YAP核酸序列第1062个碱基开始的YAP-i-1 siRNA序列 或 YAP-i-lshRNA 序列；
[0009] 所述的 YAP-i-1 siRNA 序列如下：CCGGGATGACTCAGGAATT ;
[0010] 所述的YAP-i-1 shRNA序列如下：
[0011] YAP-i-1 shRNA 正链：
[0012] 5' -GATCCCCCCGGGATGACTCAGGAATTTTCAAGAGAAATTCCTGAGTCATCCCGGTTTTTA-3' ；
[0013] YAP-i-1 shRNA 反链：
[0014] 5' -AGCTTAAAAACCGGGATGACTCAGGAATTTCTCTTGAAAATTCCTGAGTCATCCCGGGGG-3' ；
[0015] 所述的YAP-i-2为针对YAP核酸序列第930个碱基开始的YAP-i-2 siRNA序列或 YAP-i-2 shRNA 序列；
[0016] 所述的 YAP-i-2 siRNA 序列如下：GGCAATACGGAATATCAAT ;
[0017] 所述的YAP-i-2 shRNA序列如下：
[0018] YAP-i-2 shRNA 正链：
[0019] 5' -GATCCCCGGCAATACGGAATATCAATTTCAAGAGAATTGATATTCCGTATTGCC TTTTTA-3' ；
[0020] YAP-i-2shRNA 反链：
[0021] 5' -AGCTTAAAAACCGGGATGACTCAGGAATTTCTCTTGAAAATTCCTGAGTCATCCCGGGGG-3' ；
[0022] 所述的肿瘤为胶质细胞肿瘤。
[0023] 由于核苷酸序列的特殊性，任何含有ΥΑΡ-i-l和YAP-i-2所示的核酸序列或其变 体，只要其片段与前述核酸序列同源性在90%以上，或针对YAP起始位点第930或第1062 个碱基的siRNA序列，且具有相同功能，均属于本发明保护范围之列。此多核苷酸的变体包 括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可 能是一个多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的氨基酸的功能。
[0024] 本发明的发明原理：受YAP在胶质细胞瘤发生和发展中起关键作用的启示，发明 人研宄了其对这些过程的影响。根据临床胶质瘤标本的检测结果显示YAP特异性地表达在 胶质细胞瘤中，而在癌旁组织中表达量很低，且其表达量随肿瘤的病理分级息息相关，IV型 的表达量高于III型，高于II型和I型。且YAP对于胶质瘤细胞的增殖和迀移起必要作用。 通过siRNA或shRNA干扰YAP的表达能够显著抑制胶质瘤细胞系U251的增殖能力和迀移 能力。在肿瘤细胞U251中以特异性siRNA或shRNA以基因干扰的方式敲低YAP的表达，对 U251细胞的增殖和迀移能力有显著的抑制作用。这些结果显示YAP的表达对肿瘤生成和生 长有关键的调节作用，也提供了新型的抑癌靶点和药物形式。YAP表达在临床胶质细胞瘤标 本中的显著升高也提供了以检测YAP的表达水平进行临床肿瘤诊断和预后判断的可行性。
[0025] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0026] 本发明发现YAP蛋白表达水平在病人胶质瘤中明显升高，发现YAP蛋白的表达可 以反映胶质瘤的恶性程度，并研制降低YAP表达的物质对干扰胶质瘤细胞的增殖和迀移， 从而起到抑癌的作用，有助于进行干预肿瘤发生和转移的治疗，并提供了 YAP抑制剂在制 备抗肿瘤药物中的应用，为新的肿瘤药物研发提供了基础。
【附图说明】
[0027] 图1是YAP蛋白在人胶质细胞瘤组织的免疫组化结果；
[0028] 图2是YAP蛋白在人胶质细胞瘤组织表达量显著高于癌旁组织（正常组织）统计 图；
[0029] 图3是ΥΑΡ-i-l和YAP-i-2对YAP蛋白的表达的影响结果；其中：A为ΥΑΡ-i-l和 YAP-i-2对YAP蛋白的印迹结果图，B为ΥΑΡ-i-l和YAP-i-2降低YAP蛋白表达的统计图；
[0030] 图4是YAP抑制剂抑制人胶质瘤细胞U251的细胞增殖的结果图；
[0031] 图5是YAP抑制剂抑制胶质细胞肿瘤细胞系的迀移的结果图；其中，Con :对照组； ΥΑΡ-i-l :干扰 YAP 表达的 siRNA-1 ;YAP-i-2 :干扰 YAP 表达的 siRNA-2 ;
[0032] 图6是YAP抑制剂抑制胶质细胞肿瘤细胞系的迀移统计图；其中，Con :对照组； ΥΑΡ-i-l :干扰 YAP 表达的 siRNA-1 ;YAP-i-2 :干扰 YAP 表达的 siRNA-2。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0034] 实施例1
[0035] 临床胶质瘤标本的检测分析证实YAP在癌组织中的表达显著高于癌旁组织，且 YAP的表达水平与肿瘤的病理分级密切相关，证实YAP的表达是临床胶质瘤诊断的新型标 记物。